소 유선상피세포 및 유선 조직에서 지질 비말의 크기 기반 농축을 위한 프로토콜

요약

이 프로토콜은 순차적 원심분리를 통해 지질 방울의 크기 기반 분리 및 농축을 달성하여, 지질 대사 메커니즘과 지질 방울 관련 생물학적 과정을 정확하고 재현 가능하게 하는 것을 목표로 합니다.

초록

이 프로토콜은 소 유선 상피세포(BMECs)와 유선 조직에서 다양한 크기의 지질 방울(LD)을 농축하기 위한 순차적 차등 원심분리 접근법을 설명하며, 기존의 대용량 LD 분리 방법을 넘어서는 크기 분해 분석을 가능하게 합니다. 세포 내 지질 대사의 동적 조절 허브로서, LD는 중성성 지질(중성지방, 콜레스테릴 에스터 등)을 저장하고 합성, 가수분해, 운송을 조정하는 중요한 기능을 수행합니다. 이들은 에너지 항상성 유지, 막 생합성 지원, 세포 신호 전달 촉진에 중심적인 역할을 합니다. LD 추출은 지질 대사의 조절 메커니즘을 연구하는 데 필수적입니다. 유선의 지질 대사 연구는 영아 발달, 인간 건강, 농업 경제학, 그리고 기본 세포 생물학에 중요한 영향을 미칩니다. 따라서 우리는 BMECs와 유선선 조직에서 LD를 추출하는 차동 원심분리 방법을 설명합니다. 기존의 대량 LD 분리 접근법과 달리, 이 프로토콜은 원심력을 순차적으로 조정하여 크기 기반 LD 하위 집단의 농축을 가능하게 합니다. LD 분획의 무결성과 상대적 농축도는 BODIPY493/503 염색을 통해 예비적으로 평가되어, 지질 대사 및 LD 관련 과정의 후속 분석에 실용적이고 재현 가능한 접근법을 제공합니다.

서론

지질 방울(LDs)은 세포 내의 동적 소기관으로, 중성 지질의 주요 저장 부위 역할을 합니다^. LD의 비정상적인 축적은 비만을 넘어 지방간 질환², 심혈관 질환³, 당뇨병⁴, 암⁵와 같은 다양한 질환과 관련이 있습니다. 반대로 LD의 수가 부족하면 심각한 결과를 초래하여 세포 에너지 저장량 손실과 이후의 기능 장애로 이어질 수 있습니다⁶. 농업 경제학 맥락에서, 반추동물의 LDs 부족은 우유 지방 분비 부족으로 이어져 우유 지방 억제를 초래하고, 이는 다시 유제품의 영양가와 시장성을 저해합니다⁷. 현재 LD 대사 조절은 중요한 연구 분야로 떠오르고 있습니다.

20세기 이후 LDs 추출 기술 개발은 일관되게 더 많은 양, 더 높은 순도, 그리고 더 잘 보존된 생물학적 활성을 목표로 해왔습니다. 이는 방법론의 지속적인 확립과 최적화를 포함합니다. 현재 여러 회사가 LD 분리⁸을 위한 상업용 키트를 설계하고 있습니다. 이 키트들은 분리 시간을 크게 단축하고 기존 원심분리기만 사용하면 되지만, 해리가 어려운 시료의 경우 시약을 조절할 수 없고, 시험 단계를 최적화하기도 어렵습니다. 더 나아가, LDs 추출은 지방간⁹, 암¹⁰, 신경퇴행성 질환¹¹과 같은 대사 질환의 기전을 밝히는 데 필수적인 역할을 하며, 병리학적 경로를 해독하는 다차원적 탐침 역할을 합니다. 단백질과 지질 조성은 LD를 추출하여 해부하여 LD의 생물학적 기능의 다양성을 밝혀낼 수 있습니다¹².

우유 지방의 형성은 단순히 기질이 분해되는 과정이 아닙니다; 오히려 유방 상피세포에 의해 수행되는 고도로 조율된 지질 합성과 포장 과정을 나타냅니다. ¹³. 낙농 소에서 우유 지방 생성은 이 세포들의 첨단 막 분비 메커니즘에 의존합니다: 소포체에서 합성된 트리글리세리드는 세포질 LD를 형성하고, 이 물질은 첨단막으로 운반되어 출아를 통해 분비됩니다. 이 과정에서 LD는 첨단 막에서 유래한 유지방 구덩이 막에 둘러싸여 구조적으로 안정적인 유지방 구덩이가 형성^됩니다. 소 유선은 포유류 수유 연구의 고전적 모델이며, LD 합성과 분비를 조절하는 핵심 메커니즘은 인간에서 매우 보존되어 있습니다¹⁵. BMECs와 유선 조직에서 LD를 추출하는 방법을 확립하는 것은 가축 생산과 인간 건강을 연결하는 역할을 합니다. 추출한 LDs의 단백질체학 및 지질세포 분석은 이후 우유 생산량과 품질을 개선하는 데 활용되어 안전성과 보안을 보장할 수 있습니다.

본 방법은 LD의 저밀도 특성에 주로 기반하며, 이로 인해 원심분리¹⁶번 과정에서 구배의 상단으로 떠오르게 됩니다. 추출 절차는 세 가지 주요 단계로 구성됩니다: 샘플 수집, LD 부상을 위한 초원심분리, 그리고 LD 세척. LD를 보호하기 위해 2.5 M의 자당을 버퍼에 첨가하고, 원심분리 속도는 실험 요구사항에 따라 조정됩니다; 일반적으로 큰 LD는 10,000 x g 이하의 힘으로 농축할 수 있으며, 10,000 x g 이상의 속도로 작은 LD를 추출하는 데 사용됩니다. 이 조건에서는 더 큰 LD가 파열될 수 있기 때문입니다. 마지막으로, 추출된 LD는 오염을 방지하기 위해 여러 차례 세척을 거치며, 추출 순도는 BODIPY493/503 염색을 통해 예비 평가됩니다.

기존의 LD 분리 방법은 주로 이질적인 LD 집단의 대량 회수를 달성하여 크기에 따른 구조 및 기능적 차이 분석을 제한합니다. 본 프로토콜은 순차적 차등 원심분리를 통해 LD 아집단의 크기 기반 농축을 가능하게 하여 표준 접근법을 확장하여, LD 성장, 교체, 세포 내 운송, 그리고 지방 매개 또는 자가포식 경로에 의한 차별 이용에 대한 연구를 용이하게 합니다. 이 접근법은 절대 정제보다는 농축을 달성하며, 연속적인 크기 분포와 공통된 물리적 특성으로 인해 크기 분획 간 부분적 중복이 발생할 수 있습니다.

프로토콜

농축을 위한 목표 지질 방울 크기를 결정합니다(그림 1).

1. 시약 설정

1. PBS: 무게 8 g NaCl, 0.2 g KCl, 3.58g Na₂HPO₄·12H₂O, 0.24g KH₂PO₄를 800mL ddH₂O에 넣습니다. HCl로 pH를 7.4로 조절하고, 충분히 섞은 후 부피를 1L로 만듭니다. 오토클레이핑 후 최대 1년간 4°C에서 보관합니다.
2. 자당(2.5 M): 자당 856g을 400 mL의 ddH₂O에 녹입니다. 자당이 완전히 녹을 때까지 충분히 저어준 후 부피를 1L로 조절합니다. 용액을 오토클레이브하여 4 °C에서 최대 3개월간 보관합니다.
3. 버퍼 A: 트리신 1.79 g을 무게로 400 mL ddH₂O에 녹입니다. KOH로 pH를 7.8로 조절합니다. pH 조절 후에는 미리 준비된 2.5M 자당 용액 50mL를 추가합니다. 충분히 섞고 부피를 500mL로 조절하세요. 오토클레이빙 후에는 버퍼를 최대 3개월간 4°C에서 보관할 수 있습니다.
4. 버퍼 B: 무게 0.95 g HEPES, 1.49 g KCl, 0.038 g MgCl₂·6H₂O를 180 mL ddH₂O에 각각 넣습니다. KOH로 pH를 7.4로 조절하고 충분히 혼합한 후 부피를 200 mL로 만듭니다. 오토클레이빙 후에는 최대 3개월간 4°C에서 보관하세요.
5. PMSF (1,000x, 0.2 M): PMSF 0.175 g의 무게를 5 mL의 DMSO에 녹입니다. 빛으로부터 보호하여 -20°C에서 최대 1년간 보관하세요.
   참고: PMSF는 매우 독성이 강합니다; 적절한 보호 조치가 필요합니다. 준비 과정 중에는 빛으로부터 완전한 보호를 보장하고; PMSF는 용해가 어려워 1.5 mL 마이크로 원심분리기 튜브에 분할 추출할 수 있습니다.

2. 세포에서 LDs 추출

1. BMEC의 문화
   1. -80 °C 냉장고에서 냉동 BMEC 세포 5개 튜브를 꺼내 37°C 수조에서 빠르게 해동하세요. 완전히 해동된 후 튜브를 250 x g 에서 4분 30초간 원심분리합니다.
   2. 피펫터로 냉동 보존 배지를 버리고, 10% FBS 1mL를 넣어 세포를 재현탁한 후, 세포를 혼합하여 100mm 세포 배양 접시에 부드럽게 넣습니다. 접시를 부드럽게 흔들어 세포 분포를 고르게 하고, 37°C에서 5% CO₂로 배양하세요.
   3. 세포 형태를 현미경으로 관찰하고, 세포가 80%–90% 융합에 도달하면 서브컬레이션을 수행합니다.
      참고: LD 추출 전에 최적의 셀 상태와 충분한 셀 수를 확보하여 수율과 재현성을 개선하세요.
   4. 피펫으로 페트리 접시에 원래 배양지를 버리고, 각 접시 벽을 따라 1mL PBS를 첨가하세요. 두 번 세척한 후 각 접시에 1mL 트립신을 추가하고 37°C에서 3분 30초간 배양합니다.
   5. 세포가 현미경으로 완전히 소화되었는지 관찰하고, 소화가 끝난 후 10% FBS 1mL를 추가하여 소화를 종료합니다. 피펫팅으로 세포를 부드럽게 재현탁한 후 2mL 마이크로 원심분리관으로 옮긴 후 250 x g 에서 4분 30초 원심분리합니다.
   6. 상정액을 버리고 1.2단계에서 설명한 절차를 반복합니다.
   7. 약 30개의 배양 접시나 더 큰 배양 용기를 사용하여 세포를 확장하거나, 세포 배양에는 더 큰 배양 접시를 사용합니다. 추출 전날 밤에 150 μmol/L t10,c12-CLA(DMEM에 희석됨)를 첨가하여 세포를 처리합니다. 100mm 배양 접시당 7mL의 배양지를 사용하세요. 배양 시간은 분리해야 할 LD의 크기에 따라 달라집니다.
      참고: 사전 최적화에 따라, BMEC는 t10,c12-CLA로 6시간 동안 치료하여 큰 LD를 풍부하게 하거나, 12–24시간 동안 작은 LD를 풍부하게 합니다. 세포에는 LD가 적기 때문에, 외래 지방산이 LD 축적을 유도하는 경우가 많습니다. 본 연구에서는 배양된 세포에 t10,c12-CLA를 첨가하여 LDs 축적을 유도합니다.
2. 샘플 채취
   1. 원래 배지를 버리고 얼음 차가운 PBS 1mL를 넣은 후 3번 세척하세요. 최종 세척 중에 PBS를 버리지 마세요. 예를 들어, 100mm 셀 30개의 접시를 사용하면, 10개의 플레이트마다 세포를 15mL 원심분리관 하나에 모으면, 각 튜브는 약 1x108인치로 구성되어 총 3개의 원심분리관이 됩니다.
      참고: 추출 과정 내내 모든 샘플을 ≤4 °C로 유지하여 LD의 단백질 분해를 방지하세요.
   2. 균형을 맞춘 후, 1,000 x g, 4 °C에서 10분간 원심분리기를 합니다.
   3. PBS는 버리세요. 원심분리관에 미리 준비된 버퍼 A 10 mL와 PMSF 10 μL (1,000x, 0.2 M)를 추가합니다. 충분히 섞은 후 얼음 위에서 20분간 부화시킵니다.
3. 세포 용해와 초기 분획
   1. 프로브형 초음파 균질기를 사용한 파란트 셀은 5초 켜짐과 10초 오프의 펄스 사이클로 작동하여, 총 30분 동안 총 유효 초음파 시간은 10분에 달했습니다. 3mm 직경 프로브를 사용해 기기를 40% 출력(약 76 μm의 프로브 진폭에 해당)으로 설정합니다.
      참고: 과열을 방지하기 위해 시술 내내 샘플을 얼음에 보관하세요.
   2. 균질체를 3,000 x g , 4 °C에서 10분간 원심분리하여 핵과 세포 이물질을 제거합니다. 상청액을 핵 후 상청액(PNS)으로 채취합니다.
4. 떠다니는 LD의 초원심분리
   1. 상청액을 100 μm 셀 체에 걸러냅니다.
   2. 10mL의 PNS를 15mL 원심분리관에 피펫팅합니다. 자당 2mL(2.5 M)와 버퍼 B 2mL를 순차적으로 PNS 상단에 첨가합니다(자당 부피는 적절히 줄이면서 LD 순도를 높이기 위해 버퍼 B 부피를 증가시킬 수 있습니다). 그리고 처음으로 원심분리기(5,000 x g, 4 °C, 20분)를 사용합니다.
   3. 원심분리 후에는 튜브 상단에 우유빛 크림 같은 LD 층을 모으세요. LD를 수집하려면, 먼저 1.5mL 마이크로 원심분리관에 100 μL 버퍼 B를 추가한 후, 20 μL 피펫을 사용해 떠 있는 LD 층을 여러 번 부드럽게 흡입하여 가능한 많은 LD를 수집합니다.
      참고: LD는 상단에 떠 있는 크림층을 형성합니다; 오염을 막기 위해 기저 용액의 흡입을 최대한 피하세요.
   4. 두 번째 원심분리(10,000 x g, 4 °C, 30분)를 수행하여 LD를 수집합니다.
   5. 용액을 스윙 버킷 로터와 호환되는 초원심분리관으로 옮기고, 캡을 씌운 뒤 튜브 밸런스를 맞춥니다. 초원심분리기(50,000 x g, 4 °C, 40분)에서 세 번째 원심분리를 수행하여 LD를 수집합니다.
      참고: 안전한 초심분리기 작동을 위해 튜브(0.0001g)를 정밀하게 균형 맞추세요.
   6. 균형을 맞춘 후에는 네 번째 원심분리(150,000 x g, 4 °C, 50분)를 수행하여 LD를 계속 수집합니다. 목표 LD 크기에 따라 속도와 지속 시간을 최적화하세요.
      참고: 장시간 또는 반복적인 고속 원심분리는 LD를 방해할 수 있습니다. 반면, 세척 중 10,000 x g 의 단기 원심분리는 주로 불순물을 제거하며 LD 무결성에 미치는 영향은 최소화됩니다. 이 방법은 적응 가능하며; 다양한 세포 유형이나 조직에 따라 최적화가 필요할 수 있습니다.
5. LD 세척
   1. 수집한 LD를 차가운 버퍼 B에 재현탁한 후 10,000 x g , 4 °C에서 5분간 원심분리합니다.
   2. 상정액을 조심스럽게 제거한 후 같은 완충 부피, 원심력, 원심분리 시간을 사용하여 세척 과정을 최소 네 번 반복하세요. 작은 거리 분리의 경우, 효율적인 분리를 위해 원심력을 필요에 따라 증가시킵니다.
   3. 최종 세척 후에는 LD 분획을 모아 부드럽게 혼합한 후 −80 °C에서 보관합니다.
      참고: 일부 자각몽 손실이 불가피하더라도 세척 단계를 생략하지 마세요. 보이는 막 이물질이 남지 않을 때까지 세척을 계속하세요.

3. 조직에서 LDs 추출

1. 샘플 채취
   1. 액체 질소에서 소 유선조직 샘플을 채취하세요. 조직 5g을 무게로 재고 얼음 위에 녹여서 얼음 결정이 없을 때까지 해동하세요.
   2. PBS나 생리식염수로 조직을 씻어내세요.
   3. 수술용 가위로 조직을 1-2mm 크기로 잘게 썰어주세요.
   4. 다진 조직을 12mL 완충제와 10μL PMSF(1,000x, 0.2 M)가 포함된 미리 냉각된 모르타르에 옮깁니다. 혼합물을 얼음에 약 10분간 갈아줍니다.
   5. 균질체를 얼음 위에 20분간 배양하세요.
   6. 철저히 분쇄한 후, 균질물을 15mL 원심분리관에 수집합니다.
   7. 원심분리기는 2,500 x g, 4 °C에서 10분간 가열합니다. 결과적으로 생성된 상청액은 PNS입니다.
2. 떠다니는 LD의 초원심분리
   1. 상청액을 100 μm 셀 체에 걸러냅니다.
   2. 10mL의 PNS를 15mL 원심분리관에 피펫팅합니다. 2 mL 자당과 2 mL 버퍼 B를 순차적으로 첨가합니다. 첫 번째 원심분리(4,000 x g, 4 °C, 20분)를 수행합니다. 우유 같고 크림 같은 물질을 모으세요.
   3. 두 번째 원심분리(7,000 x g, 4 °C, 30분)를 수행하고 LD를 수집합니다.
   4. 세 번째 원심분리(10,000 x g, 4 °C, 40분)를 수행하고 LD를 수집합니다.
   5. 상청액을 SW40 튜브로 옮기고 초원심분리(50,000 x g, 4 °C, 50분)를 수행합니다. 자명몽을 수집하세요.
   6. 5번째 원심분리(100,000 x g, 4 °C, 60분)를 수행합니다. 자명몽을 수집하세요.
3. LD 세척
   세포 추출 LD에 대한 세척 방법을 참고하세요.

4. 염색을 통한 LD 순도의 예비 검증

1. 광 보호 조건(BODIPY: 버퍼 B = 1:100, V/V) 하에 10 μg/mL 중성 지질 형광 염료 용액을 미리 준비합니다.
2. 적당량의 혼합 LD와 버퍼 B를 마이크로 원심분리관에 추가하세요. 빛이 차단된 조건에서는 적절한 양의 중성 지질 형광 염료를 첨가하세요. 충분히 섞고 10분간 배양하세요.
3. 깨끗한 현미경 슬라이드를 준비하세요. 혼합물 2.5 μL을 커버슬립에 분배합니다. 슬라이드를 혼합물 위에 부드럽게 올려 공기 방울을 피하세요. 역형광현미경 아래에서 관찰하세요.

5. 서부 블롯을 통한 LD 순도 검증

1. LD 분획의 단백질 농도는 BCA 단백질 분석 키트를 사용해 측정하였습니다.
2. 웨스턴 블롯 분석을 위해 각 샘플에서 단백질 20 μg를 5개의 SDS 로딩 버퍼와 혼합하고 99 °C에서 10분간 가열하여 완전한 변성을 보장합니다.
3. 그 후 분자량에 따라 10% 구배 폴리아크릴아마이드 겔에서 SDS–PAGE로 단백질을 분리합니다.
4. 전기영동 후에는 단백질을 사전 활성화된 PVDF 막에 옮기고, 5% BSA로 실온에서 1.5시간 동안 차단합니다. 그 후 4°C에서 1차 항체(토끼 항페리리핀 2(1:500)와 토끼 항β액틴(1:5000)을 포함한 1차 항체와 함께 막을 하룻밤 배양합니다.
5. 막을 1x TBST로 세 번 각각 10분씩 세척한 후, HRP 결합된 염소 항토끼 2차 항체(1:5000)와 함께 실온에서 1.5시간 배양합니다.
6. TBST로 세 차례 추가 세척 후 증강 화학발광(ECL) 키트를 사용해 단백질 밴드를 검출하고 젤 영상 시스템으로 시각화합니다.

6. 일시정지 지점과 보관 지침

1. 초원심분리 전 최대 1–2시간 동안 PNS를 얼음 위에 보관하세요.
2. 모은 LD를 세척 전에 최대 1–2시간 얼음 위에 보관하세요. 단기 보관을 위해서는 LD를 최대 24시간 동안 4°C에서 보관하세요. 장기 보관의 경우, LD는 −80°C에 보관하고, LD의 무결성을 유지하기 위해 동결-해동 사이클을 한 번으로 제한하세요.
3. 모든 실험 중단 중에는 샘플을 얼음 위에 보관하고 튜브 캡을 닫아 오염을 최소화하세요.

7. 문제 해결

1. 얇은 부유층: 완충 부피 또는 원심분리력을 조절하세요.
2. 부력 저하: 원심분리 속도를 높이거나 시간을 연장하세요.
3. 오염: 멸균된 취급과 필터링된 완충 장치를 반드시 확인하세요.
4. LD 파열: 샘플을 얼음 위에 보관하거나, 원심분리력을 줄이거나, 부드럽게 재현탁하세요.

결과

워크플로우 및 방법론적 틀
실험 목표에 따라 원심분리 조건 선택을 안내하기 위해 의사결정 트리 도식(그림 1)이 설정되었습니다. 구체적으로, 큰 LD(≥2 μm)를 농축할 때는 원심력≤10,000 x g )을, 작은 LD(<1 μm)를 농축할 때는 원심력>10,000 x g )을 가했습니다. 이 프레임워크는 크기 기반 LD 분리를 달성하는 실질적인 기반을 제공합니다. BMECs와 유선 조직으로부터 LD 분리의 전체 작업 흐름은 그림 2에 나와 있습니다. 샘플 기원의 차이에도 불구하고, 이 절차는 샘플 준비, 교란, 순차 원심분리를 포함한 표준화된 순서를 따르기 때문에 샘플 유형 간에 일관된 처리 및 비교가 가능합니다.

지질 방울 분리...

토론

LD는 인지질 단일층으로 둘러싸인 중성 지질 핵이 특징인 독특한 소기관입니다. 이들은 소포체에서 발아하여 크기와 수를 동적으로 변화시키며, 세포 내 수송과 다른 세포 내 구조와의 광범위한 소통을 용이하게 하여 세포 지질 항상성을 조정합니다 17,18,19. 이 동적 행동은 전신 대사 신호에 의해 추가로 조절되는데, 인슐린은 포도당-지질 대사 교차를 조율하여 LD 교체와 세포 에너지 균형에 영향을 미치는 것으로 나타났습니다²⁰. LD는 단순 박테리아부터 복잡한 고등 식물과 동물에 이르기까지 다양한 생물체에서 주요 에너지 저장 구획으로 기능하며, 다양한 생물에 걸쳐 존재합니다 ^1,21

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.25% 트립신-EDTA	깁코	25200072	시약
10% PAGE 젤 신속 준비 키트	베이징 바이오맨	PG112	시약
100 & mu; M 세포 체감기	비요타임	FSTR100	시약
100mm 세포 배양 접시	코닝	490167	시약
아머샴 이미저 600	GE 헬스케어 생명과학	600	장비
오토클레이브	파나소닉	MLS-3751L	장비
BCA 단백질 분석 키트	베이징 딩궈.	BCA01	시약
보디피 493/503	인비트로젠	D3922	시약
원심분리기	에펜도르프		장비
DMEM	하이클론	SH30022.01	시약
DMSO	솔라비오	D8370	시약
태아 소 혈청	깁코	2492319	시약
젠장	메드켐익스프레스	HY-D0857	시약
HRP 결합 염소 염소 항 2차 항체	단백질 기술	SA00001-2	시약
KCl	허시	20030666	시약
KH2PO4	허시	10017608	시약
MgCl2	허시	20059028	시약
Na2HPO4middot; 12H2O	허시	S112623	시약
나클	허시	10019328	시약
옴니-이지 즉각적인 단백질 로딩 버퍼	상하이 에피자임 생의학기술	LT101S	시약
옴니-ECL 초민감 화학발광 탐지 키트	상하이 에피자임 생의학기술	SQ201	시약
PBS	하이클론	SH30256.01	시약
페니실린 & 스트렙토마이신 100번,	NCM 바이오텍	클루크5	시약
pH 측정기	메틀러 톨레도	S220K	장비
피펫	에펜도르프		장비
PMSF	쿨라버	CP8651	시약
PVDF 멤브레인 전송 키트	젠스크립트	eBlot L1	시약
래빗 항페릴리핀 2	앱캠	15294-1-AP	시약
래빗 안티-&베타;-액틴	단백질 기술	20536-1-AP	시약
연구용 등급 역형광 현미경	올림포스	IX73	장비
자당	솔라비오	S8271	시약
SW 40 Ti 로터	벡먼 쿨터	331301	장비
트랜스-10, 시스-12 공액 리놀레산	카이맨	90145	시약
트라이신	쿨라버	CT11331	시약
초원심분리기	벡먼 쿨터	옵티마 XE-100	장비
초음파 세포 분쇄기	시엔츠	JY92-11N	장비