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연구 논문

고리 RNA ZBTB46 은 지포다당류 손상된 인간 내피세포에서 ERBB2-AKT 신호 전달을 조절하여 세포자멸증과 산화 스트레스를 감쇠합니다

253 조회수

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DOI:

10.3791/69765

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2026년 2월 13일

1Department of Emergency, Fuzhou University Affiliated Provincial Hospital, Fujian Provincial Hospital, 2Fujian Provincial Key Laboratory of Emergency Medicine

이 논문에서

요약

패혈증 관련 급성 신장 손상(SA-AKI)은 상당한 사망률과 관련이 있습니다. 이 연구는 LPS 유도 HUVECs(시험관 내 SA-AKI)에서 circZBTB46이 하향 조절된 것을 발견합니다. 과발현은 HUVEC 생존성을 높이고, ERBB2/AKT 신호와 관련된 세포자멸사, 염증, 산화 스트레스를 감소시켜 SA-AKI와 관련된 잠재적 치료 표적을 시사합니다.

초록

원형 RNA는 스트레스 반응의 신흥 조절자로 떠오르고 있지만, 패혈증 관련 급성 신장 손상으로 이어지는 내피 손상에서의 역할은 아직 완전히 정의되지 않았습니다. 우리는 원형 RNA ZBTB46 (circZBTB46)이 ERBB2-AKT 신호를 활성화하여 내피 보호를 제공한다고 가설을 세웠습니다. 인간 탯줄 정맥 내피 세포가 지포다당류로 도전받는 세포 기반 모델을 사용하여 circZBTB46 발현을 정량화하고, 강제 발현이 생존, 세포자멸사, 염증 매개체, 산화환원 항상성에 미치는 영향을 검증하였습니다. 세포 생존 가능성 검사와 유세포 검사를 통해 생존율과 세포자살사를 평가하였습니다. 효소 결합 면역흡착 분석법에서는 인터루킨-6, 종양 괴사 인자 α, 인터루킨-1β가 측정되었으며, 활성 산소종, 말론디알데히드, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제, 카탈라아제는 산화 손상 및 항산화 능력의 지표로 평가되었습니다. 기전을 정의하기 위해 전사체 프로파일링을 수행하고 유전자 집합 풍부도 분석을 수행하고, 웨스턴 블롯팅을 통해 경로 단백질을 확인했으며, ERBB2 억제제 AG-825를 사용해 필요성을 평가하였습니다. 지포다당류가 억제된 circZBTB46. CircZBTB46 과발현은 생존력을 높이고, 세포자멸사를 감소시키며, 염증성 사이토카인 및 활성 산소종을 감소시키고, 말론디알데히드를 감소시키며, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 및 카탈라아제 활성을 증가시켰습니다. 전사체 및 단백질 분석은 ERBB2-AKT 축의 활성화를 지지했으며, 약리학적 ERBB2 차단은 세포보호 효과를 둔화시키고 산화환원 균형의 증가를 역전시켰습니다. 이 발견들은 circZBTB46 이 ERBB2-AKT 신호를 통해 지다당류에 의한 내피 손상을 억제하는 내인성 제약 역할을 하며, circZBTB46 을 패혈증 관련 급성 신장 손상의 기전적 결절이자 잠재적 치료 표적으로 지명합니다.

서론

패혈증은 병원성 침범에 의해 시작되는 생명을 위협하는 전신 염증 연쇄 반응으로, 종종 다기관 부전으로 절정에 이르는경우가 많습니다 1. 이러한 중요한 맥락에서 SA-AKI는 중환자실에서 주요하고 임상적으로 중요한 합병증으로 부각합니다. 전신 감염과 함께 신장 여과 능력이 급격히 저하되는 것이 특징이며, 임상 코호트2에서 비패혈성 AKI보다 38%-42% 높은 사망률을 보입니다. 패혈증 또는 패혈성 쇼크 진단을 받은 환자의 약 60%가 SA-AKI3로 발병할 것으로 예상됩니다. 따라서 SA-AKI는 중환자실에서 주요 도전 과제가 되어 이환율과 사망률에 크게 기여하고 있습니다. 현재 SA-AKI의 기전은 완전히 밝혀지지 않았습니다. 전임상 연구에서는 미세순환 기능 장애, 세포 대사 변화, 레닌-안지오텐신-알도스테론계(RAAS) 내 불균형, 미토콘드리아 기능 장애, 염증 조절 이상이 포함되었으나, SA-AKI의 병태생리학적 기전은 여전히 밝혀지지 않았으며, 조기 진단과 지속적인 관리를 지원할 최적의 조치가 현재 부족합니다 5,6,7,8. SA-AKI는 세포자멸사 증가, 과도한 산화 스트레스, 염증9를 특징으로 합니다. 이 연구 틀 내에서 지지다당(LPS)은 시험관 내에서 인간 제대정맥 내피세포(HUVECs)에서 패혈증 관련 AKI의 증상을 모방하기 위해 시험관 내에서 사용되었으며, 이는 예비 표적 탐색5.

최근 몇 년간 고리형 RNA(circRNA)는 최근 확인된 비암호화 RNA 분자 범주로, 다양한 질병에서의 역할로 점점 더 주목받고 있습니다10. 서클RNA는 안정적인 고리 구조를 가지고 있으며, 마이크로RNA(miRNA)의 분자 해면체로 작용하거나 유전자 전사를 조절하거나 단백질 상호작용에 참여함으로써 세포 생리적·병리학적 과정에 참여합니다. 연구 결과 circRNA는 염증, 산화 스트레스, 세포자멸 경로를 조절하는 데 결정적으로 관여하며, 이로 인해 패혈증 및 급성 신장 손상을 포함한 관련 질환에 대한 연구 관심이 증가하고 있습니다. 예를 들어, hsa_circ_0072463는 SA-AKI13의 유망한 진단 지표이자 치료 표적으로 확인되었습니다. Circ_001653 BUD1314 모집을 통해 SA-AKI 완화 효과가 보고되었습니다. 그러나 SA-AKI에서 circRNA의 기능적 중요성은 아직 크게 밝혀지지 않았습니다.

본 연구는 시험관 내 SA-AKI 시스템을 사용하여 circZBTB46이 내피 세포 기능, 산화 스트레스 및 염증 반응에 미치는 영향을 조사하기 위해 설계되었습니다. LPS 유도 HUVEC 모델을 구축하여 내피 손상을 조사하였다. LPS 도전 HUVEC는 환원주의적 내피 스트레스 모델을 나타내며, 이는 패혈증 관련 급성 신장 손상의 다요인 병태생리와 관련되지만 동등하지는 않다는 점을 주목해야 합니다. 이 모델은 주로 TLR4 매개 염증 활성화, 산화 스트레스, 세포자퇴사 관련 내피 반응을 포착하며, 혈역학적 변화, 보체 및 응고 연쇄 반응, 손상 관련 분자 패턴, 이질적인 미생물 자극과 같은 주요 생체 내 요소는 생략합니다. 이 실험 틀 내에서 circZBTB46이 ERBB2 신호 경로를 조절하여 LPS에 의해 유발된 산화 스트레스와 세포자멸사를 완화하여 내피 세포 기능을 보호하는지 조사했습니다. 우리가 아는 한, 이 연구는 패혈증 관련 급성 신장 손상 맥락에서 circZBTB46이 내피 스트레스 반응과 연관된 최초의 증거를 제공합니다. circZBTB46 매개 내피 보호의 분자 기전을 밝혀내음으로써, 이 연구는 SA-AKI의 병원성 기전에 대한 이해를 심화시키고 circRNA를 중심으로 한 혁신적인 치료법의 길을 열 수 있습니다.

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프로토콜

이 프로토콜은 circZBTB46 조절이 HUVEC에서 염증 신호, 산화 스트레스, ERBB2-AKT 경로 활성화에 미치는 영향을 조사하는 데 사용되는 실험적 절차를 설명합니다.

세포 배양
이 연구에 사용된 HUVECs 셀은 상업용 공급원에서 얻었습니다. HUVEC는 광범위한 이용 가능성, 재현 가능한 배양 조건, 높은 형질전환 효율 덕분에 염증 스트레스 하에서 유전적 조작과 내피 신호 전달 경로의 기전적 연구를 용이하게 하여 대표적인 내피 세포 모델로 사용되었습니다15,16. HUVEC는 10% (v/v) 태아 소 혈청과 1% 농도의 항생제-항균제 혼합 요법을 보충한 DMEM에서 배양하였다. 모든 세포 배양은 표준 생리학적 조건 하에 가습 챔버(37 °C, 5%CO2)에서 유지되었으며, 이는 지속적인 세포 증식을 촉진하면서도 >95% 생존율을 유지하였으며, 이는 트리판 블루 배제 검사로 확인되었습니다. 장기 HUVEC 유지에는 일반적으로 내피 특이적 배지(예: EGM-2 또는 M199와 내피 성장 보충제를 추가한 것)가 권장되지만, 본 연구에서는 실험적 치료 간 일관성과 LPS 자극 및 약리학적 억제제 분석과의 적합성을 보장하기 위해 DMEM을 사용했습니다. AG-825 억제제 분석의 경우, 10 μM AG-825가 포함된 신선한 DMEM과 함께 HUVEC를 1시간 동안 인큐베이팅합니다. 그 후 LPS 용액을 웰에 추가하여 최종 농도는 10 μg/mL로 만들고, 24시간 동안 배양을 계속합니다. 잠재적인 표현형 드리프트를 최소화하기 위해 HUVEC는 낮은 통과 수에서 사용되었고, 단기 분석에만 DMEM 기반 실험 조건에 노출되었습니다. 모든 기능적 실험은 장기간 배양 기간이 아닌 정의된 처리 창 내에서 수행되었습니다.

세포 형질전환
circZBTB46의 생물학적 역할을 밝히기 위해 과발현 플라스미드(oe-circZBTB46)와 일치하는 음성 대조 구조체(oe-NC)를 합성하고 GenScript에 의해 검증되었습니다. HUVEC는 1 x 10⁵ 세포/웰 밀도의 6웰 플레이트에 시딩되어 하룻밤 동안 배양하여 형질전환 시점에 ~70%-80% 합류율을 달성했습니다. 각 웰마다 2.5 μg 플라스미드 DNA(oe-circZBTB46 또는 oe-NC)를 125 μL 환원 혈청 배지에 희석하고 2.5 μL P3000 시약(튜브 A)과 혼합했습니다. 동행하여 3.75 μL 리포펙타민 3000을 125 μL 환원 혈청 배지(튜브 B)에 희석하였다. 그 후 튜브 A와 튜브 B를 결합하여 부드럽게 혼합한 후 상온에서 15-20분간 배큐하여 복합체 형성을 허용했습니다(최종 복합체 부피: 250 μL/well). 복합체는 항생제 없는 완전 배지에 점적 첨가하여 세포에 추가되었습니다. 37°C, 5%CO2에서 6시간 배양한 후, 형질전환 배양지를 신선한 완전 배양지로 교체하였습니다. 세포는 이후 분석에 대해 48시간 동안 배양되었습니다. 모든 절차는 제조사의 지침을 따랐습니다.

LPS 유도 모델
시험관 내 SA-AKI 모델을 생성하기 위해, OE-circZBTB46 또는 NC로 형질전환한 HUVEC(5 x 10 5 세포/웰)를 96웰 플레이트에 시딩하고 80% 수율이 달성될 때까지 24시간 유지했습니다. 이후 이 세포들은 10 μg/mL LPS로 24시간 동안 치료를 받았다. LPS 처리를 하지 않은 HUVEC가 대조군으로 사용되었다.

qRT-PCR
HUVEC에서 총 RNA 추출은 상업용 시약을 사용했습니다. 상업용 시약 키트를 사용하여 cDNA 합성을 위한 역전사가 수행되었습니다. 정량적 PCR(qPCR)은 마스터 믹스와 함께 실시간 PCR 시스템을 사용하여 3회로 수행되었습니다. 표적 유전자의 발현량은 U6에 대해 보정되었으며, 분석은 2−ΔΔCT 방법17,18로 수행되었습니다. circRNA 발현 분석에서는 U6 소규모 핵 RNA가 정규화의 내부 기준으로 사용되었으며, 이는 소규모 비암호화 RNA의 정량화에 일반적으로 사용되며 단기 시험관 실험 조건에서 비교적 안정적인 발현을 보이는 것으로 보고되었습니다. 본 연구에 적용된 프라이머 서열은 다음과 같이 나열되어 있습니다:

circZBTB46-포워드: 5'-CGGCCTCATGAGTAAGAAC-3'

circZBTB46-리버스: 5'-CGCCTCTTACAGACTGGG-3'

U6-포워드: 5'-TGCTATCACTTCAGCAGCA-3'

U6-후진: 5'-GAGGTCATGCTAATCTCTCTG-3'.

CCK-8 분석
HUVEC의 생존 가능성은 상업적으로 구매한 CCK-8을 사용해 평가되었습니다. 간단히 말해, 세포는 96웰 플레이트에 씨앗을 심었고, 세포들은 24시간 동안 부착 배양을 거쳤다. 이후 각 웰에 10 μL CCK-8 용액을 첨가하고, 세포를 37 °C에서 2시간 동안 추가로 배양했습니다. 마이크로플레이트 리더기를 사용해 450 nm 파장에서 광학 밀도(OD)를 측정했습니다. 예비 관찰 결과 10 μg/mL의 LPS가 HUVECs의 생존 가능성을 현저히 감소시키는 것으로 나타났으며, 이로 인해 이후 실험 공정에 이 농도가 선택되었습니다.

유세포검사
초기에는 표준 절차에 따라 EDTA가 없는 트립신으로 HUVEC를 분리했습니다. Annexin V-APC/PI 세포자살상증 분석 키트 제조사 지침에 따라, 효소 해리 후 세포 현탁액은 1,000 x g 4°C에서 5분간 원심분리되었습니다. 펠릿 세포는 동일한 조건에서 얼음처럼 차가운 PBS로 2회 세척한 후, 100 μL 1x 결합 완충액에 재현탁했습니다. 각 샘플은 5 μL Annexin V-FITC 결합액과 5 μL 프로피디움 요오화물(PI) 염색액으로 처리한 후, 실온(20-25 °C)에서 어둠 속에서 10분간 배양하였습니다. 마지막으로 모든 샘플에 400 μL 1x 결합 버퍼를 추가하고, 유동 세포계를 사용해 1시간 이내에 세포자멸사를 분석하였습니다. 이벤트는 처음에 FSC/SSC로 인해 잔해를 차단하기 위해 게이트가 설정되었습니다. 세포자멸사 분석을 위해 적절한 대조군(염색되지 않은 및 단일 염색/보상 대조군)을 사용하여 Annexin V-FITC 대 PI 플롯에 사분면 게이트를 적용하여 생백신(Annexin V-/PI-), 초기 세포자살자사(Annexin V+/PI-), 후기 세포자사멸(Annexin V+/PI+), 괴사(Annexin V-/PI+) 집단을 구분하였습니다. 동일한 게이팅 템플릿과 임계값이 모든 샘플에 적용되었습니다.

ELISA 분석법
배양된 HUVECs의 상정액 내 염증 인자인 종양 괴사 인자-α(TNF-α), 인터루킨-6(IL-6), 인터루킨-1β(IL-1β) 농도는 상업적으로 구할 수 있는 ELISA 키트를 사용하여 측정하였습니다. 구체적으로, 제조사 지침에 따라 인간 TNF-α ELISA 키트, 인간 IL-6 ELISA 키트, 인간 IL-1β ELISA 키트가 사용되었습니다. 각 분석마다 50 μL의 희석되지 않은 세포 배양 상원액이 각 웰에 적재되었습니다. 표준 곡선은 제공된 직렬 희석(TNF-α를 사용하여 생성되었습니다: 0-1000 pg/mL; IL-6: 0-500 pg/mL; IL-1β: 0-200 pg/mL). 샘플과 표준 첨가 후, 플레이트는 37°C에서 90분간 배양한 후, 세척 완충제를 사용한 다섯 차례의 세척이 이루어졌습니다. 그 후 비오틴 접합 검출 항체를 첨가하여 37°C에서 60분간 배열했습니다. 또 한 단계 세척 후 스트렙타비딘-HRP를 첨가하여 37°C에서 30분간 배양했습니다. 최종 세척 후에는 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB) 기질을 추가하여 37°C에서 15분간 어두운 환경에서 배양했습니다. 반응은 정지 용액으로 종료되었고, 450 nm 파장과 기준 파장 630 nm에서 즉시 흡광도를 측정했습니다. 각 샘플과 표준체는 중복 분석되었으며, 모든 실험에는 세 개의 독립적인 생물학적 복제가 포함되었습니다. 상청액 내 산화 스트레스 마커인 말론디알데히드(MDA), 슈퍼옥사이드 디무타제(SOD), 카탈라제(CAT)의 수치는 각각 MDA ELISA 키트, SOD ELISA 키트, CAT ELISA 키트를 사용하여 제공된 프로토콜19, 20, 21에 따라 평가하였습니다. MDA 및 SOD 분석에서는 희석 없이 웰당 40 μL 상청액을 사용했으며; CAT의 경우, 샘플은 적재 전에 분석 버퍼로 1:10 희석되었습니다. 표준 곡선은 키트 사양에 따라 작성되었습니다(MDA: 0-60 nmol/mL; SOD: 0-100 U/mL; CAT: 0-100 U/mL). 배양 단계는 다음과 같이 수행되었습니다: MDA - 37 °C에서 60분; SOD - 37 °C에서 60분; CAT - 37°C에서 30분. 주요 배화 단계 사이에 플레이트를 4번 세척했습니다. 색상 현상은 각 기질을 추가하고 37 °C에서 배양하여 달성되었습니다 (MDA: 15분; SOD: 20분; CAT: 15분). 흡수도는 SOD와 CAT의 경우 450nm, MDA의 경우 532nm에서 측정되었습니다. 모든 측정은 중복 웰에서 수행되었으며, 세 개의 독립적인 생물학적 복제체에 걸쳐 반복되었습니다.

RNA 시퀀싱
총 RNA는 제조사 지침에 따라 상용 시약을 사용해 HUVEC에서 추출되었습니다. RNA 순도와 농도는 분광광도계를 사용해 260nm 및 280nm(A260/A280)에서 흡수도를 측정하여 평가했으며, RNA 무결성은 바이오분석기로 평가하였습니다. 이후 라이브러리 준비에는 RNA 무결 번호(RIN) ≥ 7인 RNA 샘플만 사용되었습니다. 상업 회사에서 시행한 표준 rRNA 제거 절차를 사용하여 라이브러리 준비 과정에서 리보솜 RNA를 제거했습니다. 필요한 경우, 라이브러리 구축 전에 RNase R 처리가 선형 RNA를 선택적으로 소화하고 순환 RNA 종을 풍부하게 하는 데 적용되었습니다. RNA 단편화는 RNA 라이브러리 준비 키트 매뉴얼의 표준 프로토콜에 따라 고온 조건에서 수행되어 적절한 크기의 RNA 조각을 생성했습니다. 시퀀싱 라이브러리는 제조사의 지침에 따라 RNA 라이브러리 준비 키트를 사용해 준비되었고, 150 bp(PE150) 읽기 길이의 쌍엔드 시퀀싱 전략을 사용해 일루미나 플랫폼에서 시퀀싱되었습니다. 시퀀싱 깊이는 전사체 전체 분석을 지원하기에 충분했습니다. 원시 시퀀싱 리드는 표준 품질 관리 절차를 통해 어댑터 서열과 저품질 리드를 제거했습니다. 클린 리드는 인간 참조 게놈과 정렬되었고, 유전자 발현 수준은22,23으로 정량화되었습니다. LPS 자극 하에서 circZBTB46 과발현 HUVEC와 NC 처리 HUVEC 간의 차등 발현 유전자(DEGs)가 확립된 통계적 방법을 사용하여 확인되었습니다. 유전자 집합 풍부 분석(GSEA)을 통해 circZBTB46 과발현과 관련된 신호 전달 경로를 규명하였습니다. 유전자는 실험 그룹 간 발현 차이를 기준으로 순위가 매겨졌습니다. 분자 서명 데이터베이스(MSigDB)에서 선별한 유전자 세트가 풍부 분석에 사용되었습니다. 농축 유의성은 정규화 농축 점수(NES)와 거짓 발견률(FDR)을 기반으로 평가되었으며, FDR < 0.25는 통계적으로 유의미한 것으로 간주되었습니다. CircRNA 시퀀싱과 관련된 모든 생물정보학적 분석은 외주로 진행되었습니다.

DEG의 식별
DEG를 선별하기 위해 DESeq(2012) R 소프트웨어 패키지를 통해 두 개의 뚜렷한 그룹 간 발현 수준을 대조했습니다. 통계적 유의성의 임계값은 p < 0.05로 정의되었으며, |log2FC| 0.58을 초과하는 값. 히트맵은 Pheatmap R 패키지로 생성되었고, 화산 플롯은 Goplot2 R 패키지를 사용해 그리었습니다.

기능 풍부 분석
선형 전사체에서 도출된 GO 및 KEGG 농축 분석은 온라인 플랫폼 EnrichR을 사용하여 수행되었으며, 버블 차트는 GOplot R 패키지를 기반으로 작성되었습니다. GSEA 소프트웨어는 MSigDB 데이터베이스에서 제공된 발현 행렬과 유전자 세트 파일을 기반으로 분석파라미터(예: 순열 수 및 통계적 방법)를 설정하여 사용되었습니다. 유전자 집합의 풍부화는 정규화된 농도 점수(NES), P-값, FDR 값을 사용하여 평가하여, 차별발현 유전자의 기능과 잠재적 생물학적 메커니즘을 심층적으로 탐구하였습니다.

서부 블롯
전체 단백질은 RIPA 용해 완충제를 사용해 약 1 x 10⁶ 세포에서 추출되었으며, 프로테아제와 인산효소 억제제가 보완되었습니다. 단백질 농도는 BCA 단백질 정량 키트를 사용해 측정하였습니다. 동일한 양의 단백질(레인당 20 μg)을 10% 도데실 황산나트륨-폴리아크릴아마이드 겔(SDS-PAGE)에서 80 V에서 30분간 30분간 사용하고, 이어서 120 V에서 60분간 전기영동으로 분리하였습니다. 이후 단백질은 100V 습식 전달 시스템을 사용해 4 °C에서 90분간 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF) 막으로 전달되었습니다. 막은 상온에서 5% 무지방 우유와 0.1% Tween-20(TBST) 및 Tris 완충 식염수에 1시간 차단한 후, 동일한 차단 버퍼(표적 단백질은 일반적으로 1:1000, GAPDH는 1:5000)에서 희석된 1차 항체를 4°C에서 밤새 배양하였습니다. 사용된 주요 항체는 ERBB2, p-AKT, AKT, GAPDH였습니다. 배양 후, 막을 TBST로 3회(세척당 10분씩) 세척한 후, 고추냉이 과산화효소(HRP) 결합된 염소 항토끼 항 IgG 2차 항체(차단 완충액 내 1:5000)와 실온에서 1시간 배양하였습니다. 추가로 세 번의 TBST 세척(각각 10분)을 거친 후, 증강 화학발광(ECL) 서부 블롯 기판 키트를 사용해 단백질 밴드를 시각화하고 영상 시스템으로 영상화하였습니다. 밴드 강도는 소프트웨어를 사용해 정량화되었습니다.

통계 분석
통계 평가는 GraphPad Prism 10을 사용하여 수행되었습니다. 데이터는 평± 표준오차(SEM)로 표시됩니다. p-값 < 0.05가 통계적 유의성을 나타내도록 정의되었습니다.

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결과

시험관 내 SA-AKI 모델에서 circZBTB46 발현의 qRT-PCR 분석
이 실험들은 circZBTB46 발현이 LPS 자극 하에서 변화하고, circZBTB46 조절이 내피세포 생존력과 세포자멸사에 영향을 미친다는 가설을 시험 관 내 SA-AKI 모델에서 검증하기 위해 수행되었습니다. 초기에는 circZBTB46 발현을 대조군 조건과 시험관 내 SA-AKI 시스템에서 조사하였다. 그림 1A에 나타난 것처럼, LPS 처리된 HUVEC에서 circZBTB46 발현은 처리되지 않은 대조군에 비해 현저히 감소했습니다. 이 결과는 LP...

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토론

패혈증 동안 병원체가 방출하는 LPS와 같은 병원체 관련 분자 패턴(PAMPs)이 Toll 유사 수용체(예: TLR4)를 활성화하여 전신 염증 반응을 시작한다26. 이 과정은 TNF-α, IL-6, IL-1β 등 여러 염증성 매개체의 분비를 촉진하여 사이토카인 폭풍27을 일으킵니다. 동시에 LPS는 혈관 내피 세포를 직접 손상시켜 미세순환 장애, 혈관 투과성 증가, 혈전증을 유발하여 궁극적으로 신혈류를 저해합니다27. 또한, LPS에 의해 유발된 산화 스트레스는 과도한 ROS를 발생시켜 신장 세뇨관 상피 및 내피 세포를 추가적으로 손상시키고, 미토콘드리아 의존 경로를 통해 세포 세포자멸사를 촉진합니다. 이 과정들은 모두 관성 기능 장애, 사구체 여과율 감소, 궁극적으로 급성 신장 손상을 초래합니다

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공개 사항

저자들은 상충하는 이해관계가 없다고 선언한다. 저자들은 이 원고에 제시된 주요 결과가 이전에 출판된 적이 없으며 다른 곳에서 출판 검토 중이 없다고 선언합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
AG-825 (ErbB2 억제제)메드켐익스프레스HY-1019710 & 뮤; M은 경로 차단을 의미합니다
애질런트 2100 바이오분석기애질런트G2939BARNA 무결성 (RIN≥ 7)
AKT 항체단백질 기술60203-2-IgWB (1:15000)
부속 V-APC/PI 세포자퇴증 키트일러브사이언스E-CK-A327세포자멸증 검출
항생제-항균류깁코152400621% 농도
BCA 단백질 정량 키트비요타임P0012단백질 농도
캣 엘리사 키트메이미안MM-0897H2항산화 효소
CCK-8 키트도진도CK04세포 생존성 검사
CircRNA 시퀀스푸저우 화롱커후이 바이오테크놀로지 유한회사.PE150CircRNA 시퀀싱 및 관련 생물정보학 분석
CytoFLEX 유량 세포계벡먼 쿨터B53000세포자멸증 분석
DMEM깁코 (인비트로젠)11965092세포 배양 배지
ECL 기질 키트밀리포어WBKLS0100단백질 검출
ERBB2 항체시노 바이오컬100271-T32WB (1:10000)
태아 소 혈청 (FBS)생물학적 산업04-001-1ACS10% (v/v) 보조제
GAPDH 항체단백질 기술60004-1-IgWB (1:50000)
HUVEC프로셀 시스템CP-H082세포주의 출처
IL-1&베타; 엘리사 키트메이미안MM-0181H2염증 인자
IL-6 ELISA 키트메이미안MM-0049H2염증 인자
일루미나 노바세쿼터 6000일루미나20012850RNA 시퀀싱
리포펙타민 3000인비트로젠L3000008트랜스펙션 시약
LPS (대장균 O111:B4)시그마-올드리치L263010 & 뮤; SA-AKI 모델의 g/mL
MDA ELISA 키트메이미안MM-2037H2산화 스트레스 지표
나노드롭 2000써모피셔ND-2000RNA 정량
NEBNext 울트라 II RNA 라이브러리 키트NEBE7770SRNA-seq 라이브러리 준비
OE-circZBTB46 플라스미드젠스크립트커스텀 합성circZBTB46 과발현 벡터
OE-NC 플라스미드젠스크립트커스텀 합성음성 통제 벡터
p-AKT (Ser473) 항체단백질 기술66444-1-IgWB (1:1200)
PrimeScript RT 시약 키트타카라RR047AcDNA 합성
PVDF 멤브레인밀리포어IPVH00010서부 블롯 전이
QuantStudio 5 시스템써모피셔A28137실시간 PCR
리보뉴클레아제 R루시겐RNR07250rRNA 제거
RIPA 용해 버퍼비요타임P0013B단백질 추출
RNAiso 플러스타카라9109총 RNA 추출
소드 엘리사 키트메이미안MM-25469H2항산화 효소
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참고문헌

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