이 연구는 후두암에서 HMGA1 수치가 증가하고 HAND1 발현이 감소하는 것을 발견하여, 전이와 임상 단계와 역상관계가 있음을 나타내어 두 가지 모두 종양 진행에 기여함을 시사합니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 연구는 후두암에서 HMGA1 수치가 증가하고 HAND1 발현이 감소하는 것을 발견하여, 전이와 임상 단계와 역상관계가 있음을 나타내어 두 가지 모두 종양 진행에 기여함을 시사합니다.
본 연구는 면역조직화학 및 RT-PCR 방법론을 적용하여 후두 편평세포암(LSCC) 및 인접한 정상 후두 점막 조직에서 HMGA1 및 HAND1 유전자의 발현 프로필을 조사하였습니다. 목표는 이들이 LSCC의 시작, 진행, 침습 및 전이에 어떤 역할을 하는지 조사하는 것이었습니다. HMGA1과 HAND1 모두 암 및 인접 정상 조직에서 검출되었습니다. 그럼에도 불구하고 HMGA1은 LSCC 조직에서 유의미하게 높은 발현을 보인 반면, HAND1은 현저히 낮은 발현 수준을 보였다. HMGA1 발현 상승은 림프절 전이(100.0% 대 50.0%)와 진행된 임상 단계(91.7% 대 44.4%)와 양의 연관이 있었으나, 종양 조직학적 등급, 임상 유형, 환자 연령과는 연관이 없었습니다. 반면, HAND1 단백질 발현 감소는 림프절 전이, 임상 단계, 병리학적 등급과 연관되어 종양 진행 및 전이에 관여함을 시사하였다. 또한 HMGA1과 HAND1 발현 사이에 선형 음상관관계가 관찰되어 HMGA1이 HAND1 발현을 억제할 수 있는 잠재적 조절 상호작용이 있음을 시사하였다. 이 결과는 HMGA1과 HAND1이 LSCC 발병 기전에서 상호보보적인 기능을 가지며, HMGA1은 종양 발달을 촉진하고 HAND1은 억제자 역할을 할 수 있음을 시사합니다. 이 두 유전자 간의 상호작용은 LSCC 진행과 전이를 촉진하는 분자 메커니즘에 대한 새로운 관점을 제공할 수 있습니다.
후두암은 비인두암에 이어 두경부에서 두 번째로 흔한 원발성 악성 종양으로, 전 세계 두경부 종양의 26%–30%를 차지합니다. 후두암의 90% 이상이 후두편평세포암(LSCC)으로 분류됩니다. 후두암의 주요 치료법은 수술과 방사선 치료입니다. 국소 재발과 림프절 전이는 후두암 환자의 주요 사망 원인입니다. 따라서 재발과 전이의 효과적인 관리는 여전히 주요 임상적 과제로 남아 있습니다. 분자생물학의 발전과 함께 후두암에서 비정상적으로 발현되는 다양한 유전자가 확인되었습니다. 그러나 후두암에서 종양 침습과 전이의 기전은 명확하지 않으며, 추가 연구가 필요한 분야로 남아 있습니다.
고이동성 그룹 A(HMGA) 단백질은 세포핵에 위치한 비히스톤 염색질 결합 단백질입니다. HMGA1은 DNA와 관련 단백질에 결합하여 유전자 전사를 조절하는 염색질 구조 변화를 유도합니다. 염색질과 관련된 전사 조절자로서 HMGA1은 증식과 전이에 관여하는 여러 종양 관련 유전자의 발현을 조절합니다. 이전 연구들은 HMGA1이 갑상선암, 대장암, 췌장암, 두경부 악성 종양 4,5,6,7 등 다양한 인간 암에서 과발현된다는 것을 보여주었으며, 문헌에 보고된 기타 상피 및 고형 종양도 포함합니다. HMGA1은 증식 및 전이에 관여하는 여러 하위 표적 유전자의 발현을 조절하여 종양 발생을 조절합니다8.
심장 및 신경 볏 발현 유전자(HAND) 유전자는 HAND1과 HAND2를 포함한 bHLH(기본 나선-루프-나선) 계열의 일원입니다. HAND1은 전사 인자로서 영양층 분화와심장 발달에 관여합니다. 그러나 배아외 세포층에서 HAND1의 발현 기전은 여전히 명확하지 않습니다. HMGA1이 HAND1 프로모터에 직접 결합하여 생체 내와 시험관 내에서 HAND1 활성을 억제하는 것으로 확인되었습니다. HAND1은 억제 단백질로서 세포 분화와 암 형성 조절에 관여하는 것으로 알려져 있습니다. 연구에 따르면 HAND1의 발현은 인간 위암11, 췌장암12, 난소암13, 갑상선암14에서 침묵 및 과메틸화됩니다. 그러나 우리가 아는 한, 후두암 조직에서 HAND1 발현을 조사한 연구는 제한적입니다.
본 연구에서는 면역조직화학(2단계 검출법)과 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)을 사용하여 LSCC 및 인접한 정상 점막 조직에서 HMGA1 및 HAND1 단백질 및 mRNA의 발현을 검출하였습니다. 면역조직화학은 조직 구조 내 단백질 위치를 시각화할 수 있게 하며, RT-PCR은 전사 수준에서 유전자 발현을 민감하게 감지하여 단백질과 mRNA 발현 패턴에 대한 상호 보완적 통찰을 제공합니다. 더 높은 감도와 정밀한 정량을 제공하는 정량적 PCR(qPCR), 단백질 수준 검증을 가능하게 하지만 공간적 맥락이 부족한 웨스턴 블롯팅, 그리고 첨단 계산 분석이 필요한 포괄적인 전사체 프로파일링을 제공하는 RNA 시퀀싱(RNA-seq)과 비교할 때, 면역조직화학과 RT-PCR의 결합은 비용 효율적이고 임상적으로 적용 가능한 바이오마커 연구 전략을 제시합니다. 이 연구는 LSCC 발생, 발달, 진행 및 전이에서 이 두 요인의 역할과 상관관계를 탐구하는 것을 목표로 했습니다. 더 나아가, HMGA1과 HAND1 발현을 평가하는 것은 후두암의 진단 및 예후 평가를 위한 바이오마커를 제공하여 위험 계층화를 개선하고 임상 의사결정에 도움을 줄 수 있습니다.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
이 연구는 스자좡 인민병원 연구 윤리 위원회(승인 번호)의 검토 및 승인을 받았습니다. YKLS 2026 번호 041; 2026년 3월 27일). 이 연구는 인간 대상 생의학 연구 윤리 심사 규정, 생명과학 및 인간 대상 의학 연구 윤리 검토 규정, 헬싱키 선언, 그리고 인간 관련 건강 연구 국제 윤리 지침에 따라 수행되었습니다. 기관의 윤리 요건을 준수하여 보관된 외과 표본에서 인간 조직 샘플을 채취하여 환자 데이터의 익명성과 기밀성을 보장했습니다. 참여자들로부터 서면 동의를 받거나, 익명화된 보관된 표본 사용에 대해 윤리 위원회가 동의 포기를 부여했습니다.
실험 재료
표본 출처
2011년 2월부터 2012년 8월까지 허베이성 이비인후과-두경부외과에서 외과적 절제 시료를 통해 LSCC 조직 42건과 인접한 정상 후두 점막 조직 25건이 채취되었습니다. 이 중 25건의 인접 정상 점막(암 가장자리에서 1.0cm 떨어진 >부위에서 채취)이 염증성 또는 정상 점막으로 병리학적으로 확인되었습니다. 42개의 LSCC 표본은 모두 편평세포암으로 병리학적으로 확인되었습니다. 모든 조직은 -80°C에서 보관되었습니다. 42명의 환자는 남성이었고 여성 환자는 없었다. LSCC 사례 중 15명은 명확분별, 18명은 중등도 분별, 9명은 저분화되었습니다. 18건은 림프절 전이가 있었고, 24건은 그렇지 않았다. 임상 병기는 TNM 분류 및 병기 체계(UICC, 2002)를 기반으로 하였으며, 1기 및 2기 20명, III 및 IV기 22명이 포함되었습니다. 문상형 30건, 성문형 11건, 아성문형 1건이 있었습니다. 환자의 연령대는 40세에서 75세였으며, 중위 연령은 60세였습니다. 수술 전 방사선 치료나 화학요법을 받은 환자는 없었으며, 임상 데이터는 완전했습니다.
실험 방법과 단계
HE 염색 절차
슬라이드 준비 및 헤마톡실린-이오신 염색
면역조직화학용 유리 슬라이드는 먼저 농산에 24시간 담갔고, 이어서 잔류 산을 제거하기 위해 최소 10분간 수돗물로 철저히 세척한 뒤, 증류수에 두 번 30분간 담그면서 부드러운 저어주어 완전한 헹구기를 했습니다. 슬라이드는 95% 에탄올에 2시간 동안 담갔다가 60 °C 오븐에서 건조한 후 APES: 아세톤(1:49, v/v) 혼합물에 1분간 담그고 부드러운 흔들며 균일한 코팅을 한 뒤, 순수 아세톤으로 헹구었습니다. 마지막으로, 이들은 이후 염색 시 조직 접착을 위해 실온(20–25 °C)에서 자연 건조되었습니다.
파라핀 박입 조직 절편은 각각 10분간 자일렌 I과 자일렌 II에 순차적으로 담가 파라핀을 제거했고, 이후 등급 에탄올(100%, 95%, 80%)으로 각각 5-10분간 재수화한 후 증류수에서 2분간 세척했습니다. 절편들은 다음과 같이 헤마톡실린-에오신(HE) 염색을 받았다: 헤마톡실린 4분 염색, 흐르는 수돗물에서 3분간 연속 세척으로 과잉 염색을 제거, 1% 염산을 에탄올에 30초간 분별, 분화 종료를 위해 수돗물로 세 번 세척, 그리고 10초간 에오신 염색. 일상적인 단계별 탈수는 70% 에탄올, 80% 에탄올, 95% 에탄올, 무수 에탄올 I, 무수 에탄올 II를 각각 5분씩 차례로 사용하여 순차적으로 수행되었습니다. 건조 후에는 중성 발삼으로 슬라이드를 장착했습니다.
면역조직화학 절차
두께 4μm의 파라핀 조각을 잘라내어 APES 코팅된 슬라이드 위에 평평하게 놓은 뒤, 67°C 오븐에 하룻밤 동안 넣은 뒤, 각각 10분씩 자일렌 I과 II로 탈파라핀화를 했습니다. 점진적으로 100%, 90%, 70% 알코올을 각각 5분씩 사용한 후, 수돗물과 증류수로 3분간 세척했습니다. 내인성 과산화효소 활성을 차단하기 위해, 슬라이드는 갓 준비된 3% 메탄올-과산화수소 용액과 함께 배양하여, 조직 절편을 20분간 완전히 덮은 후, 0.01 M PBS에서 증류수로 5분간 세 번 세척했습니다.
항원 회취는 시트레이트 버퍼(pH 6.0)에 슬라이드를 담근 후, 압력솥에서 압력솥에서 약 95–100 °C에서 8분, HAND1은 10분간 가열하여 뚜껑을 단단히 닫아 일정한 압력 상태를 유지하였습니다. 이후 이 조각들은 실온(20–25 °C)에서 냉각되고, 0.01 M PBS에서 각각 3분간 부드러운 교반 하에 세 차례 세척되었다. HMGA1과 HAND1에 대한 1차 항체는 각각 1:150 및 1:100 비율의 항체 희석제에 희석되어 피펫팅으로 부드럽게 혼합한 후 각 조직 단면을 고르게 덮었습니다. 슬라이드는 4°C에서 가습실에서 밤새 배양되었습니다. 하룻밤 배양 후, 슬라이드는 가습 챔버에서 꺼내 10분간 실온에 맞춰 평형을 맞췄다. 슬라이드는 0.01 M PBS(세척당 5분)로 세 차례 세척하여 결합되지 않은 항체를 제거하였습니다. 과잉 액체를 제거하고, 2차 항체(HRP 표지된 폴리머 항토끼/마우스)를 추가하여 조직 절편 표면을 완전히 덮었습니다. 추가 37°C에서 35분간 배양이 이루어졌다.
DAB 기판 용액을 방울 방향으로 조직을 덮었고, 현미경으로 1–3분간 색 현상을 관찰하다가 갈색 염색이 나타나 최적의 염색 강도가 달성되면 증류수로 헹구어 즉시 멈추게 했습니다. 헤마톡실린 재염색, 염산 알코올 분별, 청색 역전을 위한 암모니아 용액 사용이 수행되었습니다. 이후 일상적인 단계별 알코올 탈수, 자일렌 투명도, 현미경 관찰을 위한 중성 발삼 부착이 이어졌습니다. PBS는 1차 항체 대신 빈 대조군으로 사용되었습니다. 또한, 이전에 확인된 HMGA1 양성 두경부 편평암 조직 절편과 HAND1 양성 태반 조직 절편을 양성 대조군으로 사용하여 염색의 질과 일관성을 보장하였습니다.
결과 결정
이 실험에서 사용된 염색제는 DAB-H2O2 시스템입니다. 헤마톡실린 재염색 후에는 주로 세포핵에서 HMGA1과 HAND1 양성 염색이 관찰되며, 일부 세포질 염색도 관찰됩니다. 평가를 위해 저배율(×40)에서 양성 염색 세포 밀도가 가장 높은 영역을 확인하였습니다. ×100 배율 하에서 양의 셀 밀도가 가장 높은 5개 필드가 선택되었고, 각 필드마다 100개의 셀이 집계되었습니다. 각 슬라이드의 결과로 다섯 필드의 양수 셀 비율 평균이 사용됩니다. 평가 기준은 다음과 같았습니다: 염색 세포 없음(-), 양성 세포 <25%(+), 양성 세포 25%–50%(++), 양성 세포 > 50%(+++)로, 면역조직화학 분석에서 일반적으로 사용되는 반정량적 백분율 점수 체계에 기반했습니다. 평가는 두 명의 자격을 갖춘 병리학자가 독립적으로 이중맹검 방식으로 수행하였으며,15, 16, 17. 의견이 다르면 논의하고 결론에 도달해야합니다.
RT-PCR 방법
프라이머
프라이머는 표적 유전자 서열을 기반으로 한 프라이머 설계 소프트웨어를 사용하여 프라이머 특이성, 용융점 적합성, 예상 생성물 크기에 주의를 기울여 설계되었습니다. 상세한 프라이머 서열, 생성물 크기 및 어닐링 온도는 표 1에 요약되어 있습니다. 프라이머는 2 OD 농도로 합성되어 두 개의 튜브로 나누어 DEPC 처리수로 10 pmol/μL로 희석하여 -20 °C에서 저장했습니다. 어닐링 온도는 다음과 같은 공식으로 계산되었습니다: Tm= 2(A + T) + 4(G + C)
실험 재료 및 장비의 RNase 처리:
플라스틱 품목(예: 피펫 팁, EP 튜브): 플라스틱 품목은 멸균된 와이드마우스 시약 병에 넣고, DEPC 처리된 물을 첨가하여 물품이 완전히 잠기게 한 후, 실온(20–25°C)의 훈기 후드에서 하룻밤 배양했습니다. 그 후 120분 동안 압력 소독한 후 65°C에서 건조되었습니다.
유리 제품: 유리 제품은 하룻밤 동안 산성에 담갔다가 깨끗하게 헹구고, 건조한 뒤 알루미늄 호일로 감싼 후 200°C 오븐에서 6시간 동안 구워 깨끗한 곳에 보관했다.
금속 제품(예: 가위, 핀셋): 금속 제품은 세척되어 200°C 오븐에서 6시간 동안 구운 후 미래를 위해 깨끗한 장소에 보관되었습니다.
해의 준비
0.1% (v/v) DEPC 용액: 1 mL DEPC를 1000 mL 증류수에 첨가하여 최종 농도는 0.1%(v/v)로 만들고, 잘 흔들어 4 °C에서 하룻밤 배양한 후 오토클레이빙으로 멸균한 후 4 °C에서 보관했습니다.
75% (v/v) 에탄올 용액: 75 mL 절대 에탄올을 25 mL DEPC 처리수와 혼합하여 최종 농도는 75%(v/v)로 만들었으며, 4 °C에서 저장되었습니다.
조직에서 총 RNA 추출
RNA 추출 후, 역전사와 후속 분석을 위해 RNA 무결성을 평가하였습니다. 80mg의 조직을 전자 저울로 무게를 재고 작은 조각으로 잘라 사전 처리된 유리 균질기에 넣었습니다. 4 °C에 1mL 미리 냉각된 RNA 추출 시약을 첨가하고, 샘플을 얼음 위에 반복 분쇄하여 조직 조각이 보이지 않는 균일한 용해액을 얻을 때까지 균질화하여 기포 형성을 방지했습니다. 균질화된 혼합물을 1.5mL RNase 없는 EP 튜브로 옮겨 얼음 위에서 5분간 배큐했습니다. 각 튜브에 400 μL 클로로포름을 첨가하고, 10–15초간 강하게 소용돌이 돌려 완전한 상 혼합을 보장한 후 5분간 얼음에서 배양했습니다. 튜브들은 4°C, 12,000 x g 에서 15분간 원심분리되었습니다. 원심분리 후, 상부 수상은 RNase 없는 피펫으로 신중하게 흡인하여 간기층을 교란하지 않고 새로운 튜브로 삽입했습니다. 같은 부피의 이소프로판올을 추가하고, 튜브를 부드럽게 8-10번 뒤집어 층이 사라질 때까지 혼합한 뒤, -20°C에서 최소 10분간 배양했습니다. 혼합물은 4°C, 12,000 x g 에서 10분간 원심분리되었다. 상원액층은 버려지고, 75% 얼음 냉각 에탄올 400 μL을 추가하여 RNA 펠릿을 현탁시켰습니다. 혼합물은 다시 4°C, 12,000 x g 에서 5분간 원심분리되었다. 상정액층은 제거되었고, RNA 펠릿은 약간 건조되었다. RNA 펠릿은 RNase 없는 물에 용해되어 -80 °C에 보관되어 미래 사용을 위해 사용되었습니다.
RNA 무결성 검출
RNA 무결성 검출을 위해 5 μL RNA 샘플과 5 μL 브로모페놀 블루 로딩 버퍼를 혼합하고, 2% 아가로스 젤에서 전기영동을 수행하였습니다. 명백한 번짐 없이 명확한 28S, 18S, 5S 밴드가 보일 때 RNA 무결성은 허용 가능한 것으로 간주되었습니다.
cDNA 합성을 위한 역전사(RT)
6 μL RNA를 70 °C에서 10분간 예열한 후, 25 mM MgCl2 (4.0 μL), dNTP(2.0 μL), AMV(0.7 μL), 10× AMV 버퍼(2.0 μL), 올리고(dT)(1.0 μL), RNasin(0.5 μL), 탈이온수를 순차적으로 얼음 위에 첨가하여 최종 반응량 20 μL를 얻은 후, 부드러운 혼합과 짧은 원심분리가 이루어졌습니다. 반응 조건은 1분간 25°C, 60분당 42°C, 5분간 98°C였으며, 이후 4°C에서 무기한 보관되었다. 반응이 4 °C에 도달하면 산물을 PCR 기계에서 꺼내 다음 PCR 반응의 cDNA 템플릿으로 사용하고, 이후 사용을 위해 -20 °C에 보관했습니다.
PCR 증폭
각 PCR 반응에 대해 혼합물에는 cDNA 주형(1 μL), HMGA1, HAND1, GAPDH에 특이적인 전방 프라이머(1 μL), 표적 유전자 또는 GAPDH에 특이적인 역프라이머(1 μL), PCR 마스터 믹스(10 μL), DEPC 처리수(7 μL)가 포함되어 총 20 μL의 부피가 사용되었습니다. 각 표적 유전자(HMGA1, 각 반응은 해당 유전자 특이적 순방향 및 역방향 프라이머 쌍을 포함하고 있습니다.
총 반응 부피는 20 μL였습니다. 반응 성분을 부드럽게 혼합하고 5–10초간 저속으로 원심분리한 후, 튜브를 예열된 PCR 기계에 넣고 표 2의 반응 조건에 따라 증폭했습니다.
PCR 증폭 산물의 확인 및 분석
젤 준비
2g의 아가로스를 무게를 재고 삼각형 플라스크에 넣었다. 50× TAE 전기영동 완충제 2mL와 증류수 100mL(2% 아가로스 젤 준비)를 넣은 후, 전자레인지에서 간헐적으로 15–20초 간격으로 가열하여 아가로스가 완전히 용해될 때까지 가열했습니다. 약 55°C까지 냉각된 후 10μL EB 용액을 첨가하여 완전히 혼합했습니다. 젤은 실온(20–25 °C)에서 깨끗한 젤 트레이에 부어지고 증류수로 세척한 후 빗을 삽입해 샘플 웰을 만들었습니다. 젤 두께는 0.4cm였습니다. 트레이는 실온(20–25 °C)에서 평평한 표면에 30분간 올려 젤이 완전히 굳을 때까지 보관했습니다. 빗은 조심스럽게 제거되었다.
샘플 로딩
각 DNA 샘플 4 μL을 젤의 웰에 첨가하고, 가장 왼쪽 웰에 DNA 마커를 추가했습니다.
전기영동
적재된 젤 트레이는 TAE 전기영동 완충제로 채워진 전기영동 탱크에 넣어, 완충 수준이 젤 표면에서 약 1mm 위에 유지되도록 했습니다. 웰의 한쪽 끝은 음극에 있었는데(DNA가 양극 쪽으로 이동할 수 있도록 하기 위함), 전기영동 시스템은 전원 공급에 연결되어 약 45분 동안 120 V, 60 mA로 작동했으며, 이후 부하 완충기가 젤의 중간선을 넘어 이동한 후 전원이 차단되었습니다.
결과 관찰 및 영상
전기영동 후 겔을 신중히 제거한 후 UV 트랜스라이트 조명 기초 아래에서 결과를 관찰하고 DNA 마커와 비교하여 증폭된 조각의 분자량이 예상 위치에 나타나는지 확인했습니다. 젤 이미징 시스템을 사용해 이미지를 캡처하고 결과를 컴퓨터에 저장했습니다.
제어 설정
음성 대조군으로는 cDNA 대신 증류수가 사용되었습니다.
반정량적 분석
아가로스 겔 전기영동 결과는 겔 이미징 시스템을 사용해 분석하고 기록하였습니다. 이미지 분석 소프트웨어를 사용해 밴드의 밝기를 분석했습니다. 목표 유전자 증폭 밴드의 절대 통합 OD 값과 해당 내부 대조 유전자 증폭 밴드를 측정하였다. 결과는 목표 밴드의 절대 통합 OD 값과 해당 내부 제어 밴드의 절대 통합 OD 값의 비율로 표현되었습니다.
즉, 상대 발현 = 목표 유전자 OD 값 / 내부 대조 유전자 OD 값입니다.
통계 분석
모든 데이터는 엑셀로 정리되었고 통계 소프트웨어로 분석되었습니다. 연속 변수는 평균 ± 표준편차(SD)로 표현하고 독립 표본 t-검정을 사용하여 두 그룹 간 비교하였습니다. 면역조직화학적 양성 발현율을 포함한 명목 범주 변수들은 χ2 검사를 사용하여 분석하였다. 병리학적 등급과 임상 단계를 포함한 서열 범주 변수는 랭크합 검정(해당되는 경우 2그룹 비교용 Mann-Whitney U 검정)을 사용해 분석하였다. HMGA1과 HAND1 발현 간의 상관관계는 선형 상관관계 분석을 통해 평가하였다. 모든 시험은 양측 실험이었으며; P < 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었고, P. < 0.01은 매우 유의한 것으로 간주되었습니다.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
면역조직화학적 검출 결과
인접한 정상 후두 점막과 LSCC(LSCC)의 조직학적 형태를 보여주는 대표적인 헤마톡실린-에오신(HE) 염색 이미지가 나타나며, 분화 정도는 다양합니다(잘 나아짐), 중간도(well, merd), 저분(poor) 상태입니다. 구체적으로, 그림 1A 는 인접한 정상적인 후두 점막을, 그림 1B 는 잘 분화된 LSCC, 그림 1C 는 중간 정도 분화된 LSCC, 그림 1D 는 분화가 저분화된 LSCC를 보여줍니다.
후두편평세포암 및 인접한 정상 후두점막조직에서의 HMGA1 및 HAND1 발현 ...
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
두경부에서 가장 흔한 종양 중 하나인 후두암은 최근 몇 년간 발생률이 증가하고 있으며, 이는 환경적 요인과 생활습관 관련 요인과 관련이 있을 가능성이 큽니다. 다른 악성 종양과 마찬가지로, 재발과 전이가 여전히 주요 사망 원인으로 남아 있습니다. 분자생물학의 발전으로 후두암 발병과 관련된 많은 요인들이 밝혀졌으나, 발병과 전이의 기전은 아직 완전히 밝혀지지 않았습니다. HMGA1은 전사 조절자로서 종양 발생과 진행에 중요한 역할을 하여 최근 연구의 중심 분야가 되었습니다. 여러 암 유형에서 고도로 발현된 것으로 보고되었으며, 종양 관련 생체표지로 활용될 수 있습니다. HAND1 역시 전사 조절자로서 주로 영양층 세포와 심장 발달에 관여하며, 다양한 악성 종양에서 침묵하고 높은 메틸화되는 것으로 밝혀졌습니다. 그러나 후두암에서의 발현은 아직 충분히 특성화되지 않았습니다. 본 연구는 항원 회출 조건, 항체 희석 비율, RNA 취급 절차 등 프로토콜에 상세히 설명된 표준화된...
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
저자들은 이 연구에 기여한 모든 개인과 기관의 지원에 감사드립니다.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 자동 조직 삽입기 | 사쿠라 파네텍, 도쿄, 일본 | 티슈텍 TEC 5 | 파라핀 임베딩 |
| 미세토름 | 라이카 마이크로시스템즈, 베츨라르, 독일 | RM2135 | 단면 분할 (4 & mu; m) |
| 슬라이드 드라이어 | 샤오간 홍예 의료기기 유한회사, 중국 | CS-VI | 슬라이드 건조 |
| 가열 인큐베이터 | 상하이양광 실험기기 유한회사, 중국 | 303-4A | 온도 조절 부화 |
| 광학 현미경 | 올림푸스 코퍼레이션, 일본 도쿄 | BX41 | 조직학적 관찰 |
| 이미지 캡처 시스템 | QImaging, 캐나다 | QCapture Pro 7 | 현미경 영상 |
| 클린 벤치 | 중국 베이징 시청 반도체 장비 공장 | SW-CJ-1FD | 무균 작업 공간 |
| 냉장 원심분리기 | 중국 베이징 의료기기 수리 공장 | LXJ-64-01 | RNA 분리 |
| 탁상형 원심분리기 | 상하이 페이칭 테크놀로지 유한회사, 중국 | PQ-1600A | RNA/DNA 처리 |
| 자기 교반기 | 중국 장쑤 진탄 의료기기 공장 | HJ-3 | 용액 준비 |
| 미니 믹서 | 상하이 펑 s 인더스트리얼 컴퍼니, 유한회사, 중국 | H-1 | 샘플 믹싱 |
| 전자 저울 | 메틀러 톨레도, 스위스 | PB3002-S | 샘플 무게 측정 |
| PCR 증폭기 | 에펜도르프 AG, 독일 | 마스터사이클러 5333 | PCR 증폭 |
| 전기영동 전원 공급 | 중국 베이징 류이 기기 공장 | DYY-6C | 전압 제어 |
| 전기영동 탱크 | 중국 베이징 류이 기기 공장 | DYCZ-24DN | 젤 전기영동 |
| 전자레인지 | 중국 상하이 중다 의학 응용 연구소 | WD800SL23 | 아가로스 준비 |
| UV 트랜스빌리미네이터 | 중국 베이징 류이 기기 공장 | WD-9403B | DNA 시각화 |
| 젤 이미징 시스템 | 안라이 유한회사, 중국 | 알파 이미저 HP | 젤 문서 |
| 냉장고 (4 & deg; C) | 하이얼 바이오메디컬, 중국 | BC-165D | 샘플 저장 |
| 초저온 냉동고 | 하이얼 바이오메디컬, 중국 | DW-86L388 | 저장 (-80 & deg; C) |
| 아이스 박스 | 상하이 푸즈테크놀로지 유한회사, 중국 | FZ-IB-20L | 샘플 수송 |
| 냉동 보관 가방 | 상하이 이리 테크놀로지 유한회사, 중국 | YL-ULT-50 | 샘플 보존 |
| 연구 피펫 | 에펜도르프 AG, 독일 | 리서치 플러스 | 액체 취급 |
| RNA 추출 시약(TRIzol) | 인비트로젠 (서모 피셔 사이언티픽), 미국 | 15596026 | RNA 추출 |
| 역전사 키트 | 타카라 바이오 주식회사, 일본 | RR037A | cDNA 합성 |
| PCR 마스터 믹스 | 타카라 바이오 주식회사, 일본 | RR820A | PCR 증폭 |
| dNTP 믹스 | 타카라 바이오 주식회사, 일본 | 4030 (일반적) | PCR 구성 요소 |
| RNase 억제제(RNasin) | 프롬메가, 미국 | N2111 | RNA 보호 |
| 올리고(dT) 프라이머 | 타카라 바이오 주식회사, 일본 | 3806 (일반적) | cDNA 합성 프라이머 |
| 아가로스 | 시그마-올드리치, 미국 | A9539 | 젤 준비 |
| TAE 버퍼 (50회 초과;) | 시그마-올드리치, 미국 | TAE50X-1L (일반) | 전기영동 완충기 |
| DNA 마커(사다리) | 타카라 바이오 주식회사, 일본 | DL2000 (3421A) | 크기 참조 |
| 에티듐 브로마이드 (EtBr) | 바이오-래드, 미국 | 1610433 | DNA 시각화 |
| PBS 버퍼 | 깁코 (서모피셔 사이언티픽), 미국 | 10010023 | 세척 완충제 |
| DEPC 처리 물 | 인비트로젠, 미국 | AM9916 | RNA 보호 |
| 클로로포름 | 시그마-올드리치, 미국 | C2432 | RNA 추출 |
| 이소프로판올 | 독일 머크 | 109634 | RNA 침전 |
| 에탄올(절대 수도) | 독일 머크 | 100983 | 탈수 |
| 메탄올 | 독일 머크 | 106009 | 퍼옥시다아제 차단 |
| 과산화수소(H2O2) | 시그마-올드리치, 미국 | H1009 | 내인성 과산화효소 차단 |
| 자일렌 | 시그마-올드리치, 미국 | 534056 | 탈파라핀화 |
| 시트레이트 항원 회수 완충제 | 영국 애브캠 | AB93678 | 항원 추출 |
| 항체 희석제 | 덴마크 다코 | S3022 | 항체 희석 |
| HMGA1 1차 항체 | 영국 애브캠 | AB129153 | 희석 1:150 |
| HAND1 1차 항체 | 영국 애브캠 | AB200040 | 희석 1:100 |
| 2차 항체(HRP 접합) | 덴마크 다코 | K5007 | 탐지 시스템 |
| DAB 기판 키트 | 덴마크 다코 | K3468 | 색채 발생 검출 |
| 헤마톡실린 염색 | 시그마-올드리치, 미국 | H9627 | 핵 염색 |
| 얼신 얼음 | 시그마-올드리치, 미국 | E4009 | 세포질 염색 |
| 중성 발삼 마운팅 매체 | 시노팜 화학 시약 회사, 중국 | 10004160 | 슬라이드 장착 |
| HMGA1 프라이머 | 커스텀 합성(예: IDT/Sangon) | 해당 없음 | 유전자 증폭 |
| HAND1 프라이머 | 커스텀 합성(예: IDT/Sangon) | 해당 없음 | 유전자 증폭 |
| GAPDH 프라이머 (내부 통제) | 맞춤 합성 | 해당 없음 | 가사 유전자 |
| APES (아미노프로필트리에톡실실란) | 시그마-올드리치 | 해당 없음 | 슬라이드 코팅 |
| RNase 없는 마이크로 원심분리기 튜브 | 에펜도르프와 nbsp; | 해당 없음 | RNA 처리 |
| RNase 프리 피펫 팁 | 에펜도르프와 nbsp; | 해당 없음 | 액체 취급 |
| 아가로즈 젤 캐스팅 트레이와 빗 | 제네릭 | 해당 없음 | 젤 준비 |
| 프라이머 설계 소프트웨어 | 통합 DNA 테크놀로지스, 미국 | 프라이머퀘스트 도구 | 프라이머 설계 |
| 이미지 분석 소프트웨어 | 미디어 사이버네틱스, 미국 | 이미지-프로 플러스 6.0 | 밴드 정량화 |
| 통계 분석 소프트웨어 | IBM 코퍼레이션, 미국 | SPSS 버전 13.0 | 통계 분석 |