마우스 기본 모드 네트워크의 종단적이고 다중 모드 전기생리학 기록을 가능하게 하는 대형 재밀봉 가능한 두개골 창을 위한 수술 프로토콜

요약

이 프로토콜은 쥐에서 크고 재밀봉 가능한 경막 보존 두개골 창을 만들기 위한 2단계 수술 방법을 설명합니다. 이 기술은 기본 모드 네트워크와 같은 분산된 심부 뇌 네트워크에서 몇 주에 걸쳐 만성적이고 다중 모달 전기생리학적 기록을 가능하게 합니다.

초록

기본 모드 네트워크(DMN)는 주요 우울장애(MDD)와 같은 다양한 인지 기능과 신경정신 질환에 관여하는 중심적이고 대규모 뇌 네트워크입니다. 동물 모델에서 DMN의 복잡한 역학을 연구하는 것은 건강 상태와 병리 상태 모두에서 그 기능에 대한 귀중한 통찰을 제공합니다. 그러나 깨어 있을 때 DMN의 여러 깊고 분산된 노드에서 안정적이고 장기적이며 대규모 전기생리학적 기록을 수행하는 것은 여전히 중요한 도전 과제입니다.

여기서는 쥐에게 크고 내구성 있고 재밀봉 가능한 두개골 창문을 만들기 위한 새로운 2단계 수술 프로토콜× 제시합니다. 이 절차는 장기적인 뇌 건강과 기록 안정성에 매우 중요한 경막의 무결성을 보존하기 위해 설계되었습니다.

이 창은 표면 수준의 미세피질검사(μECoG)와 두 개의 고밀도 두개내 전극 탐침을 결합하여 1,000개 이상의 전극에서 동시적이고 반복적인 종방향 기록을 가능하게 하여 DMN에 전례 없는 접근을 가능하게 합니다. 이 기법은 수주간 네트워크 전반의 전기생리학적 역학을 다중 모드, 다규모로 탐구할 수 있는 견고한 플랫폼을 제공하며, 뇌 질환의 병태생리에 근저된 신경가소적 변화를 조사하고 새로운 치료제의 만성적 효과를 평가하는 새로운 길을 열어줍니다.

서론

기본 모드 네트워크(DMN)는 인간 뇌 영상 연구에서 외부에서 지향적이고 주의를 요구하는 작업 중에 지속적으로 억제되는 영역들의 집합으로 처음 확인되었습니다^. 현재는 자기 참조적 사고, 자서전적 기억, 미래 사건 계획과 같은 내면 지향적 인지 과정을 지원하는 근본적인 대규모 네트워크로 간주됩니다 ^2,3. 인간에서 표준 DMN은 내측 전전두엽(mPFC), 후대상피질(PCC), 하두정엽(IPL), 그리고 해마 형성⁴를 포함한 해부학적으로 연결된 핵심 영역들로 구성되어 있습니다. 이 네트워크 내의 기능 장애는 여러 신경정신과 장애의 핵심 특징입니다. 주요 우울장애(MDD)에서 DMN은 일반적으로 과잉행동과 기능적 연결성 변화 패턴을 보이며, 이는 반추와 부정적 자기 이미지 같은 MDD의 핵심 증상의 근본 원인으로 여겨집니다 ^5,6.

DMN 기능 장애를 유발하는 세포 및 회로 메커니즘을 연구하기 위해서는 견고한 동물 모델이 필수적입니다. 상동 DMN은 설치류에서 신뢰성 있게 확인되었으며, 이는 mPFC, 대상피질, 비후피질(RSP) 등 유사한 뇌 영역으로 구성되어 있어 마우스가 기전 연구를 위한 번역적으로 적합한 모델임을 입증했습니다 ^7,8. 더불어, 우울증의 핵심 요인인 만성 스트레스는 인간 MDD 환자에서 관찰된 것과 유사한 방식으로 설치류의 DMN 연결성을 변화시키는 것으로 나타났습니다⁹.

질병 상태나 만성 치료 개입에 대한 반응으로 발생하는 신경가소적 변화를 이해하려면 단일 기록 세션만으로는 시간에 따른 신경 회로의 동적 적응을 포착할 수 없으므로 신경 활동에 대한 종단적 관찰이^{필요합니다.} 생체 내 전기생리학은 국소장 전위(LFP)의 신경 진동과 동시성을 연구하는 데 필요한 밀리초 규모의 시간 해상도를 제공합니다. LFP는 네트워크 통신의 기본 기질인 국소 신경 집단의 동기화된 시냅스 활동을 반영하는 합산된 세포외 신호를 보입니다^11,12. 그러나 깨어 있는 쥐에서 만성적이고 대규모 전기생리학적 기록을 수행하는 것은 기술적으로 여전히 까다롭습니다. 기존의 만성 두개골 창은 깨어 있는 쥐의 광학 영상을 위해 개발되었으며, 이 목적을 위한 표준 준비 수단으로 남아 있습니다. 이들의 전형적인 단일 반구 크기와 투명 유리 커버슬립이 의도된 판독에 최적입니다¹³. 그러나 이들은 각성 다중 부위 전기생리학을 위해 설계되지 않았기 때문에, 작업 영역과 광학 인터페이스 때문에 DMN¹⁴와 같은 네트워크의 분산 양측 노드에서 동시에 고밀도 기록을 할 수 없습니다. 만성 전극 이식은 종방향 기록을 가능하게 하지만, 영구적으로 위치한 샹크 주변에 점진적인 외신 캡슐화와 교세포 흉터를 유발하여 시간이 지남에 따라 신호 품질을 저하시킵니다^15,16.

여기서 설명하는 2단계 수술 절차는 이러한 한계를 직접적으로 해결합니다. 이 장치는 수동형 폴리디메틸실록산(PDMS) 막, 실리콘 실란트, 3D 프린팅 캡으로 세션 사이에 닫힌 크고 재밀봉 가능한 두개골 창을 만들어내며, 중규모 LFP 기록을 위한 μECoG 그리드를 반복적으로 비말단 삽입하고, 미세, 층상 해상도 단일 단위 및 LFP 활성도를 위한 다수의 고밀도 두개내 전극 프로브를 삽입할 수 있게 합니다^17,18. 기존의 만성 접근법이 영구 삽입된 전극 배열에 의존해 시간이 지남에 따라 교세포 포집을 쌓거나, 종방향 설계를 배제하는 말기 급성 두개골 절개술이 필요하다면, 여기서 설명된 윈도우는 경막을 온전하게 보존하고 영구적인 이물질과의 접촉을 피합니다 15,16,18. 또한, 뇌 창을 세 차례(수술 후 0일, 21일, 22일) 전기생리학적 기록 없이 다시 열어준 검증 코호트에서, 교세포섬유산성 단백질(GFAP)과 이온화 칼슘 결합 어댑터 1(IBA1)의 정량적 면역반응성은 비수술적 대조군과 유의미하게 차이가 없어, 여기서 반복 개폐 일정 하에서 낮은 아스트로글리오시스와 미세아리오시스를 시사하였다. 이 방법은 DMN을 포함한 분산 피질 네트워크의 종방향 다부위 기록과 각성 상태에서 고정된 마우스의 심층 구조에 대한 층류 고밀도 두개내 전극 탐침 접근에 특히 적합합니다. 주요 운영 제약은 신뢰할 수 있는 경막 보존 골판 제거에 필요한 미세수술 전문성과 고밀도 두개내 전극 탐침이 머리 고정이 필요해 자유롭게 움직이는 녹화와의 부적합성입니다.

프로토콜

모든 동물 실험은 핀란드 국가 동물실험위원회(허가 번호: ESACI/40845/2022)의 승인을 받았으며, 실험은 과학적 목적을 위한 동물 사용 보호에 관한 유럽 의회 지침 2010/63/EU와 실험동물 관리 및 사용에 관한 국가 지침을 준수하여 수행되었습니다.

참고: 모든 수술 절차는 최소 15분 이상 자외선 방사선 또는 철저한 에탄올 표면 오염 제거로 사전 멸균된 층류 수술용 후드 내에서 진행됩니다. 이소플루란 폐기가스는 후드 내부에 설치된 활성탄 청소 시스템에 의해 포집됩니다. 조작자는 일회용 헤어 커버, 수술용 마스크, 긴 소매 실험실 코트, 그리고 보닛에 들어가기 전에 80% 에탄올로 분사된 단층 비멸균 니트릴 검사 장갑을 착용합니다. 칼날 및 주사기를 즉시 폐기할 수 있도록 날카로운 폐기 용기가 후드 내부에 배치됩니다.

1. 수술 전 준비 및 마취

1. C57BL/6JRj 마우스를 사용하세요. 최소 10주 된 상태이고 무게가 20g 이상입니다.
2. 수술 전에 모든 기구를 따뜻한 초음파 목욕에 넣어 세척하세요. 70% 에탄올에 최소 15분간 담가서 말린 뒤 담가세요.
3. 또는 사용 직전에 유리구슬이나 적외선 살균기를 잠시 통과시켜 기기를 소독할 수도 있습니다. 멸균 커튼은 사용하지 않습니다. 같은 세션 내 연속된 동물들 사이에는 기구를 에탄올에 다시 담가두어 최소 2분¹⁹분을 사용하세요.
4. 각 마우스를 개별적으로 보정된 저울로 재고 수술 전 약물의 양을 계산하세요.
5. 멸균 PDMS 막은 급성 수술 외에 한 배치당 한 번씩 미리 준비하세요.
   1. 제조사의 지침에 따라 10:1 엘라스토머-경화제 혼합물로 제조한 무균 PDMS 멤브레인을 주조하여 약 500 μm 두께로 제조합니다. 이 혼합물은 두 장의 평평한 붕규산 유리판 사이에 끼워 60°C에서 최소 2시간 경화시킵니다.
   2. 경화된 시트를 오토클레이브 파우치에 밀봉하고 증기 오토클레이브로 멸균하세요. 사전 멸균된 수술용 후드에서 멸균된 #11 메스와 작은 스테인리스 자로 각 판을 두개골 창 크기에 맞는 직사각형 막으로 자릅니다.
   3. 미리 절단된 막은 멸균 실험실 기구(예: 6웰 세포 배양판의 개별 웰)에 보관하여 사용 전까지 보관하세요.
6. 각 녹음 세션 전에 하드웨어 품질 관리를 수행하세요.
   참고: μECoG 배열에 대한 일상적인 임피던스 검사는 수행되지 않습니다: 참조 와이어 결함은 원시 트레이스에서 명확히 드러나며, 임피던스 테스트는 하드웨어 문제가 의심될 때만 실행됩니다. 고밀도 두개내 전극 탐침에는 기록 소프트웨어의 그래픽 사용자 인터페이스를 통해 접근 가능한 내장 임피던스 및 케이블 무결성 진단 기능이 포함되어 있습니다; 신호 품질이 명백히 손상된 상태에서 이 장비를 실행하세요.

2. 1단계: 동물 준비 및 헤드플레이트 이식

1. 동물 조리
   1. 이소플루란으로 마취(유도율: 4%, 유지 비율: 1.5−2.5%, 산소 유량 0.5 L/min)로 마취합니다. 발가락 꼬집는 반사가 사라져서 마취 깊이를 확인하세요.
   2. 머리 꼭대기, 대략 눈에서 목까지 털을 밀어주세요.
   3. 동물을 피드백 제어 온열 패드에 올려놓고, 시술 내내 체온을 37°C로 유지하도록 보정된 내부 온도 센서가 장착되어 있습니다. 각막 건조를 방지하기 위해 카보머 눈 연고를 바르세요.
   4. 비파열 귀 막대를 사용해 입체정위 프레임에 마우스를 고정하세요. 앞니 막대를 조정하여 두개골이 평평하게 놓이고, 브레그마와 람다가 등복부 높이(평평한 두개골 방향)에 위치하도록 합니다. 코 콘을 통해 산소 유량 0.5 L/min으로 이소플루란(1.5–2.5%)을 투여하여 마취를 유지합니다.
   5. 수술 전 진통제 및 소염제는 피하 주사(S.c.)를 통해 투여합니다: 카프로펜(5 mg/kg), 부프레노르핀(0.05 mg/kg), 덱사메타손(2 mg/kg).
   6. 면도한 부위를 포비돈-요오드 용액으로 소독하세요.
   7. 두피 피부 아래에 국소 마취제로 리도카인-에피네프린 용액(S.c.)을 주입하세요.
2. 두개골 노출
   1. 귀 옆에 작은 횡절개(약 1cm)를 하세요.
   2. 절개를 귀 주변과 머리 양쪽을 따라 눈 쪽으로 측면으로 점진적으로 확장하되, 눈 쪽으로 절개를 넘지 않도록 하세요. 노출을 마무리하면 양쪽 중앙선 방향으로 대각선으로 절단하여 두개골 등 전체가 노출되도록 합니다.
3. 두개골 청소
   1. 노출된 두개골을 실험실용 아세톤으로 꼼꼼하게 청소하세요. 멸균 면봉을 아세톤에 담가 과도한 용매를 제거해 주변 조직에 떨어지는 것을 방지한 후, 뼈에 발라서 보이는 모든 골막이 제거될 때까지 닦아주세요.
   2. 아세톤은 소독제가 아니라 뼈 표면의 지방 잔류물과 지속적인 막 잔여물을 녹이는 능력 때문에 사용하세요.
      참고: 골막과 뼈 표면의 지질 잔류물을 완전히 제거하는 것은 헤드플레이트와 치아 시멘트의 강한 접착을 위해 매우 중요합니다. 임플란트는 깨어 있는 쥐가 가하는 기계적 스트레스를 견뎌야 하므로, 뼈 접착 접합부에 남아 있는 골막이나 지질막이 주요 파열 지점이 됩니다.
   3. 아세톤 세척이 완전히 녹지 않은 잔여 골막과 결합조직 조각을 제거하기 위해 둔한 미세수술(원형) 메스 칼날을 사용하세요. 뼈 표면과 약 45° 각도로 잡고, 노출된 뼈의 측면 가장자리를 향해 브레그마-정중선 접합부에서 바깥쪽으로 가볍고 방사형 스트로크로 두개골을 긁어내세요.
   4. 노출된 전체 뼈 표면이 최소 한 번 이상 통과되어 균일하게 깨끗하고 무광이 될 때까지 계속합니다.
   5. 마지막으로 면봉 어플리케이터에 아세톤을 사용해 간단한 세척을 마무리합니다.
4. 두개골 절개 부위 표시
   1. 디지털 입체 정각 팔에 생체 적합 수술용 피부 표식을 부착하세요.
   2. 두개골에 브레그마에 대해 4mm × 7.6mm 직사각형 영역을 표시하세요.
      1. 마커 팁을 브레그마로 이동해 디지털 판독부의 X와 Y 좌표를 0으로 재설정하세요.
      2. 팔을 계획된 창문의 네 모서리 각각에 배치하여, 직사각형이 양쪽 브레그마에서 2mm 측면, 앞쪽 3mm, 후쪽 방향으로 4.6mm 뻗어 나오게 하고, 각 모서리에 한 개의 점을 놓습니다.
5. 오른쪽 반구에 두개내 탐침 삽입 부위를 표시하세요.
   1. 앞쪽 탐침 부위를 1.66 mm A/P 및 1.95 mm M/L 거리로 표시하세요.
   2. 꼬리 탐침 부위를 -2.2 mm A/P, 1.9 mm M/L 위치로 표시하세요.
      참고: 이 사이트들은 DMN 특정 영역을 목표로 조정되었습니다. 이 프로토콜을 통해 삽입 부위를 여러 영역에 맞게 조정할 수 있습니다.
   3. 입체정위 팔에서 마커를 분리하세요.
   4. 멸균된 유연한 직선(예: 얇은 플라스틱 카드)을 두개골에 대고 네 모서리 점을 마커와 연결해 미래의 두개골 창을 연속된 직사각형으로 윤곽을 그려 두세요.
6. 접착력 향상을 위한 표면적 증가
   1. 다음 모든 단계를 4구역까지 쌍안현미경 아래에서 수행하세요.
   2. 지정된 창문 구역 밖의 모든 노출된 뼈 표면에 #11 수술용 칼날을 사용해 교차 무늬를 새기고, 0.2–0.4mm 깊이의 얕지만 뚜렷한 홈을 만들어 약 1mm × 1mm 정사각형의 균일한 격자를 만듭니다.
      참고: 이렇게 하면 접착제와 치과용 시멘트의 유효 표면적이 증가하여 기계적 접지력이 향상됩니다.
   3. 긴 목의 면봉 끝에 멸균된 30G 바늘을 끼우고 바늘을 V자 모양으로 구부려 미세 접착제 어플리케이터를 만드세요.
   4. 시아노아크릴레이트 접착제를 일회용 플라스틱 무게 측정 보트에 분배한 후 도포기를 접착제 저장소에 담가세요.
   5. 노출되고 새겨진 모든 뼈 표면에 접착제를 발라주며, 각 부위당 한 번의 침착물만 바르면 덮개가 철저하지만 과도하지 않습니다. 접착제를 7분간 말리세요.
7. 레퍼런스 소켓 이식
   1. 왼쪽 소뇌 위에 보이는 표면 혈관이 보이지 않도록 드릴링 부위를 선택하세요.
   2. 치과 드릴을 입체 정위 암의 드릴 홀더에 장착하세요.
   3. 파일럿 홀을 5–10초 간격으로 20,000–25,000 RPM에서 둥근 강철 버를 사용해 구멍을 뚫고, 번식 사이에 비트를 당겨 쌍안경으로 현장을 점검합니다.
   4. 구멍이 더 투명해질 때까지 드릴을 두어 연한 분홍빛이 보이고, 얇아진 뼈를 통해 경막이 보입니다.
   5. 이 시점에서 즉시 드릴링을 중단하여 경막 침투를 방지하세요. 완성된 구멍 크기를 약 0.5 mm 크기로 맞추며, 기준 소켓의 외경보다 약간 더 큽니다.
   6. 금도금 기준 소켓을 파일럿 구멍에 삽입하고, 시아노아크릴레이트 접착제로 고정한 뒤, 자외선 경화 가능한 치과용 시멘트로 접합부를 보강하세요. 405nm 발광 다이오드(LED) 경화 펜 라이트로 치과 시멘트를 1분간 경화시킵니다.
8. 헤드플레이트 이식
   1. 노출된 앞쪽뼈 꼭대기(코에 가장 가까운 지점)에 소량의 자외선 경화 치과 시멘트를 바르어 평탄 지지대 역할을 하세요.
   2. 헤드플레이트를 두개골 위에 올려놓고, 한쪽 가장자리는 기준 소켓 주변에 경화된 치과 시멘트 비계 위에 놓이고(2.7.6단계), 반대쪽 가장자리는 신선한 두막 시멘트 도브 위에 놓이게 합니다.
   3. 헤드플레이트의 긴 축이 시상선 중앙선에 중심을 맞추고, 두 개의 고정 손잡이가 중앙선 축에 수직(90°)으로 뻗도록 정렬하세요. 자외선 아래에서 복합재를 경화시켜 헤드플레이트를 고정하세요.
   4. 머리판 바닥 주변에 약 1mm 두께의 자외선 경화 가능한 치과 시멘트 층을 연속적으로 적용하여 조각된 뼈와 기준 소켓을 둘러싸고, 미래 두개골 창 주변에 연속적이고 밀폐된 인클로저를 형성하여 구조를 보강합니다.
   5. 각 층을 405nm LED 경화 펜으로 40초간 1–2cm 작업 거리에서 각각 개별적으로 경화하여 다음 층을 적용하기 전에 완전한 중합을 보장합니다. 완성된 시멘트 벽이 헤드플레이트의 윗면과 평평하게 뻗어 있고, 표시된 창문 영역에 겹치지 않고 노출된 뼈 둘레를 완전히 감싸도록 하세요.
9. 쥐가 마취에서 회복할 시간을 주세요. 쥐를 최소 48시간 동안 집 우리에 다시 넣어두세요.
10. 3단계로 진행하기 전에, 동물이 수술 전 체중의 5% 이내로 돌아왔고, 쥐 찡그림 척도²⁰에서 통증 징후가 없는지 확인하세요. 이 중 어느 하나라도 충족되지 않으면, 충족될 때까지 회복 기간을 연장하세요.
    참고: 이 단계적 설계와 수술 간 회복 간격이 매우 중요합니다. 이 수술은 동물이 두개술 전 초기 생리적 스트레스와 염증에서 회복할 수 있게 해주며, 이는 수술 성공률과 임플란트의 장기적인 건강을 향상시키는 것으로 밝혀졌습니다; 최소 48시간을 사용하며, 헤드플레이트 고정과 두개골 절개술 사이에 다일간 회복 간격이 있는 단계적 두개골 이식은 수술 전 염증을 줄이고 장기^{준비 품질을 향상시키}는 것으로 나타났습니다.

3. 2단계: 만성 두개창 생성

1. 수술 전 준비
   1. 1절에 설명된 수술 부위와 기구를 준비하세요.
   2. 아이소플루란으로 다시 마취(유도 4%, 유지 1.5–2.5%)
   3. 2.1.4 단계에서 설명한 대로 마우스를 입체정위 프레임에 위치시킵니다.
   4. 수술 전 약물은 2.1단계에서 설명한 동일한 용량으로 투여하며, 리도카인-에피네프린 국소 마취제는 제외됩니다(두피 피부는 이미 A단계에서 제거되어 더 이상 적용되지 않습니다).
2. 창문 구멍 뚫기
   1. 1단계(2.4단계)에 표시된 직사각형 윤곽선을 따라 치과 드릴로 뼈를 얇게 만들기 시작하세요. 드릴링 장치를 뼈 표면에 수직(≈ 90°)으로 들고 25,000 RPM에서 시작하며, 직사각형 가장자리를 따라 약간 더 깊은 부분을 한두 번 통과시켜 초기 절단 홈을 만듭니다.
      참고: 시작 드릴 속도는 조작자의 경험 수준에 맞게 조정할 수 있습니다.
   2. 2.5단계에서 표시된 두 개의 프로브 삽입 좌표에 두개골 창문 옆 뼈와 치아 시멘트에 약 0.2–0.3mm 깊이의 드릴 홈을 파는 것입니다.
      참고: 이 홈들은 뼈판을 제거한 후에도 계속 보이는 지속적인 시각적 랜드마크 역할을 하며, 이후 전기생리학적 세션에서 두개내 탐침을 재배치하는 데 사용됩니다.
   3. 시추 내내 얼음처럼 차갑게 무균 인공 뇌척수액(ACSF; Goldey 등의 세파졸린 함유 레시피에 따라 조제)을 정기적으로 바르며, 기저 피질에 대한 열 손상을 방지하고 출혈을 최소화하세요^.
   4. 뼈가 얇아질수록 드릴 속도를 점차 20,000 RPM으로 줄이고, 손잡이를 ≈ 45°로 기울여 조작자가 드릴을 손에 고정하고 부드럽고 통제된 스트로크로 전환할 수 있도록 합니다.
3. 뼈판 제거 (중요한 단계)
   1. 직사각형 가장자리를 따라 계속 드릴을 통해 윤곽 안의 뼈가 약 90% 얇아질 때까지 계속하세요. 두개골을 완전히 뚫지 마세요.
   2. 남은 뼈 두께를 두 가지 상호 보완 검사로 확인하세요:
      1. 쌍안현미경 아래에서 뭉친 도구로 얇아진 뼈 선반 가장자리를 살짝 두드리세요. 가벼운 두드림이 만들어내는 굴절의 크기는 잔여 골 두께를 직접적으로 나타냅니다.
      2. 드릴된 창문 위에 얼음처럼 차가운 ACSF를 적용하고 즉시 쌍안경으로 검사하세요: ACSF가 뼈를 관통하기 전 처음 20–30초 동안 액체층이 시각적 대비를 극대화하여 뼈가 경막 근처에서 얇아진 곳의 피질 모세혈관을 해소하고, 잔류 두께의 영역은 액체 아래에서 비교적 불투명하게 유지됩니다. 플랩이 균일하게 반투명하고 유연해 보이면 3.3.3단계로 진행합니다.
   3. 90° 굽은 끝부분의 가늘고 곡선 듀라 훅으로 바꾸세요. 뼈 표면에 대해 약 15° 각도로 조심스럽게 팁을 삽입한 후, 창문 가장자리를 따라 미끄러지듯 움직여 뼈 판을 주변 두개골과 그 아래 조직에서 조심스럽게 분리하세요.
   4. 양쪽 모서리에서 다른 모서리로 양쪽 측면을 따라 점진적으로 작업하다가, 마지막으로 모서리에서 중앙 쪽으로 진행하여 전체 둘레가 아래 두막에서 분리될 때까지 진행합니다.
   5. 슬라이딩 시 경막 후크에 아래쪽 압력을 가하지 말고, 뇌를 만지지 마세요.
      참고: 대각선으로 마주 보는 모서리를 얕은 갈고리 각도로 번갈아 가리면 뼈 플랩 주변에 기계적 응력이 고르게 분산됩니다. 이 전략은 경막 파열을 예방하고 뇌 조직의 장기적인 건강을 유지합니다.
   6. 후크가 어느 모서리에서든 초점 저항에 부딪히면 무리하게 움직이지 마세요. 대신 플랩을 내리고 3.4단계로 돌아가 부착 부위를 더 얇게 만듭니다.
      1. 경막 파열이 발생하면 해당 동물의 시술을 중단하세요(갑작스러운 국구 돌출, 분홍빛 액체 누출, 또는 차가운 ACSF로 헤드플레이트 강을 세 번 붓고 각 세척 후 30초간 세척을 허용해도 가라앉지 않는 선명한 붉은 동맥 출혈로 인식됨).
         참고: 성공적인 박리는 뼈 판막이 전체 둘레를 따라 균일하게 움직이며, 경막 돌출이 보이지 않고 경미한 모세혈관 출혈만 있을 때 나타난다.
   7. 성공적으로 분리된 뼈 판을 경막 후크로 조심스럽게 뒤에서 앞쪽으로 들어 올려 두개골 표면에서 약 35° 높이로 올립니다.
   8. 겸자로 들려온 가장자리를 잡고 부드럽게 좌우로 흔들어 판이 완전히 풀릴 때까지 하세요. 만약 판이 어느 모서리에서든 저항한다면, 다시 제자리로 내리고 3.3.4단계로 돌아가 부착 부위를 얇게 만든 후 다시 제거를 시도합니다; 이러한 저항은 국소적으로 뼈가 덜 얇아진 부분임을 나타냅니다.
   9. 얼음처럼 차가운 ACSF를 반복해서 세척하여 노출된 응고된 혈액을 부드럽게 제거합니다.
   10. 경막이 온전하고 투명한지 확인한 후 진행하세요.
       참고: 후방 가장자리에서 천천히 점진적으로 들어 올리는 것이 상시상정맥동과 횡정맥동과 피질 표면 손상 위험을 최소화하는 데 필수적입니다.
4. 두개골 창문 밀봉
   1. 출혈이 가라앉으면 무균 프리캐스트 PDMS 멤브레인 하나를 경막 표면에 직접 부착하세요(섹션 1에서 준비). 적절한 크기로 조절되면 창문을 정확히 덮고 경막에 수동적으로 달라붙어 뇌에 평평하게 붙입니다.
   2. 비섬유성 닦기로 창문 둘레에 남아 있는 ACSF를 흡수하세요.
      참고: 닦기는 노출된 경막에 절대 닿지 않아야 하며, 창문이 반복적으로 열리므로, 이 단계에서 오염이 발생하면 이후 종방향 기록에 지장이 있기 때문에 엄격한 무균 기법(멸균 작업자, 도구, 현장 사용)을 유지해야 합니다.
   3. 제조사 지침에 따라 2성분 실리콘 엘라스토머 실란트를 준비하고, 혼합 엘라스토머를 분배 후 30초 이내에 칠해 덴탈 시멘트 인클로저와 헤드플레이트 내부 가장자리 사이의 모든 틈새를 채우고, PDMS 멤브레인 가장자리를 완전히 감싸고 겹치도록 하세요.
   4. 엘라스토머를 약 2분(제조사에서 지정한 시간) 경화시키세요. 경화된 밀봉이 연속적이고, 액체에 밀폐되어 있으면서도 각 녹음 세션 시작 시 기계적으로 분리 가능한지 확인하세요.
   5. 녹음 세션 사이에 창문을 보호하기 위해 소량의 시아노아크릴레이트 접착제를 사용해 헤드플레이트에 맞춤형 3D 프린팅 보호 캡을 부착하세요.
   6. 마취에서 회복할 시간을 주고, 임플란트 손상을 방지하기 위해 집 케이지로 돌려보내세요.

4. 수술 후 관리 및 습관

1. 수술 후 최소 2일간 쥐의 건강을 면밀히 관찰하세요. 마우스 찡그림(²⁰) 기준으로 통증 징후가 나타나면 수술 후 2일간 추가 진통제(s.c.)를 투여합니다.
2. 수술 후 최소 4일간 쥐가 방해받지 않고 회복할 수 있도록 하세요. 그 후 5일간의 익숙화 기간을 시작하는데, 1일차는 5분, 2일차는 각각 15분, 3일차, 4일차, 5일차에 15분, 30분, 45분, 60분씩 진행하며 쥐가 다루는 것과 머리 고정 기록 플랫폼에 익숙해지도록 합니다.
   참고: 두개골 절개 후 조직 부종과 국소 염증은 최대^{2주 동안} 지속되는 것으로 알려져 있습니다. 실험 일정이 허락하는 경우, 첫 녹음 세션 전 회복 기간을 연장하는 것이 권장됩니다. 첫 번째 기록 세션 전에 양안현미경으로 두개골 창문이 투명하고 불투명하거나 섬유 조직이 없는지, 동물의 체중과 행동이 정상인지 확인하세요.

5. 종방향 전기생리학적 기록 절차

1. 동물을 녹음 플랫폼에 올려놓기
   1. 마우스를 녹음 플랫폼에 올려놓고 마우스 헤드 고정 클램프를 안내하세요. 머리 고정 시 동물의 자연스러운 서 자세를 유지할 수 있도록 높이가 미리 조정되었는지 확인하세요.
      참고: 마우스가 지속적으로 머리 고정을 거부한다면 강제로 시술을 강제하지 마세요. 동물을 다시 집 케이지로 돌려보내고, 익숙화 단계(4절)를 한두 세션 더 연장한 후 다시 고정을 시도하세요.
   2. 클램프의 잠금 나사를 조여.
   3. 사용 직전에 무딘 미세수술용 원형 칼날을 80% 에탄올에 담가세요.
   4. 3D 프린팅된 캡과 헤드플레이트 상단 사이에 칼날을 삽입하며, 블레이드가 헤드플레이트 표면과 거의 평행하게 유지되도록 합니다. 뇌와 접촉할 위험을 방지하기 위해 칼날을 헤드플레이트 개구부 내쪽 가장자리 너머로 절대 밀어내지 마십시오.
      참고: 캡은 의도적으로 투명 수지로 인쇄되어 블레이드 깊이가 전체적으로 보입니다.
   5. 캡 주위를 부드럽게 좌우로 흔들며 접착제층을 점진적으로 갈라가세요.
   6. 미세한 해리 겸자를 사용해 캡을 들어 올렸다가 완전히 해제되면 버리세요.
   7. 실리콘 엘라스토머 씰의 바깥 가장자리를 잡고 천천히 뒤쪽에서 앞쪽으로 들어 올립니다. 엘라스토머 씰과 그 아래 PDMS 막이 하나의 단위로 분리되어 온전한 경막이 노출됩니다.
   8. ACSF 몇 방울을 발라서 뇌를 촉촉하게 유지하세요.
2. 녹음 장치 배치
   1. μECoG 배열을 자기 베이스가 있는 관절 암에 장착합니다; 조작자의 경험에 따라 팔의 마찰 다이얼을 조절할 수 있으며, 경험 많은 조작자는 위치 조정 중 미세한 운동 제어를 유지하는 저마찰 설정을 선호합니다.
   2. 배열을 유도하여 전극면이 두개골 창의 오른쪽 가장자리를 따라 피질 표면에 수직(90°) 떨어지도록 유도합니다; 만족스러운 위치에 놓이면 마찰 다이얼을 조여 암을 고정하세요.
   3. 뾰족한 실리콘 팁핑 도구를 사용해 어레이의 평평한 리본 케이블을 부드럽게 헤드플레이트 상단 표면에 두드리게 하여 케이블이 헤드플레이트와 맞물리게 하고, 어레이 자체가 듀라에 평평하게 자리 잡도록 하며, 잔여 ACSF가 수동 접착력을 제공합니다. 두개골 창은 두 개의 서브그리드 배열을 단일 방향으로 수용하도록 치수가 조정되어 있어 거친 정렬을 쉽게 감지할 수 있습니다.
   4. 실리콘 도구로 마지막으로 미세 조정을 하며, 시상선 중앙선이 반투명 배열 내에서 명확히 중앙에 위치할 때까지 배열을 옆으로 밀어냅니다.
      참고: 반투명 μECoG 격자는 시상동을 배열 전체에서 명확한 해부학적 정렬 단서로 노출시키며, 동일한 측면 오프셋을 종방향 세션 전반에 걸쳐 재현할 수 있게 합니다. 이 배열은 앞쪽 절반의 전측 대상피질(ACC)과 후측 후비장 피질(RSP)을 양측으로 덮도록 배치되어 있으며, 이 연구에서 표적 삼은 DMN 노드를 가로지릅니다. 오픈소스 분석 패키지(ephy_spatial_fidelity-툴킷, https://github.com/RazBalin/ephy_spatial_fidelity-toolkit 에서 제공됨)는 보수적인 녹음에서 세션 간 그리드 배치 드리프트를 정량화합니다.
   5. μECoG 기준선을 2.7단계에서 이식된 금도금 기준 소켓에 연결합니다.
      참고: 선택 사항으로, 프로브와 배열을 50mL 원뿔형 ACSF 튜브에 담근 상태로 간단한 녹화를 받아 패러데이 케이지가 환경 전자기 간섭을 효과적으로 감쇠시키는지 확인한 후 생체 내 기록을 진행하세요.
   6. 후미 고밀도 두개내 전극 탐침을 뇌 표면에 수직(≈ 90°) 방향으로 배치한 미세 조작기 팔에 위치시키고, 50°로 기울인 두 번째 팔에 고밀도 두개내 전극 프로브를 위치시킵니다.
   7. 쌍안현미경 아래에서 각 프로브를 경막 위 약 1mm 높이까지 올려 각 프로브의 Y축을 3.2.4단계에서 밀링한 해당 각인 가이드 홈과 정렬합니다.
   8. 쌍안경으로 기록하거나 기록하며, μECoG 전극 그리드가 각 프로브의 계획된 진입점 바로 옆에 위치해 있습니다.
      참고: 수술이 적절히 시행되고 피질 부종이 없을 때, 뼈 가장자리와 μECoG 배열 사이의 간격이 최소화되어 진입점 선택이 명확합니다. 종단 세션에서 최대 공간적 정밀도를 얻으려면, 배열이 설치된 노출된 피질의 사진을 촬영하고, 뼈 가장자리와 μECoG 배열 사이의 좁은 영역 내에서 독특한 섬모 혈관을 식별합니다. 이 이미지는 참조 용기와 μECoG 패드에 대한 상대적 위치가 주석으로 표시되어 있으며, 이후 녹음일에 동일한 진입점을 재현할 수 있도록 세션 간 참조 지도 역할을 합니다.
   9. 경막 천공 시 연약한 전극 샹크를 보호하기 위해 프로브-패드 대응 관계가 기록된 후 각 프로브를 약 15mm 위로 당겨 넣습니다.
   10. 면끝 어플리케이터 끝에 멸균된 30G 주사기를 부착하고, 비이빨 미세 겸자로 바늘 끝을 90°까지 구부려 듀랄 천자 도구를 제작합니다.
   11. 천천히 천공 도구를 헤드플레이트 위로 밀어 넣으세요. 쌍안경을 통해 μECoG 전극 패드를 세어 도구를 기록된 진입 좌표와 일치시킵니다. 굽힌 팁을 듀랄 표면에 낮춰 절단 팁이 90° 각도로 경막에 접근하도록 하고, 도구의 축은 쥐의 등 긴 축과 평행하게 유지합니다.
   12. 팁을 경막면에서 약 1mm 아래로 밀고 당겨. 천공 부위에서 약간의 일시적 출혈이 예상되며; 비섬유질 물티슈의 꼬인 모서리로 닦아내세요.
   13. 천자 직후 고밀도 두개골 내 전극 프로브를 지속적인 양안 관찰 하에 경막 표면으로 내립니다. 구멍이 정확히 맞으면 프로브는 샤크가 편향되지 않고 천공을 부드럽게 통과합니다.
   14. 각 프로브는 약 0.1 mm/s 또는 느린²² mm의 제어 속도로 점차 경막 아래 5mm 목표 깊이까지 내려갑니다.
   15. 프로브가 10분간 기계적으로 안정될 때까지 기다린 후 데이터 수집을 시작하세요.
       참고: 30G 바늘이 만들어낸 작은 경막 천공은 몇 분 내에 자동으로 닫힙니다; 따라서 탐침 삽입은 지체 없이 천공 후에 이루어져야 합니다.
3. 데이터 수집
   1. 데이터 수집 시작.
      참고: μECoG 신호는 SPI 인터페이스 케이블을 통해 오픈 소스 획득 보드에 연결된 4개의 128채널 디지털 헤드스테이지에 의해 증폭되며, 두 개의 고밀도 두개내 전극 탐침은 모듈식 계측기 섀시 내에 내장된 전용 고밀도 탐침 획득 모듈을 통해 획득되며, 동기화 및 디지털 신호를 위한 다기능 입출력 및 데이터 획득 모듈과 함께 제공됩니다. 공통 TTL 마스터 클럭은 오픈 소스 μECoG 획득 보드에서 생성되어 하드웨어 동기화 라인으로 프로브 획득 섀시(다기능 I/O 모듈을 통해)로 배포되어, 두 획득 스트림이 샘플 정렬된 타임베이스를 공유합니다. 모든 데이터 스트림은 획득 시스템의 그래픽 사용자 인터페이스를 통해 동기화되어 기록됩니다; 전체 하드웨어 모델과 카탈로그 번호 는 재료표에 나열되어 있습니다.
   2. 기록 세션이 끝나면 μECoG 그리드에 0.5mL의 ACSF를 투여한 후, 각 고밀도 두개내 전극 프로브를 삽입 시 사용하는 속도(≈6 mm/min)로 후퇴시키고 μECoG 배열을 부드럽게 제거합니다.
   3. 프로브와 배열을 새로 준비한 1% 효소 세제 용액에 45분간 담가서 청소하세요.
   4. 효소 세제 담그는 후, 각 세척마다 새로운 튜브를 사용해 역삼투압 정제된 물에 세 번 연속으로 전극을 세척합니다.
   5. 3.4.1 단계에 따라 PDMS 막을 새 멸균 시트로 교체하세요.
   6. 엘라스토머 실란트를 다시 도포하고(3.4.3–3.4.4단계), 3D 프린팅된 새 보호 캡을 부착하세요(3.4.5단계).
   7. 다시 밀봉한 조립체를 5분간 자연 건조시킨 후 쥐를 다시 우리 우리로 돌려보내세요. 이 절차는 몇 주에 걸쳐 여러 차례 녹음 세션에 걸쳐 반복될 수 있습니다.

결과

성공적인 수술은 피질에 투명하고 투명한 창을 제공하며, 혈관이 눈에 띄고 염증이나 감염의 징후가 최소화됩니다. 이 선명도는 21일 이상 유지할 수 있어 장기 종단 연구가 가능합니다. 임플란트의 견고함은 설치류에서 우울증과 유사한 상태를 유도하는 일반적인 모델인 21일 만성 코르티코스테론 투여 패러다임 내내 안정을 유지하는 능력으로 입증됩니다^{10, 23, 24}. 이는 만성 질환 모델링에 이 방법이 적합함을 확인시켜 줍니다.

만성 창을 통해 기록된 원시 전기생리학적 신호는 종단 시간 전반에 걸쳐 높은 품질을 유지합니다. 대표적인 광대역 μECoG 추적 샘플은 후비장 후반 격자에서 샘플링한 것과, 동시에 표...

토론

이 보고서는 쥐에서 크고 만성적이며 재밀봉 가능한 두개골 창을 만드는 신뢰할 수 있고 매우 효과적인 방법을 제공하는 2단계 경막 보존 수술 프로토콜을 상세히 설명합니다. 이 기법의 중요성은 창문의 크기를 넘어섭니다. 주요 장점은 대규모 뇌 네트워크를 종단 시간 척도에 걸쳐 동시적이고 다규모로 탐색할 수 있다는 점입니다. 표면 μECoG 그리드(중규모 LFP 데이터 제공)와 깊고 고밀도의 두개내 전극 탐침(미시적 층 분해 단일 단위 및 LFP 데이터 제공)을 결합함으로써, 연구자들은 예를 들어 심부 DMN 노드 내의 특정 회로 활동이 피질에서 관측되는 네트워크 수준의 역학에 어떻게 기여하는지 직접 조사할 수 있습니다. 또한, 이 방법은 마우스 뇌의 대부분에 접근할 수 있어 대규모 네트워크에 적합합니다.

프로토콜의 성공에 근본적인 두 가지 측면이 있습니다. 첫째, 수술을 48시간의 회복 기간으로 나누어 두 단계로 나누는 것...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
µ ECoG 어레이 & mdash; 512채널 커스텀 (2 & times; 256채널)	뉴로넥서스	E256-200-30-80	포장: IH256. 두 번의 16시간 넘게 되고; 16개의 하위 격자(각각 3.3mm 및 3.5 mm); 200 & mu; m 음정; 80 & mu; 전극 직경 m. 표면적인 DMN 녹음.
3축 왼쪽 마이크로매니퓰레이터 팔	월드 프리시전 인스트루먼트(WPI)	504926	10 & 뮤; m 해상도; 디지털 디스플레이; 수술 중 헤드플레이트/프로브 위치 조정에 사용됩니다
3D 프린팅 보호 캡	사내 (Anycubic Photon Mono 4K)	해당 없음	맞춤형 디자인; Anycubic High Clear UV 수지로 인쇄; STL 파일은 https://github.com/RazBalin/ProtectiveDMN_Cap 에서 이용 가능합니다
아세톤 (실험실 등급)	시그마-올드리치	179973	접착 전 두개골 표면 탈지 및 골막 제거
애드슨 듀라 훅 5mm (파인 듀라 훅)	gSource	gS 25.2570	뼈판을 경막에서 분리하는 데 사용; 고운 텅스텐 와이어나 이와 유사한 재료로 만들어졌습니다
Anycubic 하이 클리어 UV 레진	애니큐빅	STMGCL-102B	Anycubic Photon Mono 4K 프린터와 함께 3D 프린팅 보호 캡에 사용되는 광고분자 수지
Anycubic Photon Mono 4K 3D 레진 프린터	애니큐빅	포톤-모노-4K	Anycubic High Clear Resin에서 보호 창문 캡을 출력하는 데 사용됨
Anycubic UV 레진 워시 & 큐어 머신 2.0	애니큐빅	285-550	3D 프린팅 캡의 사후 세척 및 UV 경화
자기 베이스를 가진 관절 암(및 시간; 2)	하스 툴링	09-0535	예전에는 미세하게 잡아; 기록 중 피질 표면에 설치된 ECoG 서브그리드
인공 뇌척수액(aCSF)	내부 준비	해당 없음 (사내 보험)	aCSF 조제법: 124 mM NaCl, 3 mM KCl, 26 mM NaHCO3, 2 mM CaCl2, 1 mM MgSO4, 1.25 mM KH2PO4<서브>, 10 mM D-포도당; 준비 직후 95% O2 / 5% CO2 산소를 첨가합니다. 카탈로그 번호는 별도로 기재되어 있습니다.
둔한 미세외과 칼날(원형 메스) & nbsp;	이오겐	374769	두개골 표면 긁기 및 모자 제거에 사용됩니다
부프레노르핀 (템제식)	인디비어	BE-112515	오피오이드 진통제; 수술 전 0.05 mg/kg s.c.
C57BL/6JRj 마우스	잰비에 연구소		남성 또는 여성 모두; 최소 10주 이상 생후 상태, 수술 당시 체중 >20g
염화칼슘 이하이드레이트 (CaCl2 · 2H<서브>2O)	시그마-올드리치	C-7902	2 mM; 월수 147:02; 0.29 g/L. Ca 및 시간으로 준비; 100 주식. 사내 aCSF의 구성 요소입니다.
카프로펜 (리마딜)	조에티스 동물 건강	RXRIM-INJ	NSAID 진통제; 수술 전 5 mg/kg S.C.
코르티코스테론	시그마-올드리치	C2505	21일 만성 스트레스/우울증 모델에서 식수에 용해됨
면봉	그리고 nbsp; 피셔브랜드	그리고 nbsp; 22-363-157	30G 경막 천자기와 두개골 표면의 아세톤 탈지 처리를 위한 손잡이 역할을 합니다
시아노아크릴레이트 접착제 및 mdash; 록타이트 401	헨켈 접착제	록타이트 401	얇은 점도의 시아노아크릴레이트; 두개골 표면 프라이밍, 헤드플레이트 및 캡 고정에 사용됩니다
치과 드릴과 mdash; 포어돔 K.1070	포어돔	K.1070	유연축 회전 드릴; 두개골 절개술 소량 및 파일럿홀 드릴링에 사용됩니다
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D-포도당	시그마-올드리치	G-7021	10 mM; 월수: 180.20; 1.80 g/L. 포도당 및 시간으로 준비됨; 100 주식. 사내 aCSF의 구성 요소입니다.
드릴 비트 스틸 버 라운드 1/007W	헤이거 & 마이징어	18089	참조 부위와 두개골 창에 사용됨
에탄올 80% (v/v) - A12t 디루투스	베르너	13221132	수술 기구와 멸균을 위한 외과용 층층 후드의 수술 전 담임
가스 배출 장치	RWD 생명과학	R546W	청소부는 수술 부위에서 마취 가스를 낭비시킵니다
금도금 기준 소켓	디지키	310-13-102-41-001000	좌소뇌 위에 이식됨; ECoG 접지/기준 역할을 합니다
GRANT 초음파 세척기 & 대시; 모델 17002A	그랜트 악기	17002A	이안: 4064343191654. 온수 초음파 목욕; TICKOPUR TR 3와 함께 기기 청소에 사용됩니다
온열 패드 & 대시도; 슈퍼테크 TMP-5B	슈퍼테크	TMP-5B	체온을 37도 이하로 유지합니다; 마취 내내 C
이소플루란	피라말 헬스케어	66794-017-25	흡입 마취제; 유도율 4%, 유지 1.5% & Ndash; 2.5%
Kimtech Science, 정밀 물티슈 (비섬유성 조직)	킴벌리 클라크	7552	뾰족한 끝과 함께 사용해 잔여 ACSF를 건조시키고 PDMS 막이 경막에 부착되도록 돕습니다
퀵-캐스트 멸균 엘라스토머 실란트	월드 프리시전 인스트루먼트(WPI)	쾅-캐스트	모델: KWIK-CAST-S. 생체 적합성 실리콘; PDMS 막 주변에 탈착 가능한 밀봉을 만드는 데 사용되었습니다.
LED UV 경화 펜 405nm	큐어UV	514424-405	임플란트 중 자외선 활성화 치아 시멘트(Total C-Ram)를 경화시키는 데 사용됨
리도카인-에피네프린 용액	오리온 파마	05 10 31	국소 마취; 두피 피부 아래 S.C. 주사
황산마그네슘 헵타하이드레이트 (MgSO4 · 7H2O)	시그마-올드리치	M-7774	1 mM; 월수 246.48시간; 0.25 g/L. Mg 및 시간으로 준비; 100 주식. 사내 aCSF의 구성 요소입니다.
금속 헤드플레이트와 mdash; 뉴로타르 모델 13	뉴로타르	모델 13	티타늄 헤드플레이트; 직경 11mm의 원형 개구부; 두개골에 시아노아크릴레이트와 치아 시멘트로 부착했다
뉴로넥서스 헤드스테이지 어댑터 :)	뉴로넥서스	커스텀 IH256 64시간 이상; 4 몰렉스	맞춤형 어댑터 보드; 샌드위치와 마이크로; 두 대의 Intan RHD 128채널 헤드스테이지 사이의 ECoG 서브그리드
금속 캡이 있는 Neuropixels 1.0 프로브(× 2)	IMEC	PRB_1_4_0480_1_C	960개의 녹음 장소; 10mm 샹크. 한 탐침은 해마-시상-시상 기둥을, 다른 하나는 mPFC 기둥을 표적으로 합니다
NI PXIe-1083 섀시	내셔널 인스트루멘츠	PXIe-1083	9슬롯 PXI Express 섀시, Neuropixels 모듈과 NI DAQ 카드를 수용
NI PXIe-3839 다기능 입출력 모듈	내셔널 인스트루멘츠	PXIe-3839	NI PXIe-1083 섀시에 장착됨; 동기화 및 보조 I/O에 사용됩니다
NI PXIe-6363 다기능 DAQ	내셔널 인스트루멘츠	PXIe-6363	NI PXIe-1083 섀시에 장착됨; 동기화를 위한 아날로그 및 디지털 I/O
노바 마이크로시네레이터 -  적외선 살균기	아르고스 테크	S3022	노출된 뇌 조직에 닿을 수 있는 모든 기구를 신속히 멸균하는 데 사용됩니다
올림푸스 SZ51 입체 쌍안현미경	올림포스	SZ51	외과적 시각화; 두개골 절개술과 착상 과정 전반에 걸쳐 사용됩니다
오픈 Ephys 획득 보드 (One Box, 1세대)	오픈 에피스	OEPS-9029	수신 및 마이크로; SPI를 통한 ECoG 데이터 스트림; 오픈 소스 하드웨어. 참고 open-ephys.org
Ephys GUI 오픈	오픈 에피스	해당 없음 (오픈소스)	무료 오픈소스 전기생리학 획득 소프트웨어입니다. 이용 가능한 곳: open-ephys.org
염화칼륨(KCl)	시그마-올드리치	P-5405	3 mM; 월수 74시 55분; 0.22 g/L. 사내 aCSF의 구성 요소.
이수소 인산칼륨 (KH2PO4)	시그마-올드리치	P-5655	1.25 mM; 월수 136.09; 0.17 g/L. 사내 aCSF 성분(클렙스 및 시각; 10 스톡).
포비돈-요오드 용액(베타딘)	다케다	45 70 28	수술 현장 준비를 위한 국소 소독제
PXIe 획득 모듈	뉴로픽셀	PXIE_1000	Neuropixels 1.0 데이터 수집용 PXI 포맷 모듈; NI PXIe-1083 섀시에 장착됨
참조 소켓 커넥터	디지키	342-10-102-00-591000	위의 참조 소켓에 해당하는 맞물림 커넥터; DigiKey로 부품 번호를 확인하세요
RHD 128채널 헤드스테이지(및 시간; 4)	인탄 테크놀로지스	RHD 128	각 &마이크로 헤드스테이지 두 개; ECoG 서브그리드; 모델 확인(예: RHD2132 또는 RHD2164)
RHD SPI 인터페이스 케이블, 0.9m	인탄 테크놀로지스 / 오픈 에피스	C3203	오른쪽 헤드스테이지와 오픈 Ephys 획득 박스를 연결하는 표준 SPI 케이블
후륜구동 에어펌프	RWD 생명과학	R510-29	마취 회로를 통한 공기 흐름 제공
후륜구동 동물 마취 증기	RWD 생명과학	R5835	마취 유도 및 유지를 위한 정밀 아이소플루란 증기화
메스 칼날 #11	스완 모튼	SM0103	접착력을 높이기 위해 두개골 표면에 십자형 무늬를 새기는 데 사용됩니다.
작은 동물 헤어 트리머 - GT416	아스쿨랍 셰르마시넨 GmbH	D-98528H	수술 전 동물 두피 다듬기에 사용됨
중탄산나트륨 (NaHCO3)	시그마-올드리치	S-5761	26 mM; 월수 84시 01분; 2.18 g/L. 사내 aCSF의 구성 요소.
염화나트륨(NaCl)	시그마-올드리치	S-5886	124 mM; 월수 58시 44분; 7.25 g/L. 사내 aCSF의 구성 요소.
SOL-M (멸균 주사기 30G)	솔-밀레니엄 유럽	113005	90도 휘어짐; 끝에 부착하여 면봉에 부착하여 경막 천공 장치를 만듭니다
표준 매니퓰레이터 암, 3축 왼쪽 (스톨팅)	스톨팅 컴퍼니	51604	녹음 세션 중 뉴로픽셀 프로브 삽입에 사용됩니다
표준 매니퓰레이터 암, 3축 우측 (스톨팅)	스톨팅 컴퍼니	51606	녹음 세션 중 뉴로픽셀 프로브 삽입에 사용됩니다
입체정관 프레임 및 mdash; 후륜구동 F67001	RWD 생명과학	F67001	표준 입체 타격 프레임; 머리 안정화 및 좌표 참조 임플란트 삽입에 사용됩니다
자와 자인 수술용 마커 스킨펜 (바이올렛 잉크)	패닌	SM0372	생체 적합성 겐티안-바이올렛 기반 외과용 피부 표지자를 사용하여 계획된 두개골 절개술과 뼈에 임플란트 발자국을 제시했습니다. 시아노아크릴레이트 프라이밍에 저항하며(록타이트 401), 두개골 탈脂 및 머리 고정 시술을 통해 입체 좌표를 뼈 표면에 신뢰성 있게 전달할 수 있습니다.
SYLGARD 184 실리콘 엘라스토머 키트 (PDMS)	다우 (독일)	1673921	폴리디메틸실록산; 얇게 캐스팅 (< 1 mm) 막; 뇌를 보호하기 위해 경막 표면에 놓입니다
테르가자임 효소 세제	알코녹스	1304-1	프로테아제 기반 세정제는 미지근한 RO 물에 1% 비율(w/v)로 사용되어 세션 후 전극 세척(45분 담근 후 정제수에 3번 헹궈 사용).
Total C-RAM Automix UV 덴탈 시멘트 (흰색)	이테나	R301950	모델: TTCRAM-BLC. 자외선 경화 가능한 치과용 수지; 헤드플레이트 보강 및 소켓 고정에 사용됩니다
초음파 세척 용액 (TICKOPUR TR 3)	Dr. H. Stamm GmbH	TR-3-913	구연산 기반 농축액; 수술 후 기구 세척을 위한 초음파 욕조에 사용됩니다
비스코티어스 아이 젤 2 mg/g	알콘	503849	카보머 기반 윤활 연고; 마취 중 각막에 적용하여 건조를 방지하는 방법
자이스 콜드 라이트 소스 KL1500 LCD	칼 자이스	KL1500 LCD	수술 현장을 위한 광섬유 냉조명; 열 손상을 방지합니다