방법 논문

쥐 배아에서 흰색 및 갈색 프레디포세포의 분리 및 배양

245 조회수

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DOI:

10.3791/70101

⸱

2026년 4월 17일

 ,  ,  , 
1Laboratory Lille Neuroendocrinology, Lille Neuroscience & Cognition, University of Lille, Inserm, CHU Lille

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

우리는 쥐 배아에서 흰색 및 갈색 전지방세포를 분리 및 배양하는 새롭고 견고하며 재현 가능한 접근법을 제시하여, 지방세포 계통 헌신과 분화를 지배하는 세포 및 분자 메커니즘을 해부하는 강력한 시험관 내 전략을 확립하고, 지방 조직 발달의 영향을 조사할 수 있는 틀을 제공합니다.

초록

지방 조직은 대사 항상성에서 중심적인 역할을 하며, 그 특성은 지방세포 분화를 통해 배아 발달 과정에서 형성됩니다. 따라서 배아 전지방세포는 지방 조직 형성과 계통 특정의 초기 사건을 연구하는 데 중요한 모델을 제공합니다. 이 글은 배아 15.5일(E15.5)에 마우스 배아에서 분리된 흰색과 갈색 전지방세포를 분리하고 시험관 내에서 분리하는 재현 가능한 프로토콜을 설명합니다. 이 단계는 지방 저장소가 형성되기 시작하는 발달 단계입니다. 이 방법은 세포 생존성과 지방 생성 성숙을 지원하는 조직 미세해부, 효소 소화, 1차 배양, 계통별 특이적 분화 조건에 대한 상세한 지침을 제공합니다. 대표적인 결과로는 지질 방울 축적과 계통 관련 마커 발현이 포함되어 있으며, 이는 정의된 배양 조건에서 성공적인 분화를 확인시켜 줍니다. 이 접근법을 사용하면 배아 전지방세포를 흰색 또는 갈색 지방세포의 운명으로 유도할 수 있어, 발달 시기, 계통 특성, 유전자 발현 프로필의 비교 분석이 가능해집니다. 이 프로토콜은 통제된 실험 환경에서 지방 조직 형성과 주산기 프로그래밍 메커니즘을 연구하는 데 실용적이고 발달에 적합한 도구를 제공합니다.

서론

지방 조직은 에너지 저장, 내분비 신호 전달, 적응적 열생성을 조절함으로써 전신 항상성 유지에 중심적인 역할을 하며, 국소 및 먼 기관과 광범위하게 상호작용합니다 1,2,3. 지방 조직은 두 가지 주요 유형으로 구분할 수 있는데, 흰색 지방 조직(WAT)과 갈색 지방 조직(BAT)으로, 세포 계통, 생리적 기능, 해부학적 분포, 대사 활동 면에서 현저히 다릅니다.

WAT는 이 생물체의 주요 에너지 저장소를 구성합니다. 백색 지방세포는 지질 저장에 매우 특수화되어 있으며, 세포질 공간 대부분을 차지하는 단일 큰 지질 방울(LD)이 존재하는 것이 특징이다. 반면 BAT는 진동이 없는 열생성에 특화되어 있습니다. 갈색 지방세포는 여러 개의 작은 LD를 포함하고 있으며, 높은 미토콘드리아 밀도를 보입니다 3,6. BAT의 열생성 능력은 양성자 누출을 촉진하는 내부 미토콘드리아 막 단백질인 분리 단백질1(UCP1)에 의존합니다. ATP 합성에서 산화적 인산화를 분리함으로써, UCP1은 양성자 구배를 열로 소산하여 체온 유지에 기여합니다. WAT와 BAT는 다양한 역할을 수행함에 따라 대사 질환의 핵심 조절자이자 잠재적 치료 표적으로서뿐만 아니라, 복잡하고 광범위한 전신 상호작용 덕분에 발생 및 진화생물학, 면역학, 노화 분야에서도 상당한 관심을 받고 있습니다 9,10. 축적된 증거는 태아 대사 프로그래밍이 지방 조직 발달과 밀접하게 연관되어 있음을 시사하는데, 자궁 내 환경의 교란은 지방세포 수, 분포, 기능에 영향을 미쳐 개인이 이후 비만과 대사 질환에 취약해질 수 있기 때문입니다11.

지방 조직 생물학을 연구하기 위해서는 성숙한 지방세포의 가용성이 필수적입니다. 시험관 내 배양 시스템은 지방 생성과 지방세포 기능에 영향을 미치는 특정 요인을 평가할 수 있는 통제된 환경을 제공합니다. 성체 쥐 또는 신생아 새끼로부터 지방세포를 분리하고 분화하기 위한 여러 프로토콜이 확립되었습니다12, 13, 14, 15. 하지만 이러한 지방세포 전구는 발달 과정에서 지방 조직을 생성하는 원래 세포 집단과는 다를 수 있습니다. 쥐에서 BAT 데포는 배아 발생 중 가장 먼저 발달하여, 신생아에게 떨림이 없는 열생성 능력을 제공하여 출생 후 추위 적응에 매우 중요합니다. 갈색 지방세포의 저장소는 배아 14.5일째(E14.5)16일부터 견갑 간 부위에서 발견될 수 있다. LD는 E15.5에서 형성되기 시작하며, UCP1 발현은 E16.5 부근에서 시작됩니다. 쥐 배아에서는 서혜부 WAT(iWAT)의 전지방 세포도 이16단계에서 이미 존재합니다.

여기서 설명하는 프로토콜은 E15.5에서 분리된 전지방세포에 초점을 맞춥니다. 이 단계는 전구세포가 생체 내에서 분화를 시작하는 배아기(16)에 해당하며, 이는 WAT와 BAT를 기래하는 주요 전구세포를 나타냅니다. 반면, 성인 또는 신생아 단계에서 분리된 지방 생성 조상은 이미 환경적 요인의 영향을 받았을 가능성이 있어 가소성이 더 제한적일 가능성이 높습니다. 따라서 E15.5 배아 전구세포를 사용하면 생체 내 지방생성 프로그램을 충실히 재현할 수 있는 능력이 향상되는데, 이 세포들은 높은 발달 가소성을 유지하며 생리학적 분화 경로를 더 잘 따르기 때문입니다. 이 접근법은 특히 태생기 동안 환경적 요인이 전지방세포 분화에 미치는 영향을 조사하는 발달생물학 질문에 관심이 많으며, 초기 노출이 지방 조직 발달과 장기 대사 결과에 어떤 영향을 미치는지 연구하는 데 유용한 모델을 제공합니다. 하지만 사용자는 이 단계별 특이성에 주의해야 합니다: 이 방법은 E15.5 배아에 최적화되어 있으며, 배아 나이나 해부 정밀도의 편차가 세포 수율이나 생존력에 영향을 줄 수 있습니다. 또한, 미세해부 기술은 배아 저장소가 작다는 점을 고려할 때 비지방 조직과의 오염을 피하기 위한 연습이 필요합니다. 이 프로토콜은 배아 전지방세포를 성숙한 갈색 및 흰색 지방세포로 분리, 배양, 증폭 및 구분하는 모든 단계와 절차를 요약합니다.

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프로토콜

모든 동물 시술은 현지 규정과 2010년 9월 22일 유럽연합 이사회 지침(2010/63/EU) (APAFIS#2617-2015110517317420)에 따라 진행되었습니다.

모든 생물학적 폐기물 및 효소 용액은 생물학적 위험물질에 관한 기관의 생물안전 지침과 규정에 따라 취급 및 폐기되어야 합니다. 구체적으로:
- 생물학적 폐기물: 승인된 생물학적 위험 용기에 수집하여 오토클레이빙 또는 기관 생명안전 사무소의 지시에 따라 처리합니다.
- 효소 용액: 10% 표백제를 30분간 첨가하여 잔류 효소 활성을 비활성화하고, 현지 규정에 따라 화학 폐기물로 폐기합니다.
- 오염된 소모품(피펫 팁, 튜브 등): 폐기 전에 생물학적 위험 봉지와 오토클레이브에 보관합니다.
- 고정 시약: 지정된 용기에 유해 화학 폐기물로 폐기됩니다.

폐기물을 처리할 때는 항상 적절한 개인 보호 장비를 착용하세요.

1. 쥐 배아 채취

  1. 임신한 쥐(C57Bl/6J)는 기관동물 관리 및 사용 위원회의 지침에 따라 안락사시키세요.
  2. 임신한 쥐의 복부 부위를 70% 에탄올로 소독하고 자궁을 노출시키기 위해 중간 절개를 하세요.
  3. 복강을 절개하여 E15.5 배아가 들어 있는 노른자 주머니를 제거하고, 4 °C의 차가운 1배 PBS가 담긴 아가로스 상자에 넣습니다.
  4. 각 난황낭의 외막과 태반을 제거하고, 배아의 탯줄을 절단합니다.
  5. 배아를 차가운 1x PBS가 들어있는 새로운 아가로스 박스에 넣으세요.
    참고: 의식적 통증 인식의 근간중간 신경계 구조는 이 임신 단계에서 완전히 발달하지 않았지만, 말초 통각수용체는 E13에서 E15 사이에 형성되기 시작합니다. 기관 동물 관리 지침에 따라, 잠재적 통각 반응을 최소화하기 위해 실험적 조작 전에 배아를 참수로 안락사할 것을 권장합니다.

2. 배아 지방 조직 해리 (그림 1)

  1. 견갑간 BAT 박리 (그림 1A)
    1. 5% 아가로스 플레이트에서 직사각형을 잘라내어 배아를 그 안에 넣어 고정하세요. 접시에 차가운 1x PBS를 채우세요. 아가로스 상자와 배아를 쌍안경 현미경 아래에 놓으세요.
    2. 배아 뒷부분에서 피부를 제거하세요.
    3. 미세한 겸자와 현미 가위로 보갑간 박테를 해리합니다.
    4. 미세가위를 사용해 BAT를 주변 조직(결합조직 및 근육)과 조심스럽게 분리하여 약 4–6mm x 2–3mm 크기의 BAT 샘플을 얻습니다.
    5. BAT를 1mL의 차가운 4°C의 Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12(DMEM/F-12) 글루타민과 100 U/mL 페니실린/스트렙토마이신(P/S)이 들어있는 2mL 튜브에 넣습니다.
  2. iWAT 해부 (그림 1B)
    1. 배아를 옆으로 눕히고(한쪽 면, 다시 다른 쪽) 아가로스 플레이트 위에 놓습니다.
    2. 미세한 겸자와 현미 가위를 사용해 iWAT를 해부하세요.
    3. iWAT를 주변 조직(결합 조직 및 피부)과 조심스럽게 분리하여 약 2–4 mm x 0.5–0.8 mm 크기의 두 개의 데포를 만듭니다.
    4. 두 개의 WAT 샘플을 1mL의 냉 DMEM/F-12 글루타민과 100 U/mL 페니실린/스트렙토마이신(P/S)이 들어 있는 2mL 튜브에 넣습니다.
      참고: 모든 해부는 가능한 한 가장 멸균된 환경에서 쌍안현미경 아래, 사전에 소독된 도구를 사용해 수행해야 합니다.

3. 지방 조직의 소화

  1. 피펫으로 DMEM/F12를 제거하고, 튜브에 200 μL DMEM/F12 글루타민과 100 U/mL p/s, 0.2% 소 혈청 알부민(BSA), 0.5 U 콜라게나제 D, 0.5 U 디스파제 II를 넣습니다.
  2. 조직을 마이크로 가위로 튜브 안에 넣어 최대한 줄이고, 피펫팅으로 10번 위아래로 움직이며 소화 과정을 돕습니다.
    참고: 완전히 소화된 샘플은 조직 덩어리가 보이지 않는 흐릿한 현탁 상태로 보여야 합니다.
  3. 37°C(물욕)에서 15분간 부화하세요.
  4. 반응을 멈추려면 600 μL 차가운 DMEM/F-12 글루타민과 100 U/mL p/s, 20% 태아 소 혈청(FBS)을 첨가하여 반응을 멈추세요. 피펫팅으로 10번 위아래로 고르게 재현탁하세요.

4. 1차 세포 배양

참고: 이 단계부터 모든 절차는 오염을 방지하기 위해 생물학적 안전 캐비닛(BSC) 내에서 엄격한 멸균 조건 하에서 수행되어야 합니다. 멸균 장갑, 실험복, 안전 고글을 착용하여 멸균을 유지하고 잠재적 위험으로부터 보호하세요. 멸균된 일회용 플라스틱웨어를 사용하고, 무균 기법을 사용하며, 모든 시약과 매체가 멸균인지 확인하세요. 오염을 막기 위해 무균이 아닌 표면과의 접촉을 피하세요.

  1. 세포를 웰 슬라이드에 판 부착하고 표준 조건(37°C, 5%CO2)에서 1시간 배양합니다; 8웰 플레이트의 경우 웰당 200 μL을 넣습니다. 배양 후에는 세포가 부착되었는지 현미경으로 관찰하며 플레이트를 부드럽게 움직여 확인한다.
    참고: 이 단계에서 다양한 BAT 또는 WAT 샘플을 하나의 튜브에 모아 서로 다른 웰에서 균질화된 배양물을 얻을 수 있습니다(예: 유사한 배양에 대한 처리 효과를 테스트하기 위해).
  2. 배지를 37 °C의 예열된 DMEM/F-12 글루타민과 100 U/mL p/s, 10% FBS를 포함해 세포를 37 °C, 5%CO2에서 하룻밤 배양합니다.
    참고: 배지를 바꾸면 분해되지 못한 죽거나 붙지 않은 세포와 조직 조각이 제거되어 부착된 세포만 남게 됩니다.
  3. 분화 치료 (72시간)
    1. 갈색 지방세포 분화를 위해, 37°C에서 예열된 DMEM/F-12 글루타민을 100 U/mL p/s, 10% FBS, 125 nM 인도메타신, 0.5 mM 3-이소부틸-1-메틸크산틴(IBMX), 1 nM 트리이오도티로닌(T3), 1 μM 로시글리타존, 1 μM 덱사메타손, 850 nM 인슐린을 사용하여 배지를 교체하고, 37°C, 5%CO2 5%에서 72시간 배양합니다.
    2. 백색 지방세포 분화를 위해서는 100 U/mL p/s, 10% FBS, 0.5 mM IBMX, 1 μM 덱사메타손, 850 nM 인슐린을 포함한 예열된 DMEM/F-12 글루타민을 사용해 배지를 교환하고, 37°C, 5%CO2 5% CO2 에서 72시간 배양합니다.
  4. 유지 치료 (48시간마다)
    1. 배지를 37 °C에서 예열한 DMEM/F-12 글루타민과 함께 100 U/mL p/s, 10% FBS, 1 nM T3, 1 μM 로시글리타존, 850 nM 인슐린을 사용하여 교환합니다. 중간 크기는 48시간마다 교체하세요.
      참고: 나열된 모든 농도는 시약의 최종 작동 농도를 의미합니다. 처리할 웰 수에 따라 최종 분별 및 유지 매체의 부피를 조정하며, 8웰 플레이트의 표준 부피로 웰당 200 μL를 사용합니다.

5. 고정 및 면역 염색 (그림 2A)

  1. 배지를 흡인하고 세포를 차가운 1x PBS로 세척하세요.
  2. 세포를 10분 동안 차가운 4% 포름알데히드 1x PBS로 고정합니다.
  3. 세포를 PBS 1배로 3분, 5분씩 세척하세요.
  4. 0.1% 트리톤을 1x PBS에 10분간 투과시킵니다.
  5. 세포를 PBS 1배로 3분, 5분씩 세척하세요.
  6. 5% 정상 당나귀 혈청(NDS)을 1x PBS에 실온(RT)에서 1시간 동안 차단합니다.
    참고: 차단 혈청의 종 선택은 2차 항체가 생성되는 종에 따라 다릅니다.
  7. 1차 항체를 5% NDS에 희석한 1차 항체를 1x PBS에 4°C에서 하룻밤 배양합니다.
    참고: 웰 중 하나에 1차 항체를 첨가하지 마세요—이는 음성 대조군으로 작용합니다.
  8. 세포를 1x PBS로 2회 5분간 세척하세요.
  9. 세포를 5% NDS로 1x PBS에 5분간 세척하세요.
  10. 2차 항체, DAPI, Bodipy와 함께 RT에서 1시간 동안 인큐베이팅하고, 빛으로부터 보호할 수 있도록 덮어주세요.
  11. 우물을 1x PBS로 3 x 5분 세척하세요.
  12. 이미지를 얻을 때까지 셀을 어둠 속에서 4°C로 유지하세요.

6. 전지방 세포의 냉동 보존

참고: 분화 과정 전후에 세포를 중단하고 냉동하여 저장하고 이후 세포 배양에 재사용할 수 있습니다.

  1. 냉동 매체를 준비하세요: 50% FBS, 40% DMEM/F-12 글루타민, 100 U/mL p/s, 10% 디메틸 설폭사이드(DMSO).
    주의: DMSO는 유해 화학물질입니다. 피부와 눈을 자극하며, 피부를 통해 다른 유해 물질의 흡수를 촉진할 수 있고, 흡입하거나 섭취하면 해로울 수 있습니다. 노출과 오염을 최소화하기 위해 항상 BSC 내부에서 DMSO를 다루세요. 적절한 개인 보호 장비(PPE) (멸균 장갑, 실험복, 접촉을 방지하기 위한 안전 고글)를 착용하세요. 피부 접촉을 피하세요. 접촉 시 즉시 충분한 물로 씻으세요. 사용하지 않을 때는 BSC 내에서 밀폐된 용기에 보관하고, 실험실 안전 프로토콜에 따라 적절히 폐기하세요.
  2. 셀을 미리 예열한 37 °C 1x PBS로 세척하세요.
  3. 미리 예열된 0.05% 트립신을 첨가하여 세포를 화학적으로 분리시키고, 37°C, 5%CO2에서 5분간 배양합니다. 현미경으로 세포 박리가 있는지 육안으로 확인하세요.
  4. 반응을 멈추려면 예열(37 °C) DMEM/F-12 글루타민을 3배 양에 100 U/mL p/s, 10% FBS로 첨가합니다. 고르게 재정지하세요.
  5. 원심분리기 RT 7분, 300g × 그리고 상원액을 버 립니다.
  6. 세포를 10mL의 냉동 배지에 재현탁하세요. 원심분리기로 7분 RT, 300 g × 후 상정액을 버려 약 3mL를 남깁니다.
    참고: 셀 수를 세고 총 셀 수를 계산하려면 정확한 부피를 측정하세요.
  7. 작은 부피를 1:2 희석한 후 노이바우어 챔버를 사용해 생세포를 세세요.
  8. 냉동 배지를 사용해 5 × 10– 10 × 105 셀/바이알(최종 부피: 1 mL/바이알)을 달성할 수 있도록 용량을 조절합니다.
  9. 바이알을 냉동 용기(냉각 속도: -1 °C/분)로 옮겨 -80 °C에서 하룻밤 보관하세요.
  10. 장기 보관을 위해 액체 질소로 옮깁니다.
    참고: 이 프로토콜은 해동 후 90% 이상의 생존 가능성을 허용합니다.
  11. 필요할 때 37°C 수조에서 빠르게 해동하여 세포를 녹입니다.
  12. 바이알 내용물을 100 U/mL p/s, 10% FBS를 포함한 4mL 예열(37 °C) DMEM/F-12 글루타민에 옮깁니다. 부드럽게 피펫을 10번 위아래로 돌려 고르게 재현탁하세요. 37°C, 5%CO2에서 하룻밤 배양하세요.
  13. 배지를 100 U/mL p/s, 10% FBS의 신선한 DMEM/F-12 글루타민으로 교체하고 48시간마다 갱신하세요.
    참고: DMSO 잔여물을 제거하기 위해 배지를 교체하는 것이 매우 중요하며, 장기간 노출되면 세포 생존력, 분화 및 기능에 저해가 될 수 있습니다. 세포독성 효과를 피하기 위해 배지 교체를 완전히 해야 합니다.
  14. 80% 합류율에 도달하면 실험이나 통과 세포를 진행하세요.

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결과

그림 1에 나타난 것처럼, 온전한 BAT 및 iWAT 데포는 E15.5 배아로부터 효율적으로 분리할 수 있습니다. BAT는 E15.5 배아에서 쉽게 검출할 수 있지만, iWAT를 검출하려면 훈련이 필요할 수 있습니다. 두 경우 모두 다른 세포 유형을 배양하지 않기 위해 주변 조직을 거칠게 해부한 후 미세해부하는 것이 필수적입니다.

흰색과 갈색 전지방세포의 초기 소화 및 배양 단계는 동일하지만(그림 2A,B), 이후 분화 단계는 분리된 조직의 기원에 따라 세포를 흰색 또는 갈색 지방세포 계통으로 유도하는 방향이 다릅니다. 따라서 세포는 적용된 처리에 따라 뚜렷한 분화 프로필을 보입니다(그림 3A). 이 프로토콜을 사용하여 E15.5 ...

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토론

전지방세포의 배양은 다양한 실험적 맥락에서 광범위하게 기술되어 왔습니다. 그러나 기존 프로토콜은 주로 성체 조직이나 배아 섬유아세포에 의존하고 있으며, 현재 발달 중인 지방 조직에서 배아 전지방세포를 직접 분리하고 배양하는 표준화된 방법은 없습니다. 이 세포들을 연구하는 것은 특히 중요합니다. 이들은 고유한 배아 미세환경 내에 서식하는 진정한 전지방세포 집단을 대표하기 때문입니다. 이러한 분석은 배아 발생 중 흰색과 갈색 지방세포의 형성, 각 발달 단계를 지배하는 분자 요인 등 분화 신호를 이해하는 데 매우 중요합니다. E15.5는 주로 성숙한 전구세포가 얻어지는 성체 분리와 신생아 모델과 달리 WAT 및 BAT 저장소가 활발히 형성되는 임계 창을 나타냅니다. 더 나아가, 배아 전세포 배양은 지방 생성 프로그래밍에 미치는 환경 영향의 영향을 조사하는 독특한 전략을 제공합니다. 이 전구세포를 시험관 내에서 배양하...

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공개 사항

저자들은 이해 상충을 선언할 필요가 없습니다.

감사의 글

우리는 크리스티안 듀헴의 조언에 감사드립니다. 프랑스 국립보건의학연구소(INSERM)의 지원을 감사드립니다. M.C-M은 ANR-23-CE13-0044의 지원으로 지원받았습니다. M.A는 유럽 당뇨병 유전체 연구소(EGID, ANR-10-LABX-0046), 국립 당뇨병 정밀 의학 센터(PreciDIAB, ANR-18-IBHU-0001), 그리고 오트프랑스 지역 협의회(22005973)의 지원을 받았습니다. 그림 2 는 BioRender로 제작되었습니다. 메이유프-루샤르, A. (2026) https://BioRender.com/3pbzif1. SB는 ANR-24-CHBS-0002 보조금의 지원을 받았습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
3,5,3'-트리이오도티로닌시그마709719T3
3-이소부틸-1-메틸산틴 시그마I7018IBMX
아가로스시그마A0169
알코올VWR1.59010.0500
항-UCP1 항체앱캠AB10983
쌍안경 현미경라이카그리고 nbsp; MZ9.5
생물학적 안전 캐비닛써모 사이언티픽51022482BSC, HeraSafe KS 클래스 II 안전 캐비닛
보디피인비트로젠D3922여기/방출 493/504 nm
소 혈청 알부민유로메덱스04-100-812-CBSA
원심분리기에펜도르프5430 R
클램프FST (독일 스테인리스)
콜라게나제 D시그마11088882001
크라이오튜브사르스테트72.379
배양판 (8웰)이비디 80826
배양판 (12웰)코닝 코스타CLS3513폴리스티렌 판, 평평한 바닥, 멸균
덱사메타손시그마D2915
디스파즈 II시그마4942078001
DMEM/F12깁코31331글루타민 첨가
DMSO시그마D2438
당나귀 항토끼 항체인비트로젠A32795알렉사 플루오 플러스 647
에펜도르프 1.5 mL에펜도르프15625367
FBS깁코A5256701
포름알데히드 37%써모 사이언티픽119690010
냉동 용기써모 사이언티픽그리고 nbsp; 5100-0001
Hoechst 인비트로젠H3570
인큐베이터써모 사이언티픽50116048헤라셀 150i CO2 인큐베이터
인도메타신시그마I7378
인슐린시그마I9278
그리고 nbsp; 10시간 이상 전경이 장착된 역현미경; 대물 조명과 할로겐 조명칼 자이스 악시오 베르트 A1
마우스 C57BL/6J찰스 강
마이크로가위FST (독일 스테인리스)
NDS시그마D9663
노이바우어 챔버써모 사이언티픽10195580
PBS 10x깁코14200
PBS 1x깁코14190
페니칠린/스트렙토미신깁코15140-122
페트리 접시사르스테트83.3902
qPCR 플레이트써모 사이언티픽AB-0600
Fabp4용 qPCR 프로브써모 사이언티픽4331182TaqMan 분석, Mm00445878_m1
Pparg용 qPCR 프로브써모 사이언티픽4331182TaqMan 분석, Mm00440940_m1
UCP-1을 위한 qPCR 프로브써모 사이언티픽4331182TaqMan 분석, Mm01244861_m1
역전사 키트  써모 사이언티픽4368813고용량 cDNA 키트
RNA 추출 키트오메가 바이오텍R6934-02E.Z.N.A. 총 RNA 키트 II
로지글리타존시그마R2408
트리톤 X-100써모 사이언티픽A16046
트리판 블루시그마T8154
트립신-EDTA깁코25300054
물욕그랜트SAP12 12L 용량

참고문헌

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