마우스 피하 지방 조직 유래 기질 혈관 분율을 이용한 지방세포 인슐린 저항성 모델링

요약

본 연구는 마우스 피하 지방 조직에서 유래한 기질 혈관 분획을 데크사메타손으로 처리하여 인슐린 저항성을 시뮬레이션하는 실험 프로토콜을 제시합니다. 지방 조직의 복잡성을 유지함으로써 기전 연구를 위한 생리학적으로 신뢰할 수 있는 플랫폼을 제공합니다.

초록

지방 조직에서의 인슐린 저항성은 제2형 당뇨병과 같은 대사 질환의 중심 특징이지만, 많은 시험관 내 모델은 토착 지방 조직의 세포 복잡성을 완전히 반영하지 못하는 불멸화된 세포주에 의존합니다. 이 프로토콜의 목표는 마우스 피하 지방 조직의 기질 혈관 분획(SVF)에서 유래한 1차 지방세포를 사용하여 지방세포 인슐린 저항성을 재현 가능하고 실험적으로 접근 가능한 방법을 확립하는 것입니다. 프로토콜은 효소 소화를 통해 SVF 세포를 분리하고, 지방생성 분화를 지질 함유 성숙 지방세포로 분화하며, 이후 덱사메타손을 이용해 인슐린 저항성을 유도하는 과정을 설명합니다. 인슐린 저항성은 기능적 및 분자적 측정 결과를 통해 조작적으로 정의되고 검증되며, 여기에는 인슐린 자극 포도당 흡수 및 소비 감소, PI3K-AKT 경로에서 주요 인슐린 신호 단백질의 인산화 감소가 포함됩니다. SVF 유래 세포 이질성을 유지함으로써, 이 접근법은 기존 세포주보다 지방 조직 생리학에 더 가깝게 근접한 조건에서 지방세포 인슐린 신호 전달 연구를 지원하는 1차 세포 기반 시스템을 제공합니다. 이 프로토콜은 지방세포 인슐린 저항성 기전을 연구하거나 대사 개입을 평가할 표준화된 플랫폼을 찾는 연구자들을 위한 것이며, 측정값이 정제된 지방세포 집단이 아닌 혼합 SVF 유래 배양 배양의 반응을 반영한다는 점을 인정합니다.

서론

제2형 당뇨병(T2DM)은 전 세계적으로 가장 빠르게 증가하는 비전염성 대사 질환 중 하나가 되었으며, 총 환자 수는 현재 5억 3,700만 명을 넘었으며 2045년까지 7억 8,300만 명을 넘을 것으로 예상됩니다. 이 질환의 핵심 병태생리적 특징은 말초 조직 인슐린 저항성(IR)과 진행성 β세포 기능 장애로 나타납니다^. IR의 핵심은 표적 장기 내 생리학적으로 농축된 인슐린에 의해 유발되는 생물학적 효과가 현저히 감소하여 포도당 흡수 감소, 간 포도당 배출 증가, 지방 분해 억제 저하로 이어진다는 점에 있습니다^. 지방 조직은 인슐린의 가장 중요한 표적 기관 중 하나입니다. 비만은 지방 세포가 인슐린에 둔감해지게 하여 포도당 흡수를 감소시키고 중성지방 합성을 억제하며, 동시에 지방 해리를 증가시키고 더 많은 자유 지방산을 방출하여 전신 인슐린 저항성을 악화시킵니다 ^4,5.

생리학적 조건에서 인슐린은 PI3K-AKT 경로를 활성화하여 포도당 수송체 4(GLUT4)를 세포막으로 옮기고, 지방세포의 포도당 흡수와 중성지방 합성을 촉진합니다. 동시에 인슐린은 지질 방울 표면에서 지방 중성지방 리파아제(ATGL)와 호르몬 감응성 리파아제(HSL)의 활성을 억제하여 지방 용해를 차단^합니다. IR이 발생하면 인슐린 신호 전달 저하가 지방 분해 억제를 약화시켜 혈류로 자유 지방산(FFA)이 대량으로 방출됩니다. 이로 인해 FFA가 대량으로 혈류로 방출되어 간, 골격근, 췌장 등 장기에서 자궁외 중성지방 침착이 발생합니다. 이로 인해 입술 독성과 만성 염증이 유발되어 궁극적으로 T2DM⁷의 발병과 진행에 기여합니다. 따라서 생체 내 IR 특성을 재현하는 성숙한 지방세포 모델을 구축하는 것은 IR의 분자 기전을 밝히고 새로운 개입 전략을 개발하는 데 매우 중요합니다.

현재 3T3-L1 마우스 배아 섬유아세포주는 짧은 유도 주기와 우수한 재현성 ^8,9 덕분에 지방세포 IR의 시험관 내 연구에서 고전적인 도구로 자리 잡고 있습니다. 그러나 3T3-L1 세포의 배아 기원, 균일한 유전적 배경, 장기 배출 후 표현형 변동에 대한 감수성은 성체 내 제자리 지방세포와 비교해 대사 행동에서 유의미한 차이를 일으켜 번역 의학적 가치를 제한한다^10,11. 반면, 설치류 피하 지방 조직에서 분리된 기질 혈관 분획(SVF)은 다능성 지방 줄기세포(ASC)가 풍부합니다. 이 ASCs에서 분화된 성숙한 지방세포는 널리 사용되는 3T3-L1 세포주보다 토착 백인 지방세포와 더 유사한 형태학적, 기능적, 전사적 특성을 보입니다. 이로 인해 SVF 유래 지방세포는 1차 조직^{복잡성을 더} 잘 근사하는 맥락에서 인슐린 신호 전달과 저항성을 연구하는 보완적 모델이 됩니다.

이 프로토콜은 불멸화된 세포주보다 조직 이질성을 더 많이 유지하는 1차 지방세포 모델에서 인슐린 작용을 연구하려는 연구자들에게 가장 적합합니다. 하지만 사용자는 SVF가 내피세포와 면역 세포를 포함하는 혼합 집단임을 유의해야 합니다; 따라서 읽기는 지방세포가 주요 구성 요소이지만 배타적이지 않은 문화의 행동을 반영합니다. 이 모델은 순수하고 동기화된 지방세포 집단이 필요한 연구에는 덜 적합할 수 있습니다.

본 연구는 SVF에서 유래한 성숙한 지방세포를 사용하여 인슐린 저항성 세포 모델을 구축하는 프로토콜을 제안합니다. 프로토콜은 SVF 분리, 배양, 분화 및 인슐린 저항성 유도 전 과정을 상세히 다루며, 생체 내 지방세포의 인슐린 저항성 상태를 성공적으로 모방합니다. 모델 평가는 포도당 섭취, 세포 형태, 분자 메커니즘 수준에서 수행될 것입니다. 이는 지방세포에서 인슐린 저항성의 분자 기전을 조사하는 기술적 기반을 제공합니다.

프로토콜

모든 동물 실험은 신장 의과대학 동물실험윤리위원회(윤리 승인 번호: IAGUC-20240228-41)의 승인을 받았습니다.

1. SVF 절연

1. 실험 동물: 4-6주 된 SPF 등급 C57BL/6J 마우스, 무게 9-11g을 사용하세요. 22± 2°C에서 12시간 동안 밝고 어두운 주기를 하며 먹이와 물을 자유롭게 사용할 수 있도록 하세요.
2. 멸균 준비: 모든 기구와 소모품을 121°C에서 30분간 오토클레이브합니다. 실험 전에 층류 후드에 75% 에탄올을 뿌리고 자외선으로 ≥15분간 조사하세요. 모든 절차를 Class II 생물안전 캐비닛 내에서 수행하세요. 멸균 장갑과 마스크를 착용하세요.
3. 지방 조직 채취: 이산화탄소 흡입 후 자궁경부 탈구를 통해 쥐를 안락사시킵니다. 즉시 75% 에탄올에 10분간 담가 표면 소독을 하세요. 멸균 안과 가위를 사용해 가슴과 복부 중앙선을 따라 원형 절개를 합니다. 둔한 해리를 수행하여 양쪽 허벅지 안쪽에 위치하고 고환 부위로 V자 형태로 뻗은 양측 서혜부 흰색 지방 조직을 노출시킵니다. 보이는 림프절은 조심스럽게 제거하세요. 지방 조직을 미리 냉각된 PBS에 담아 세 번 빠르게 세척합니다.
4. 콜라겐제 소화: 세척된 지방 조직을 즉시 멸균 배양 접시로 옮겨 1-2 mm³ 조각으로 다지게 합니다. 0.2% Type II 콜라게나제(둘벡코 PBS에 용해되어 pH 7.4, 37 °C로 예열됨)를 조직의 1.5배에서 2배 부피로 첨가합니다. 37°C에서 100rpm 상온 셰이커에서 10분간 배양합니다. 과소화를 막기 위해 3분마다 부드럽게 뒤집어 주세요.
5. 종료 및 여과: 소화가 완료된 후, 37°C에서 같은 부피의 예열된 완전 배지(DMEM/F-12 + 10% FBS + 1% 페니실린-스트렙토마이신)를 추가하여 반응을 종료합니다. 1mL 피펫 팁을 사용해 5x에서 8번 부드럽게 피펫팅하세요. 70 μm 세포 체를 통과시켜 소화되지 않은 조직 조각과 성숙한 지방세포를 제거합니다.
6. 원심분리 및 세척: 여과액을 300 x g 에서 25 °C에서 5분간 원심분리합니다. 성숙한 지방 세포가 포함된 상액은 조심스럽게 버리세요. 알갱이를 완전한 매체에 다시 현탁하세요. 다시 300 x g 에서 25 °C에서 5분간 원심분리합니다. 이 세척 과정을 2번 반복하여 남은 콜라겐효소와 남아 있는 성숙한 지방세포를 제거합니다.
7. 씨앗 뿌리기 및 배양: 최종 펠릿을 1mL의 완전 배지에 재현탁합니다. 씨앗은 10cm 세포 배양 접시당 4마리의 쥐 서혜지방 샘플 밀도로 채취됩니다. 37°C에서 5% CO₂로 배양하세요. 24시간 후 첫 배지 교환을 하여 비부착 세포를 제거하세요. 그 후에는 매체를 48시간마다 바꾸세요. 세포가 80%-90% 합류할 때 통과시키세요.
   참고: 합류율이 90%를 초과하면 세포가 접촉 억제에 도달해 증식 능력이 감소하므로 통과하지 마십시오.

2. 타입 II 콜라겐제 작업 용액의 준비

1. 시약 및 소모품: II형 콜라겐제(활성 ≥ 120 U/mg) 획득; BSA(지방산 프리 ≥ 98%); 헤페스; 둘벡코 PBS (Ca²⁺ 1.8 mmol/L 포함, Mg²⁺ 0.9 mmol/L 포함), pH 7.2-7.4; 0.22 μm 멸균 저단백 결합 필터.
2. 0.2% 타입 II 콜라겐제 용액 제제: 60 mg 타입 II 콜라겐제 분말, 800 mg BSA, 48 mg HEPES를 50 mL 원심분리관에 무게를 젊 무게로 넣습니다. Dulbecco's PBS로 40mL로 희석하세요. 1 M NaOH 또는 HCl을 사용해 pH를 7.4 ± 0.1로 조절합니다. 0.22 μm 필터를 통해 여과하여 멸균합니다. 튜브당 5mL를 할당하여 -20 °C에서 보관하세요. 반복되는 냉동-해동 사이클은 피하세요.
3. 세포가 통과 후 100% 합류에 도달할 때 분화를 유도합니다. 최적의 분화 상태는 소용돌이 형태를 보이는 세포로 표시됩니다. 처음 48시간 동안은 유도 용액 I을 사용하고, 이후 유도 용액 II로 전환하세요 (표 1).
4. 다음 기준에 따라 성공적인 분화를 확인하라: 유도 4일째에 오일 레드 O 염색으로 대부분의 세포에서 지질 방울이 축적(약 50%)을 나타내며, 주요 지방생성 지표의 발현이 통계적으로 유의하게 증가하는 (p < 0.05).

3. 인슐린 저항성 모델 확립

1. 분화 4일차를 인슐린 저항성 유도의 시작점으로 선택하세요. 현미경으로 모든 세포가 방추형에서 둥근 형태로 전이하며, 대부분의 세포 세포질이 고굴절률 지질 방울로 채워져 있음을 확인하세요.
2. 배지를 1 μmol/L Dex가 포함된 유도 배지 II로 교체하고 48시간 동안 배양을 계속합니다(표 1). 이 절차를 거쳐 인슐린 저항성 지방세포 모델이 확립된 것을 고려합니다. 이 세포들은 추가적인 형태학적 변화를 보이지 않는다는 점에 유의하세요. 이 세포들을 직접 이용해 포도당 흡수/섭취 검사와 인슐린 신호 전달 경로 단백질 검출에 활용합니다.
3. 인슐린 저항성 모델 확립 성공 기준: 덱사메타손 치료 48시간 후, 100 nM 인슐린으로 자극받은 대부분의 세포에서 포도당 흡수 능력이 약 40% 감소함을 확인함. 또한, 주요 인슐린 신호 전달 경로 단백질의 인산화 수준이 통계적으로 유의미하게 감소한 것을 확인하<
   참고: 이 과정은 유도 유지 매체 II를 지속적으로 첨가해야 합니다.

4. 배양 상정액에서 잔류 포도당 검출

1. 지정된 시점에 세포 배양 상청액을 수집하세요. 세포를 4°C, 300 x g 에서 원심분리하여 5분간 제거하세요.
2. 포도당 산화효소-과산화효소(GOD-POD) 검사 키트를 사용하여 상원액 내 포도당 농도를 측정하세요. 농도를 계산하려면 다음 공식을 사용하세요:
   포도당 농도(mmol/L) = (A_(샘플) - _A(빈칸)) / (A_(표준) - A_(빈칸)) * C_(표준)
   포도당 소비량(mmol/L) = 세포 자유 배지 내 포도당 농도(mmol/L) - 세포 상상구 내 포도당 농도(mmol/L)
   정규화 포도당 소비량(mmol/mg 단백질) = 원시 포도당 섭취량(mmol/L) / 총 세포 단백질 농도(mg/L)

5. 서부 얼룩

1. 지정된 시점에 100 nM 인슐린을 완전 배지에 37°C에서 10분간 자극하여 PI3K-AKT 경로를 활성화합니다. 그 후 각 3.5cm 세포 배양 접시에 200 μL의 세포 용해 버퍼를 추가합니다. 얼음 위에 30분간 부화하세요. 13,040 x g 에서 4 °C에서 10분간 원심분리기. 상정액을 새로운 1.5 mL 마이크로 원심분리관으로 옮깁니다. BCA 작동 용액을 사용해 단백질 농도를 정량화합니다.
2. 샘플을 8% SDS-PAGE 겔에 적재합니다. 샘플이 적층/분리 겔 인터페이스에 도달할 때까지 겔을 80V로 돌립니다. 전압을 120V로 올리고 마커 밴드가 완전히 분해될 때까지 작동시킵니다. 2시간 동안 200 mA의 일정 전류로 전송을 수행합니다.
3. 막을 실온에서 5% 저지방 우유나 BSA와 함께 2시간 배양해 블로킹하세요. 멤브레인을 TBST로 3번 세척하세요. 그 후 1차 항체와 함께 4°C에서 하룻밤 배큐합니다. 1차 항체(희석): AKT: 1:1000, p-AKT (Ser473): 1:1000, β-액틴: 1:1000, PI3K p110α: 1:1000, 인산-PI3K p110: 1:1000, C/EBPα: 1:2000, FABP4: 1:2000.
4. 멤브레인을 TBST로 3번 세척하세요. 이후 HRP 결합 2차 항체와 함께 실온에서 1시간 인큐베이션합니다. 2차 항체(희석): 염소 항생쥐 IgG-HRP: 1:5000, 염소 항토끼 IgG-HRP: 1:5000.
5. ECL 화학발광 신호를 사용해 신호를 검출합니다. 웨스턴 블롯 이미저를 사용해 실험 결과를 시각화하고 기록하세요.
6. ImageJ 소프트웨어를 사용해 결과 밴드의 그레이스케일 값을 분석하세요.

6. 포도당 흡수 염색 분석법

1. 기저 포도당 간섭을 제거하기 위해 1% FBS가 포함된 RPMI 1640을 사용해 두 지정된 시점에서 각각 12시간 동안 세포를 굶깁니다.
2. 100 nM 인슐린으로 10분간 자극한 후, 각 웰에 1x 2-NBDG 용액 1mL를 추가합니다. 플레이트를 37°C에서 1시간 동안 빛으로부터 보호하여 부양하세요.
3. 세포를 2번에서 3번 세척하세요. 각 웰에 사용 가능한 Hoechst 염색액 1mL를 추가하세요. 플레이트를 37°C에서 어두운 곳에서 10분간 부양하세요. 세포 분리를 막기 위해 세포층과 직접 접촉하지 않도록 염색액을 배양 용기의 측면 벽을 따라 천천히 첨가합니다.
4. 세포를 2번에서 3번 세척한 후 PBS를 추가하세요. 역형 형광 현미경을 사용해 세포의 형광 이미지를 포착합니다.
5. ImageJ 소프트웨어를 사용해 이미지를 정량적으로 분석합니다. ImageJ를 사용해 각 채널을 분리하여 포도당 흡수 신호(녹색 채널)와 핵 형광 신호(파란색 채널)를 분리합니다.
6. 모든 이미지를 8비트 그레이스케일 이미지로 변환하세요. 기본 자동 임계값 알고리즘을 적용하여 양성 신호 영역을 정의합니다.
7. 이 지정된 영역 내에서 평균 형광 강도를 측정합니다. 녹색 채널의 평균 형광 강도를 해당 파란색 채널의 평균 형광 강도로 나누어 포도당 흡수 형광 신호를 정규화합니다.

7. 오일 레드 O 염색

1. 오일 레드 O 스톡 용액을 RNase 무첨가 물로 3:2 비율로 희석하세요. 용액을 필터 페이퍼와 0.22 μm 필터로 순차적으로 걸러내어 작업 용액을 준비합니다.
2. 배양지를 흡입한 후 PBS로 세포를 부드럽게 두 번 세척하세요. 각 웰에 4% 파라포름알데히드를 추가하고 셀을 실온에서 30분간 고정합니다.
3. 고정제를 넣고 세포를 이중 증류수로 세척하세요. 각 웰에 오일 레드 O 작업 용액 1mL를 추가하세요. 플레이트를 실온에서 어두운 상태로 25분간 부양하세요.
4. 염색 후에는 염색 용액을 흡입하세요. 배경물과 얼룩을 제거하기 위해 증류수로 셀을 철저히 세척하세요. 세포를 덮기 위해 증류수 1mL를 추가하세요. 즉시 역현미경으로 밝은 시야 이미지를 캡처하세요.

8. 몸

1. BODIPY 스톡 용액을 멸균수로 1:200 부피 비율로 희석하여 작업 용액을 준비합니다.
2. 감방 커버슬립을 멸균 PBS로 세척하세요. 각 커버슬립에 4% 파라포름알데히드 용액 30μL을 추가하고 실온에서 30분간 고정합니다.
3. 고정제를 흡입하고 PBS로 3번 세척하세요. 각 셀 커버슬립에 30 μL BODIPY 작업 용액을 추가하세요. 실온에서 어두운 환경에서 30분간 부양하세요.
4. 커버슬립을 PBS로 3번 세탁하세요. 각 커버슬립에 30μL DAPI 스테인을 추가하세요. 실온에서 어두운 환경에서 10분간 배양하여 세포 핵을 표지하세요.
5. 커버 슬립을 PBS로 세 번 더 세척하세요. 장착 진행: 깨끗한 현미경 슬라이드에 10 μL 안티페이드 마운팅 매개체를 추가합니다. 겸자를 사용해 세포 커버슬립(세포 면이 아래)을 부드럽게 마운팅 매체 위에 뒤집어 놓습니다. 어두운 곳에서 마르게 하세요.
6. 레이저 주사 공초점 현미경으로 즉시 이미지를 촬영하세요.

9. 통계 분석

1. 각 실험에는 세 개의 생물학적 복제가 포함되었습니다. GraphPad Prism 10.0 소프트웨어를 사용해 데이터를 분석하세요. 정규분포 기준을 충족하는 정량적 데이터를 제시하며, 표준편차(평균 ± SD)±로 기준을 충족합니다. 정규성과 분산 균질성을 만족하는 두 그룹에 대해 독립 표본 t-검정을 적용합니다. 여러 그룹에 대해 일방향 ANOVA를 수행하며, p < 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다.

10. 안전 및 폐기물 처리

1. 동물 조직 취급
   1. 1차 세포가 관련된 모든 시술을 클래스 II 생물안전 캐비닛에서 멸균 조건에서 수행하십시오.
   2. 모든 동물 조직 폐기물, 사용하지 않는 장기, 오염된 소비재를 생물학적 유해 폐기물로 분류합니다. 이러한 폐기물은 지정된 생물학적 위험 봉투에 넣고, 오토클레이빙을 통해 처리한 후 최종적으로 폐기됩니다.
2. 덱사메타손 취급
   1. 덱스 가루를 무게 재실 때는 장갑, 의료용 마스크, 실험복을 착용하세요. 화학 연기 후드 내에서 용액 준비를 수행합니다.
   2. 덱스에 오염된 폐기물은 별도로 수집하여 화학 폐기물로 처리하세요.
3. 생물위험물질 취급
   1. 실험 절차를 시작하기 전에 작업 표면과 생물안전 캐비닛 내부를 70% 에탄올로 철저히 소독하십시오.
   2. 세포 배양에서 생성된 모든 액체 폐기물을 폐기 전에 감염성 없도록 오토클레이션(autoclaved)되도록 하세요.

결과

C57BL/6J 마우스의 iWAT에서 분리된 SVF 세포는 배양 배양 접시에서 초기 씨앗 시 점점부탁(punctate suspension)을 보였습니다. 약 40%의 세포가 18시간 후 1차 부착을 완료했으며; 씨앗 후 5일째에는 세포가 완전히 퍼져 합류율이 95%에 달했습니다(그림 1A, B). 세포들이 합류하여 특징적인 소용돌이 같은 배열을 보일 때, 분화 배지를 교체했습니다. 유도 4일째에는 세포 내에 다수의 굴절성 지질 방울이 관찰되었으며, 성숙한 지방세포가 전체 집단의 약 1/³을 차지했습니다(그림 1C,D).

Oil Red O와 BODIPY 실험은 SVF 세포가 유도된 지방생성 분화 4일째에 풍부한 지질 방울을 축적하기 시작함을 보여주었습니다(그림 2A,B

토론

광범위한 연구에 따르면 SVF 세포 기반 모델은 지방 조직의 병리학적 특징을 시뮬레이션하는 데 독특한 가치를 제공합니다. 그러나 이러한 모델의 긴 구축 주기는 보통 약 14일이 조직 분리, 1차 배양, 유도 분화, Dex 처리에 소요되어 있어 실험적 연속성과 세포 상태 안정성에 도전이 됩니다. 이러한 도전 과제를 해결하기 위해 본 연구는 다음과 같은 주요 지표를 중심으로 한 실험 워크플로우를 채택하고 최적화했습니다: (1) 약 10g 무게의 3-4주 된 건강한 유생 마우스를 SVF 세포원으로 선정하여 매우 활발한 전지세포를 얻는 것. (2) 조직 처리 과정에서 지방 조직을 약 1 mm³ 크기의 작은 조각으로 곱게 다져서 효소 소화를 위한 표면적을 늘립니다. (3) 신선하게 준비(보관≤3개월) II 콜라게나제를 37°C(pH 7.4)에서 10분 소화로 최적의 세포 수량을 위해 사용한다. (4) 분화 및 덱스 처리 단계에서는 배치별 변이를 방지하기 위해 유도제나 덱스를 완...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.22 & mu; M 필터	바이오샤프	BSF-XS-0232-01
2-NBDG	비요타임	S0561M
3-아이소부틸-1-메틸크산틴	시그마	15879
4% 폴리포름알데히드	바이오샤프	BL1278A
70 & mu; M 세포 체감기	바이오샤프	BS-70-CS
반 AKT	단백질 기술	10175
안티-C/EBP&알파;	아클론	AB40764
반-FABP4	세포 신호 전달 기술	2120년대
안티-pAKT (Ser473)	단백질 기술	28731
안티-PI3K	바이오스	10657R
안티-pPI3K (p10쪽)	바이오스	6417R
항-&베타; -액틴	단백질 기술	60008
BCA 단백질 분석 키트	써모피셔	23225
보디피 493/503	인비트로젠	D3922
BSA와 EMSP;	시그마	A7030
세포 상승 절단 Biosharp와 nbsp;	바이오샤프	BS-14-RC
세포 배양 접시, 100mm x 20mm	코닝	430167
세포 배양 접시, 35mm x 10mm	코닝	430165
DAPI 솔루션	솔라비오	28718-90-3
덱사메타손	시그마	D2915
DMEM/F-12	깁코	C11330500BT
둘벡코 s PBS	시티바	SH30264.02
에펜도르프 튜브	코닝	MCT-175-C
FBS	라이프-아이랩	AC03L0555
형광 현미경	라이카	DMi8
포도당 산화효소-과산화효소	난징 건청	F006-1-1
염소 항생쥐 IgG-HRP	베이징 중산 진차오	ZB-2305
염소 항토끼 IgG-HRP	베이징 중산 진차오	ZB-2301
그래프패드 프리즘	버전 10.0.0	/
헤페스	바이오프록스	1112GR025
호체스트	바이오샤프	BL803A
이미지J	버전 1.54p	/
인슐린	솔라비오	18040
레이저 주사 공초점 현미경	니콘	티-이
마운팅 미디엄 안티페이딩	솔라비오	S2100
오일 레드 O 염색 용액	시그마	O0625-25G
페니실린-스트렙토마이신	하이클론	SV30010
RIPA 버퍼	써모피셔	89901
로지글리타존	시그마	R2408
RPMI 1640	비바셀	C3010-0500
스킴 밀크 파우더	바이오프록스	1132GR500
TBS 버퍼	솔라비오	T1060
제2형 콜라게나제	시그마	C6885