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연구 논문

자발성 뇌내출혈 후 병원 폐 감염과 관련된 사이토카인 및 염증성 유전자 다형성

70 조회수

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DOI:

10.3791/70761

⸱

2026년 8월 4일

 ,  ,  , 
1Department of Clinical Laboratory, Affiliated Hospital of Jiaxing University, The First Hospital of Jiaxing

이 논문에서

요약

이 후향적 연구는 자발성 뇌내출혈 환자에서 초기 입원 후 혈액 채취, 혈청 사이토카인 및 Toll-유사 수용체 측정, 염증 유전자 다형성의 유전자형 분석, 감염 위험 평가에 대한 재현 가능한 워크플로우를 제시합니다.

초록

병원내 폐 감염은 자발성 뇌내출혈 후 흔히 발생하는 합병증으로, 신경학적 회복을 악화시키고 입원 기간을 연장하며 임상 부담을 증가시킬 수 있습니다. 이 후향적 임상-실험실 연구는 원발성 자발성 뇌내출혈 후 병원 내 폐 감염과 관련된 염증성 바이오마커 및 숙주 면역유전적 프로필을 평가하는 재현 가능한 워크플로우를 제시합니다. 환자는 입원 후 병원 폐 감염이 발생하는지 여부에 따라 분류됩니다. 말초 정맥 혈액은 입원 후 초기 단계에서 표준화된 사전 분석 조건 하에 수집됩니다. 혈청은 분리되어 분리되어 저장되어 IL-1β, IL-6, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α, TLR2, TLR4, TLR9의 효소 결합 면역흡착 분석법 측정을 위해 저장됩니다. 동시에, 항응고된 전혈에서 유전체 DNA를 추출하여 선택된 사이토카인 및 톨 유사 수용체 관련 유전자의 중합효소 연쇄반응 제한 조각 길이 다형성 유전자형 분석에 활용합니다. 워크플로우에는 샘플 취급, 중복 ELISA 측정, DNA 순도 평가, 유전자형 호출, 반복 유전자형 분석에 대한 품질 관리 절차도 포함됩니다. 통계 분석에는 임상 특성과 바이오마커 수준의 그룹 간 비교, 하디-와인버그 평형 검사, 유전자형 및 대립유전자 연관에 대한 로지스틱 회귀 분석, 관련 임상 공변량에 대한 조정, 다중 유전적 비교에 대한 거짓 발견율 보정이 포함됩니다. 이러한 임상적, 염증적, 면역유전적 작업 흐름이 자연 뇌내출혈 후 감염 위험 프로파일을 특성화하는 데 도움이 될 수 있으나, 정기적인 임상 적용 전에는 전향적 다기관 검증이 여전히 필요합니다.

서론

자연성 뇌내출혈(ICH)은 뇌 혈관의 비외상성 파열로 인해 발생하는 심각한 뇌졸중 아형으로, 신경학적 사망과 장애의 주요 원인으로 남아 있습니다. 임상적으로 ICH는 일반적으로 1차 또는 2차로 분류됩니다. 원발성 ICH가 대부분의 사례를 차지하며, 주로 고혈압성 동맥병증 또는 뇌 아밀로이드 혈관병증과 관련이 있습니다. 반면, 2차 ICH는 동맥류, 동정맥 기형, 모야모야병, 응고 장애 등 구조적 또는 혈액학적 원인과 관련이 있습니다. ICH는 허혈성 뇌졸중보다 전체 뇌졸중 사건의 비중은 적지만, 단기 사망률과 장기 기능 부담이 불균형적으로 높으며, 2,3,4,5를 차지합니다.

ICH 이후 주요 병원 내 합병증 중 병원 내 폐 감염은 특히 자주 발생하며 임상적으로 중요한 결과를 초래합니다. 이전 연구들은 뇌졸중 또는 뇌내출혈 후 입원 환자의 상당수 환자에서 폐 감염이 발생할 수 있으며, 이는 더 긴 입원 기간, 더 큰 의료 부담, 더 열악한 신경학적 회복, 그리고 사망률 증가와 연관되어 있음을 보여주었습니다 6,7,8. 이 합병증의 임상적 중요성은 단순한 호흡기 관리만을 넘어섭니다. 의식 저하, 삼킴 및 기침 반사 장애, 고정, 기계적 기도 지지, 침습적 배수 절차 등은 ICH 후 급성기 감염 위험을 높일 수 있습니다. 동시에 폐 감염은 전신 염증을 더욱 악화시키고 산소 공급을 저해하며 신경중환자 치료를 복잡하게 만들어 2차 손상 과정을 증폭시킬 수 있습니다.

이 관계는 생물학적으로 타당한데, ICH는 국소 뇌혈관 사건일 뿐만 아니라 전신 면역 조절 장애를 유발하는 유발 요인이기 때문입니다. 급성 뇌출혈은 염증성 연쇄반응을 활성화하고, 선천 면역 신호를 변화시키며, 신경염증과 말초 숙주 방어의 균형을 깨뜨릴 수 있습니다. 이러한 맥락에서 일부 환자는 유사한 임상 관리 하에서도 병원 내 감염에 더 취약해질 수 있습니다. 따라서 ICH 후 폐 감염은 단지 침상 노출이나 지지 치료의 결과로만 보아서는 안 되며; 또한 숙주 염증 활성화와 면역 반응성의 차이를 반영할 수도 있습니다.

이 합병증의 임상적 관련성에도 불구하고, 조기 위험 계층화에 대한 실질적인 접근법은 여전히 제한적입니다. 기존의 임상적 위험층화 접근법은 일반적으로 신경학적 중증도, 연령, 삼킴 장애, 동반 질환, 침습적 시술, 기기 노출 기간과 같은 침상 및 입원 관련 변수에 의존합니다. 이 도구들은 응급실, 중환자실, 신경중환자실 환경에서 신속하게 적용할 수 있어 임상적으로 유용합니다. 그러나 임상 변수만으로는 유사한 신경학적 중증도와 유사한 치료 노출을 가진 환자들이 서로 다른 감염 결과를 보이는 이유를 완전히 설명하지 못할 수 있습니다. 따라서 염증 바이오마커와 숙주 면역유전적 인자는 특히 입원 후 초기 기간 동안 예방 감시 및 호흡기 관리 결정이 이루어지는 시기에 생물학적 감수성에 대한 추가 정보를 제공할 수 있습니다.

사이토카인은 면역 및 염증 반응의 중심 매개체이며, 톨 유사 수용체(TLR) 경로는 병원체 인식과 선천 면역 활성화에 중요한 역할을 합니다. 혈청 사이토카인 및 TLR 단백질 측정은 초기 전신 염증 활성화의 스냅샷을 제공할 수 있으며, 선택된 면역-유전자 다형성은 사이토카인 생성, 수용체 신호 전달, 염증 조절에서 더 안정적인 숙주 차이를 반영할 수 있습니다. 임상 평가만을 위한 것과 비교할 때, 바이오마커와 다형성을 결합한 워크플로우는 현재 염증 상태와 각 환자의 근본적인 면역 반응을 모두 포착할 수 있습니다. 이 접근법은 임상 평가를 대체하려는 것이 아니라, 자발적 ICH 이후 더 엄격한 감염 감시가 필요한 환자를 식별하는 데 도움이 될 수 있는 실험실 및 숙주 유전 정보를 추가하여 보완하기 위한 것입니다.

이에 근거하여, 병원 내 폐 감염이 발생하는 자발성 ICH 환자는 감염이 없는 환자와 달리 뚜렷한 염증 프로필과 선택된 면역 관련 유전적 다형성 분포가 있을 것이라고 가정했습니다. 이 가설을 검증하기 위해, 본 후향적 임상-실험실 연구는 원발성 자발성 ICH 환자에서 초기 입원 후 혈청 사이토카인, TLR2, TLR4, TLR9의 혈청 단백질 수치, 그리고 선택된 염증성 유전자 다형성을 분석하였다. 이 워크플로우는 급성 입원 중 채취된 말초혈, ELISA 기반 단백질 정량, PCR-RFLP 기반 유전체형 분석, 병원 내 폐 감염 환자 간 통계적 비교를 사용합니다. 목적은 감염 위험과 관련된 염증성 및 숙주 유전적 프로필을 재현 가능한 틀로 특성화하여 급성 병원 환경에서 고위험 환자를 조기 인식하는 데 도움을 주는 것이었습니다.

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프로토콜

이 연구는 중국 저장성 자싱 제1병원 자싱대학교 부속 병원 윤리위원회의 승인을 받았습니다(승인 번호 2025-LP-599). 인간 참여자가 포함된 모든 절차는 제도적 요구사항과 헬싱키 선언 원칙에 따라 수행되었습니다. 혈액 채취 및 데이터 사용에 관한 서면 동의서가 모든 참가자 및/또는 그들의 법적 권한 대리인으로부터 샘플 채취 전에 이루어졌습니다.

이 워크플로우에서 사용되는 모든 상업용 키트, 시약, 소모품, 기기, 소프트웨어, 제조사, 카탈로그 번호 및 주요 운영 사양은 재료표에 나열되어 있습니다.

연구 범위, 자격 및 환자 그룹

본 연구는 2019년 5월부터 2024년 9월까지 중국 저장성 자싱 자싱 대학교 제1병원 응급 중환자실 응급 및 중환자실에 입원한 원발성 자발성 뇌내출혈(ICH) 환자들을 대상으로 단일 기관 후향적 임상 실험실 코호트 분석으로 수행되었습니다. ICH 진단은 중국 뇌출혈 진단 및 치료 지침(2019)에 따라 두개내 컴퓨터 단층촬영 또는 자기공명영상으로 확정되었다10.

환자들은 영상 확인 1차 자발성 ICH를 가지고 있고, 증상 발현 후 3일 이내에 입원했으며, 완전한 주요 임상 변수와 염증성 바이오마커 측정 및 유전분석을 위한 말초혈액 샘플을 보유한 경우 자격이 있었습니다. 환자는 외상성 두개내 출혈, 2차 ICH, 입원 전 또는 입원 후 48시간 이내에 있는 폐 감염, 의사의 권고 없이 퇴원한 경우, 입원 후 48시간 이내의 사망, 악성 종양 또는 자가면역질환 병력, 또는 주요 임상, 실험실 또는 유전자형 분석 기록이 불완전한 경우 제외되었습니다. 선별 검사 후 360명의 환자가 적격 기준을 충족하여 최종 분석에 포함되었습니다. 그중 180명은 입원 중 병원 내 폐 감염이 발생했고, 180명은 그렇지 않았습니다. 환자들은 입원 후 병원 내 폐 감염이 발생했는지에 따라 폐 감염 그룹 또는 무감염 그룹으로 배정되었습니다.

최종 분류 전에 영상 진단, 입원 시간, 감염 시기, 혈액 샘플 가용성, 임상 및 실험실 기록의 완전성을 점검하였습니다. 이 단계는 오분류를 줄이고 모든 포함된 사례가 임상 비교, 염증 바이오마커 측정, 유전자형 분석을 위한 완전한 데이터를 확보하도록 하기 위해 사용되었습니다.

병원 내 폐 감염의 정의

병원 내 폐 감염은 방사선 증거와 임상 기준11을 결합하여 정의하였다. 방사선 확인은 흉부 방사선 촬영 또는 컴퓨터 단층촬영에서 새로운 또는 진행성 침윤, 고정 또는 그라운드글라스 병변이 필요했습니다. 또한 다음 기준 중 최소 두 가지가 충족되어야 했습니다: 체온 > 38 °C, 고름성 호흡기 분비물, 또는 말초 백혈구 수치가 비정상이며 백혈구 수치가 4 × 109/L 또는 > 10 × 10 9/L <.

입원 전 또는 입원 후 48시간 이내에 진단된 폐 감염은 병원 내 폐 감염으로 분류되지 않았습니다. 감염 분류는 방사선 보고서, 체온 기록, 호흡기 분비물 문서, 말초 혈액 수치 결과, 임상 진단 기록을 통해 확인되었습니다.

생물안전 및 폐기물 처리

인간 혈액, 혈청, 혈액 유래 DNA는 표준 생물안전 2단계 예방 조치 하에 취급되었습니다. 실험실 직원들은 혈액 처리, 혈청 분리, ELISA 검사, DNA 추출, PCR 준비, 겔 전기영동, 제한 소화, 자외선 시각화 시 장갑, 실험실 코트, 마스크, 보호 안경을 착용했습니다. 혈액 튜브는 가공 전에 누출이나 파손 여부를 검사했습니다. 원심분리는 캡이 있는 튜브나 구석이 있는 경우 밀봉된 원심분리기 버킷을 사용하여 수행되었습니다.

날카로운 용기는 즉시 승인된 용기에 버려졌습니다. 혈액에 오염된 튜브, 피펫 팁, 장갑, ELISA 플레이트 및 기타 일회용 소모품은 생물학적 실험실 폐기물로 폐기되었습니다. 액체 생물 폐기물은 폐기 전에 기관 절차에 따라 소독되었습니다. 아가로스 겔, 폴리아크릴아마이드 겔, 염색 시약, 전기영동 관련 재료는 기관의 화학 및 실험실 폐기물 요구에 따라 폐기되었습니다.

PCR 시약 준비, DNA 주형 첨가, 증폭 제품 취급, 제한 분해, 겔 전기영동은 오염을 줄이기 위해 가능한 한 분리되었습니다. PCR 및 DNA 처리에는 에어로졸 저항성 피펫 팁이 사용되었습니다. 자외선 시각화는 보호막이나 젤 문서 시스템으로만 수행되었으며, 눈이나 피부에 직접 노출되는 자외선은 피했습니다.

말초 혈액 채취 및 샘플 처리

분석 전 변이를 줄이기 위해, 입원 다음 날 아침 8시에 최소 12시간 이상의 하룻밤 금식 후 말초정맥 혈액 10mL를 채취했습니다. 5mL는 혈청 준비를 위해 일반 진공관에 혈액을 채취하고, 나머지 5mL는 유전체 DNA 추출을 위해 헤파린화된 튜브에 담갔습니다.

처리 전에 각 튜브는 환자 식별, 채취 시간, 관 종류, 혈액량, 누출, 눈에 띄는 응고, 대다한 용혈 여부를 확인했습니다. 잘못된 표지, 혈액량 부족, 관 누출 또는 항응고 튜브 내 눈에 띄는 응고가 있는 샘플은 후속 분석에서 제외하였습니다. 일반 튜브 안의 혈액은 실온에서 60분간 응고된 후, 1,500 × g 에서 4 °C에서 10분간 원심분리했습니다. 혈청 상청액은 세포층을 교란시키지 않고 멸균된 저단백질 결합 폴리프로필렌 튜브로 옮겨져 0.5 mL 분획으로 분리되어 −80 °C에서 분석할 때까지 보관되었습니다.

눈에 띄는 중등도 또는 중증 용혈을 보이는 샘플은 ELISA 기반 정량에서 제외하였다. 경미하게 용혈된 샘플은 기록되었으며 1차 사이토카인 분석에는 사용되지 않았습니다. 눈에 띄는 탁도, 명백한 지방혈증, 잔류 부피 부족, 반복적인 동결-해동 노출이 있는 샘플은 검사 전에 표시되었습니다. 분석 전에 한 번의 동결-해동 사이클을 거친 혈청 알리코트는 없었다.

ELISA에 의한 사이토카인 정량

IL-1β, IL-6, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α의 혈청 농도는 상용 인체 샌드위치 ELISA 키트를 사용하여 혈청 샘플에 검증되어 측정되었습니다. 혈청 알리코트는 해동되어 부드럽게 혼합한 후 용혈, 탁도, 리핏혈증, 부피 부족, 동결-해동 이력을 검사한 후 적재하였습니다.

표준, 빈 웰, 혈청 샘플이 두 겹으로 적재되었다. 표준 곡선은 키트 설명서에 따라 표준 농도의 연속 희석과 빈 대조군을 사용하여 각 판에 생성되었습니다. 광학 밀도는 450 nm에서 측정되었고, 570 nm에서 보정 기준 보정은 보정된 마이크로플레이트 리더기를 사용했습니다. 농도는 4매개변수 로지스틱 곡선 적합을 통해 계산되었습니다.

분석 결과는 표준 곡선이 적절한 농도-반응 패턴을 보였고, 빈 웰에서 배경이 낮으며, 중복 샘플 변이가 10%≤일 때만 받아들여졌다. CV가 10%> 중복된 샘플은 충분한 부피가 확보될 때 원래 혈청 알리코트에서 재분석하였다. 신뢰할 수 있는 표준 곡선 범위를 벗어난 샘플은 키트 설명서에 따라 희석되거나 반복되었습니다. 일관성 없는 표준, 과도한 배경, 명백한 가장자리 효과가 나타나는 판이 반복되었습니다.

데이터 수용에 사용된 낮은 분석 검출 한계는 IL-1β 2.0 pg/mL, IL-6 1.5 pg/mL, IL-10 2.0 pg/mL, IL-17 3.0 pg/mL, IFN-γ 4.0 pg/mL, TNF-α 2.5 pg/mL였습니다. 최종 사이토카인 값은 샘플 식별자, 플레이트 지도, 중복 판독 기록, 샘플 품질 노트와 대조하여 통계 분석을 수행하였습니다.

ELISA에 의한 혈청 TLR2, TLR4, TLR9의 정량

혈청 TLR2, TLR4, TLR9 단백질 수준은 상용 인간 ELISA 키트를 사용하여 혈청 표본에 대해 검증된 결과를 측정하였습니다. 혈청 샘플은 해동되어 부드럽게 혼합된 후, 사이토카인 측정에 적용된 동일한 샘플 품질 기준으로 검사하였습니다.

표준, 빈 웰, 혈청 샘플을 중복 분석하였다. 판은 450nm에서 읽히고 기준 보정은 570nm에서 측정되었으며, 농도는 4매개변수 로지스틱 회귀분석을 통해 계산되었습니다. 표준 곡선이 유효하고, 빈 우물이 예상 배경 범위 내에 있으며, 중복 CV가 10% ≤ 있을 때 결과가 받아들여졌습니다. 이 중복 CV 임계값을 초과한 샘플은 충분한 샘플이 남으면 재검사되었습니다.

결과 수용에 사용된 낮은 분석 검출 한계는 TLR2의 경우 0.10 ng/mL, TLR4의 0.12 ng/mL, TLR9의 경우 0.15 ng/mL였습니다. 최종 TLR2, TLR4, TLR9 값은 통계 분석 전에 샘플 식별자, 플레이트 맵, 중복 기록, 샘플 품질 노트와 대조되었습니다.

유전체 DNA 추출

실리카 컬럼 기반 혈액 유전체 DNA 추출 키트를 사용해 헤파린 항응고가 된 전혈에서 유전체 DNA를 추출했습니다. 추출 전에 항응고혈 샘플의 올바른 표지, 충분한 양, 눈에 띄는 응고, 누출, 보관 상태를 점검했습니다.

DNA 순도와 농도는 분광광도계로 평가되었습니다. A260/A280 비율이 1.80에서 2.00 사이의 샘플만이 PCR 증폭에 사용되었습니다. 이 범위를 벗어난 샘플은 부드러운 혼합 후 재측정되었습니다. 비정상적인 순도 비율이 지속되면, 충분한 전혈이 남아 있을 때 DNA 추출을 반복했습니다.

DNA는 뉴클레아제가 없는 물로 희석하여 작동 농도인 50 ng/μL로 만들었고, PCR 증폭 전까지 -20 °C에서 저장되었습니다. PCR 설치 전에 각 DNA 샘플은 농도, 순도, 샘플 식별자, 동결-해동 이력을 검사했습니다.

PCR-RFLP 유전자형 분석 및 유전자형 호출

IL-1B +3954 C/T, IL-10-1082 G/A, IL-10-819 T/C, TNF-α-308 G/A, TLR2-196에서 174 IN/DEL, TLR4 Asp299Gly, TLR4 Thr399Ile, TLR9 rs187084, IFN-γ +874 A/T, IFN-γ +2108 A/G에 대해 중합효소 연쇄반응-제한 조각 길이 다형성(PCR-RFLP)을 사용하여 유전형 특이적 프라이머 서열, 예상 증폭자 크기, 제한 효소 및 유전자형 특이적 소화 패턴은 보충표 1에 제공된다.

PCR 증폭은 25 μL 최종 반응 부피에서 수행되었으며, 여기에는 10 × 버퍼 2.5 μL 2.5 μL, dNTP 혼합물 2.0 μL 각각 2.5 mM, 10 μM 전방 프라이머 1.0 μL, 10 μM 역프라이머 1.0 μL, 5 U/μL 0.25 μL Taq DNA 중합효소, 50 ng/μL 2.0 μL 유전체 DNA 2.0 μL 포함 그리고 16.25μL의 무핵효소 물. PCR 마스터 믹스는 깨끗한 사전 PCR 부위에 준비되었고, DNA 템플릿은 마지막에 추가되었습니다. 각 PCR 검사마다 무템플릿 음성 대조군이 포함되었습니다.

열 프로파일은 95 °C에서 5분간 초기 변성, 95 °C에서 30초간 변성, 프라이머 쌍에 따라 58–62 °C에서 30초간 어닐링, 72 °C에서 30초간 확장, 최종 72 °C에서 7분간 확장하는 방식으로 구성되었습니다. PCR 생성물은 제한 분해 전에 1.5% 아가로스 젤에서 먼저 확인되었습니다.

PCR 증폭은 예상되는 증폭 밴드가 보이고, 무주형 대조군에서는 증폭이 없을 때만 허용되었다. 음성 대조군에서 약한 밴드, 비특이적 증폭, 프라이머-다이머 간헐, 오염 등의 반응이 반복되었습니다.

제조사 지침에 따라 PCR 제품은 해당 제한 엔도뉴클레아제와 함께 3시간 동안 총 15 μL 소화량 내에서 3시간 동안 소화되었습니다. 소화된 조각은 대부분의 유전자좌에 대해 2.5% 아가로스 겔로 분리되었습니다. TLR2-196에서 -174 인치/델 유전자좌는 8% 폴리아크릴아마이드 젤에서 분리되어 조각 구별을 개선하였다.

제한 소화는 조각 패턴이 예상되는 유전자형 특이적 소화 프로필과 일치할 때만 허용되었다. 소화 불완전, 띠가 번지거나, 예상치 못한 조각 크기, 불명확한 분리 반응이 반복되었습니다. 핵산 염색 후 자외선 조명 하에서 띠가 시각화되었습니다. 젤 이미지는 샘플 식별자, 유전자 좌 이름, 실행 날짜, 겔 번호와 함께 저장되었습니다.

유전자형 분류는 두 명의 블라인드 실험실 연구자가 독립적으로 수행했습니다. 불일치하거나 모호한 유전자형 호출은 원본 겔 이미지를 사용하여 검토하고, 필요 시 PCR 증폭을 통해 반복하였습니다. 무작위로 선정된 샘플의 10%는 품질 관리를 위해 재유전자형 배분되었으며, 일치율은 99.2%였습니다. 최종 유전자형 데이터는 샘플 식별자, 좌위명, 유전자형 호출, 품질 관리 기록을 확인한 후에야 분석 데이터셋에 입력되었습니다.

통계 분석

통계 분석은 적절한 통계 분석 소프트웨어를 사용하여 수행되었습니다. 임상, ELISA, 유전자형 데이터셋은 식별 해제된 환자 코드를 사용해 통합되었습니다. 분석 전에 환자 코드의 중복, 불일치, 누락 여부를 점검하였습니다. 모든 환자가 임상, 염증, 유전자형 핵심 데이터를 보유하고 있었기 때문에 완전 사례 전략이 사용되었습니다.

적절한 통계 분석 소프트웨어에서는 폐 감염 상태를 그룹 변수로 코딩하고, 폐 감염 없음 그룹을 기준 범주로 사용했습니다. 연속 변수들은 먼저 샤피로-윌크 검정을 사용하여 정규성을 검증했습니다. 정규분포 연속 변수는 평균 ± 표준편차로 표현하고 독립 표본 학생의 t 검정으로 비교하였습니다. 비정규분포 연속 변수는 중간값으로 보고되어 Mann-Whitney U 검정과 비교하였다. 범주별 변수는 카운트와 백분율로 표현되었으며, 적절히 카이제곱 검정 또는 피셔 정확 검정으로 비교되었습니다.

폐 감염이 없는 그룹의 유전자형 분포는 연관 분석 전에 하디-와인버그 평형을 평가하였다. 유전자형 및 대립유전자 빈도는 n(%)로 요약되었습니다. 폐 감염 위험에 대한 오즈비와 95% 신뢰구간은 다변수 로지스틱 회귀 모델을 사용하여 추정하였다. 폐 감염 상태를 종속 변수로 입력하였다. 유전자형, 대립유전자 또는 바이오마커 변수는 각 분석에 지정된 독립 변수로 입력되었습니다.

나이와 성별은 사전에 기본 모델에 입력되었습니다. BMI, 만성 폐쇄성 폐질환, 심장 질환, 뇌척수액 누출, 배액관 유입 시간, 입원 글래스고 혼수 척도 항목이 임상적으로 관련성 있거나 그룹 간 기저선 불균형을 보였기 때문에 완전 조정 모델에 동시에 입력되었습니다. 다중공선성은 분산 인플레이션 인플레이션(VIF)을 사용하여 평가되었으며, VIF<5.0이 허용 가능한 것으로 간주되었습니다.

다중 다형성이 검사되었기 때문에, Benjamini-Hochberg 거짓 발견률 보정이 유전적 연관성 분석에 적용되었다12. 유전적 연관성 검사의 P 값은 가장 작은 것부터 큰 것까지 순위를 매기고, Benjamini-Hochberg 절차에 따라 보정된 유의성을 결정했습니다. 모든 검사는 양측 검사였으며, 다중 비교 조정 후 별도 명시가 없는 한 P <0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.

최종 결과물은 원고 준비 전에 원본 데이터셋, ELISA 품질 관리 기록, 유전자형 호출 기록, 표 값과 대조하여 검증되었습니다. 연구가 후향적 관찰 설계를 사용했기 때문에 결과는 인과관계보다는 연관성으로 해석되었습니다.

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결과

임상 지표

기초 임상 특성은 표 1에 요약되어 있습니다. 최종 분석에는 자발성 뇌내출혈 환자 360명이 포함되었으며, 입원 중 병원 폐 감염이 발생한 환자 180명과 발생하지 않은 환자 180명으로 구성되었습니다. 연령(62.4세± 6.8세± 7.0세, P > 0.05), 성별 분포(142/180, 78.9% 대 137/180, 76.1%, 흡 연 > 0.05), 흡연 이력(94/180, 52.2% 대 99/180, 55.0%, P > 0.05), 음주이력(99/180, 55.0% 대 106/180, 58.9%, P > 0.05), 당뇨병(18/180, 10.0% 대 21/180), 11.7%, P > 0.05), 또는 고혈압(21/180, 11.7% 대 24/180, 13.3%...

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토론

자발성 뇌내출혈(ICH)은 가장 심각한 뇌졸중 아형 중 하나로 남아 있으며, 상당한 조기 사망과 장기 장애 부담을 계속 초래하고 있습니다13. 임상 실무에서 ICH 환자는 특히 병원 내 합병증에 취약한데, 신경학적 손상은 기도 보호를 약화시키고 기침 효과를 저하시키며 움직임을 제한하고 침습적 보조 시술에 노출될 수 있기 때문입니다. 이러한 합병증 중 병원 폐 감염은 입원 기간을 연장하고 자원 사용을 증가시키며, 산소 공급과 전신 염증 스트레스 저하로 인해 신경학적 회복을 더욱 저해할 수 있어 특히 중요합니다14. 이러한 임상 현실은 감염 위험이 높은 환자를 조기에 식별하고 급성 치료 단계에서 보다 집중적인 감시가 필요함을 강화합니다.

본 연구에서 병원 내 폐 감염이 발생한 환자들은 만성 폐쇄성...

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공개 사항

저자들은 이 작업과 관련된 경쟁 재정적 이해관계나 기타 이해 충돌이 없음을 선언합니다.

감사의 글

저자들은 환자 진료에 참여한 임상 직원들과 문헌 검색 및 데이터 정리를 지원한 분들께 감사를 표합니다. 이 연구는 자싱시 보건과학기술기획 프로젝트(보조금 번호) 지원의 하였습니다. JWKJ-25005)를 사용했습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
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Human TNF-α ELISA KitInvitrogen / Thermo Fisher ScientificKHC3011ELISA kit for quantitative measurement of human TNF-α in serum.
Human TLR2 / Toll-like Receptor 2 ELISA KitSigma-Aldrich / MerckRAB0744-1KT96-well ELISA kit for measurement of human TLR2 in serum or plasma samples.
Human TLR4 ELISA Kit, colorimetricNovus Biologicals / Bio-TechneNBP3-11807Colorimetric sandwich ELISA kit for measurement of human TLR4 in serum, plasma, or other biological fluids.
Human TLR9 ELISA Kit, colorimetricNovus Biologicals / Bio-TechneNBP2-76574Colorimetric ELISA kit for measurement of human TLR9 in serum samples.
Absorbance microplate readerAgilent BioTek800 TSMicroplate reader for ELISA optical-density measurement at 450 nm with reference correction at 570 nm.
QIAamp DNA Blood Mini KitQIAGEN51104Silica membrane-based kit for genomic DNA extraction from anticoagulated whole blood.
NanoDrop One Microvolume UV-Vis SpectrophotometerThermo ScientificND-ONE-WMicrovolume spectrophotometer for DNA concentration and A260/A280 purity assessment.
SimpliAmp Thermal CyclerApplied Biosystems / Thermo Fisher ScientificA24811Thermal cycler used for endpoint PCR amplification in PCR-RFLP genotyping.
PCR Master Mix, 2XThermo ScientificK0171Premixed PCR reagent containing Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, and reaction buffer; used for conventional PCR amplification.
Recombinant Taq DNA PolymeraseThermo ScientificEP0401Alternative enzyme source for locus-specific PCR reactions when separate PCR components are used instead of 2X master mix.
Nuclease-free waterThermo ScientificR0581Molecular-biology-grade water used for PCR setup, DNA dilution, and no-template controls.
Custom DNA primersSangon BiotechCustom synthesisLocus-specific primers for PCR-RFLP genotyping; primer sequences are listed in Supplementary Table S1.
Restriction endonucleases for PCR-RFLPThermo Scientific / New England BiolabsLocus-specific enzymes listed in Supplementary Table S1Restriction enzymes used for genotype-specific digestion of PCR products. The enzyme selected for each locus should match the digestion pattern listed in Supplementary Table S1.
Agarose I, molecular biology gradeThermo Scientific17850Agarose for preparation of 1.5% and 2.5% gels used to confirm PCR products and resolve most RFLP fragments.
GeneRuler 50 bp DNA LadderThermo ScientificSM0371DNA size marker for PCR amplicons and RFLP fragment-size estimation.
SYBR Safe DNA Gel StainInvitrogen / Thermo Fisher ScientificS33102Nucleic-acid gel stain for visualization of DNA in agarose or acrylamide gels; used as a reduced-hazard alternative to ethidium bromide.
Horizontal agarose gel electrophoresis systemBio-RadMini-Sub Cell GT system / 1704360 baseElectrophoresis system for agarose gel separation of PCR and RFLP products.
Vertical PAGE electrophoresis systemBio-RadMini-PROTEAN Tetra Cell / 1658001Vertical electrophoresis system for 8% polyacrylamide gel separation when higher-resolution fragment discrimination is required.
Gel documentation system with UV or blue-light transilluminationBio-Rad / equivalent laboratory systemGel Doc XR+ or equivalentImaging system for documenting stained DNA bands after gel electrophoresis. Use UV shielding or blue-light mode where available.
Refrigerated centrifugeEppendorf / equivalent laboratory centrifuge5424 R or equivalentRefrigerated centrifuge used for serum separation at 1,500 × g and 4 °C.
−80 °C ultra-low temperature freezerThermo Scientific / equivalent laboratory freezerForma 900 Series or equivalentStorage of serum aliquots before ELISA analysis.
IBM SPSS StatisticsIBMVersion 25.0Statistical software used for descriptive statistics, normality testing, group comparisons, logistic regression, and model-output export.
Spreadsheet softwareMicrosoftExcel for Microsoft 365Used for data checking, plate-map organization, duplicate-value review, and preparation of merged analysis files before SPSS analysis.

참고문헌

  1. O'Carroll CB, Brown BL, Freeman WD. Intracerebral hemorrhage: a common yet disproportionately deadly stroke subtype. Mayo Clin Proc. 2021;96(6):1639-1654.
  2. Hostettler IC, Seiffge DJ, Werring DJ. Intracerebral hemorrhage: an update on diagnosis and treatment. Expert Rev Neurother. 2019;19(7):679-694.
  3. Al-Kawaz MN, Hanley DF, Ziai W. Advances in therapeutic approaches for spontaneous intracerebral hemorrhage. Neurotherapeutics. 2020;17(4):1757-1767.
  4. Garg R, Biller J. Recent advances in spontaneous intracerebral hemorrhage. F1000Res. 2019;8:F1000 Faculty Rev-302.
  5. Kuohn LR et al. Cause of death in spontaneous intracerebral hemorrhage survivors: multistate longitudinal study. Neurology. 2020;95(20):e2736-e2745.
  6. Maramattom BV et al. Pulmonary complications after intracerebral hemorrhage. Neurocrit Care. 2006;5(2):115-119.
  7. Wilson RD. Mortality and cost of pneumonia after stroke for different risk groups. J Stroke Cerebrovasc Dis. 2012;21(1):61-67.
  8. Hinduja A et al. Nosocomial infections in patients with spontaneous intracerebral hemorrhage. Am J Crit Care. 2015;24(3):227-231.
  9. Ji R et al. Risk score to predict hospital-acquired pneumonia after spontaneous intracerebral hemorrhage. Stroke. 2014;45(9):2620-2628.
  10. Cao Y et al. Chinese Stroke Association guidelines for clinical management of cerebrovascular disorders: executive summary and 2019 update of clinical management of intracerebral haemorrhage. Stroke Vasc Neurol. 2020;5(4):396-402.
  11. Kalil AC et al. Management of adults with hospital-acquired and ventilator-associated pneumonia: 2016 clinical practice guidelines by the Infectious Diseases Society of America and the American Thoracic Society. Clin Infect Dis. 2016;63(5):e61-e111.
  12. Benjamini Y, Hochberg Y. Controlling the false discovery rate: a practical and powerful approach to multiple testing. J R Stat Soc Series B Methodol. 1995;57(1):289-300.
  13. van Asch CJJ et al. Incidence, case fatality, and functional outcome of intracerebral haemorrhage over time, according to age, sex, and ethnic origin: a systematic review and meta-analysis. Lancet Neurol. 2010;9(2):167-176.
  14. Alsumrain M et al. Predictors and outcomes of pneumonia in patients with spontaneous intracerebral hemorrhage. J Intensive Care Med. 2013;28(2):118-123.
  15. Lindner A et al. Early predictors for infectious complications in patients with spontaneous intracerebral hemorrhage and their impact on outcome. Front Neurol. 2019;10:817.
  16. Grossmann I et al. Stroke and pneumonia: mechanisms, risk factors, management, and prevention. Cureus. 2021;13(11):e19912.
  17. Yan J et al. ICH-LR2S2: a new risk score for predicting stroke-associated pneumonia from spontaneous intracerebral hemorrhage. J Transl Med. 2022;20(1):193.
  18. Grimes DA, Schulz KF. Bias and causal associations in observational research. Lancet. 2002;359(9302):248-252.
  19. Tapia-Pérez JH et al. Assessment of systemic cellular inflammatory response after spontaneous intracerebral hemorrhage. Clin Neurol Neurosurg. 2016;150:72-79.
  20. Yu T, Liu H, Liu Y, Jiang J. Inflammatory response biomarkers nomogram for predicting pneumonia in patients with spontaneous intracerebral hemorrhage. Front Neurol. 2023;13:1084616.
  21. Smith AJ, Humphries SE. Cytokine and cytokine receptor gene polymorphisms and their functionality. Cytokine Growth Factor Rev. 2009;20(1):43-59.
  22. Kawai T, Akira S. Toll-like receptors and their crosstalk with other innate receptors in infection and immunity. Immunity. 2011;34(5):637-650.
  23. Sepahi S et al. Haplotype analysis of interleukin-10 gene promoter polymorphisms in chronic hepatitis C infection: a case control study. Viral Immunol. 2014;27(8):398-403.
  24. Areeshi MY et al. IFN-gamma +874 A>T (rs2430561) gene polymorphism and risk of pulmonary tuberculosis: a meta-analysis. Arch Med Sci. 2021;17(1):177-188.
  25. Teuffel O, Ethier MC, Beyene J, Sung L. Association between tumor necrosis factor-alpha promoter -308 A/G polymorphism and susceptibility to sepsis and sepsis mortality: a systematic review and meta-analysis. Crit Care Med. 2010;38(1):276-282.
  26. Ollier WE. Cytokine genes and disease susceptibility. Cytokine. 2004;28(4-5):174-178.
  27. Moons KGM et al. Prognosis and prognostic research: what, why, and how? BMJ. 2009;338:b375.
  28. Collins GS, Reitsma JB, Altman DG, Moons KG. Transparent reporting of a multivariable prediction model for individual prognosis or diagnosis: the TRIPOD statement. BMJ. 2015;350:g7594.

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