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방법 논문

Pseudomonas aeruginosa 응집체에서 숙주 유발 스트레스에 대한 실시간 영상 분석

173 조회수

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DOI:

10.3791/70682

⸱

2026년 5월 15일

 , 
1Department of Molecular Medicine, University of South Florida

이 논문에서

요약

Pseudomonas aeruginosa 집합체는 항생제와 면역 세포에 대한 내성이 증가하는 모습을 보입니다. 막 무결성이 집합체 생존에 미치는 역할은 현재 충분히 탐구되지 않고 있습니다. 본 연구는 P. aeruginosa 집합체 내 세포막 역학 변화를 정량화하는 방법을 제시하여 세포 완전성이 집합체의 전반적인 생존력에 어떤 영향을 미치는지 이해할 수 있습니다.

초록

낭포성 섬유증(CF)과 같은 만성 감염은 면역 및 치료적 압력에도 불구하고 지속되는 작고 매우 내성적인 Pseudomonas aeruginosa 집합체에 의해 유지됩니다. 고전적인 바이오필름과 달리, 이 집합체들은 숙주 유발 스트레스 하에서도 구조적 완전성과 생리적 항상성을 유지하는 미세하고 공간적으로 조직된 독특한 병원성 군집을 나타냅니다. 그러나 이러한 조건에서 집합체가 온전하게 유지될 수 있는 메커니즘과 이러한 항상성 과정이 선택적으로 방해될 수 있는지는 여전히 명확하지 않습니다. 이 격차를 해결하는 데 있어 주요 장애물은 생리적 스트레스와 구조적 안정성 및 붕괴를 실시간으로 연결하는 역동적이고 공간적으로 해결된 과정을 포착할 수 있는 도구가 부족하다는 점입니다. 본 연구는 숙주 관련 스트레스 요인에 대한 집계 반응을 정량화하기 위한 통합 영상 및 분석 워크플로우를 제시합니다. 전압 감응 염료인 DiBAC4(5)를 사용하여 합성 낭포성 섬유증 가래 배지(SCFM2)에서 형성된 집합체 내 생리학적 교란의 초기 지표로 막 탈분극을 모니터링하였다. 고해상도 타임랩스 공초점 현미경은 안정 상태와 스트레스 유발 상태 모두에서 응집체를 시각화할 수 있게 하며, 이미지 분할과 복셀 기반 분석은 단세포 해상도로 막 완전성과 집합체 분해의 공간적 이질성을 정량적으로 매핑합니다. 이 워크플로우는 다세포 박테리아 집합체에서 생리적 스트레스를 구조적 결과와 연결하는 재현 가능하고 적응 가능한 플랫폼을 구축합니다. 집단의 무결성을 보존하거나 저해하는 과정을 정량적으로 분석할 수 있게 함으로써, 이 접근법은 집단체 회복력을 뒷받침하는 항상성 메커니즘을 식별하고 표적으로 삼는 데 중요한 토대를 제공하며, 임상적으로 중요한 박테리아 지속 방식을 교란할 새로운 전략을 발전시킵니다.

서론

만성 박테리아 감염은 종종 표면에 부착된 큰 바이오필름이 아니라 숙주 관련 환경 내에서 형성되는 작은 다세포 집합체에 의해 유지됩니다. 낭포성 섬유증(CF) 및 기타 만성 기도 질환에서 Pseudomonas aeruginosa는 일반적으로 고전적인 바이오필름이 아닌 점액이나 가래 내에 매립된 부유 집합체로 존재합니다. 이 집합체들은 미시적 공간 조직, 뚜렷한 생리학적 이질성, 면역 및 항균 스트레스 요인에 대한 탁월한 내성을 특징으로 하는 독특한 성장 방식을 나타냅니다 1,2,3,4. 임상적 관련성에도 불구하고, 본 프로토콜에서 막의 무결성과 공간적 조직을 유지할 수 있는 능력으로 정의하는 집합 안정성을 지배하는 메커니즘은 아직 잘 이해되지 않았으며, 이전 연구들은 표면 부착 바이오필름 형성을 지원하는 매트릭스 구성 요소에 더 초점을 맞추고 있습니다 5,6.

막 탈분극 및 집합체 구조의 변화와 같이 집합체 불안정화에 기여하는 사건을 연구하는 데 큰 장애물은 실시간으로 동적 생리적·구조적 변화를 포착하는 실험 워크플로우의 부재입니다 7,8. 기존의 대량 분석법과 엔드포인트 영상 기법은 응력 반응이 집합체 내에서 어떻게 나타나는지, 이러한 반응이 공간적으로 어떻게 분포되는지, 또는 막 탈분극과 이온 항상성 상실과 같은 생리적 약화가 세포 스트레스의 초기 징후와 궁극적인 물리적 붕괴로 어떻게 연결되는지 밝혀내지 못합니다. 공초점 현미경은 표면에 부착된 바이오필름에 널리 적용되었지만, 시간 분해 영상과 세포 생리학을 집단 구조 및 막 활동과 직접 연결하는 정량적 분석과 통합하는 접근법은 드물다.

박테리아 막 전위 변화는 세포 스트레스와 항상성 상실을 조기에 그리고 민감하게 감지하는 지표가 됩니다. 비스-(1,3-디부틸바르비투르산) 펜타메틴 옥소놀(DiBAC4(5))과 같은 전압 감응 염료는 탈분극된 세포에 축적되어 막 무결성을 비파괴적이고 형광 기반 판독값을 제공합니다. DiBAC 염료는 플랑크톤 배양 및 표면 부착 바이오필름에서 막 탈분극을 평가하는 데 사용되었으나, 특히 생리학적으로 중요한 성장 조건과 시간 경과 영상 하에서 다세포 집합체에 대한 적용은 제한적이다.

여기서는 P. aeruginosa 집합체에서 막 탈분극과 구조적 파손을 실시간으로 시각화하고 정량화할 수 있는 통합 영상 및 분석 워크플로우를 제시합니다. 응집체는 합성 낭포성 섬유증 가래 배지(SCFM2)에서 형성되며, 이는 CF 기도의 주요 영양 및 이온 특성을 재현하고, 표면이나 흐름 없이 자발적 응집체 형성을 지원합니다11,12. 이러한 조건에서 P. aeruginosa는 CF 가래와 기도 샘플에서 관찰되는 것과 유사한 크기와 구조적 이질성을 가진 부유 집합체를 형성하여, 집합체 행동 연구에 생리학적으로 중요한 플랫폼을 제공합니다13.

온도 및 습도가 조절된 상태에서 타임랩스 공초점 레이저 주사 현미경을 사용하여 이 워크플로우는 장시간 영상 기간 동안 막 탈분극과 세포 항상성 상실이 증가하는 스트레스 유발 상태와 함께 안정된 집합체 상태와 스트레스 유발 상태를 모두 포착합니다. DiBAC 기반 막 전위 보고와 고해상도 z-스택 이미징을 결합함으로써, 이 방법은 단일 세포 수준에서 DiBAC₄(5) 형광을 정량화할 수 있게 하며, 개별 응집체의 공간적 맥락 내에서 값을 매핑하고 분석할 수 있게 합니다. 하위 이미지 분할과 복셀 기반 표면 분석을 통해 집합체 구조의 변화와 막 탈분극을 병렬로 정량화할 수 있습니다.

중요한 점은, 이 프로토콜이 SCFM2에서 형성된 P. aeruginosa 집합체를 사용해 시연되었지만, 작업 흐름은 대체로 일반화될 수 있다는 것입니다. 영상 전략, 염료 기반 생리학적 측정 및 분석 프레임워크는 항균제, 면역 효과체, 환경 교란 등 다른 박테리아 종, 집합체 촉진 배지, 스트레스 요인에 쉽게 적용할 수 있습니다. 따라서 이 접근법은 다양한 실험 맥락에서 박테리아 군집의 안정성을 조사할 수 있는 전이 가능하고 재현 가능한 플랫폼을 제공합니다.

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프로토콜

P. aeruginosa에 관한 모든 작업은 적절한 BSL-2 격리 조건과 기관 생물안전 승인 하에 수행되어야 합니다. 이 연구에 사용된 시약과 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.

1. 합성 낭포성 섬유증 가래 배지(SCFM2)에서 Pseudomonas aeruginosa 집합체 생성

참고: 이 단계는 생리적으로 중요한 조건에서 CF 기도 환경을 모방하는 P. aeruginosa 의 배양 및 부유 다세포 집합체 형성을 설명합니다.

  1. 박테리아 배양물 제조
    1. 실험 전날, 냉동 글리세롤 스톡에서 플라스미드 pMRP9-1(GFP)14를 운반하는 야생형 Pseudomonas aeruginosa PAO1을 5mL 용동성 육수(LB)에 접종합니다.
    2. 플라스미드 선택을 유지하기 위해 카르베니실린(300 μg/mL)을 추가합니다.
    3. 배양물을 37°C에서 하룻밤 동안 200rpm에서 흔들어 키우세요.
  2. 역희석 및 골재 형성 준비
    1. 실험 당일에는 하룻밤 배양을 1:5(1 mL 하룻밤: 4 mL LB)로 역희석합니다. 이 단계에서 항생제는 다시 첨가하지 않으며, 잔류 잔류 효과가 거의 없으며 성장에 영향을 주지 않습니다.
    2. 37 °C에서 약 2시간 동안 진동(200 rpm)으로 배양하여 로그 위상에 도달합니다.
      참고: 이러한 조건에서 세포는 일반적으로 ~2시간 후 초기 지수 단계에 있습니다. 또한, 세포는 SCFM2로 세척되어 잔여 항생제 잔류 효과를 최소화합니다.
  3. SCFM2의 준비 및 평형
    1. 백 희석 기간이 끝나기 약 30분 전, 미리 준비된 SCFM2를 멸균 튜브에 넣고 37°C로 데웁니다.
    2. 4웰 유리 바닥 광학 접시에서 영상을 촬영할 때, 웰당 500 μL SCFM2를 할당합니다. 피펫팅 오차를 고려하기 위해 초과 부피를 준비하세요.
      참고: SCFM2는 4°C에서 저장됩니다. 예비 가열은 온도 충격을 최소화하고 골재 형성의 재현성을 향상시킵니다.
  4. 접종 세척과 표준화
    1. 4200 x g 에서 실온에서 4분간 원심분리하여 펠릿 배양합니다.
      참고: rpm 계산이 필요할 경우, 스윙 버킷 로터의 로터 반경은 172mm입니다.
    2. 상정액을 제거하고 3mL의 멸균 PBS(pH 7.0)에 펠릿을 재현탁합니다.
    3. 이 과정을 두 번 더 반복해서 (총 세 번 세척).
    4. OD₆₀₀를 측정하고 SCFM2를 0.05의 시작 OD₆₀₀₀로 접종하는 데 필요한 부피를 계산합니다.
    5. 세포를 균질화하고 각 웰에 500 μL SCFM2가 포함된 접종을 위해 잠시 소용돌이를 사용합니다.
  5. 정적 조건에서의 골재 형성
    1. 인큐베이트는 37°C에서 4시간 동안 SCFM2를 정적으로 접종하여 집합체 형성을 허용했습니다.
      참고: 4시간 배양은 CF 가래 및 기도 샘플에서 관찰된 크기와 이질성을 가진 현탁 집합체를 재현적으로 생성하며, 후기 단계 바이오필름 성숙을 최소화합니다 1,15.

2. 면역 관련 스트레스 요인(인간 호중구 엘라스타제) 제제.

참고: 이 단계는 세포 스트레스와 박테리아 집합체의 불안정을 유도하기 위해 사용되는 숙주 유래 스트레스 요인의 준비를 설명합니다.

  1. 인간 호중구 엘라스타제(HNE)의 재구성 및 저장
    1. 제조사 권장에 따라 50 mM 아세트산 나트륨, 200 mM NaCl, 멸균수를 사용하여 인간 호중구 엘라스타제를 재구성합니다.
    2. 50 μg/L 정액을 준비하고 0.2 μm 필터를 사용해 여과합니다.
    3. 50mL 용량으로 분할하여 −20 °C에서 보관합니다.
    4. 사용 전날 밤에는 4°C에서 알리코트를 해동하세요.
      참고: 알리쿼트는 효소 활성을 감소시키고 변동성을 초래할 수 있는 냉동-해동 주기를 최소화합니다. 알리코트는 약 1개월 동안 4°C에서 안정적입니다.

3. 막 탈분극을 보고하기 위한 DiBAC4(5) 조제 및 적용

참고: 이 단계는 응집체 내 막 탈분극을 시각화하기 위해 전압 감응 염료를 준비하고 사용하는 과정을 설명합니다.

  1. DiBAC4(5)의 준비 및 저장
    1. 먼저 DiBAC4(5) 스톡 용액을 준비하세요. DiBAC4(5) 분말을 무수 DMSO에 1 mg/mL로 재구성합니다.
      참고: DMSO의 DiBAC4(5) 재구성은 표준 제조업체 권고사항을 따릅니다.
    2. 100 μL 용량으로 분할하여 빛으로부터 보호한 채 −20 °C에서 보관합니다.
    3. 각 알리코트는 최대 두 번은 사용하지 마세요.
      참고: DiBAC4(5)는 기능적으로 DiBAC4(3)와 동등하지만, GFP 여기/방출 스펙트럼에 맞게 선택되었습니다. 이 프로토콜에서 DiBAC4(3)는 결과 섹션에서 논의한 추가 염색에만 사용됩니다. 이 프로토콜 전반에 걸쳐 사용되는 주요 염료는 DiBAC4(5)입니다.

4. P. aeruginosa 집합체의 막 탈분극의 타임랩스 공초점 영상

참고: 이 단계는 집합체의 동적 생리적·구조적 변화를 포착하기 위해 고해상도 시간 해상도 공초점 이미지를 획득하는 과정을 설명합니다.

  1. 현미경 및 환경 챔버 준비
    1. 공초점 현미경 스테이지에 가열된 마이크로플레이트 인서트나 환경 챔버를 설치하세요.
    2. 영상 촬영 최소 1시간 전에 온도 및 습도 조절을 켜고 37°C로 설정하세요.
    3. 획득 탭에서 레이저 탭을 찾아 사용 약 1시간 전에 필요한 레이저를 켜서 충분한 예열을 가능하게 합니다(GFP용 아르곤 레이저; DiBAC4(5)에 대한 DPSS 561-10 (보조 그림 1A).
      참고: 안정적인 환경 제어는 초점 이동을 줄이고 장시간 랩스 실험 중 집체의 무결성을 유지합니다.
  2. 면역 스트레스 요인의 적용
    1. 골재 형성 4시간 후, 실험용 우물에 HNE를 최종 농도인 20 μg/L16까지 첨가합니다.
    2. 대조 우물은 처리하지 않고 두세요.
    3. 4웰 접시를 현미경 단계로 옮깁니다.
      참고: HNE는 농축된 재고가 아닌 유도 가래의 보고된 농도를 근거로 생리학적으로 관련 농도(μg/L)로 제조되었습니다. 이 연구에 사용된 농도는 McGarvey 등16에서 IS(유도 가래), NE-AAT(NE/a1-항트립신 복합체) HV(건강한 자원자) 하에서 발견됩니다.
  3. 관심 있는 집계 지역 식별
    1. 위치 찾기 탭과 20× 목표 렌즈를 사용해 투과광을 켜고 밝은 필드 영상을 이용해 집합체가 풍부한 영역을 식별합니다(보조 그림 1B).
    2. 밝은 필드 이미징을 계속 사용하는 동안, 획득 탭으로 이동하여 위치 모듈을 이용해 x, y, z-좌표를 저장하세요(보조 그림 1C).
    3. 한 우물당 여러 차례 기술적 복제를 반복합니다.
  4. 고해상도 z-스택 및 시계열 획득
    1. 저장된 위치로 이동해 63× 오일 침수 목표로 전환하세요.
    2. 접시를 배치하기 전에 침지 오일을 바르세요.
    3. 획득 탭에서 스마트 세팅(보조 그림 1D)을 사용해 채널을 구성하세요: GFP (488/509 nm) – 녹색 할당, DiBAC4(5) (591/615 nm) – 빨간색 할당.
    4. 라이브 뷰로 이동한 후 Z-스택 모듈을 사용해 미세 초점을 조정해 커버슬립의 하단을 식별한 후, Set First를 클릭하여 첫 번째 z-위치로 설정하세요(보조 그림 1E).
    5. 범위를 60 μm 으로 표시 할 때까지 위로 이동한 후 'Set Last '(보조 그림 1E)를 클릭하여 최종 z-위치를 설정합니다.
    6. 라이브 뷰를 끄고 Definite Focus를 활성화하세요. '표면 찾기'를 선택한 후, 상태가 반사 발견(Reflex Found)을 표시할 때만 '스토어 포커스(Store Focus)'를 선택하세요(보조 그림 1F).
    7. Z -스택 과 Definite Focus 모듈을 사용하여 저장된 각 위치에 대해 초점 보정을 반복하세요.
    8. 타임 레퍼 레이션 획득을 구성하여 각 위치를 3분마다 6시간 동안 촬영하도록 설정하세요(보조 그림 1G).
      참고: 프로토콜은 여기서 일시정지하여 DiBAC4(5) 염료를 해동, 첨가 및 배양할 수 있으며, 배양 기간 후 재개할 수 있습니다.
    9. 실험 시작을 선택하세요.
      참고: 3분 간격은 시간적 해상도와 광독성 및 광표백 고려의 균형을 맞추기 위해 사용된다.
  5. DiBAC4(5) 첨가 및 배양
    1. 각 웰에 DiBAC4(5)를 최종 농도인 5 μg/mL9에 첨가합니다.
    2. 타임랩스 영상 촬영을 시작하기 전에 어두운 곳에서 30분간 부양하세요.
      참고: 이 배양은 배경 형광을 최소화하면서 염료 평형을 가능하게 합니다.

5. 골재 구조와 DiBAC4(5) 공동배치의 정량적 이미지 분석

참고: 이 단계는 막 탈분극과 집합체 구조 및 불안정화를 연결하는 정량적 워크플로우를 설명합니다.

  1. 이미지 가져오기 및 채널 분리
    1. 이미지 파일(.czi 또는 동등한 파일)을 Imaris x64 소프트웨어 버전 10.2.0 이상에 업로드하세요.
    2. 이미지 메타데이터의 x, y, z 픽셀 치수(복셀 크기)가 공초점 획득 매개변수(대물렌즈, 줌, z-단계 크기)를 정확히 반영하는지 확인하여 복셀 보정을 검증하세요. 잘못된 보정은 공간 및 체적 측정에서 오류를 초래합니다.
  2. 박테리아 집합체의 표면 렌더링과 DiBAC4(5) 신호
    1. Surfaces 모듈을 사용하여 P. aeruginosa 골을 렌더링하세요:
      1. 세분화 설정에서 GFP 채널을 선택하세요 (보조 그림 2A).
      2. 분리 접촉 객체(영역 성장)를 활성화하고, 강도 임계값을 조정하여 집계체를 완전히 포착합니다(보조 그림 2B).
      3. 필터 시드 포인트 모듈에서 필터 유형을 복셀 수 Img = 1로 변경 하고 90%로 설정하세요 (보조 그림 2C).
      4. 렌더링 처리 후에는 표면을 100%로 설정하세요 (보조 그림 2D).
    2. 렌더링을 완료하고 박테리아 표면에 녹색 색상을 할당하세요(보조 그림 2E).
    3. DiBAC4(5) 채널에 대해 렌더링을 반복하고 빨간색 색상을 할당하세요.
  3. 공동 위치화 및 부피 기반 정량화
    1. DiBAC4(5) 표면 렌더링(보충 그림 3A)을 선택하고 어떤 시점에서 공동 위치 분석을 수행할지 결정하세요.
    2. 통계 탭> 상세 탭> 특정 값으로 이동하세요(보조 그림 3B).
    3. 박 테리아 표면까지의 최단 거리 가 0.00인 물체를 선택하여 공동 국지화를 정의합니다(보완 그림 3B).
    4. 이 객체들을 찾고, 편집한 후, 복제하여 DiBAC와 셀이 겹치는 표면을 생성하세요(보조 그림 3C). 이 표면의 중첩된 특성을 표시하기 위해 이름을 바꾸는 것을 잊지 마세요.
    5. 평균 값 아래 상세 탭에서 각 선택된 시점에서 기록된 볼륨 합산값은 다음과 같습니다: (1) 총 DiBAC4(5) 신호 (보충 그림 3D); (2) 동위치화된 DiBAC4(5) 신호 (보조 그림 3E).
    6. 중복률을 다음과 같이 계산하세요:
      figure-protocol-1
      참고: 중복율은 집합체 내 세포 관련 DiBAC₄(5) 신호의 비율을 반영하며, 특정 시점에서 막의 탈분극을 반영합니다.
      참고: SCFM2 내 P. aeruginosa 응집체와 HNE 스트레스를 사용하여 입증되었지만, 이 워크플로우는 항균제나 환경 교란을 포함한 다른 박테리아 종, 응집 촉진 배지, 형광 리포터, 스트레스 요인에 널리 적응할 수 있습니다.

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결과

위에서 설명한 프로토콜에는 낭포성 섬유증 폐 환경에서 모델링된 P. aeruginosa 집합체의 막 역학 변화를 추적하는 방법이 제공됩니다(그림 1). pMRP9-1(GFP) 플라스미드를 탑재한 야생형 PAO1 균주(그림 1A), 면역 스트레스를 시뮬레이션하는 HNE, 그리고 DiBAC4(5) 막 염료(그림 1C)를 사용하여, 막 전위 및 세포 항상성 파괴를 반영하는 막 탈분극 변화를 정량화하였다(그림 2M). 초기에는 배양물을 4시간 동안 정적으로 배양하여 자유롭게 떠다니는 집합체 형성을 보장했습니다(그림 1B). 이후 HNE에 노출된 <...

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토론

막 전위는 세포 스트레스와 항상성 장애를 민감하고 조기에 읽어내는 역할을 합니다. 다세포 박테리아 집합체 내에서는 이러한 생리학적 변화가 이후 구조적 불안정화 이전에 일어나며, 이를 촉진할 수 있습니다. 여기서는 느린 반응과 잠재적 민감성 염료 bis-(1,3-디부틸바르비투르산) 펜타메틴 옥소놀(DiBAC4(5))을 사용하여 숙주 유래 스트레스에 노출된 Pseudomonas aeruginosa 집합체의 탈분극을 추적하는 영상 기반 워크플로우를 제시합니다. 탈분극 추적은 집합체 내 세포의 생리학에 대한 귀중한 통찰을 제공하여, 이온 항상성을 변화시키거나 막 전위를 교란하는 외부 스트레스 요인이 이러한 다세포 군집의 불안정화에 어떻게 기여하는지 더 깊이 이해할 수 있게 합니다. 이 접근법을 사용하면 생리적으로 중요한 조건에서 성장한 집합체 내 막 활성의 직접적인 시각화와 정량화가 가능합니다.

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공개 사항

저자들은 이해 상충이 없음을 선언합니다.

감사의 글

S.E.D는 사우스 플로리다 대학교 분자 의학과에서 제공하는 초기 자금과 낭포성 섬유증 재단(CFF)(DARCH19G0, DARCH22P0, DARCH25G0)의 연구 보조금으로 지원받고 있습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1,3-디부틸바르비투르산) 펜타메틴 옥소놀 (DiBAC4(3))AAT 바이오퀘스트21411그리고 nbsp; 지질친성, 음이온 분자 
1,3-디부틸바비투르산) 펜타메신 옥소놀(DiBAC4(5))AAT 바이오퀘스트21410그리고 nbsp; 지질친성, 음이온 분자 
카르베니실린 국제 연구 결과물;C46000-5.0PAO1 발현 균주를 선택하는 데 사용됨
셀비스 4실, 35mm 유리 바닥 접시피셔NC0600518유리 바닥 챔버 접시는 이미지 촬영 중 성장 배지 내 부유 골재의 관리가 가능하며,
원심분리기벡만 쿨터 생명과학  B06320벡만 쿨터 라이프 사이언스 SX4400 스윙 버킷 로터(부품 번호 B01425)와 함께 사용되었습니다.
공초점 레이저 주사 현미경(CLSM)자이스LSM 880이 프로토콜에서 설명된 실험에 사용된 CLSM 모델은 더 이상 제공되지 않지만, LSM 900은 업데이트된 동등한 옵션입니다.
배양 튜브제네시21-130불임; 폴리프로필렌 
다피써모피셔62248미래에 제안된 DiBAC4(5)로 호중구를 염색하는 데 사용됨
일회용 큐벳 브랜드 테크759086D1.5mL, 세미마이크로
DMSO밀리포어-시그마276855-100MLDiBAC4(3,5) 재구성에 사용됨
드라크5써모피셔65-0880-92미래에 제안된 중성구 염색 용도로 DiBAC4(3)
CLSM을 위한 환경 상실PECONLSM 880이 시스템은 자이스 제품용으로 독점적으로 제작되었으며, 일반적으로 "인큐베이션 시스템 S"라고 불리며, 모든 부품은 LSM 880(또는 유사) 시스템에 추가되어 자이스를 통해 주문할 수 있습니다
겐타마이신 설페이트 피셔BP918-1PA1633 발현 균주를 나타내는 RFP 선별에 사용됨
글리세롤  제네시18-205장기 보관을 위해 품종을 -80 및 -nbsp 상태로 냉동하는 데 사용되었습니다; ° C
인간 호중구 엘라스타제(HNE)밀리포어-시그마324681-50UG재구성되면 1개월간 4 에서 안정적입니다; ° C 또는 20년 1년 정도 근무 중; ° C
Imaris x64 소프트웨어옥스퍼드 인스트루먼트 버전 10.2.0
이머전 오일  전자현미경 과학 및 nbsp;16919-12건조하지 않으며; 표준화는 37 & nbsp; ° C
인큐베이터 벤치마크 사이언티픽H1001-M흔들릴 수 있어
라이소제니 브로스 (LB)제네시11-118밀러 믹스
mCherry 플라스미드 협업자로부터 얻었고,
PA1633 트랜스포존 돌연변이 균주 협업자로부터 얻었고,
인산염 완충 식염수(PBS)써모피셔3002pH 7.0
아세테이트 나트륨써모피셔AM97403세 남자; pH 5.5; RNase 프리
염화나트륨피셔 S271-500HNE 재정비 임무에 사용됨
분광광도계 VWR634-0882PAO1/PA1633을 SCFM2에 접종하기 위한 세포 밀도 측정에 사용됨
멸균 .22&마이크로; m 필터제네시25-244재구성된 HNE 정제에 사용됨
멸균 마이크로 원심분리기 튜브제네시24-272LR0.6mL
멸균 주사기피셔14955459재구성된 HNE 정제에 사용됨
SX4400 스윙 버킷 로터  벡만 쿨터 생명과학  B01425벡만 쿨터 생명과학 원심분리기(부품 번호 B06320)와 함께 사용됨
합성 낭포성 섬유증 가래 배지 (SCFM2)합성생물군계10002-500배치 #: 001-CF2-0724
울트라 퓨어 워터제네시18-195HNE 재구성에 사용됨
야생형 Pseudomonas aeruginosa PAO1과 pMRP9-1 플라스미드 이 pMRP9-1 플라스미드는 GFP를 포함하고 있으며 카르베니실린 내성을 발현합니다.
ZEN 블랙 에디션 2.3 자이스 이미징 소프트웨어 자이스LSM 880과 호환됨

참고문헌

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