디지토닌 투과화된 BE(2)-C 신경모세포종 세포에서 산화적 인산화 결합의 콜린성 리간드 의존 조절

Summary

우리는 형질막을 선택적으로 투과시키는 프로토콜을 제시하여, 기질과 억제제의 표적 전달을 가능하게 하여 배양된 세포에서 미토콘드리아 산화 인산화(OXPHOS)를 평가하고, 일반적으로 이러한 분석을 방해하는 원형질막 수송 장벽을 극복합니다. 이 기법을 사용하여 우리는 OXPHOS 기능이 무스카린 작용제와 길항제에 의해 어떻게 조절되는지 입증했습니다.

Abstract

본 연구의 목적은 정의된 기질-억제제 조합을 사용하여 배양된 세포에서 산화 인산화(OXPHOS) 기능을 평가하면서도 분리된 미토콘드리아 준비물에서 손실된 세포 구조와 세포질 맥락을 유지하는 것이었습니다. 온전한 세포는 여러 크렙스 사이클 중간체에 대한 투과성이 낮기 때문에, 특정 전자전달 사슬(ETC) 진입점을 통한 기질 지지 호흡을 직접 평가하는 것은 제한적입니다. 이를 극복하기 위해 디토닌 매개 선택적 원형질막 투과법을 적용하고, BE(2)-C 신경모세포종 세포에서 세포외 플럭스 분석기 기반 결합 및 전자 흐름 분석을 수행하였습니다. 세포 유형 의존성을 확인하기 위해, 디지토닌은 HEK293 세포와 쥐 등뿌리 신경절(DRG) 신경세포에서 숙시네이트 + 로테논을 사용해 경험적으로 용량 조절하여 복합체 II–IV 유도 호흡을 분리하였습니다.

복합체 I 억제를 받은 수시네이트 지원 호흡은 투과성 세포에서 비투과성 세포에 비해 복합체 II–IV 구동 산소(O₂) 소비가 증가했으며, 이는 막 비전면 기질의 미토콘드리아 접근성 개선과 일치하였다. 반면, 내인성 수송 경로(예: 피루브산/말산)를 통해 침입하는 기질에 의해 지지되는 호흡은 조건 간 차이가 더 작았습니다. 이 플랫폼을 이용해 무스카린 리간드를 시험한 결과, 결합 분석에서 작용제와 길항제 관련 O₂ 섭취량 차이를 관찰한 반면, 전자 흐름 분석법에서는 시험 조건에서 리간드 관련 효과가 미미했습니다. 이 결과들은 최대 전자 전달 능력보다 결합 정의 호흡 상태 수준에서 감지 가능한 리간드 효과가 더 두드러졌음을 시사한다. 전반적으로 선택적 투과는 배양 세포 생체에너지 분석에서 기질 접근성을 확장하고 미토콘드리아 호흡의 약리학적 조절 분석을 가능하게 합니다.

Introduction

미토콘드리아 에너지 대사의 기능 장애 또는 재프로그래밍은 신경퇴행, 암, 염증성 질환, 심장대사 질환, 다양한 유전 질환 등 다양한 질환의 중심적인 원인입니다. 미토콘드리아 대사가 질병 발병 기전에서 어떤 역할을 하는지 더 잘 이해하기 위해 여러 분석 전략이 개발되었습니다. 여기에는_{산소 소비} 율(OCR), 세포외산성화율(ECAR), ATP 정량, 기질 이용, 프로파일링 또는 크렙스 사이클 대사물 분석, 동위원소 추적¹ 등이 포함됩니다. 이 중 OCR은 미토콘드리아 호흡의 주요 지표로, 고해상도 호흡법(HRR; 예: Oroboros O₂k)², 클라크형 전극, 세포외 플럭스 분석기와 같은 기기를 사용하여 평가할 수 있습니다

Oroboros O₂k 시스템은 클라크형 극광 O₂ 센서(POS^)3,4,5를 사용하여 밀폐된 챔버 내_O2 농도를 측정하며, 분리된 미토콘드리아, 투과성 세포, 조직 균질체 샘플에 적합합니다. 이 장치는 금/백금 음극, 은 양극, 그리고 25 μm O₂ 투과성 및 화학적으로 저항성 플루오린화 에틸렌 프로필렌 막(FEP)으로 시료와 분리된 KCl 전해질 저장소로 구성되어 있습니다. 클라크형 전극³은 또한 폐쇄된 챔버에서 작동하며,_O2 민감 전극을 통해 산소 농도 변화를 감지하며, 고립된 미토콘드리아나 세포 현탁액에 일반적으로 사용됩니다. 반면, 세포외 플럭스 분석기는 마이크로플레이트에 내장된 형광 센서를 사용해 살아있는 부착 세포나 분리된 미토콘드리아에서 OCR과 ECAR를 정량하여 고처리량 대사 프로파일링을 가능하게 합니다. 세포외 플럭스 분석기 플랫폼의 실용적인 장점 은 여러 조건에서 병렬로 자동화된 다중 매개변수 평가가 가능하다는 점입니다. 반면, 폐쇄형 챔버 시스템(예: HRR 또는 클락형 전극)은 일반적으로 처리량이 낮고 더 많은 수작업 작업이 필요합니다.

세포외 플럭스 분석기는 마이크로플레이트 바닥에 침착하는 온전한 부착 세포나 현탁 세포의 미토콘드리아 기능을 평가하는 데 특히 유용합니다. 온전한 부착 세포를 이용한 검사에서는 포도당이나 피루베이트⁶와 같은 기질을 사용하여 미토콘드리아 에너지 대사를 프로파일링할 수 있습니다. 또는 소량의 농축된 미토콘드리아 분획을 이용한 검사법을 통해 기저호흡, ADP 자극호흡(상태 3), 안정 호흡(상태 4), 그리고 기질과 억제제의 조합을 이용한 비결합자 자극호흡의 순차적 측정이 가능합니다⁷. 그러나 온전한 세포 시스템에서는 세포 투과성이 없는 트리카복실산(TCA) 주기 대사산물을 직접 대사를 평가할 수 없습니다. 반면, 분리된 미토콘드리아는 원형질막 장벽이 없기 때문에 이러한 대사산물의 사용을 허용합니다. 분리된 농축 미토콘드리아 생체에너지학 분석에는 한계가 있습니다: 분리 과정에서 미토콘드리아 구조가 변화할 수 있고, 미토콘드리아 대사와 대사산물 수송에 영향을 미치는 세포질 인자가 감소하거나 사라집니다. 따라서 선택적 투과화 접근법은 세포 구조의 일부 측면을 유지하면서도 미토콘드리아에 대한 통제된 접근을 가능하게 하는 타협안으로 자주 사용됩니다. 대사 검사에 온전한 세포나 분리된 미토콘드리아를 사용하는 한계를 극복하기 위해, 이 프로토콜은 디지토닌을 이용해 부착성 신경모세포종(BE(2)-C) 세포를 투과시키는 방법을 설명합니다. 이 접근법은 원형질막을 통해 비세포 전과성 대사산물을 수입하는 것을 용이하게 하면서도 정의된 기질과 억제제에 대한 기능적 미토콘드리아 반응을 유지합니다.

디토닌의 선택성은 막 지질 조성의 차이에 기반합니다: 원형질막은 콜레스테롤이 풍부한 반면, 미토콘드리아 막, 특히 내부 미토콘드리아 막은 콜레스테롤이 매우 적^습니다. 낮은 농도에서는 디지토닌(또는 사포닌)이 높은 콜레스테롤 함량 때문에 원형질막을 선택적이고 완전히 투과시키는 반면, 미토콘드리아 막은 높은 농도에서만 영향을 받습니다 ^9,10. 디지토닌은 콜레스테롤에 결합하여 원질막에 기공을 형성하여, 적절히 최적화되면 TCA 사이클 중간체와 같은 소분자가 미토콘드리아 구조나 기능을 방해하지 않고 세포질에 들어갈 수 있게 합니다. 이 방법은 세포외 플럭스 분석기 마이크로플레이트에서 부착 단분포로 재현 가능하게 도판될 수 있는 배양 세포에 가장 적합하며, 각 세포 유형과 시딩 밀도에 대해 디지토닌 농도의 경험적 적정이 필요합니다. 보존된 미토콘드리아 무결성의 운영 지표로는 강력하고 억제제에 민감한 OCR 반응(예: 로테논/항마이신 A 시 예상 감소, 아스코르베이트/TMPD로 인한 복합체 IV 주도 호흡 온전함), 과투과를 알리는 OCR 붕괴 부재가 포함됩니다. 따라서 디지토닌 최적화는 실험 비교 전에 수행되어야 하며, 배양 조건이나 세포 밀도가 변할 때마다 반복해야 합니다. 더불어, 최적의 디토닌 농도는 세포 유형에 따라 다르며, 억제제 민감성 미토콘드리아 기능을 유지하면서 비기질(예: 숙시네이트)이 침투할 수 있는 투과성 창을 확립하기 위해 경험적으로 결정되어야 합니다. 본 연구에서는 BE(2)-C 세포뿐만 아니라 HEK293 세포와 1차 쥐 등뿌리 신경절(DRG) 뉴런에서도 디토닌을 최적화함으로써 이 원리를 설명합니다.

이 프로토콜은 원래 남성 신경모세포종 환자의 뇌에서 분리된 BE(2)-C 신경모세포종 세포를 사용하여 입증되었습니다. BE(2)-C 세포는 다양한 무스카린 수용체, 특히 콜린성 수용체 무스카린 1형(CHRM1)을 발현합니다. 이전 연구에서 우리는 CHRM1이 배양된 쥐 배양된 배 등뿌리 신경절 신경세포의 세포체와 신경돌, 그리고 CHRM1 형질전환된 HEK293 세포¹¹에서 미토콘드리아와 연관되어 있음을 입증했습니다. 더 나아가, 쥐에서 Chrm1의 유전적 결실은 미토콘드리아 구조와 기능의 여러 측면을 변화시킵니다^12,13. 따라서 우리는 BE(2)-C 세포가 무스카린 리간드가 OXPHOS 기능에 미치는 조절 효과를 조사하는 데 사용될 수 있다고 가설을 세웁니다. 이 시연에서는 작용제 아세틸콜린, 편향된 길항제 피렌제핀¹⁴, 길항제 아트로핀이 미토콘드리아 호흡에 미치는 영향을 숙신산 또는 피루브산/말레이트 기질에서 비교하였다.

Protocol

1. 해동 및 초기 도금

참고: BE(2)-C 세포의 기본 배지는 ATCC 조제된 Eagle's 최소 필수 배지와 F12 배지를 1:1 혼합하여 10% 태아 소 혈청(FBS)으로 보충합니다.

1. 37 °C 수조에서 냉동 보존된 BE(2)-C 세포를 해동합니다. 해동된 후에는 세포를 200× 원심분리하여 5 분간 냉 동보호제를 제거하세요.
2. 세포 펠릿을 완전한 배양지에 재현탁한 후 10cm 세포 배양 접시에 세포를 플레이트합니다. 배양물을 37°C에서 5% CO₂를 공기 중 CO₂로 가습한 인큐베이터에서 배양하여 세포가 서브컨플런시에 도달할 때까지 보관합니다.

2. 서브컬처링

1. 세포가 안정적인 지수적 성장 단계에 도달하도록 2–3회 소중계를 수행한다.

3. 트립신화 및 단세포 현탁 준비

1. 배양 비율이 60–80%에 도달하면 세포를 트립신화합니다. 연마된 팁이 있는 미세한 팁 이송 피펫을 여러 번 통과시켜 덩어리를 해리하고 단일 세포 현탁액을 만듭니다.
2. 트립신을 중화시키기 위해 FBS가 포함된 신선한 배지를 추가하세요. 세포를 200× g에서 5 분간 원 심분리해서 알렛으로 만듭니다.

4. 세포외 플럭스 분석기에 사용되는 24웰 세포 배양 마이크로플레이트의 세포 시딩 프로토콜

1. 펠릿을 웰당 100 μL당 10,000 셀의 최종 농도로 완전 배지에 재현탁합니다.
2. 세포가 1–2일 이내에 완전히 융합되도록 최적의 밀도로 씨앗을 주어야 합니다. 실험 설계에 따라 네 모서리 우물 또는 단일 모서리 우물을 비워두세요. 이 우물들은 배경 제어 역할을 할 것입니다.
   참고: 이는 미디어 볼륨과 타이밍 조정 등 시행착오가 필요할 수 있습니다.
3. 배양 배지 색상 변화를 모니터링하세요—노란화는 pH 하락을 의미하며 세포 건강을 유지하기 위해 즉시 신선한 배지로 교체해야 합니다.

5. 세포외 플럭스 분석기 기반 분석 준비

참고: 여기서 사용되는 결합 및 전자 흐름 분석법 형식은 확립된 마이크로플레이트 기반 미토콘드리아 호흡 워크플로우⁷을 따르며, 디토닌 적정과 무스카린 리간드 처리 조건을 이용한 BE(2)-C 세포의 투과화 등 수정이 포함된다.

1. 스톡 용액과 미토콘드리아 분석액(MAS) 2개를 준비합니다. 사전에 MAS 혼합물 2개와 작용 시약(기판 및 억제제) 스톡 용액을 준비하세요( 표 1, 표 2, 표 3 참조).
2. 모든 재고 용액과 MAS는 -20°C에 보관하여 향후 사용을 위해 효율적인 분석법 설정을 가능하게 합니다.
   안전: 로테논, 안티마이신 A, 올리고마이신, FCCP, 디토닌, TMPD는 위험하므로 기관 안전 지침에 따라 취급해야 합니다. 모든 억제제 재고 용액은 인증된 화학 연기 후드에서 준비 및 취급되며, 적절한 개인 보호 장비(실험실 가운, 니트릴 장갑, 안구 보호구)를 착용해야 합니다. 이러한 시약을 포함한 용액과 DMSO 함유 폐기물은 기관 및 지역 규정에 따라 유해 화학 폐기물로 수집 및 폐기되어야 합니다. 작업 표면은 사용 후 반드시 오염 제거를 해야 합니다.
3. 센서 카트리지에 수분 공급하기
   1. 실험 전날 밤, 각 웰에 센서 카트리지 보정 버퍼 또는 인산염 완충 식염수(PBS, pH 7.4)를 1mL를 첨가하여 세포외 플럭스 분석기 센서 카트리지를 수화합니다. 센서 카트리지를 실온(20–25 °C)에서 하룻밤(12–18시간) 방치합니다.
      참고: 37°C에서 비CO₂ 인큐베이터에서 배양할 필요는 없으며, 카트리지는 장전 과정에서 실온에 평형을 이루기 때문입니다. 교정을 위해 세포외 플럭스 분석기에 넣으면 약 15분 이내에 37 °C에 도달합니다.

6. 실험 당일

참고: 모든 용액을 신선하게 준비하고, 필요하면 pH를 조절하며, 사용 전까지는 얼음 보관하세요.

1. 냉동 기질 스톡과 MAS 2회를 상온(20–25 °C)에서 15–30분 또는 37 °C 수조에서 5–10분간 해동합니다.
2. 모든 기판 및 주입 용액을 준비하고( 표 4, 표 5, 표 6, 표 7 참조), pH가 7.4인지 확인하세요. 필요하면 조정하고, 사용 전까지는 용액을 얼려두세요. 결합 분석은 표 4 와 표 5 를 사용하세요. 전자 흐름 분석은 표 6 과 표 7을 사용하세요.
3. 억제제와 기판을 적절한 센서 카트리지 포트에 장전하고 분석 준비를 하세요. 분석의 종류에 따라 결합 분석법 또는 전자흐름 분석 ^{법 7} 에 따라 필요에 따라 표 4 와 표 5 또는 표 6 과 표 7을 참고할 수 있습니다.
4. 모든 기판 및 억제제 작동 용액을 최종 부피로 준비하세요(대용량 혼합물: 15 mL; 카트리지 주입 혼합물: 포트당 2 mL). 주입 후 원하는 최종 인웰 농도를 달성하기 위해 농도를 계산합니다(최종 웰 부피: 포트 D 이후 700 μL).
5. 무스카린 리간드를 포함한 24웰 세포외 플럭스 분석판의 각 웰(최종 리간드 농도: 1 μM; 총 웰 부피: 500 μL)에 준비된 분석 용액 450 μL을 첨가합니다. 각 우물에는 이미 50 μL 1x MAS 버퍼와 잠수 셀이 포함되어 있는지 확인하세요.
   참고: 판을 분석기에 적재하기 직전에 이 단계를 수행하세요.
6. 각 준비 시약을 센서 카트리지의 해당 주입 포트에 50 μL씩 주입합니다.

7. 기기 프로그래밍 및 분석 실행

1. 실험 최소 1–2시간 전에 세포외 플럭스 분석기를 켜서 내부 인큐베이터가 37 °C에서 안정화되도록 하세요. 교정과 분석 실행 기간 동안 챔버를 37°C로 유지하세요.
2. 분석기를 표 8에 따라 적절한 혼합, 대기, 측정 사이클을 수행하도록 프로그래밍하세요.
3. 실험 설계에 따라 소프트웨어 내에서 우물과 실험 그룹을 라벨링하세요.
4. 분석 실행을 시작하세요. 기기가 센서 카트리지를 보정할 수 있도록 기다리세요(~15분).
5. 카트리지 교정 시 장전을 위해 분석판을 준비하세요. 필요하면 장전 지연; 센서 카트리지는 기기 내부에서 37°C에서 안정적으로 유지됩니다.
6. 포트 D 주입 후 최종 측정 사이클이 끝나면 분석이 완료됩니다. 즉시 분석 후 정규화 및 데이터 분석으로 진행하세요.

8. 세포외 플럭스 분석기 분석용 세포판 준비

1. 센서 카트리지를 분석기에 넣은 직후 셀 플레이트 준비를 시작하여 교정을 시작하세요. 각 웰에 부착 세포가 있는 각 웰에 700 μL 1x MAS 버퍼를 추가합니다. 실온(20–25 °C)에서 1분간 배양합니다.
2. 부착된 세포를 건드리지 않고 조심스럽게 완충 흡인하세요. 최소 3분간 1분 동안 세척 과정을 반복하여 잔류 배지를 제거하고 10분 이내에 모든 세척을 완료하세요.
3. 지정된 배경 웰(셀 없음)에 1x MAS 버퍼 50 μL을 추가하여 시각적 부피 기준을 설정합니다.
4. 실험 우물에서 버퍼를 흡입하여 각 우물에 약 50 μL의 잔류 완충액을 남깁니다.
5. 37°C에서 수욕에서 배양하며, 증발을 막기 위해 수면 위에 올려 둡니다. 37°C에서 10분(최대 20분) 유지한 후 장전하세요.
6. 판 적재 직전, 각 웰에 적절한 기판을 포함한 1x MAS 버퍼 450 μL을 추가하여 최종 부피 500 μL를 만듭니다.
7. 플레이트를 세포외 플럭스 분석기에 삽입하세요.

9. 분석 및 데이터 분석 종료

1. 실행 완료 후 셀 플레이트와 센서 카트리지를 분석기에서 분리하세요.
2. 총 단백질 정량 또는 총 세포 수를 사용하여 우물별 OCR 값을 정규화합니다. RIPA 버퍼를 사용한 용해 세포를 이용해 브래드포드 분석법 또는 다른 분광광도 단백질 분석법을 사용해 총 단백질을 정량합니다.
3. 분석 소프트웨어를 사용해 OCR 값을 정규화하고 필요에 따라 데이터를 내보내세요.
4. 다음 수용 기준을 적용하세요: 기초 OCR 안정성(두 차례 연속 측정 주기에 걸쳐 ≤15% 드리프트) 확인 및 로테논, 올리고마이신 또는 항마이신 A 주사 후 ≥60% OCR 감소 확인.
5. 이 기준에 미치지 못하는 유통은 제외하고, 필요에 따라 투과제 농도나 세포 시딩 밀도를 재최적화합니다.

10. 결과 수출

1. USB 드라이브를 악기에 삽입하세요.
2. 분석 데이터를 내보내세요.

11. 데이터 처리

1. 계측기 소프트웨어를 사용해 데이터를 분석하세요.
2. 추가 분석 및 시각화를 위해 선택한 분석 소프트웨어와 호환되는 형식으로 처리된 데이터를 내보내십시오.

Results

결합 분석에서 BE(2) C 세포 투과화를 위한 디토닌 농도 최적화
이 프로토콜 초기에 우리는 미토콘드리아 호흡을 저해하지 않으면서 효과적인 세포 투과성을 위해 필요한 최적의 디토닌 농도를 표준화했습니다. 이 프로토콜에서는 시작 농도로 5 μM 및 10 μM 디토닌을 검사하고 결합 분석을 수행했습니다. 이 분석법은 ETC와 OXPHOS 기구 간의 결합 정도를 평가하여 ETC와 OXPHOS 유도 호흡을 구분할 수 있게 합니다. 로테논은 복합체 I을 억제하는 데 사용되었고, 석신산은 복합체 II의 전자 공여체 역할을 하여 복합체 II를 통한 전자 흐름을 유도_{하고 산소 소비}를 지원했습니다(그림 1A). 복합체 II–IV에 의한 기저호흡은 10 μM 디토닌에서 5 μM보다 유의하게 높았으며, 이는 높은 농도에서 투과화된 세포막을 통한 숙신산 수송이 더 효율적임을 시사한...

Discussion

본 연구는 배양된 신경모세포종 세포에서 무스카린 리간드 매개 OXPHOS 조절을 신속하고 비용 효율적인 프로토콜로 소개합니다. 선택적 원형질막 투과제인 디토닌과 정의된 기질-억제제 쌍을 결합하여 석신네이트와 같은 대사 기질을 미토 콘드리아에 직접 표적 전달할 수 있게 했습니다. 이 접근법은 일반적으로 주요 TCA 사이클 중간체에 대한 접근을 제한하는 온전한 세포막의 한계를 극복합니다. 중요한 점은, 이 프로토콜이 세포 구조와 세포질 상호작용을 보존하여, 신경퇴행성 질환 모델과 관련된 약물 치료를 포함한 다양한 실험 조건에서 미토콘드리아 기능을 평가할 수 있는 생리학적으로 적합한 플랫폼을 제공한다는 것입니다.

성공의 가장 중요한 결정 요인은 특정 세포 유형과 씨앗 밀도에 맞는 디토닌 농도를 경험적으로 최적화하는 것입니다. 이러한 세포 유형 의존성을 뒷받침하기 위해, 최적의 디토닌 농도는 세포 유형에 따라 ...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
아세틸콜린 클로라이드	밀리포어 시그마	A6625	무스카린 작용제
ADP	MP 바이오메디컬스 주식회사	ICN19014901	전자 수용체, ATP 합성을 위한 기질.
안티마이신 A	AAJ63522MA	써모 사이언티픽	미토콘드리아 복합체 III를 억제합니다
아트로핀	밀리포어 시그마	1044990	무스카린 길항제
Be2C 셀	미국 타체 문화 컬렉션	CRL-2268	신경모세포종 남성 환자의 뇌에서 분리된 신경아세포가 무스카린 수용체를 발현합니다
디지토닌	밀리포어 시그마	D141	순한 세제, 막 투과제.
D-만니톨	열보 사이언티브 케미컬스	AA3334236	삼투압 안정화 및 막 보호에 사용되는 비대사성 당알코올입니다
EGTA	밀리포어 시그마	E0396	칼슘 킬레이션은 미토콘드리아 단백질을 분해할 수 있는 칼슘 의존성 프로테아제 및 기타 효소의 활성화를 방지합니다.
지방산 없는 BSA	밀리포어 시그마	126575	통제되지 않은 지방산 변화를 방지하고 미토콘드리아를 안정화합니다
FCCP	케이맨 케미컬	NC0904863	미토콘드리아에서 산화적 인산화의 프로토노포어이자 분리체
젠장	밀리포어 시그마	391340	pH 완축, 미토콘드리아 기능과의 적합성
L-아스코르베이트	TCI 아메리카	A053925G	TCA 사이클 중간, OXPHOS의 기질
염화마그네슘	밀리포어 시그마	M8266	이온 균형을 위해, 효소 활성 지원
N1,N1,N1,N1-테트라메틸-1,4-페닐렌 디아민 (TMPD)			전자 공여체를 시토크롬 c로 보고, 복합체 I 및 II를 우회하여 복합체 IV 기능을 평가하는 TMPD/아스코르베이트는 복합체 IV 의존적 산소 소비를 직접 측정할 수 있게 합니다
올리고마이신	밀리포어 시그마	1404-19-9	미토콘드리아 ATP 합성을 억제하며, 복합체 V
피렌제핀 디하이드로클로라이드	밀리포어 시그마	P7412	무스카린 편향 작용제
피루빅산	열보 사이언티브 케미컬스	AC132155000	TCA 사이클 기판
로테논	밀리포어 시그마	557368	미토콘드리아 복합체 I 억제
Seahorse XF24 V7 PS 세포 배양 마이크로플레이트	애질런트	102340-100	세포 배양 마이크로플레이트
시호스 XFe24 분석기	애질런트	S7801BR	애질런트 씨호스 XFe24 분석기는 24웰 플레이트 형식으로 생세포의 산소 소비율(OCR)과 세포외산성화율(ECAR)을 측정합니다.
석신산	피셔 케미컬	AC158742500	TCA 사이클 중간, OXPHOS의 기질
XFe24 센서 카트리지 보정 버퍼	애질런트	102340100	PBS 버퍼 pH 7.2
XFe24 센서 카트리지	애질런트	102340-100	OCR 및 ECAR 측정용 센서