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연구 논문

오스톨은 miR-34a/bcl-2 축을 통해 쥐 관절염을 개선합니다

97 조회수

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DOI:

10.3791/69624

⸱

2026년 5월 15일

 ,  ,  ,  ,  , 
1Jiangsu Key Laboratory of New Drug Research and Clinical Pharmacy, and Public Experimental Research Center, Xuzhou Medical University, 2Department of Joint Surgery, Shuyang Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

오스톨(Ost)은 광범위한 약리학적 작용을 가진 천연 화합물입니다. 이 연구는 OST가 miR-34a/Bcl-2 축 을 통해 무릎 골관절염(KOA)의 영향을 완화하며, 이는 생 체 내 및 시험관 내 쥐 연구에서 입증되었으며, 특허 의학과 임상 응용에 대한 새로운 아이디어와 방향을 제시합니다.

초록

무릎 골관절염(KOA)은 비대성 또는 퇴행성 관절염이라고도 하며, 흔히 흔한 관절 질환입니다. 현재 임상 관리 전략에는 약물 치료, 물리 개입, 외과적 절차 및 보조 치료가 포함됩니다. 이러한 접근법은 어느 정도 KOA 증상을 완화할 수 있지만, 부작용, 제한된 효능, 침습성 등 제한적인 경우가 많습니다. 오스톨(Ost)은 천연 쿠마린 유도체로, 특히 관절 통증 완화와 관절 기능 개선에 대한 약용으로 널리 연구되어 왔습니다. 본 연구에서는 CCK8 분석, 투과 전자현미경(TEM), H&E 염색, 혈청 생화학적 분석을 통해 OST가 시험관 내외 연골세포에 보호 효과를 발휘하며, 유의미한 독성은 관찰되지 않음을 입증하였습니다. TEM, 아크리딘 오렌지 염색, 유세포분석, 웨스턴 블로팅을 이용한 후속 연구에서 OST가 연골세포에서 자가포식을 촉진하고 세포자멸사를 억제한다는 사실이 밝혀졌습니다. qRT-PCR 및 루시퍼레이스 리포터 분석법을 통한 추가 기전 연구에서는 OST가 miR-34a를 하향 조절하여 Bcl-2 발현을 상향 조절하고 miR-34a/Bcl-2 경로를 통한 세포자멸사를 억제한다는 결과가 나타났습니다. 요약하자면, 이 발견들은 OST가 세포 및 동물 모델 모두에서 연골 세포를 보호하여 LPS에 의한 스트레스를 완화하고 KOA 쥐에서 염증과 세포자멸사를 감소시킨다는 것을 시사합니다. miR-34a의 하향 조절과 그에 따른 Bcl-2 발현 증가는 항세포자멸 효과에 기여합니다. 이 결과들은 OST 기반 특허 약물 개발과 KOA 치료에서의 임상 번역 가능성을 위한 이론적 토대를 제공합니다.

서론

무릎 골관절염(KOA)은 비대성, 비대성 또는 노인성 무릎 관절염으로도 알려진 흔한 관절 질환입니다. 관절 연골의 퇴행과 관절 주변 구조의 변화로 인해 발생합니다. 역학 연구에 따르면, 무릎 골관절염은 특히노인에게 흔한 질병입니다. 발병률은 나이, 체중, 유전, 관절 손상 등과 밀접한 관련이 있습니다. 관절 움직임 제한, 근력 저하, 비정상적인 보행 등 생리적 기능에도 영향을 받을 수 있습니다. 현재 무릎 골관절염 치료에서 일반적으로 사용되는 방법으로는 약물 치료, 물리치료, 수술, 보조 요법등이 있습니다. 약물로는 진통제, 비스테로이드성 소염제, 만성 관절염 치료제가 통증 완화와 염증 조절을 위해 자주 사용됩니다. 물리치료에는 온찜질, 냉찜질, 마사지 및 관절 운동 기능 개선과 통증 완화를 위한 특정 재활 운동이 포함됩니다. 수술 치료에는 관절 구조와 기능을 회복하기 위한 관절 수술, 인공 관절 치환술, 또는 관절 형태학적 수리가 포함될 수 있습니다. 또한 침술, 물리치료, 전통 중의학과 같은 보완 요법도 널리 사용되고 있습니다.

하지만 이러한 치료가 무릎 골관절염의 증상과 상태를 어느 정도 완화시켜 주긴 하지만, 여전히 한계가 있습니다. 약물 치료는 부작용과 의존 문제를 일으킬 수 있으며; 물리치료는 지속적인 재활 과정을 필요로 하며, 결과는 개인차에 따라 다릅니다; 수술적 치료는 위험하고 회복 기간이 길고 신중한 고려가 필요합니다; 보조제 치료는 널리 주목받고 적용되고 있지만, 그 효능에 대한 과학적 근거는 아직 제한적이며, 보조제 치료의 조절 기전에 대해 깊이 있게 연구할 필요가 있습니다. 보조 요법에서는 전통 중국 의학이 무릎 골관절염 치료에 널리 사용되어 왔으며 유용함을 입증했습니다. 전통 한의학에는 아직 잘 알려지지 않았지만 장기간 수련과 추적 연구를 통해 입증된 요소들이 있을 것입니다. 현재 시보티움 바로메츠3, 리구스티쿰 왈리키이 프랑샤4, 안젤리카 푸베센스5 등 많은 중국 의학이 무릎 골관절염 치료에 풍부한 경험을 쌓아왔습니다. 이 허브들은 진통 및 항염 효과가 있어 통증 완화와 염증 감소에 효과적입니다.

OST는 천연 허브 추출물로 널리 사용되는 쿠마린 유사 화합물입니다. 이 약물은 다양한 약리학적 활약을 가지고 있으며 수많은 연구들에 의해 뒷받침되고 있습니다. 연구에 따르면 크니듐은 항종양, 항염증, 고혈당, 항혈소판 응집, 신경보호 등 다양한 약리학적 활성을 가지고 있으며, 많은 다른 질병에 대한 잠재적 치료 효과가 있다고 밝혀졌습니다7. OST가 자가포식을 조절하여 암세포의 세포자살사를 촉진할 수 있다는 보고가 있는데, 자가포식은 LC3 매개 자가포식과 GSDME 의존적 피롭토시스를 통해 난소암 세포의 세포자살사를 억제합니다8; OST는 소포체 스트레스와 세포 자가포식을 통해 HT-29 세포의 세포자멸사를 유도합니다9; OST는 AMPK/Akt 신호를 억제하여 대장암의 세포세포자멸사를 촉진하고, 세포 자가포식, ROS, 철세포 세포 세포 세포 사전증을 유도합니다. OST는 자가포식과 미토콘드리아 매개 신호 전달을 조절하여 대장암의 성장을 억제할 수 있습니다11. 동시에 OST는 특히 염증 반응을 줄이고 관절 통증을 완화하여 관절 기능 개선에 중요한 역할을 합니다. 또한 그 활성 성분은 염증성 물질의 방출을 줄이고 관절염으로 인한 관절 연골 퇴행을 억제할 수 있습니다. 일반적인 서구 약물과 비교할 때, OST는 더 안전하고 독성이 낮으며, 장기간 사용해도 약물 내성을 유발하지 않습니다. 골구멍이 시험관 및 생체 내에서 cAMP/CREB 신호를 통해 전사 인자 오스테릭스를 증강시켜 골세포의 골형성을 강화하는 것으로 보고되었습니다. OST는 AMPK/ULK1 경로를 통해 활성화된 자가포식을 촉진하여 무릎 골관절염 발병을 억제합니다13; 크니듐 락톤은 p38 MAPK 및 PI3K-Akt, c-Fos/NFATc1 신호 경로를 통해 파반 세포 분화를 억제합니다. 크니듐 락톤은 에스트로겐-α/BMP-2/Smad 신호 경로를 통해 난소절제된 쥐 모델에서 골 손실을 방지합니다15; OST는 중간엽 줄기세포의 자가포식을 증가시켜 골다공증을 개선합니다16. 그러나 관찰과 분석 결과, 대부분의 연구가 표현형에 머물렀거나 약물 참여의 신호 경로 조절 메커니즘을 분자 수준에서 밝히지 못한 것으로 나타났으며, 이는 전통 한의학에서 추출한 화합물이 널리 받아들여지지 어려운 이유 중 하나이기도 하다. 따라서 특허 의학과 임상 응용을 위해 Osthole의 생물학적 조절 메커니즘을 분자 수준에서 더 깊이 탐구하는 것이 매우 중요합니다.

miRNA는 표적 유전자의 발현을 억제하여 생물학적 기능을 조절하는 작은 RNA입니다. 많은 전통 중국 의학은 miRNA를 조절함으로써 생물학적 효과를 발휘하는 것으로 알려져 있습니다. 마찬가지로, OST도 miRNA 발현에 영향을 미치는 것으로 보고되었습니다. 첫째, OST는 miRNA를 통해 항종양 생물학적 역할을 합니다. OST가 자궁내막암17에서 miR-424를 상향 조절하여 세포 증식을 억제하고 세포 사멸을 유도하는 것으로 보고되었습니다; OST는 miR-16의 상향 조절과 MMP-9의 하향 조절을 통해 인간 교모세포의 증식을 억제하고 세포자살사를 가속화합니다. OST는 PI3K/AKT/mTOR 경로를 억제하고 hsa_circ_0007534/miR-214-3p 축19를 조절함으로써 망막모세포종에서 항종양 효과를 보입니다. 둘째, OST는 miRNA의 조절을 통해 신체 장기의 생리적 과정에도 영향을 미칠 수 있는데, OST는 miR-22–3p 매개 지질 대사재프로그래밍을 조절하여 폐혈관 재형성을 완화합니다. OST는 miR-30a를 하향 조절하고 자가포식을 촉진함으로써 쥐를 심근 허혈/재관류 손상으로부터 보호합니다. OST는 p38MAPK/mTOR 신호 전달 경로를 통해 자가포식을 강화하여 H9c2 심근세포를 트라스투주맙 유발 손상으로부터 보호합니다. 셋째, OST는 miRNA를 통해 신경 보호 역할을 할 수 있는데, 이는 알츠하이머병 세포 모델에서 miR-9의 상향 조절을 통해 신경 줄기세포가 신경세포로 분화하도록 유도하고, APP/PS1 형질전환 마우스에서 해마 신경세포의 기능 장애를 구해냈다23; OST는 알츠하이머병에서 miR-107의 상향 조절을 통해 베타 아밀로이드 수치를 감소시킵니다 24. 그러나 miRNA가 OST에 의해 무릎 골관절염 치료를 위해 조절될 수 있다는 보고는 없습니다. 문헌에 따르면 miR-34a는 연골세포 세포자멸사를 촉진하고 DLL1을 표적으로 하고 PI3K/AKT 경로를 조절함으로써 골관절염 발병을 촉진합니다25. 긴 비암호화 RNA MEG3는 miR-34a/Klotho 축26을 조절하여 골관절염의 진행을 조절합니다; miR-34a의 하향 조절은 PI3K/Akt 경로27을 활성화하여 쥐 골관절염 연골 세포의 증식을 촉진하고 세포자멸사를 억제합니다. 따라서 KOA는 miR-34a 조절을 통해 OST로 치료할 수 있을까요? 따라서 OST가 miRNA를 조절하여 무릎 골관절염을 치료할 수 있다는 가설이 제기됩니다.

요약하자면, OST는 광범위한 약리학적 활성을 가진 천연 화합물입니다. 이전에 연구팀은 OST가 쥐의 무릎 골관절염을 개선할 수 있음을 확인했으나, 이 생물학적 효과의 세포 신호 전달과 분자 메커니즘은 완전히 밝혀지지 않았습니다. 본 글에서는 OST의 miRNA, 자가포식, 세포자멸사 신호 전달 경로를 추가로 연구함으로써 무릎 골관절염 치료에서 OST의 기전을 명확히 하고, 특허 의학 및 임상 적용에 대한 새로운 아이디어와 방향을 제시하고자 합니다.

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프로토콜

모든 연구는 쉬저우 의과대학 기관동물관리 및 치료 위원회의 승인을 받았습니다. 시약과 사용된 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.

1. 동물 모델

250–300g 무게의 성체 수컷 및 암컷 스프래그-도울리(SD) 쥐를 쉬저우 의과대학 실험동물센터에서 구입하였다. 쥐는 병원체가 없는 특별한 방에서 번식되었습니다. 치료, 관리, 평가 종료 여부를 포함한 동물 실험 절차는 "동물 연구: 생체 내 실험 보고" 지침을 따랐습니다. 동물 실험은 무작위 배정으로 수행되었습니다. SD 쥐는 네 그룹으로 나뉘었습니다(n=8명씩): 정상군(수술 없음, 정상 급식)(정상군), 샴군(가짜 수술: 전방십자인대 절단[ACLT], 이어서 생리식염수 관제), KOA/NC 군(ACLT 수술+식염수 관철), KOA/OST 군(ACLT 수술+OST 관습). 쥐 무릎의 KOA 모델은 앞서 설명한 전방 십자 인대 절단법(ACLT) 방법을 사용하여 구축되었습니다29. 식염수군 은 식염 수로 관중을 투여받았고, OST 그룹은 4주간 식염수를 통한 OST를 투여받았습니다. OST 용량은 체중 50 mg(PEG 400에 용해하고 생리적 식염수로 희석)이며, 쥐 하위 항목에서는 4주 동안 하루 한 번씩 투여합니다. 그 후, 쥐들은 기관에서 승인한 프로토콜에 따라 분석을 위해 안락사되었습니다. 조직은 즉시 액체 질소에 냉동하거나 4% 파라포름알데히드에 고정되었습니다.

2. 세포 배양

인간 연골세포 세포주(C28/I2)는 American Type Culture Collection(ATCC, 버지니아주 매너서스)에서 획득하였습니다. 세포는 ATCC 지침에 따라 배양되어 6개월 이내에 사용되었습니다.

배양 조건: DMEM/F-12 배양지에 태아 소 혈청 10%와 페니실린-스트렙토마이신 1%를 보충하고, 5%CO-2 가습 인큐베이터에서 37°C에서 배양.

처리: 세포는 6웰 플레이트에 1× 106 셀/웰에 시딩되었고; 유착 24시간 후에는 LPS(1 μg/mL) 단독 또는 OST(100 μM)로 24시간 치료하였습니다.

3. 세포 생존 가능성 검사

연골세포는 96웰 플레이트에서 OST 또는 LPS와 함께 서로 다른 농도로 공동 배양했습니다. CCK8 분석은 마이크로플레이트 리더를 이용해 흡수도(OD450 nm)를 검출하여 세포 생존력을 반영하며, OD가 높을수록 더 많은 생존 가능한 세포를 나타냅니다.

OST 농도 구배: 0, 25, 50, 100, 200, 400 μM (24시간 배양). CCK8 분석법은 모든 농도에서 >90%의 세포 생존성을 보여주어 화합물의 무독성을 확인했습니다.

LPS 농도 구배: 0, 0.1, 0.5, 1, 2 μg/mL (24시간 배양). 1 μg/mL LPS 그룹은 세포 생존율이 ~50%였으므로(Ctrl 그룹과 비교), 이후 실험에서 이 농도가 선택되었습니다.

4. 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색 및 사파닌 O 염색

조직은 제조사 지침에 따라 파라핀 함정, 탈액, 재수화, H&E 및 사프라닌 O/패스트 그린 시약으로 염색되었습니다. 염색 조건: AO 작동 농도는 1 μg/mL였고; 세포는 37°C에서 5분간 어두운 환경에서 배양되었습니다.

정량적 방법: AVO 양성률은 ImageJ 소프트웨어를 사용해 샘플당 5개의 무작위 영역(×400배율)에 있는 주황색 펀크타 함유 세포를 계산했습니다. 그 후 BX43 현미경(배율 ×400)으로 단면을 촬영했습니다.

5. 유세포 검사

세포를 채취하여 Annexin-V FITC/PI 용액에 재현탁하여 세포자멸사 분석하였습니다. 배화 조건: 세포를 Annexin-V FITC/PI 용액(KeyGEN)에 1×6 cells/mL로 재현탁한 후 실온에서 15분간 어두운 환경에서 배양했습니다.

게이팅 전략: 전방 산란(FSC) 대 측면 산란(SSC) 게이트가 셀 잔해를 차단하는 데 사용되었고; Annexin-V FITC⁺/PI⁻ 세포는 초기 세포자멸로 정의되었고, Annexin-V FITC⁺/PI⁺ 세포는 후기 세포자멸로 정의되었습니다. 게이팅 플롯은 보충 파일 1 (원시 유세포검사 데이터)에 포함되어 있습니다. 세포는 유세포계로 채취되었습니다. 데이터는 Flow Jo 소프트웨어를 사용해 분석되었습니다.

6. 플라스미드 및 모방의 형질전환

MiR-34a 모방(34a-모방)과 비특이적 대조군 모방(NC)은 상업적 출처에서 얻었습니다. 제조사 지침에 따라 LipofectamineTM 3000을 사용해 플라스미드를 형질질로 전환했습니다.

7. 아크리딘 오렌지 염색

자가포식은 보통 세포 내 아크리딘 오렌지 염색으로 평가되었습니다. 세포를 특정 농도의 LPS 또는 OST로 24시간 처리한 후, 37°C에서 5분간 어두운 환경에서 AO(1 μg/mL)와 함께 배양했습니다. 레이저 공초점 현미경으로 이미지를 촬영했습니다. AVO 양성률은 ImageJ 소프트웨어를 사용해 샘플당 5개의 무작위 영역(×400배율)에 있는 주황색 펀크타 포함 세포를 세어 계산했습니다. 데이터는 세 개의 독립 실험에서 나온 평균 ± SD로 보고됩니다.

8. 투과 전자현미경 관찰

샘플은 2.5% 글루타알데히드와 1% 오스뮴 테트록사이드에 고정된 후 탈수, 세척, 함침되었습니다. 중합 후, 샘플은 울트라미세토름을 사용해 70nm 두께의 조각으로 절단되었습니다. 세포의 초구조는 투과 전자현미경으로 관찰되었습니다.

9. 면역 블롯

Bcl-2에 대한 마우스 단클론 항체(Abs, #68103), LC3에 대한 토끼 다클론 항체(#14600-1-AP), IL-6(21865-1-AP), 그리고 β-Actin에 대한 마우스 단클론 항체(#66009-1-lg)는 Proteintech에서 구입하였습니다. IRDye 800CW 염소(다클론) 항토끼 IgG(H+L) 또는 IRDye 800CW 염소(폴리클론) 항마우스 IgG(H+L)에 결합된 2차 Abs가 상업적으로 구하되었습니다. 세포는 전세포 용해 분석법에서 용해되었으며, SDS-폴리아크릴아마이드 겔 전기영동으로 분리되었습니다. 단백질은 1차 Abs와 해당 2차 Abs를 사용하여 검출되었습니다. 단백질 부하량은 레인당 30 μg이었으며; 1차 항체 희석: Bcl-2 (1:1000), LC3 (1:1500), β-튜불린 (1:5000); 2차 항체(IRDye 800CW)는 1:10,000, IL-6(1:800)를 사용했습니다. 그 후 단백질 밴드는 향상된 화학발광 레이저 영상 스캔 시스템에 의해 포획되었습니다. 단백질 밴드는 ImageJ 소프트웨어로 정량화되었습니다.

10. 정량적 실시간 중합효소 연쇄반응(qRT-PCR)

총 RNA는 트리졸 시약을 사용해 세포에서 분리되었습니다. 총 RNA에서 유래한 cDNA는 cDNA regent 키트를 사용하여 합성되었고, SYBR Green 방법으로 분석되었습니다. miRNA에서 유래한 cDNA는 miRcute plus miRNA 1가닥 cDNA 키트를 사용해 합성하고 miRcute plus miRNA qPCR 키트로 분석하였습니다. 모든 절차는 제조사 프로토콜에 따라 진행되었습니다. 표적 전사체의 발현은 2-△△CT 방법을 사용하여 계산되었습니다. GADPH와 U6는 각각 mRNA와 miRNA의 로딩 조절 대상으로 사용되었습니다. 프라이머 서열은 표 1에 나와 있습니다.

11. 루시페라즈 리포터 분석

야생형 psiCHECK2- Bcl-2-3′UTR 리포터 플라스미드(WT)와 psiCHECK2- Bcl-2-3′UTR 리포터 플라스미드가 miR-34a 결합 부위에 돌연변이를 가진 경우(Mut). 리포펙타민TM 3000을 사용하여 리포펙타민과 miR-34a 모방체를 연골세포로 공동 형질전환하였습니다. 세포는 24시간 후 채취하여 분해했습니다. 루시페라제 강도는 제조사 설명서에 따라 Dual-LumiTM Luciferase Reporter 유전자 분석기 키트를 사용해 측정되었습니다.

12. 보행 분석 검사

MGT-PR 시스템은 각 그룹의 쥐의 달리는 사지 움직임을 관찰하는 데 사용되었다. 시험 전에 쥐들은 활주로 환경에 적응하도록 허용했습니다. 자유 보행 중 보행 데이터를 기록하였으며, 각 쥐마다 세 차례의 연속된 유효한 보행 실험이 기록되었습니다. 분석된 매개변수에는 걸음 길이, 스윙 지속 시간, 그리고 오른쪽과 왼쪽 뒷다리 간의 협응 등이 포함되었습니다.

13. 통계 분석

이 실험들은 3회로 수행되었고, 최소 세 번 이상 독립적으로 반복되었다. 통계 분석은 GraphPad Prism 9 소프트웨어를 사용하여 수행되었습니다. 데이터는 평균 ± SD로 표시되었습니다. 통계적 차이는 다중 비교에 대해 일원 ANOVA(Tukey의 사후 검정)로, 두 실험군 비교에는 양측 Student's t 검정으로 평가하였습니다. 차이는 p < 0.05에서 유의미하다고 인정되었습니다.

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결과

시험관 내외 및 생체 내 OST로 보호된 연골세포
자연산물로서 OST의 안전성 프로필은 철저한 조사가 필요합니다. 이 연구는 먼저 CCK8 분석법을 사용하여 연골 세포에 대한 세포독성을 시험관 내에서 평가하였습니다. 결과는 OST가 400 μM 농도에서도 연골세포에 대한 독성을 보이지 않음을 보여주었다(그림 1A). OST가 연골세포에 미치는 항염증 및 항세포자멸사 효과를 조사하기 위해, LPS 및 OST 치료 후 CCK8 검사법을 사용해 세포사멸을 평가하였다. 데이터는 LPS가 연골 세포 사사를 증가시키는 반면, OST 치료는 세포 사멸에 대한 일정 수준의 보호를 제공함을 보여주었습니다(그림 1B). 더 나아가 연골세포의 초구조는 투과 전자현미경을 이용해 조사되었습니다.

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토론

무엇보다도 OST는 시험 관 내에서 LPS에 의한 스트레스로부터 연골세포를 보호하고, 생체 내 KOA 쥐에서 염증과 세포자사멸사를 완화시켰습니다. 이러한 보호 효과는 miR-34a의 하향 조절과 그에 따른 Bcl-2 발현 증가와 연관되어 있는데, 이는 OST 작용에서 miR-34a/Bcl-2 축의 역할이 제안된 것과 일치합니다.

본 연구에서 OST는 연골세포의 자가포식을 촉진하고 시험 관 내와 생체 내에서 세포자살 세포 세포 세포 멸사를 감소시키는 것으로 밝혀졌습니다. 연구의 관련 분자 메커니즘은 그림 8에서 자세히 분석되었습니다. 첫째, OST는 독성이 낮고, 시험관 내에서 LPS에 의해 유발된 세포 스트레스 반응을 완화했으며, ACLT 수술로 구성된 KOA 모델에서 염증과 세포자사멸사에 대한 보호 효...

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공개 사항

저자들은 금전적 이해 충돌이 없습니다.

감사의 글

이 연구는 장쑤대학교 신약 및 임상의학 핵심 연구소(XZSYSKF2021037)의 지원을 받았습니다. 이 글의 실험들은 일부 쉬저우 의과대학 공공실험연구센터와 실험동물센터에서 수행되었습니다. 푸싱 동, 장커지아, 진샤 콰이, 민 장에게 열정적인 도움에 감사의 뜻을 전합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1% 오스뮴 테트록사이드루신 기술
2.5% 글루타알데히드중징케이 테크놀로지
아크리딘 오렌지시그마암레스코 0360
Annexin-V FITC/PI 솔루션키생성KGA107
Bcl-2단백질 기술#68103
세포 계수 키트-8빅메드39.VC5001L
화학발광오디세이 CLX
공초점 현미경라이카스텔라리스 5
DMEM/F-12하이클론12.SH30023-01
듀얼-루미TM 루시페라제 리포터 진 분석 키트비요타임RG088
FastKing cDNA 리젠트 키트천건KR116-03
유세포계BDFACS 칸토 II
인간 연골세포 계주미국 타체 문화 컬렉션YTLK280144
LC3단백질 기술#14600-1-AP
리포펙타민TM 3000인비트로젠L3000015
지포다당류시그마29.L2880
용해 분석키생성KGP704-100
마이크로플레이트 리더바이오텍시너지 2
miRcute plus miRNA 1가닥 cDNA 키트천건KR211-02‌
miRcute plus miRNA qPCR 키트천건FP411-02
오스톨레메드켐익스프레스O815127-25g
SDS-폴리아크릴아마이드 겔 전기영동NCM 바이오텍P2012
혈청클라크 생명과학FB15015
SYBR 그린천건FP217-01‌
투과 전자현미경FEI테크나이 G2
울트라 미세토름레시아UC7
직립형 형광 현미경올림포스BX43
β-액틴단백질 기술#66009-1-lg

참고문헌

  1. Kan, H. S., et al. Non-surgical treatment of knee osteoarthritis. Hong Kong Med J. 25 (2), 127-133 (2019).
  2. Dantas, L. O., Salvini, T. F., McAlindon, T. E. Knee osteoarthritis: Key treatments and implications for physical therapy. Braz J Phys Ther. 25 (2), 135-146 (2021).
  3. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology-based strategy to investigate the mechanisms of Cibotium barometz in treating osteoarthritis. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 1-15 (2022).
  4. Li, H., et al. Intra-articular injection of a nanosuspension of tetramethylpyrazine dihydroxynaphthalenate for stronger and longer-lasting effects against osteoarthritis. J Biomed Nanotechnol. 17 (6), 1199-1207 (2021).
  5. Qiang, R., et al. Carbon quantum dots derived from herbal medicine as therapeutic nanoagents for rheumatoid arthritis with ultrahigh lubrication and anti-inflammation. ACS Appl Mater Interfaces. 15 (32), 38653-38664 (2023).
  6. Sun, M., Sun, M., Zhang, J. Osthole: An overview of its sources, biological activities, and modification development. Med Chem Res. 30 (10), 1767-1794 (2021).
  7. Yang, S., et al. Osthole: An up-to-date review of its anticancer potential and mechanisms of action. Front Pharmacol. 13, 945627(2022).
  8. Liang, J., et al. Osthole inhibits ovarian carcinoma cells through LC3-mediated autophagy and GSDME-dependent pyroptosis except for apoptosis. Eur J Pharmacol. 874, 172990(2020).
  9. Zhou, X. H., Kang, J., Zhong, Z. D., Cheng, Y. Osthole induces apoptosis of HT-29 cells via endoplasmic reticulum stress and autophagy. Oncol Lett. 22 (4), 726(2021).
  10. Zhou, X., Kang, J., Zhang, L., Cheng, Y. Osthole inhibits malignant phenotypes and induces ferroptosis in KRAS-mutant colorectal cancer cells via suppressing AMPK/Akt signaling. Cancer Chemother Pharmacol. 92 (2), 119-134 (2023).
  11. Song, J., et al. Osthole impairs mitochondrial metabolism and the autophagic flux in colorectal cancer. Phytomedicine. 125, 155383(2024).
  12. Zhang, Z. R., et al. Osthole enhances osteogenesis in osteoblasts by elevating transcription factor Osterix via cAMP/CREB signaling in vitro and in vivo. Nutrients. 9 (6), 588(2017).
  13. Ma, T., et al. Osthole suppresses knee osteoarthritis development by enhancing autophagy activated via the AMPK/ULK1 pathway. Molecules. 27 (23), 8624(2022).
  14. Liang, J. Y., Wu, W. L., Chen, Y. X., Liu, H. The efficacy and potential mechanism of cnidium lactone to inhibit osteoclast differentiation. Artif Cells Nanomed Biotechnol. 47 (1), 3087-3093 (2019).
  15. Wang, Z., Bao, H. W., Xu, Y. J. Cnidium lactone prevents bone loss in an ovariectomized rat model through the estrogen-α/BMP-2/Smad signaling pathway. J Cell Biochem. 121 (10), 4567-4576 (2020).
  16. Zheng, X., et al. Osthole improves therapy for osteoporosis through increasing autophagy of mesenchymal stem cells. Exp Anim. 68 (4), 347-355 (2019).
  17. Lu, K., Lin, J., Jiang, J. Osthole inhibits cell proliferation and induces apoptosis through decreasing CPEB2 expression via upregulating miR-424 in endometrial carcinoma. J Recept Signal Transduct. 40 (1), 89-96 (2020).
  18. Lin, K. A. I., et al. Osthole suppresses proliferation and accelerates apoptosis of human glioma cells via upregulation of microRNA-16 and downregulation of MMP-9. Mol Med Rep. 12 (3), 4592-4597 (2015).
  19. Lv, X., et al. Osthole exhibits an anti-tumor effect in retinoblastoma through inhibiting the PI3K/AKT/mTOR pathway via regulating the hsa_circ_0007534/miR-214-3p axis. Pharm Biol. 60 (1), 417-426 (2022).
  20. Niu, Z., et al. Osthole alleviates pulmonary vascular remodeling by modulating microRNA-22-3p mediated lipid metabolic reprogramming. Phytomedicine. 96, 153840(2022).
  21. Lu, W. Osthole down-regulates miR-30a and promotes autophagy to protect rats against myocardial ischemia/reperfusion injury. Turk J Thorac Cardiovasc Surg. 27 (2), 178-184 (2019).
  22. Hou, H., Yang, Y., Chen, R., Guo, Z. Osthole protects H9c2 cardiomyocytes against trastuzumab-induced damage by enhancing autophagy through the p38MAPK/mTOR signaling pathway. Toxicol In Vitro. 93, 105704(2023).
  23. Li, S. H., et al. Osthole stimulated neural stem cells differentiation into neurons in an Alzheimer’s disease cell model via upregulation of microRNA-9 and rescued functional impairment of hippocampal neurons in APP/PS1 transgenic mice. Front Neurosci. 11, 340(2017).
  24. Jiao, Y., et al. Osthole decreases beta amyloid levels through upregulation of miR-107 in Alzheimer’s disease. Neuropharmacology. 108, 332-344 (2016).
  25. Zhang, W., et al. miR-34a enhances chondrocyte apoptosis, senescence and facilitates development of osteoarthritis by targeting DLL1 and regulating PI3K/AKT pathway. Cell Physiol Biochem. 48 (3), 1304-1316 (2018).
  26. Xiong, G., et al. Long non-coding RNA MEG3 regulates the progress of osteoarthritis by regulating the miR-34a/Klotho axis. Ann Transl Med. 10 (8), 454(2022).
  27. Tao, H., Cheng, L., Yang, R. Downregulation of miR-34a promotes proliferation and inhibits apoptosis of rat osteoarthritic cartilage cells by activating PI3K/Akt pathway. Clin Interv Aging. 15, 373-385 (2020).
  28. Zafar, S., et al. Osthole: A multifunctional natural compound with potential anticancer, antioxidant and anti-inflammatory activities. Mini Rev Med Chem. 21 (18), 2747-2763 (2021).
  29. Zhang, H., Zheng, W., Li, D., Zheng, J. miR-146a-5p promotes chondrocyte apoptosis and inhibits autophagy of osteoarthritis by targeting NUMB. Cartilage. 12 (10), 1467S-1477S (2021).
  30. Lu, R., et al. Oroxin B alleviates osteoarthritis through anti-inflammation and inhibition of PI3K/AKT/mTOR signaling pathway and enhancement of autophagy. Front Endocrinol. 13, 1060721(2022).
  31. Lv, X., et al. miR-34a-5p was involved in chronic intermittent hypoxia-induced autophagy of human coronary artery endothelial cells via Bcl-2/beclin 1 signal transduction pathway. J Cell Biochem. 120 (11), 18871-18882 (2019).
  32. Ma, L., et al. Knee osteoarthritis therapy: Recent advances in intra-articular drug delivery systems. Drug Des Devel Ther. 16, 1311-1347 (2022).
  33. Zhang, W., et al. GelMA hydrogel as a promising delivery system for osthole in the treatment of rheumatoid arthritis: targeting the miR-1224-3p/AGO1 axis. Int J Mol Sci. 24 (17), 13210(2023).

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