방법 논문

부분 경동맥 결찰과 PCSK9 과발현에 의해 유도된 쥐의 죽상동맥경화증 모델

548 조회수

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DOI:

10.3791/69862

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2026년 2월 27일

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1Department of Vascular Surgery, Peking Union Medical College Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, 2State Key Laboratory of Complex, Severe, and Rare Diseases, Department of Pathophysiology, Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, 3Qinghai Cardio-Cerebrovascular Specialty Hospital, Qinghai High Altitude Medical Research Institute, 4Research Center of High Altitude Medicine

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

재현 가능한 마우스 모델은 PCSK9 선상 관련 바이러스(PCSK9-AAV)-고지방 식이 매개 고콜레스테롤혈증과 부분 좌측 경동맥 결찰(PCL)을 결합하여 경동맥 동맥경화증을 유도하여 인간 병태생리를 재현합니다. 이로 인해 야생형 마우스에서 유전체 편집 없이 인간과 유사한 경동맥경화성 병변을 신속히 유도할 수 있어, 경동맥 동맥경화증 연구를 촉진하는 표준화된 도구를 제공합니다.

초록

야생형 마우스에서 빠르고 재현 가능한 경동맥 특이적 죽상동맥경화증 모델이 부족해 플라크 생물학과 치료법에 대한 번역 연구가 제한됩니다. 이 프로토콜은 선생계 관련 바이러스(AAV) 매개 PCSK9 과발현, 동맥 유발성 고지방 식단, 좌측 부분 경동맥 결찰(PCL)을 결합하여 C57BL/6 마우스에서 반복 가능한 경동맥경화를 유도하는 비유전체 편집 시간 효율적인 방법을 설명합니다. 목표는 유전자 변형 동물 없이도 인간 경동맥 질환의 주요 병태생리적 특징인 고지혈증과 출혈 장애를 재현하는 표준화된 워크플로우를 제공하는 것입니다. 방법에는 PCSK9-AAV 투여 및 투여, 수술 전 준비, 좌측 경동맥의 단계별 외과적 결찰, 수술 후 관리, 식이 요법, 조직 채취, 그리고 오일 레드 O 및 베르호에프-반 기손 염색을 포함한 조직학적 평가가 포함됩니다. 결과는 기준치에 비해 순환 콜레스테롤과 저밀도 지단백 수치가 높음을 나타냅니다. 왼쪽 결찰된 경동맥에는 뚜렷한 죽상경화성 플라크가 발생하며, 지질 축적이 유의미하게 증가하고 오른쪽 비결합 조절 동맥에 비해 동맥 막막-간질 두꺼움이 유의미하게 증가합니다. 이 표준화된 프로토콜은 경동맥 플라크 형성, 진행, 개입 전략을 연구하는 연구자들의 재현성과 접근성을 높이며, 실험적 치료법의 실험실 간 비교를 용이하게 합니다.

서론

심혈관 질환(CVD)은 전 세계 사망률의 주요 원인으로 남아 있으며, 죽상동맥경화증이 공통 병리학적 근거입니다1. 경동맥은 죽상동맥경화성 병변의 중요한 부위이며; 경동맥 동맥경화증 연구는 심혈관 질환의 발병 기전을 이해하고 치료 전략을 개발하는 데 필수적입니다. 동물 모델은 생체 내 죽상동맥경화증 연구에 필수적인 도구이지만, 기존 모델은 편의성과 인간 병태생리학적 특징을 재현하는 능력 면에서 한계가 있는 경우가 많습니다.

다른 동맥 부위(예: 대동맥, 대퇴동맥)에서의 동맥경화와 비교할 때, 경동맥 동맥경화증의 형성은 혈역학에 의해 더 강하게 영향을 받습니다. 경동맥은 관상동맥(6-45 dyn/cm²)에 이어 두 번째로 높은 전단 응력(10-15 dyn/cm², 제곱센티미터당 다이네)을 겪습니다3. 특히 경동맥 분기점에서는 와류 흐름이 발생하며, 이는 교란되고 진동성 전단 응력이 특징입니다. 이 비정상적인 혈역학적 환경은 단핵구 모집과 죽상경화증 시작을 촉진하는 부착 분자와 화학계의 상향 발현으로 특징지어지는 국소 내피 세포의 지속적인 염증 촉진 활성화를 유발합니다. 또한, 고위험 경동맥경화성 병변은플라크에 의해 뇌관 직경이 감소하는 비율로 정의되는 협착 정도가 70%를 초과하는 경우가 많습니다. 따라서 중증 죽상경화성 협착증을 유발할 수 있는 동물 모델이 중요합니다.

부분 경동맥 결찰(PCL) 모델은 지속적인 혈류 장애에 의해 유도되는 죽상동맥경화증 모델로, 짧은 모델링 시간과 심각한 병변이라는 장점을 가지고있습니다 5. 무지단백 E(ApoE)는 순환 중인 콜레스테롤과 중성지방 풍부한 지단백의 대사와 제거에 관여하는 핵심 단백질로, 혈장 지질 항상성 유지에 중요한 역할을 합니다. 하지만 ApoE 녹아웃(ApoE⁻/⁻) 마우스를 사용하는 전통적인 PCL 모델은5개를 만드는 데 어려움과 비용이 많이 듭니다. 목표 유전자 녹아웃이 필요할 때는 이중 유전자 녹아웃(목표 유전자와 ApoE 유전자 모두)이 필요하여 모델링 과정을 더욱 복잡하게 만듭니다. 반면, PCL에 야생형 C57BL/6 마우스만 사용될 경우, 이 모델은 인간 죽상경화증의 핵심 위험 인자인 고콜레스테롤혈증이 없으며, 두드러진 지질이 풍부한 죽상동맥경화성 병변을 드물게 형성합니다 6,7. 고지방 식단(HFD)을 먹인 ApoE⁻/⁻ 또는 LDLR 노크아웃(LDLR⁻/⁻) 마우스와 같은 다른 모델들은 동맥경화증 연구에 널리 사용되고 있습니다. 그럼에도 불구하고, 이러한 모델들은 혈류 장애의 영향을 반영하지 못해 짧은 시간 내에 심각한 죽상동맥경화증을 형성하지 못합니다. 이전 연구들은 HFD 먹이를 3개월간 받은 후 ApoE⁻/⁻ 또는 LDLR⁻/⁻ 마우스가 대동맥 또는 상완두동맥 부위에 경미한 죽상경화성 플라크만 형성되는 반면, 경동맥 8,9에서는 명확한 플라크 병변이 형성되지 않는다는 것을 보여주었습니다.

프로단백질 전환효소 서브틸리신/케신 9형(PCSK9)은 저밀도 지단백 콜레스테롤(LDL-C) 대사의 핵심 조절자로, LDL 수용체의 분해를 촉진하여 혈청 LDL-C 수치를 증가시킵니다10. PCSK9 를 발현하는 재조합 아데노 관련 바이러스(PCSK9-AAV)는 유전적 변형 없이도 WT 마우스에서 용량 조절 가능한 고콜레스테롤혈증을 가능하게 합니다11. PCSK9-AAV에 의해 유발되는 고콜레스테롤혈증, 지질 대사 장애를 더욱 악화시키는 HFD, 국소 혈역학적 장애를 유발하는 PCL, 그리고 국소 혈역학적 장애를 유발하는 PCL을 결합하면, 인간 동맥경화의 두 가지 주요 위험 요인인 고콜레스테롤혈증과 흐름 장애를 통합한 동물 모델을 구축할 수 있습니다.

이전 연구 진행상황 12를 바탕으로, 이 프로토콜은 C57BL/6 마우스에서 경동맥 동맥경화증을 유도하는 표준화된 방법을 확립합니다. 기존 모델 프로토콜과 비교할 때, 이 프로토콜은 세 가지 주요 장점을 제공합니다: (1) 병태생리학적 관련성: 고콜레스테롤혈증과 흐름 교란을 동시에 재현하여 중말기 인간 동맥경화증과 유사한 경동맥 병변을 유발합니다; (2) 재현성: AAV 용량, 수술 절차, 식이 조절의 상세한 매개변수화는 실험실 간 변동성을 줄인다; (3) 적시성: 전체 모델링 기간은 5주로, 모델 구축에 필요한 시간을 크게 단축합니다.

이 프로토콜은 혈관벽 생물학을 연구하고, 항죽상동맥경화제의 효능을 평가하며, 동맥경화에서 혈역학과 지질 대사 간 상호작용을 탐구하는 연구자들에게 적합합니다. 특히, 이 프로토콜은 경동맥 중심 모델로, 흡연, 당뇨병, 고혈압, 비만 등 동맥경화의 전신적 위험 요인 전반을 완전히 재현할 수 없습니다. 아래는 모델 설립 및 병변 평가를 위한 단계별 가이드입니다.

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프로토콜

모든 절차는 베이징 연합 의과대학 동물실험 윤리 위원회(ACUC-A02-2024-006)의 동물 윤리 위원회(ACUC-A02-2024-006)의 승인을 받았으며, 실험동물 관리 및 사용 가이드를 준수합니다.

1. 실험 동물 준비

  1. 수컷 C57BL/6주 된 쥐 6마리(체중: 22-25g)를 구매하세요.
  2. 특정 병원체가 없는 환경(SPF) 환경에서 엄격히 통제된 조건 아래: 온도(23 ± 1°C), 습도(50 ± 5%), 그리고 12시간의 빛과 어둠 주기(조명: 07:00-19:00)에서 집쥐를 키우세요.
  3. 실험 전에 쥐들에게 표준 차우 사료(지방 에너지 비율 10%)와 멸균된 물을 제공하고, 1주일간 음식과 물을 자유롭게 공급하며 적응 기간을 유지하세요.

2. PCSK9 -AAV 준비 및 시행

주의: AAV를 생물안전 위험으로 간주하고 모든 절차를 적절한 기관 생물안전 수준(일반적으로 BSL-2) 하에서 수행하십시오. 이중 장갑, 안구 보호구, 보호복을 착용하세요. 취급 중 에어로졸 발생을 피하세요. AAV 오염 물질은 적절한 소독제(예: 10% 표백제)로 제염하고, 명확한 책임 및 사고 대응 프로토콜을 준수해야 합니다. 모든 바이러스 오염 폐기물은 염소 함유 소독제에 담가 비활성화되어야 합니다.

  1. 재조합 PCSK9-AAV (rAAV8-HCRApoE/hAAT-D377Y-mPCSK9)를 구매하세요.
  2. CMV 프로모터를 표적으로 하는 실시간 정량적 PCR로 AAV 역가를 검증하라: 최종 역가는 6.10×10¹³ vg/mL(벡터 게놈 수/밀리리터)였다. AAV는 -80°C에서 보관하고, 반복적인 동결-해동 사이클(≤3회 동결-해동 사이클)을 피하세요.
  3. AAV를 얼음 위에 15-20분간 녹인 후, 원심분리관을 3-5번 부드럽게 뒤집어 섞으세요(소용돌이 방지).
  4. PCSK9-AAV를 멸균 인산염 완충 생리식염수(PBS)로 희석하여 마우스당 최종 농도는 2×10¹¹ vg/200 μL로 만듭니다.
  5. 꼬리 정맥 주사 투여(정맥 시각화 마우스 꼬리 주사 홀더)를 사용해 쥐를 고정하고, 인슐린 주사기로 희석된 AAV 200 μL을 천천히 주입합니다(주사 속도: 10 μL/s). 주사 시점은 PCL 1주 전입니다(그림 1A).

3. 부분 경동맥 결찰을 위한 수술 전 준비

주의: 트리브로모에탄올은 과다복용 위험이 있는 통제 시약입니다. 체중에 따라 엄격히 투여하고, 반복 주사를 피하며, 투여 시간과 용량을 정확히 기록하세요. 잠긴 용기에 보관하고, 준비 및 사용은 훈련된 인력만이 수행하도록 하세요. 과다복용이 의심되는 경우에는 비상 대응을 시작하고 사건을 기록하세요.

  1. 복강 내 주입(2.5% 아베르틴, 0.18 mL/10 g)으로 마취하여 마우스를 마취하여 오른쪽 반사가 사라질 때까지(약 2-3분) 투여합니다. 그 다음 마우스를 가열 패드(37 ± 0.5°C)로 옮깁니다. 발가락을 꼬집어 마취 효과를 확인하세요.
    참고: 성공적인 수술을 위해서는 마취가 매우 중요합니다. 마취 위험을 최소화하기 위해 여러 차례 마취 주사는 피해야 합니다. 수술 시작 전에 예상 수술 기간을 기준으로 마취 용량을 결정해야 합니다. 또한, 장기간 시술로 인한 위험을 줄이기 위해 각 마우스의 수술 시간은 <30분으로 권장됩니다.
  2. 수술 중에는 5분마다 겸자로 뒷발 패드를 부드럽게 집어 쥐의 호흡수(정상: 분당 40-60회)와 족저반사를 확인하세요.
  3. 제모 크림을 쥐의 경추 앞쪽 피부에 꼼꼼히 발라주세요. 2-3분 후에는 면봉으로 앞쪽 경추 털을 제거하고, 남은 모발은 일반 생리식염수로 깨끗이 청소하세요. 노출된 피부를 5% 포비돈-요오드로 세 번 소독하세요.
  4. 무균 쥐 방의 생체 안전 캐비닛에서 수술을 수행하세요. 수술 공간을 자외선으로 멸균하여 가능한 한 무혈을 유지하고, 모든 금속 기구를 오토클레이브하세요.
    참고: 무균 환경과 철저한 소독은 수술 후 생존과 생리적 안정성을 보장하는 데 필수적입니다.

4. 부분 경동맥 결찰술 - 외과적 절차

  1. 멸균 수술용 가위로 쥐의 목에 중간 절개(길이 약 1.0-1.5cm)를 만듭니다; 둔한 겸자로 피하 조직과 흉쇄유돌근을 분리하여 좌측 총경동맥(LCCA)을 노출시킴.
    참고: 혈관 및 조직 건조로 인한 추가 외상을 방지하기 위해 수술 부위는 따뜻한 생리식염수로 지속적으로 적셔야 합니다.
  2. 미주신경이 손상되어 호흡 억제를 유발할 수 있으므로, LCCA를 동맥 인접 미주신경에서 단호하게 분리하세요.
  3. LCCA를 따라 위쪽으로 절개하여 내경동맥(ICA), 외경동맥(ECA), 후두동맥(OA), 상갑상선동맥(STA)을 노출시킵니다(그림 1B).
  4. STA 위 왼쪽 외경동맥을 결찰하기 위해 6-0 멸균 실크 봉합사를 사용하세요. 그 후 또 다른 6-0 살균 실크 봉합선을 사용해 ICA와 OA의 뿌리를 동시에 결찰합니다.
    참고: 신경 및 주변 조직을 결찰하지 마세요. ECA/ICA/OA의 션트 흐름을 완전히 차단하면서 LCCA에서 일정 수준의 역행성 흐름을 유지하세요. 결찰 효과는 출혈/혈류 상태와 원위 동맥 박동을 관찰하여 평가해야 합니다.
  5. 수술 부위에 출혈 여부를 확인하세요. 출혈이 발생하면 멸균 면봉으로 30-60초간 부드럽게 눌러 혈전을 달성하세요. 피부를 조직 접착제나 수술용 봉합으로 봉합하세요.
    참고: 과도한 조직 접착제가 피하 조직에 스며드는 것을 피하세요.

5. 부분 경동맥 결찰 후 관리 및 고지방 식이 개입

  1. 수술 후 복막 내 주사를 통해 0.5 mL의 따뜻한 생리식염수를 투여하여 체액 교체를 시행합니다.
  2. 수술 직후 및 수술 후 12시간 이내에 멜록시캄(0.1 mg/kg)을 피하 주사로 통증을 완화합니다.
  3. 쥐를 37°C의 가열된 회수 케이지에 넣어 교정 반사가 회복될 때까지 약 15-30분간 보관하세요. 수술 후 24시간 이내에 비정상적인 행동(예: 무기력, 호흡곤란)을 모니터링하세요.
  4. 수의사의 권고에 따라 수술 후 7일간 항생제 함유 마시는 항생제를 투여하여 감염 예방을 하세요.
  5. 수술 후 4주 전까지 서양식 HFD(지방 에너지 비율 40%, 콜레스테롤 함량 1.25%)를 먹입니다.
    참고: 지방 산화를 방지하기 위해 HFD는 4°C에 보관하고, 개봉 후 2주 이내에 사용하세요. HFD는 2일마다 교체하여 신선도를 유지하고, 쥐의 먹이 섭취량을 매일 모니터링하세요(정상 먹이량: 쥐 한 마리당 약 4-5g). HFD 먹이를 PCSK9-AAV에 의해 유도된 고콜레스테롤혈증과 동기화하면 경동맥 내 지질 침착이 극대화됩니다; HFD 시작을 늦추면 병변의 심각도가 줄어듭니다.

6. 샘플 채취 및 처리

주의: 파라포름알데히드는 독성 증기를 방출합니다. 준비, 사용 및 제거는 적절한 개인 보호 장비(장갑, 안전 고글, 실험복)를 착용한 채 화학 연기 후드에서 이루어져야 합니다. 폐기물은 확립된 중화 및 화학 폐기물 수집 절차를 사용하여 처리합니다. 고정제는 기관의 액체폐기물 처리 프로토콜에 따라 중화되어 중앙에서 수집되어야 합니다.

참고: 본 연구에서 사용된 인간 경동맥동맥경화증 표본은 경동맥 협착증 환자 중 경동맥 내막 절제술을 받은 환자들로부터 수집되었습니다. 이 연구는 헬싱키 선언을 준수하며, 베이징 연합 의과대학 병원(PUMCH) 기관윤리 심사 위원회(No. JS-2966). 모든 연구 참가자는 서면 동의서를 제출하였습니다.

  1. 수술 후 4주경에 복강내 트리브로모에탄올 주사로 마취합니다.
  2. 마취된 쥐에게 양측 흉강절개술을 시행하고 심장을 천공하여 혈액 샘플을 채취하여 혈중 지질 검사를 합니다. 그 후 왼쪽 심실에 얼음처럼 차가운 PBS 20mL를 관류하여 혈관에서 잔여 혈액을 분당 3-6mL 속도로 세척합니다. 조직 색깔 변화를 관류 완료의 시각적 지표로 관찰하세요.
    참고: 기관 윤리/규정에 의해 허용되는 경우, 지역 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)의 요구사항을 준수하고 명확히 명시하고 수행될 경우 대체 방법을 사용할 수 있습니다. 동물 사체는 기관 수의팀 또는 승인된 계약자가 생물폐기물 규정을 준수하여 소각하거나 승인된 생물학적 위험물 처리 절차를 거쳐야 합니다.
  3. 심장과 함께 경동맥을 해리 및 채취한 뒤, 현미경으로 양측 경동맥을 분리한 뒤, 4% 파라포름알데히드(PFA)를 4°C에서 24시간 동안 고정합니다.
  4. 고정된 경동맥을 30% 자당 용액(PBS에 용해)으로 옮겨 4°C에서 24시간 배양합니다(조직이 가라앉을 때까지). 동맥을 최적 절단 온도(OCT) 화합물에 박아 -80°C에서 보관합니다.
  5. 크라이오스탯을 사용해 왼쪽 총경동맥의 5μm 두께 단면을 절단합니다(절개 위치: 결찰 부위 근위 1mm; 절단 온도: -20°C ~ -22°C, 조직 수분 함량에 따라 미세 조정). 미리 냉각된 미세한 브러시를 사용해 조각을 부드럽게 크라이오스탯의 안티롤 플레이트 위에 옮겨 평평하게 유지합니다. 폴리-L-라이신 코팅된 슬라이드를 거의 수직 각도로 잡고 천천히 단면에 닿게 하세요.
    참고: 관류 단계는 잔류 혈액을 제거하는 데 매우 중요합니다; 그렇지 않으면 병변 착색에 방해가 됩니다. 조직 형태를 보존하기 위해 안락사 후 30분 이내에 완전한 동맥 고정.

7. 죽상동맥경화성 병변 평가 1 - 오일 레드 O 염색

  1. 섹션을 실온(20-25 °C)에서 30분간 자연 건조; 60% 이소프로판올에 1분간 담갔다가, 실온(20-25 °C)에서 오일 레드 O 작업 용액(60% 이소프로판올로 3:2 희석)에서 10분간 배양합니다.
  2. 슬라이드를 60% 이소프로판올에 실온에서 완전히 담가 ~5-10초 동안 부드럽게 교반하여 결합하지 않은 염료를 제거하여 구분합니다; 헤마톡실린으로 30초 염색; 수돗물로 5초간 헹구세요(세포 핵을 파란색으로 만듭니다).
  3. 슬라이드 스캐너 또는 5배, 10배, 20배 배율의 광학 현미경을 이용해 절면 이미지를 캡처할 수 있습니다; ImageJ 소프트웨어(버전 1.54p)를 사용해 지질 침착 면적을 정량적으로 분석하며, 전체 내막 면적에 비해 오일 레드 O-양성 면적의 비율을 계산합니다.
  4. 이미지 J 정량화 절차
    1. 이미지를 열어보세요; 프리 핸드 선택 도구를 선택하여 intima-media 영역을 수동으로 윤곽선으로 표시하세요. ROI 매니저> 분석 > 도구 로 이동하여 추가를 클릭하세요.
    2. >이미지로 가서 색상 임계값 조정> 색상 조절; 색상 및 밝기 매개변수를 오일 레드 O-양성 영역에 맞게 조정하세요. 선택을 클릭한 후 ROI 관리자에 추가하세요.
    3. 내막 매체 ROI와 염색된 ROI 모두를 선택하고, AND 를 클릭하면 내막 매체 영역 내 오일 레드 O-양성 영역을 얻을 수 있습니다.
    4. 추가와 측정을 클릭하여 내막 중체 영역과 오일 레드 O-양성 영역의 면적을 계산하세요.
    5. 계산 공식:
      오일 레드 O 면적(%) = (오일 레드 O_positive_area / intimal_media_area) × 100

8. 동맥경화성 병변 평가 2 - 베르호프의 반 기손 염색

  1. 슬라이드에서 OCT 화합물이 함재된 냉동 부위를 회수합니다.
  2. 슬라이드를 실온(20-25°C)에서 증류수에 10-15분간 담그고 부드러운 저어주어 OCT 화합물을 완전히 녹입니다.
  3. OCT 성분이 포함된 물을 버린 후, 잔여 OCT 화합물을 제거하기 위해 신선한 증류수로 2분간 절면을 세척하세요.
  4. 베르호프 염색(헤마톡실린, 요오드, 염화철 포함)에 절편을 실온(20-25°C)에서 15분간 배양하고, 배양 중 슬라이드 선반을 2-3번 부드럽게 흔들어 균일하게 염색합니다.
  5. 절단을 증류수로 두 번, 10초씩 빠르게 헹구세요.
  6. 2% 염화철 용액에서 30-60초간 분별합니다; 현미경으로 관찰하여 탄성 섬유가 푸른빛이 도는 검은색으로 보이고 배경이 회색으로 보일 때까지 관찰합니다. 증류수로 두 번, 각각 1분씩 씻어내세요.
  7. 5% 티오설페이트 나트륨 용액에 1-2분간 절편을 처리하여 잔류 요오드를 제거합니다.
  8. 증류수로 2분간 세척한 후, 반 지슨 스테인(산성 푸흐신 + 피크린산)으로 5분간 맞교환 스테인을 하면 콜라겐 섬유를 선명한 빨간색으로 염색하세요.
  9. 95% 에탄올(각각 1분씩 2회)과 100% 에탄올(각각 1분씩)에 순차적으로 탈수; 자일렌에 5분간 맑게 함; 일부 구간은 합성 수지 장착 매체를 사용해 덮개를 슬립했습니다.
  10. 단면 이미지 촬영; 디지털 영상 분석 소프트웨어를 사용해 길이 측정 도구를 사용해 네 방향(앞, 후, 좌, 우)으로 플라크의 내막 두께 또는 내부 두께를 측정한 후 평균 값을 계산합니다.
    1. 슬라이드를 열고 목표 혈관 단면을 확대한 후 측정 도구를 클릭하세요.
    2. 앞, 후, 왼쪽, 오른쪽 방향에서 내막과 외부 가장자리를 차례로 클릭해 네 가지 두께 값을 기록하세요.
    3. 평균 값을 계산하고 측정값을 기록하세요.
      평균 값 = (앞쪽 + 뒤쪽 + 왼쪽 + 오른쪽) ÷ 4

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결과

오일 레드 O 염색 결과는 결찰된 동맥에서 심각한 죽상동맥경화성 플라크 형성, 뚜렷한 지질 코어, 괴사 부위를 보였다. 좌경동맥의 지질 영역 비율이 우측 경동맥 대조군보다 유의하게 높았다(p < 0.001)(그림 2A). VVG 염색 검사에서 막막 내 탄성 섬유가 파괴되거나 사라졌으며, 판기 막막이 유의미하게 두꺼워진 현상이 드러났습니다. 왼쪽 경동맥에서는 막막-기관 두께(IMT)와 내막 두께(IT)가 우측 경동맥 대조군에 비해 유의하게 증가했습니다(p < 0.001)(그림 2B). 이 결과는 PCL+PCSK9 AAV+HFD 모델(그림 2A, 2B RCA 그룹)이 인간 경동맥과 유사한 중증에서 진행된 중증 죽상동맥경화성 플라크를 유도할 수 있음을 시사하며(

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토론

이 프로토콜은 PCSK9-AAV 유도 고콜레스테롤혈증, 고지방식이(HFD), 그리고 총경동맥 부분 결속(PCL)을 결합하여 C57BL/6 마우스에서 경동맥 동맥경화증 모델을 표준화하는 방법을 설명합니다.

전통적인 모델인 ApoE -/- 또는 LDLR-/- 모델, WT 마우스5를 사용하는 PCL 모델과 비교할 때, 이 모델은 죽상동맥경화증 연구에 독특한 장점을 제공합니다. 첫째, 쥐에게 PCSK9-AAV를 투여하고 HFD를 투여하여 고콜레스테롤혈증을 유도하는 한편, 경동맥 내 혈류를 방해하기 위해 PCL을 시행합니다; 이 두 가지는 인간 경동맥경화증의 가장 중요한 위험 요인입니다. 병변은 초기 지질 침착에서 대식세포 침윤과 대량 지질 침착을 동반한 중간 정도의 내막 비후로 진행되며, 이는 인간 병변의 진행과 매우 유사하다

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공개 사항

저자들은 공개할 것이 없습니다.

감사의 글

이 연구는 중국국가자연과학기금(82470516, 8227022021), 중앙대학 특별연구기금, 베이징연합의과대학(3332025111), 국가고등병원 임상연구기금(2025-PUMCH-A-181, 2025-PUMCH-D-001), 쓰촨성 자연과학기금(2024NSFC0715)으로부터 자금을 지원받았습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
6-0 멸균 나일론 봉합사진환 메디컬F602NA
C57BL/6 마우스상하이 모델 유기체 센터 주식회사 (SMOC)SM-001NA
차우 데이트셰통 전기아니. XT93GNA
크라이오스터트 라이카 CM1950NA
제모 크림베트RB 헬스 LLCNA
고지방 식단셰통 전기XT108cNA
10월사쿠라4582NA
오일 레드 O 용액서비스바이오 G1017-100mLNA
광학 현미경라이카DM4BNA
파라포름알데히드 서비스바이오 G1101-500mLNA
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참고문헌

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