이 프로토콜은 인도시아닌 그린(ICG) 근적외선 영상과 초음파를 결합하여 골절 후 림프관 배출을 평가하여 쥐에서 족저 ICG 클리어와 슬와림프절 확대를 정량화합니다.
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방법 논문
골절 후 ICG 근적외선 영상 및 초음파를 이용한 림프 배출 평가
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
외상성 골절은 종종 림프 배출 기능 장애를 동반합니다. 골절 후 림프절 배출량 감소와 림프절 확대는 급성 염증 반응과 면역 세포 모집의 지속적이고 역동적인 과정을 나타냅니다. 이 글에서는 가짜 또는 경골 골절 수술을 받는 쥐의 족저부위에 0.2 mg/mL 인도시아닌 그린 6 μL을 피피 내주입하는 방법을 설명합니다. 근적외선 형광 영상은 0시와 24시의 족저 ICG 신호를 정량하여 24시간 동안 정확률을 산출하여 쥐 림프 배출의 판독값을 산출했습니다. 동시에 초음파를 사용해 슬와림프절(PLN)을 3D 재구성하고, 양을 비교하며, 골절로 인한 확대를 평가하였습니다. 결과는 골절 후 림프관 제거율이 유의미하게 감소하고, 족저 부위의 ICG의 형광 강도가 현저히 높았으며, PLNs의 부피가 유의미하게 증가함을 보여주었습니다. 조직병리학적 절편이나 림프신티그래피와 같은 이전 림프계 측정 방법과 비교할 때, 이 방법은 생 체 내 동적이고 지속적인 관찰에 실패하는 경우가 많았으며, 이 방법은 높은 안정성과 재현성을 보여줍니다. 특히, 이 시스템은 림프 배출 기능의 동적 모니터링을 가능하게 하며, 골절 모델에서 림프류 역류 변화를 조사하는 데 강력한 기술적 지원을 제공합니다.
서론
외상성 골절은 종종 심각한 조직 손상과 부기를 유발하여 감염, 괴사, 골 비유합과 같은 합병증 위험을 높입니다1,2. Grzegorz Szczesny 등은 림프 배출 기능 장애가 조직 부종을 유발하는 것이 치유 지연과 연관되어 있음을 보여주었다. 연구에 따르면 골절 치유 과정에서 골 조직 수리 외에도 골절 부위의 림프계도 중요한 역할을 합니다. 림프관은 간질액을 배출하고 부종을 예방할 뿐만 아니라 면역 세포 이동을 조절하고 대사 노폐물을 제거하는 역할도 합니다. 그러나 골절 초기 단계에서는 TNF-α, IL-1, IL-6, 대식세포 콜로니 자극인자(MCSF)와 같은 염증성 인자가 림프 내피 세포를 손상시켜 퇴행, 부종, 섬유증과 같은 병리학적 변화를 초래할 수 있습니다. 관련 연구들은 뼈와 골막뿐만 아니라 주변 지방 및 근육 조직에도 림프성 내피세포가 존재함을 보여주었습니다. 더 나아가, 림프 배출은 골절 후 혈종의 미세환경 조절에도 관여합니다; 효과적인 림프....
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프로토콜
이 동물 실험은 상하이 모델 생물 센터의 기관 동물 관리 및 이용 위원회(승인 번호)의 승인을 받았습니다. NMB-SMP-IACUC-01-0002-R02-03). 이 연구에는 골절 모델을 가진 C57 수컷 쥐(6–8주)가 사용되었습니다. 시약과 사용된 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.
1. 수술 전 관리
- 쥐를 최소 1주일간 자유롭게 적응시키고 , 음식과 물을 확보하세요. 컴퓨터가 생성한 무작위화 목록을 사용해 동물들을 골절 또는 가짜 그룹에 무작위로 배정합니다.
- 쥐를 동물용 온열 패드 위에 올려놓고 37°C의 일정한 온도를 유지하세요.
- 가스 마취기를 켜고 마우스를 유도 챔버에 2%–3% 이소플루란 농도로 5분간 넣어주세요.
- 유도 후에는 1%–2% 이소플루란으로 전환하고, 시술이 끝날 때까지 코 콘 을 통해 마취를 유지하세요.
2. 실험적 절차
참고: 마취 설정, ICG 용량 및 용량, 주사 부위 및 깊이, 노출 시간....
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결과
골절 모델 구축 후 1, 7, 14일째에 골절 그룹의 24시간 족저 ICG 형광 강도(FI24h)는 가짜 수술군보다 일관되게 높았습니다(그림 3). 수집된 족저 영상에서 ICG 형광 강도에 대한 상대적 정량 분석 결과, 골절군의 림프 ICG 제거율은 가짜 수술군보다 유의하게 낮았다(p < 0.05)(그림 4). 한편, 3차원 B모드 초음파 검사에서는 골절군 쥐의 슬와림프절 부피가 1일, 7일, 14일째에 대조군보다 유의하게 높았음을 밝혀냈습니다(p < 0.05)(그림 5). 이 결과는 림프절 제거율과 림프절 확대 사이에 높은 상관관계가 있음을 보여주었습니다.
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토론
이 프로토콜에는 쉽게 간과되기 쉬운 몇 가지 세부 사항이 포함되어 있습니다. 예를 들어, 노출 시간은 고정되어 있지 않으며 특정 형광 강도를 기준으로 결정해야 합니다. 하지만 같은 쥐 그룹의 0시간과 24시간 노출 시간은 일정해야 하며; 그렇지 않으면 결과가 신뢰할 수 없을 수 있습니다. 초음파를 관찰할 때는 반드시 하체를 결합제로 완전히 덮어야 하며, 노출된 부분은 프로브가 해당 영역을 스캔할 때 결과 이미지에 왜곡을 일으킵니다. 스캔 중에는 쥐의 하체가 움직이지 않아야 합니다. 조작자는 한 손으로 하체를 부드럽게 당기고 다른 손으로 꼬리를 잡아 쥐를 안정시킬 수 있습니다. 이 단계는 특히 어렵지만 정확한 초음파 검사를 위해 매우 중요합니다.
ICG-NIR과 초음파는 다양한 연구 및 임상 맥락에서 널리 사용되지만, 관찰되는 특정 지표에 따라 매개변수가 달라질 수 있다는 점을 유의해야 합니다
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공개 사항
저자들은 이해 상충을 선언할 필요가 없습니다.
감사의 글
이 연구는 국립자연과학재단(82174407 YJZ), 상하이 푸둥 신구 보건위원회 학과 리더 양성 프로그램(PWRd2020-05), 푸둥 신구 보건위원회 학과 리더 프로젝트(PWRq2020-56), 그리고 선전 산명 의학 프로젝트(번호)의 지원을 받았습니다. SZZYSM202311006).
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재료
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참고문헌
- Zhang, S., Sheng, H., Xu, B., Lao, Y. Acute external iliac artery thrombosis following pelvic fractures: Two case reports. Medicine (Baltimore). 100 (6), e24710(2021).
- Szczesny, G., Olszewski, W. L., Gewartowska, M., Zaleska, M., Gorecki, A. The heali....
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