자발성 뇌내출혈 후 병원 폐 감염과 관련된 사이토카인 및 염증성 유전자 다형성

요약

이 후향적 연구는 자발성 뇌내출혈 환자에서 초기 입원 후 혈액 채취, 혈청 사이토카인 및 Toll-유사 수용체 측정, 염증 유전자 다형성의 유전자형 분석, 감염 위험 평가에 대한 재현 가능한 워크플로우를 제시합니다.

초록

병원내 폐 감염은 자발성 뇌내출혈 후 흔히 발생하는 합병증으로, 신경학적 회복을 악화시키고 입원 기간을 연장하며 임상 부담을 증가시킬 수 있습니다. 이 후향적 임상-실험실 연구는 원발성 자발성 뇌내출혈 후 병원 내 폐 감염과 관련된 염증성 바이오마커 및 숙주 면역유전적 프로필을 평가하는 재현 가능한 워크플로우를 제시합니다. 환자는 입원 후 병원 폐 감염이 발생하는지 여부에 따라 분류됩니다. 말초 정맥 혈액은 입원 후 초기 단계에서 표준화된 사전 분석 조건 하에 수집됩니다. 혈청은 분리되어 분리되어 저장되어 IL-1β, IL-6, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α, TLR2, TLR4, TLR9의 효소 결합 면역흡착 분석법 측정을 위해 저장됩니다. 동시에, 항응고된 전혈에서 유전체 DNA를 추출하여 선택된 사이토카인 및 톨 유사 수용체 관련 유전자의 중합효소 연쇄반응 제한 조각 길이 다형성 유전자형 분석에 활용합니다. 워크플로우에는 샘플 취급, 중복 ELISA 측정, DNA 순도 평가, 유전자형 호출, 반복 유전자형 분석에 대한 품질 관리 절차도 포함됩니다. 통계 분석에는 임상 특성과 바이오마커 수준의 그룹 간 비교, 하디-와인버그 평형 검사, 유전자형 및 대립유전자 연관에 대한 로지스틱 회귀 분석, 관련 임상 공변량에 대한 조정, 다중 유전적 비교에 대한 거짓 발견율 보정이 포함됩니다. 이러한 임상적, 염증적, 면역유전적 작업 흐름이 자연 뇌내출혈 후 감염 위험 프로파일을 특성화하는 데 도움이 될 수 있으나, 정기적인 임상 적용 전에는 전향적 다기관 검증이 여전히 필요합니다.

서론

자연성 뇌내출혈(ICH)은 뇌 혈관의 비외상성 파열로 인해 발생하는 심각한 뇌졸중 아형으로, 신경학적 사망과 장애의 주요 원인으로 남아 있습니다. 임상적으로 ICH는 일반적으로 1차 또는 2차로 분류됩니다. 원발성 ICH가 대부분의 사례를 차지하며, 주로 고혈압성 동맥병증 또는 뇌 아밀로이드 혈관병증과 관련이 있습니다^. 반면, 2차 ICH는 동맥류, 동정맥 기형, 모야모야병, 응고 장애 등 구조적 또는 혈액학적 원인과 관련이 있습니다. ICH는 허혈성 뇌졸중보다 전체 뇌졸중 사건의 비중은 적지만, 단기 사망률과 장기 기능 부담이 불균형적으로 높으며, 2,3,4,5를 차지합니다.

ICH 이후 주요 병원 내 합병증 중 병원 내 폐 감염은 특히 자주 발생하며 임상적으로 중요한 결과를 초래합니다. 이전 연구들은 뇌졸중 또는 뇌내출혈 후 입원 환자의 상당수 환자에서 폐 감염이 발생할 수 있으며, 이는 더 긴 입원 기간, 더....

프로토콜

이 연구는 중국 저장성 자싱 제1병원 자싱대학교 부속 병원 윤리위원회의 승인을 받았습니다(승인 번호 2025-LP-599). 인간 참여자가 포함된 모든 절차는 제도적 요구사항과 헬싱키 선언 원칙에 따라 수행되었습니다. 혈액 채취 및 데이터 사용에 관한 서면 동의서가 모든 참가자 및/또는 그들의 법적 권한 대리인으로부터 샘플 채취 전에 이루어졌습니다.

이 워크플로우에서 사용되는 모든 상업용 키트, 시약, 소모품, 기기, 소프트웨어, 제조사, 카탈로그 번호 및 주요 운영 사양은 재료표에 나열되어 있습니다.

연구 범위, 자격 및 환자 그룹

본 연구는 2019년 5월부터 2024년 9월까지 중국 저장성 자싱 자싱 대학교 제1병원 응급 중환자실 응급 및 중환자실에 입원한 원발성 자발성 뇌내출혈(ICH) 환자들을 대상으로 단일 기관 후향적 임상 실험실 코호트 분석으로 수행되었습니다. ICH 진단은 중국 뇌출혈 진단 및 치료 지침(2019)에 따라 두개내 컴퓨터 단층촬영 또는 자기공명영상으로 확정되었다^10....

결과

임상 지표

기초 임상 특성은 표 1에 요약되어 있습니다. 최종 분석에는 자발성 뇌내출혈 환자 360명이 포함되었으며, 입원 중 병원 폐 감염이 발생한 환자 180명과 발생하지 않은 환자 180명으로 구성되었습니다. 연령(62.4세± 6.8세± 7.0세, P > 0.05), 성별 분포(142/180, 78.9% 대 137/180, 76.1%, 흡 연 > 0.05), 흡연 이력(94/180, 52.2% 대 99/180, 55.0%, P > 0.05), 음주이력(99/180, 55.0% 대 106/180, 58.9%, P > 0.05), 당뇨병(18/180, 10.0% 대 21/180), 11.7%, P > 0.05), 또는 고혈압(21/180, 11.7% 대 24/180, 13.3%.......

토론

자발성 뇌내출혈(ICH)은 가장 심각한 뇌졸중 아형 중 하나로 남아 있으며, 상당한 조기 사망과 장기 장애 부담을 계속 초래하고 있습니다¹³. 임상 실무에서 ICH 환자는 특히 병원 내 합병증에 취약한데, 신경학적 손상은 기도 보호를 약화시키고 기침 효과를 저하시키며 움직임을 제한하고 침습적 보조 시술에 노출될 수 있기 때문입니다. 이러한 합병증 중 병원 폐 감염은 입원 기간을 연장하고 자원 사용을 증가시키며, 산소 공급과 전신 염증 스트레스 저하로 인해 신경학적 회복을 더욱 저해할 수 있어 특히 중요합니다¹⁴. 이러한 임상 현실은 감염 위험이 높은 환자를 조기에 식별하고 급성 치료 단계에서 보다 집중적인 감시가 필요함을 강화합니다^.

본 연구에서 병원 내 폐 감염이 발생한 환자들은 만성 폐쇄성.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Human TNF-α ELISA Kit	Invitrogen / Thermo Fisher Scientific	KHC3011	ELISA kit for quantitative measurement of human TNF-α in serum.
Human TLR2 / Toll-like Receptor 2 ELISA Kit	Sigma-Aldrich / Merck	RAB0744-1KT	96-well ELISA kit for measurement of human TLR2 in serum or plasma samples.
Human TLR4 ELISA Kit, colorimetric	Novus Biologicals / Bio-Techne	NBP3-11807	Colorimetric sandwich ELISA kit for measurement of human TLR4 in serum, plasma, or other biological fluids.
Human TLR9 ELISA Kit, colorimetric	Novus Biologicals / Bio-Techne	NBP2-76574	Colorimetric ELISA kit for measurement of human TLR9 in serum samples.
Absorbance microplate reader	Agilent BioTek	800 TS	Microplate reader for ELISA optical-density measurement at 450 nm with reference correction at 570 nm.
QIAamp DNA Blood Mini Kit	QIAGEN	51104	Silica membrane-based kit for genomic DNA extraction from anticoagulated whole blood.
NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer	Thermo Scientific	ND-ONE-W	Microvolume spectrophotometer for DNA concentration and A260/A280 purity assessment.
SimpliAmp Thermal Cycler	Applied Biosystems / Thermo Fisher Scientific	A24811	Thermal cycler used for endpoint PCR amplification in PCR-RFLP genotyping.
PCR Master Mix, 2X	Thermo Scientific	K0171	Premixed PCR reagent containing Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, and reaction buffer; used for conventional PCR amplification.
Recombinant Taq DNA Polymerase	Thermo Scientific	EP0401	Alternative enzyme source for locus-specific PCR reactions when separate PCR components are used instead of 2X master mix.
Nuclease-free water	Thermo Scientific	R0581	Molecular-biology-grade water used for PCR setup, DNA dilution, and no-template controls.
Custom DNA primers	Sangon Biotech	Custom synthesis	Locus-specific primers for PCR-RFLP genotyping; primer sequences are listed in Supplementary Table S1.
Restriction endonucleases for PCR-RFLP	Thermo Scientific / New England Biolabs	Locus-specific enzymes listed in Supplementary Table S1	Restriction enzymes used for genotype-specific digestion of PCR products. The enzyme selected for each locus should match the digestion pattern listed in Supplementary Table S1.
Agarose I, molecular biology grade	Thermo Scientific	17850	Agarose for preparation of 1.5% and 2.5% gels used to confirm PCR products and resolve most RFLP fragments.
GeneRuler 50 bp DNA Ladder	Thermo Scientific	SM0371	DNA size marker for PCR amplicons and RFLP fragment-size estimation.
SYBR Safe DNA Gel Stain	Invitrogen / Thermo Fisher Scientific	S33102	Nucleic-acid gel stain for visualization of DNA in agarose or acrylamide gels; used as a reduced-hazard alternative to ethidium bromide.
Horizontal agarose gel electrophoresis system	Bio-Rad	Mini-Sub Cell GT system / 1704360 base	Electrophoresis system for agarose gel separation of PCR and RFLP products.
Vertical PAGE electrophoresis system	Bio-Rad	Mini-PROTEAN Tetra Cell / 1658001	Vertical electrophoresis system for 8% polyacrylamide gel separation when higher-resolution fragment discrimination is required.
Gel documentation system with UV or blue-light transillumination	Bio-Rad / equivalent laboratory system	Gel Doc XR+ or equivalent	Imaging system for documenting stained DNA bands after gel electrophoresis. Use UV shielding or blue-light mode where available.
Refrigerated centrifuge	Eppendorf / equivalent laboratory centrifuge	5424 R or equivalent	Refrigerated centrifuge used for serum separation at 1,500 × g and 4 °C.
−80 °C ultra-low temperature freezer	Thermo Scientific / equivalent laboratory freezer	Forma 900 Series or equivalent	Storage of serum aliquots before ELISA analysis.
IBM SPSS Statistics	IBM	Version 25.0	Statistical software used for descriptive statistics, normality testing, group comparisons, logistic regression, and model-output export.
Spreadsheet software	Microsoft	Excel for Microsoft 365	Used for data checking, plate-map organization, duplicate-value review, and preparation of merged analysis files before SPSS analysis.