방법 논문

Drosophila melanogaster의 눈-더듬이 및 날개 상상 디스크의 소규모 해부 및 항체 염색

132 조회수

⸱

DOI:

10.3791/70434

⸱

2026년 5월 15일

 , 
1Department of Developmental and Cell Biology, Charlie Dunlop School of Biological Sciences, University of California, Irvine, 2Department of Microbiology and Molecular Genetics, University of California, Irvine

이 논문에서

요약

이 글에서는 시약을 경제적으로 사용하고 소수의 상상 디스크를 쉽게 다룰 수 있는 효율적인 상상 디스크 해부 및 항체 염색 프로토콜을 설명합니다.

초록

초파리 상상 디스크는 오랫동안 상피 발달, 패턴 형성, 재생 모델로 연구되어 왔습니다. 해부된 상상 디스크의 항체 표지 및 영상 촬영은 단백질 발현 패턴을 발달 및 생리적 과정의 표지자로 시각화하는 데 중요합니다. 이 상상 디스크 해부 및 표지 방법은 원래 Tomlinson과 Ready에 의해 안-더듬이 상상 디스크의 면역전자현미경을 위해 개발되었습니다. 60마이크로웰 플레이트를 사용하고, 용액 간 조직을 옮기는 대신 조직을 옮기는 방식으로 조직 샘플에 대한 개별 주의를 최소화하여 매우 적은 낭비를 가능하게 합니다. 심지어 단일 상상 디스크도 처리할 수 있습니다. 이 방법은 소량의 항체와 기타 시약만을 필요로 합니다. 이 방법이 다른 작은 조직에 적용되는 예로, 이 글은 날개 상상 디스크도 같은 방법으로 해부하고 라벨링할 수 있음을 보여줍니다. 유사한 접근법은 유사한 크기의 작은 조직뿐만 아니라 항체 염색 외의 다른 조직화학적 및 표지 절차에도 적용할 수 있습니다.

서론

초파리 상상 디스크는 배아 발생 시 분리되어 유충 내에서 분화 없이 성장하는 전구 조직으로, 번데기1단계에서 성체 표피 구조에 기여합니다. 그들의 연구는 발달 패턴 메커니즘에 대한 많은 통찰을 제공했으며, 특히 눈과 날개의 상상 디스크가 잘 연구되었습니다 2,3,4,5,6. 면역조직화학은 상상 디스크에서 유전자 발현의 공간적·시간적 패턴을 조사하고, 세포 분열과 세포 사멸을 포함한 세포 행동을 특성화하는 데 특히 유용합니다.

항체 표지된 눈 상상 디스크의 전자현미경 분석이라는 추가 요구를 용이하게 하기 위해, 톰린슨과 레디는 시약에 대해 특히 경제적이고 매우 높은 신뢰성과 맞춤화를 제공하는 소규모 프로토콜을 개발했습니다. 그들의 방법은 인쇄물에 설명되어 있으나, 영상은 제공되지 않습니다 3,8,9. 이 방법은 다른 상상 디스크(또는 다른 조직)의 라벨링에 쉽게 수정되며, 눈-더듬이 상상 디스크 외에도 날개 상상 디스크에도 적용할 수 있습니다.

초파리 상상 디스크의 항체 표지는 모든 조직에 적용 가능한 일반적인 윤곽을 따릅니다10(그림 1). 조직은 관심 단백질에 특이적인 항체로 해부하고 고정하여 배양해야 합니다. 결합되지 않은 항체가 씻겨 나간 후, 표지된(종종 형광) 2차 항체가 첨가되어, 1차 항체에 결합하고, 1차 항체는 고정된 조직 내 관심 단백질에 결합합니다. 결합되지 않은 2차 항체를 제거하기 위해 세척한 후, 조직을 현미경으로 부착하여 관심 단백질을 시각화할 수 있습니다. 이 과정에 대한 일반적인 설명은 많이 있으며, 상상 디스크와 다른 초파리 조직에도 적용할 수 있습니다11. 여기서는 Tomlinson & Ready 방법에 대한 프로토콜이 제공되는데, 이 방법은 조직 샘플을 마이크로웰 플레이트의 작은 배양 웰 사이에서 개별적으로 옮기고, 각 단계마다 입체 현미경으로 관찰하는 방식입니다(그림 2). 이 방법은 한 번에 소수의 조직(수십 개 샘플)을 염색하는 데 가장 적합하며, 수백 개의 대량 배치에는 이상적이지 않습니다. 이 방법은 각 웰에 13 μL의 소량 용액만 필요하므로 매우 적은 항체로도 수행할 수 있습니다. 조직 손실이 최소화되기 때문에 최소 샘플 크기가 없으며, 단일 상상 디스크도 신뢰성 있게 처리할 수 있습니다.

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프로토콜

시약과 사용된 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.

1. 전송 도구 제작

  1. 펜치로 0.005" 직경 ~2.5cm 정도의 텅스텐 와이어를 잘라주세요. 핀셋을 사용해 와이어의 한쪽 끝을 갈고리나 고리로 만듭니다(그림 3). 다른 쪽 끝을 바늘 홀더에 꽂으세요. 이 방법은 액체 이동이 거의 없거나 전혀 없도록 디스크를 옮기는 데 사용됩니다. 루프가 두 가지 중 사용이 더 쉬울 수 있지만, 갈고리는 용액 간 액체 전달량이 적습니다.

2. 눈-더듬이 상상 디스크 해부 및 고정

  1. 유충을 60mm 직경의 페트리 접시에서 ~7.5 mL 0.1 M 인산나트륨 완충제(pH7.2)로 세척하여 파리 매체나 기타 이물질을 제거합니다. 눈-더듬이 디스크가 아닌 날개 상상 디스크 해부에 대해서는 6단계를 참고하세요. 이 상상 디스크 두 곳은 신체의 앞쪽 부분에 위치해 있습니다(그림 4).
    참고: PBS는 2.1–2.3 단계에서는 인산 버퍼 대신 사용할 수도 있습니다.
  2. 유충을 신선한 완충제가 들어있는 페트리 접시로 옮깁니다.
    참고: 일부 일꾼은 60mm 페트리 접시에서 단일 버퍼 방울로 개별 유충을 해부하는 것을 선호합니다; 다른 사람들은 우울증 웰 슬라이드를 사용합니다.
  3. 해부 현미경으로 관찰할 때는 유충을 몸의 5~50% 정도 겸자로 잡아주세요. 두 번째 가는 겸자를 사용해 입 갈고리를 잡고 당기세요. 눈 더듬이 원반이 입 부분에 붙어 나옵니다. 뇌는 또한 안구 디스크에 붙어 있을 수도 있습니다.
  4. 와이어 도구를 사용해 해부한 조직을 직경 35mm의 작은 페트리 접시(예: 3.7% 포름알데히드를 0.1M 인산나트륨 완충제(pH7.2)에 넣은 작은 페트리 접시로 옮기세요. 이 용액은 37% 포름알데히드 정액을 완충제에 희석하여 만듭니다.
    참고: 포름알데히드 취급 시 현지에서 승인한 안전 절차를 따르세요. 3.7% 포름알데히드는 단순한 고정제로 많은 경우 만족스럽지만, 특정 항원에는 다른 고정제가 최적일 수 있습니다. PBS 또는 PEM(0.1 M PIPES pH 7.0, 2 mM MgSO4, 1 mM EGTA)은 0.1 M 인산나트륨 대신 고정 완충제로 사용될 수 있으며, 농축된 정액 대신 고체 파라포름알데히드를 용해하여 얻을 수도 있습니다. 고정제인 파라포름알데히드-라이신-피로데이트(PLP)는 부드러운 단백질 고정과 탄수화물 가교결합을 결합하여 막 구조를 더 잘 보존합니다12. 예를 들어, 초파리 당단백질인 스카브러스는 PLP 고정 후에는 항원성을 유지하지만, 포름알데히드 고정 후에는 그렇지 않습니다. PLP를 신선하게 준비하세요: (1) 25mL 이온수 25mL에 파라포름알데히드 분말 2g을 원뿔형 플라스크에 넣고 연기 후드에서 약한 불로 저어줍니다; (2) 피펫을 50% 수산화나트륨 용액에 담근 후 액체의 미량(한 방울보다 훨씬 적은 양)을 혼합물에 옮깁니다. 파라포름알데히드는 용액이 끓지 않고 몇 분 내에 녹아야 합니다. 8% 포름알데히드 용액을 냉각하는 동안 0.36g 라이신을 10 mL 탈이온수, 7.5 mL 0.1 M 인산나트륨 pH 7.2, 2.5 mL 0.1 M Na2HPO4 에 녹이고 얼음 위에 보관합니다. 이 냉 완충 라이신 용액 15mL를 신선한 8% 포름알데히드 5mL와 50mg 생류나트륨 50mg을 50mL 스크류캡 튜브에 섞어 소용돌이 작용으로 혼합한 후 신선하게 사용하세요.
  5. 상온에서 15–20분 후, 해부한 조직을 0.1 M 인산나트륨 완충제(pH 7.2)가 포함된 또 다른 페트리 접시로 옮깁니다.
    참고: PBS는 인산 버퍼 대신 사용할 수도 있습니다. 일부 항원이나 조직 내 내인성 GFP 또는 RFP의 형광을 영상화하고자 할 때는 얼음 고정이 더 바람직할 수 있습니다. PLP 고정은 항상 얼음 위에서 45분간 해야 합니다.

3. 1차 항체를 이용한 차단 및 인큐베이션

  1. 조직을 35mm 페트리 접시에 ~3 mL NSG 항체 세척 완충제를 넣어 차단합니다. 페트리 접시를 얼음 위에 최소 15분간 배양하세요. NSG는 0.1M 인산나트륨 완충제(pH 7.2), 0.1% 사포닌, 5% 일반 염소 혈청입니다. 세척 완충 스톡은 4°C에서 필터 멸균된 상태로 보관됩니다.
    참고: 특정 항체에 따라 최적의 워시 버퍼가 있을 수 있습니다. 예를 들어, 사포닌은 순한 비이온 세제로서 형질막을 특히 용해시키는 반면, 핵 내 항원을 검출하는 데는 다른 세제가 더 적합할 수 있습니다. 추가로, Jarman 등이 핵 무조성 단백질에 대해 개발한 항체는 NP40을 세제로 함유한 버퍼에서 가장 면역반응성이 높습니다. 대체 세척 완충제인 PDT, PBT, NSG의 레시피는 재료표를 참조하세요. 정상 혈청을 차단 단백질로 사용할 때는 이상적으로는 2차 항체가 생성되는 종에서 유래해야 합니다. 예를 들어, 염소 2차 항체를 사용할 경우 정상 염소 혈청을, 당나귀 2차 항체를 사용할 경우 일반 당나귀 혈청을 사용합니다. 실제로는 큰 차이가 없습니다.
  2. 좁은 겸자를 사용해 차단 시, 입 갈고리를 제외한 눈-더듬이 상상 디스크에 남은 원치 않는 조직을 제거하세요. 지금은 입 부품을 붙여 옮기기 편하게 하세요.
    참고: 뇌와 같은 불필요한 조직도 슬라이드 장착(단계 5.4)까지 방치할 수 있으나, 착색이나 가시성에 방해가 되지 않는 한 그대로 두세요.
  3. 차단 시에는 NSG에 mAb40-1a 항체 용액을 1:100 희석하여 준비하는데, 예를 들어 100 μL NSG에 1 μL 항체를 투여합니다. 피펫팅으로 섞으세요, 소용돌이 추출이 아닙니다.
    참고: mAb40-1a는 베타-갈락토시다제에 대해 생성되는 단클론 항체입니다. 최적의 항체 희석과 세척 완충제는 사용되는 특정 항체에 따라 다릅니다.
  4. 60웰 마이크로웰 미니트레이의 첫 번째 열에 최대 6개의 웰 각각에 13 μL 항체 용액을 추가합니다. 직선형 변을 가진 원뿔형 마이크로웰은 광학 선명도를 위해 중요합니다. 6개 이상의 웰이 필요하면 두 번째 미니트레이를 시작하세요.
  5. 입 부분에 부착된 눈-더듬이 상상 디스크를 와이어 루프나 훅을 이용해 1차 항체 용액에 하나씩 옮깁니다.
    참고: 각 웰에 추가할 수 있는 상상 디스크의 수는 항체에 따라 다릅니다. 조직이 너무 많으면 일부 항체가 저하되어 표지가 약해질 수 있습니다. 유정당 5쌍이 보통 만족스럽습니다. 따라서 ~60 디스크는 60웰 마이크로타이터 플레이트 6행을 사용하여 쉽게 라벨링할 수 있습니다. 각 행마다 다른 항체를 사용할 수 있습니다. 항체 용액이 재사용될 수 있는지는 각 사례에 대한 실증적 검증이 필요하며; 우리 연구실에서는 일상적인 일이 아닙니다.
  6. 플레이트를 뚜껑으로 닫고 파라필름으로 밀봉해 증발을 제한하세요. 얼음 위나 4°C에서 4시간에서 하룻밤까지 부화하세요. 흔들리는 것은 필수가 아닙니다.
    참고: 항체 배양의 최적 시간과 온도는 항체에 따라 다릅니다. 많은 경우 상온에서 1–2시간이면 충분하지만, 일부 항체는 4°C에서 배양 후 더 나은 결과를 보일 수 있으며, 4°C에서 하룻밤 배양하는 것이 편리할 수 있습니다. 극히 드문 경우에는 2–3일간의 1차 항체 인베이킹이 최적일 수 있습니다. 마이크로웰 뚜껑을 밀봉하는 것은 ~4시간 이상 부화할 때만 필요합니다.

4. 2차 항체로 세척 및 배양

  1. 각 항체 웰 후 다음 세 개의 웰 기둥에 13 μL의 NSG 버퍼를 추가하며, 샘플은 세 번 세척됩니다. 샘플을 각 웰에서 차례로 5분간 세척합니다.
  2. 세척 중에는 NSG 버퍼에서 형광 결합 2차 항체를 1:200–400 희석액으로 준비하는데, 예를 들어 100 μL NSG에 0.5 μL 항체를 투여합니다. 피펫팅으로 섞으세요, 소용돌이 추출이 아닙니다. 희석 전에 2차 항체 스톡 용액을 최대 속도로 60초간 원심분리하여 희석하세요. 항체 응집체가 조직 표면에 비특이적으로 결합할 수 있기 때문입니다.
    참고: 최적의 2차 항체 희석량은 제조사에 따라 다를 수 있습니다. 알렉사 또는 시나닌 결합 항체는 여러 표지를 용이하게 하기 위해 다른 종에 대해 차감할 수 있습니다.
  3. 다음 5번째 기둥에 2차 항체 용액 13 μL을 추가합니다.
  4. 루프나 훅을 사용해 샘플을 2차 항체로 옮깁니다.
  5. 플레이트를 뚜껑으로 닫고 파라필름으로 밀봉해 증발을 제한하세요. 얼음 위에 4시간 밤 부양하세요.
    참고: 항체 배양의 최적 시간과 온도는 항체에 따라 다릅니다. 많은 경우 상온에서 1–2시간이면 충분하지만, 일부 항체는 4°C에서 배양 후 더 나은 결과를 보일 수 있으며, 4°C에서 하룻밤 배양하는 것이 편리할 수 있습니다. 마이크로웰 뚜껑을 밀봉하는 것은 ~4시간 이상 부화할 때만 필요합니다.

5. 현미경 촬영을 위한 조직 세척 및 마운팅

  1. 2차 항체 웰 이후 13 μL NSG로 다음 세 개의 웰 기둥을 준비합니다. 샘플을 각 우물에 5분간 옮깁니다.
  2. 샘플을 9번째 웰에서 0.1M 인산나트륨 완충제(pH 7.2)의 13 μL 최종 세척으로 옮깁니다. 이 버퍼 세척은 마운팅 매체 내에서 침전되는 성분이 포함된 워시 버퍼에 필요할 때 필요합니다.
  3. . 마지막 10번째 기둥에 13μL의 마운팅 매개체를 추가합니다. 마운팅 매체는 2% n-프로필 갈레이트를 75% 글리세롤과 25% 0.1M 인산나트륨 버퍼(pH 7.2)에 녹여 만듭니다. 매주 회전하는 플랫폼 위에서 재료를 혼합하여 신선한 마운팅 매체를 준비하세요. 사용 전에 기포가 사라질 때까지 기다려 주세요.
    참고: 마운팅 미디어는 상업적으로도 판매되고 있습니다.
  4. 깨끗한 현미경 슬라이드에 20 μL 마운팅 매개체를 피펫 넣습니다. 샘플을 슬라이드의 배지에 옮기세요. 이것은 원치 않는 조직을 제거할 마지막 기회입니다. 눈 더듬이 디스크에서 큐티컬 입 부분을 제거해야 합니다.
  5. 커버 글라스를 덮어도 샘플이 떠다니지 않도록 배열하려면 와이어 도구를 사용해 마운턴트 주액에서 샘플을 끌어내세요. 깨끗한 #1.5 두께의 22mm x 40mm 덮개 유리를 겸자로 슬라이드에 부드럽게 내리면, 기포가 생기지 않습니다.
  6. 슬라이드를 1시간 동안 골판지 슬라이드 홀더에 넣어 마운팅 매체가 안정되도록 하세요. 슬라이드를 건드리지 마세요. 유리가 움직이면 깨지기 쉬운 샘플이 손상될 수 있습니다.
  7. 커버 유리가 가라앉으면 매니큐어로 가장자리를 밀봉하세요. 이 작업은 하지 마세요. 매니큐어는 영상 촬영 전에 최소 1시간 정도 건조시키세요.
    참고: 안타깝게도 대부분의 화용 매니큐어는 유리 슬라이드에 고르게 퍼지지 않는 용매를 사용해 유용하지 않기 때문에, 과학적인 매니큐어를 구해야 합니다.
  8. 슬라이드는 4°C에서 보관하세요. 샘플은 보통 몇 달 동안 이미징 및 재이미징이 가능합니다.
    참고: 슬라이드는 -20°C에서도 보관할 수 있습니다.

6. 날개 상상 디스크 해부 및 고정

  1. 눈-더듬이 상상 디스크 대신 날개 상상 원반을 해부하려면, 위의 2.3–2.5 단계 대신 아래 단계를 따르세요.
  2. 해부 현미경 아래에서 유충 입 부분을 가늘게 겸자로 잡으세요. 미세해부 가위를 사용해 유충을 앞쪽에서 30%에서 40% 정도 아래로 반으로 나눠 분리합니다.
  3. 유충의 앞쪽 부분을 두 번째 겸자로 벌리고 머리와 입 부분을 밀어 넣어 양말을 뒤집는 것과 유사하게 뒤집습니다
  4. 포세프를 사용해 뒤집힌 앞쪽 유충을 고정제로 옮겨 작은 페트리 접시(직경 35mm, 약 2.5mL, 예: 3.7% 포름알데히드를 0.1M 인산나트륨 완충제(pH 7.2)에 넣어 37% 포름알데히드 정액을 PBS에 희석하여 만듭니다.
    참고: 필요 시 뒤집힌 도체를 마이크로퓨지 튜브 내 400 μL 고정제로 옮길 수 있어, 휨 후드에서의 고정이 용이합니다. 눈 상상 디스크 고정에 사용할 수 있는 동일한 고정제 옵션은 날개 디스크 고정에도 적용됩니다(2.4단계 주의 참고). 눈-더듬이 상상 디스크의 최적의 고정 및 라벨링은 보통 날개 디스크와 동일합니다.
  5. 상온에서 15–20분 후, 해부한 조직을 0.1 M 인산나트륨 완충제(pH 7.2)가 포함된 또 다른 페트리 접시로 옮깁니다.
    참고: 눈 상상 디스크 고정에 사용할 수 있는 동일한 세척 버퍼 옵션은 날개 디스크 고정에도 적용됩니다(2.4단계 주의사항 참조). 눈-더듬이 상상 원반을 표시하는 최적의 세척 버퍼는 보통 날개 원반에 대해 동일합니다.
  6. 유충의 날개 디스크는 가는 겸자로 제거하세요. 아직 남아 있다면, 작은 할터레 디스크와 다리 디스크를 지금 제거하거나 날개 디스크에 붙여 이식을 용이하게 할 수 있습니다.
    참고: 날개 디스크는 지방 몸이나 다른 조직을 제거하기 전까지는 시체에서 쉽게 보이지 않을 수 있습니다(제거 전에 반드시 조직을 식별하세요). 날개 원반은 가장 큰 상상 원반으로, 기관과 밀접하게 연관된 체벽에 부착되어 있습니다. 이들은 남아메리카1 호(그림 4)의 윤곽과 같은 물방울 모양을 가지고 있습니다.
  7. 위와 같이 3–5단계를 진행하세요.

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결과

톰린슨 앤 레디 시술은 정기적으로 우수한 항체 염색 결과를 보여줍니다. 여기서는 눈, 더듬이, 날개 상상 원반이 세 겹으로 표시되어 있습니다. 그림 5A에서는 3령 안-더듬이 상상 디스크가 삼중 표지되어 전사 인자 Senseless(파란색), 신경 전구체 표지 Elav(빨간색), 그리고 Ocho 전사체의 RNAi를 발현하는 세포 클론의 항GFP 표지(녹색)를 검출합니다. 그림 5B에서는 TIE-DYE 시스템을 사용하여 3기 날개 상상 디스크가 표지되었으며, 이 시스템은 독립적으로 클론 계통을 항GFP(녹색), 항-ß-갈락토시다제(파란색), 그리고 RFP 단백질의 내인성 형광(빨간색)을 표지합니다14. 이러한 연구들은 여러 유전자형이 세포 성장과 결정에 미치는 영향을 조사하는 데 사용되어 왔으며, 예를 들어...

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토론

톰린슨 앤 레디 방법을 이용한 60웰 원뿔형 웰 플레이트를 이용한 초파리 조직의 항체 염색은 각 조작 시 해부 현미경으로 각 상상 디스크를 추적하여 매우 신뢰할 만한 결과를 얻습니다. 이 방법은 소량의 항체 시약만으로 충분하며, 샘플을 거의 사용하지 않는 액체를 포함해 각 단계마다 용액 교환이 더 완전하게 이루어집니다. 특히 샘플을 개별 관찰하지 않는 대량 방법에서는 쉽게 손실되거나 손상될 수 있는 적당한 수의 샘플을 처리하는 데 적합합니다. 이 방법은 특히 다음과 같은 경우에 유용합니다: (1) 샘플 수가 적은 경우, 예를 들어 (i) 해당 유전자형을 얻기 어렵거나, (ii) 유충이 개체 수가 제한되는 실험적 처리를 받았을 경우; (2) 샘플은 개별적으로 처리되어야 하며, 예를 들어 동일 개체의 좌우 디스크에 서로 다른 항체를 붙이거나, 같은 개체의 눈 더듬이 및 날개 디스크를 라벨링해야 합니다; (3) 여러 샘플을 병렬로 처리해야 합니다. 예를 들어...

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공개 사항

저자들은 상충하는 이해관계가 없다고 선언한다.

감사의 글

NEB는 방법을 공유해준 앤드류 톰린슨과 개선된 루시 퍼스에게 감사를 표합니다. 그림 5A를 제공해 주신 Abhishek Bhattacharya에게 감사드립니다. 조이너 크루즈, 조나단 곤잘레스, 첼시 응우옌, 젠슨 노스럽에게 감사드립니다. 저자 연구실의 연구는 NIH(GM120451 및 CA284362)의 연구비로 지원받고 있습니다. 그림 2 와 그림 4 는 Biorender로 제작되었습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
인산나트륨피셔7558-79-4Na2HPO4 - 인산나트륨 이염기성 무수. 다른 수화 상태를 사용할 수 있지만 분자량은 변합니다
겸자: Dumont #5 Biologie 겸자정밀 과학 도구11252-20스타일: #5
그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;팁 모양: 직선
그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;길이: 11cm
그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;오토클레이브 안전장치: 네
그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;팁: 생물학
그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;팁 크기:
그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;0.05 x 0.02mm
그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;합금 / 재료: 이녹스
포름알데히드피셔BP531-500분자생물학 등급, 포름알데히드 37%. 500ml
포름알데히드 고정제피셔BP531-50037% 재고에서 희석하여 0.1M 인산나트륨 버퍼 pH7.2에 3.7% 포름알데히드가 포함되어 있습니다.
글리세롤피셔 바이오리에이전트BP229-1
얼음사용자 선호도
L-라이신, 98%열과학J62225.22
mAb40-1DHSB40-1a-s항베타 갈락토시다제
마이크로 원심분리기 튜브미국 과학1615-5520샘플을 담는 1.5mL 튜브.
미세해부 가위파인 사이언스 툴즈15003-085mm 절단면, 직선 끝, 8.5cm
인산나트륨피셔7558-80-7NaH2PO4 - 인산나트륨 단염성 무수. 수화 형태를 사용할 경우, 0.1M 용액을 만드는 데 필요한 무게가 달라집니다.
장착 매체0.1M 인산나트륨 완충제 pH7.2에 75% 글리세롤 용액과 2.5% n-프로필 갈레이트를 함께 사용했습니다. 거품을 최소화하기 위해 반전(inversion)으로 섞으세요.
NSG0.1M 인산나트륨 완충액 pH7.2, 0.1% 사포닌, 5% NGS
N-프로필 갈레이트MP 생의학210274780
매니큐어테드 펠라, 피셔에게서 구입NC0381432밀봉 슬라이드용
바늘 홀더피셔NC0099380바늘 미세 해부용이에요. 속이 빈 스테인리스 스틸; 손잡이 길이: 4 3/4" 길이
Nunc 마이크로웰 미니트레이써모 사이언티픽12565155혈청학적 응용을 위한 MicroWell MiniTray. 웰 카운트 60
파라필름통계랩PM996StatLab ParaFilm M 자기 밀봉 플렉시블 필름
파라포름알데히드폴리사이언스, Inc.00380-250
10배 PBS사용자 선호도적절한 용기에 증류수 800mL를 준비하세요.
그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;용액에 1.37M의 염화나트륨을 추가하세요.
그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;용액에 26.8mM의 염화칼륨을 추가하세요.
그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;용액에 인산이염산나트륨 101mM을 첨가합니다.
그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;용액에 18.0mM의 인산염 단염기성을 첨가합니다.
그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;원하는 pH(일반적으로 pH와 asymp; 7.4)에 맞게 용액을 조정합니다.
그리고 nbsp; 그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;그리고 nbsp; 그리고 nbsp;증류수를 1리터가 될 때까지 추가하세요.
PBT사용자 선호도0.1M 인산나트륨 완충제, pH7.2, 0.1% 소 혈청 알부민, 0.2% Triton X-100.
PDT사용자 선호도인산나트륨 완충제(pH = 7.2), 0.3% 디옥시콜레이트, 0.3% 트라이톤 x-100
페트리 접시팔콘코닝 351007페트리 접시; 60mm; 비처리
페트리 접시팔콘코닝 351008페트리 접시; 35mm; 비처리
플라이어사용자 선호도
PLP해당 없음2% 파라포름알데히드 1.35% 라이신, 0.05M 인산나트륨 완충제 pH7.2
2차 항체잭슨 면역연구소715-545-1510.5mg 알렉사 플루어 488 당키 안티마우스 IgG.
슬라이드 커버VWR48393-172VWR 커버글라스 #1.5 22x40 (케이스)
슬라이드피셔125442피셔 글라스 슬라이드 10bx/CS
디옥콜레이트 나트륨써모피셔 사이89904디옥시콜레이트 나트륨 세제; 5mg
나트륨 주기시그마 올드리치71859-25G나트륨 주기산염 및 ndash; 25그램
인산나트륨 완충제0.1M NaPO4 완충 pH 7.2. 0.1M 임의의 인산나트륨 스톡 28ml(증류수 11.998g NaH2PO4 대 1L)와 0.1M 무수인 이나트륨 인산염 스톡 72ml(증류수 14.196g Na2HPO4 대 1L 증류수 스톡)를 혼합하여 0.1M NaPO4 완충액 100ml를 생성합니다. 또는 PBS를 사용할 수도 있습니다.
텅스텐 와이어테드 펠라27-11.005" 디아.
트리톤 x-100써모피셔 사이A16046AE
소용돌이사용자 선호도

참고문헌

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