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연구 논문

통풍성 관절염 치료를 위한 Rhizoma drynariae 총 플라보노이드의 기전 및 실험적 검증

111 조회수

⸱

DOI:

10.3791/70849

⸱

2026년 6월 5일

 ,  , 
1School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, 2Quality department, Beijing Tongrentang Kangyang Industry Development Co., Ltd, 3Engineering Research Center of Good Agricultural Practice for Chinese Crude Drugs, Ministry of Education

이 논문에서

요약

Rhizoma Drynariae(TFRD)의 총 플라보노이드는 염증성 관절염(GA)을 완화하여 염증성 세포 침윤을 억제하고 AKT, MAPK, N-ΚB 신호 전달 경로를 주로 억제하여 TNF-α, IL-6, IL-17A 수치를 낮추어 항염증 및 면역조절 치료 잠재력을 강조합니다.

초록

통풍성 관절염(GA)은 관절 공간과 주변 조직에 일나트륨 요산염 (MSU) 결정이 침착되어 발생하는 염증성 관절 질환입니다. 전통 중국 의학에서 Rhizoma Drynariae (구수이부)는 오랫동안 GA 임상 치료에 널리 사용되어 왔으며, 플라보노이드는 주요 생리활성 성분으로 간주됩니다. 이 연구는 네트워크 약리학을 활용하여 GA에 대한 Rhizoma Drinariae (TFRD)의 총 플라보노이드 구성 요소-표적 네트워크를 구축하여 핵심 구성 요소, 핵심 표적 및 관련 경로를 규명하였습니다. 쥐 모델은 관절 내 주입으로 모노소듐 우산염 결정 현탁액을 구축하고, TFRD 또는 양성 대조군인 콜히친을 경구 가베지로 처리하여 구축하였습니다. 샘플 수집 후, 네트워크 약리학 기반 예측 결과는 쥐 혈청 대사체학, 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA), 웨스턴 블롯 분석을 통해 검증되었습니다. 네트워크 약리학 분석 결과, TFRD의 항GA 효과는 IL6, AKT1, TNF, EGFR, JUN, PTGS2 등 주요 표적을 통해 매개되며, 주로 IL-17, TNF, NF-κB, MAPK, PI3K-AKT, JAK-STAT, T세포 수용체 신호 전달 경로와 같은 염증, 면역, 세포자사멸사 관련 경로와 관련이 있습니다. 마찬가지로, 대사체학 역시 염증 반응의 핵심적인 역할을 밝혀냈습니다. 헤마톡실린과 에오신(H&E) 염색 검사는 TFRD가 염증 세포 침윤을 감소시키는 것으로 확인되었습니다. ELISA 검사 결과, TFRD 그룹이 관활 조직에서 TNF-α, IL-6, IL-17A 발현을 유의하게 억제함을 확인하였습니다. 서부 블롯 분석은 TFRD가 쥐 낙막 조직에서 GA에 의해 유도된 AKT, MAPK p38, NF-κB p65의 과인산화를 억제함을 밝혀냈다. TFRD는 관련 염증 인자와 경로를 직접 조절함으로써 GA 쥐의 염증에 의해 유발되는 변화를 효과적으로 완화할 수 있습니다.

서론

통풍성 관절염(GA)은 관절 내부와 주변에 단우산나트륨(MSU) 결정이 침착되어 관절 부위 1,2를 자극함으로써 유발되는 염증성 관절 질환입니다. GA의 병인은 유전적 소인, 환경 영향, 대사 조절 장애가 복잡하게 얽혀 있으며, 주로 과도한 요산 생성이나 신 배설 부족으로 인한 고요산혈증이 특징입니다 3,4. 이로 인해 신장 조직과 관절 공간에 요산 결정이 전신적으로 축적되어 선천 면역계를 활성화하고 강한 염증 연쇄반응을 유발합니다 5,6. 최근 몇 년간 일련의 연구들은 전 세계적으로 GA의 유병률이 비만과 대사 증후군 발생률 증가와 함께 증가하여 기능 장애를 초래하고 영향을 받은 개인들에게 상당한 사회경제적 부담을 가하고 있음을 보여주었습니다7. 통풍성 관절염의 치료 전략은 급성 국소 관절 염증 조절과 장기 요산 수치 관리에 중점을 둡니다 8,9. 그럼에도 불구하고 기존 약물치료의 유용성은 부작용 프로필과 특정 금기증에 의해 제한되는 경우가 많습니다. 예를 들어, 만성 신장 질환 환자에서는 급성 신장 손상을 유발하거나 악화시킬 위험 때문에 비스테로이드성 소염제를 일반적으로 피합니다10,11. 마찬가지로 요산염 감소제인 알로푸리놀은 스티븐스-존슨 증후군과 같은 심각한 피부 부작용 위험을 잘 보고한 반면, 벤츠브로마론은 유의미한 간독성을 유발할 수 있습니다 11,12,13,14,15. 따라서 GA의 효과적인 관리를 위해 더 안전하고 광범위하며 기전적으로 표적화된 치료제 개발이 여전히 절실히 필요합니다.

전통 중의학(TCM)에서 GA는 "리제병"(관절 주행 통증), "통풍"(통풍 장애), "유주비"(정체-탁증 장애)와 같은 진단 범주에 속합니다. 감혈관 중의학 중의학은 항염증 및 진통 작용, 요산 대사 조절, 미세 순환 개선, 관절 기능 보존을 통해 시너지 효과를 제공하여 현대 연구의 주요 분야로 자리 잡고 있습니다 16,17,18,19. Rhizoma Drynariae(구스이부)는 다년생 양치식물인 Polypodiaceae과에 속하는 Drynaria fortunei(Kunze) J.Sm.의 건조된 근줄기에서 유래하여 임상 실무에서 GA 치료에 흔히 사용됩니다. Rhizoma Drinariae의 생리활성 화합물은 주로 플라보노이드, 페닐프로파노이드, 트리테르페노이드, 페놀산 및 그 당당체를 포함하고 있습니다20,21. 이 중 플라보노이드는 최근 몇 년간 가장 광범위하게 연구된 화합물 클래스22, 23, 24를 대표합니다. 이전 연구들은 플라보노이드가 주목할 만한 항염증 및 항산화 특성을 가지고 있음을 입증했습니다25.

예비 연구에 따르면 Rhizoma Drynariae(TFRD)의 총 플라보노이드는 골관절염, 류마티스 관절염 및 기타 염증성 관절 질환에서 염증 반응을 효과적으로 억제할 수 있음이 밝혀졌습니다 26,27,28. 그러나 TFRD가 GA에 대해 나타나는 근본 메커니즘은 아직 철저히 조사되지 않았습니다. 따라서 본 연구는 네트워크 약리학, 대사학, 분자생물학 실험을 결합한 통합 접근법을 사용하여 TFRD의 구체적 기전과 치료 효능을 탐구하고 검증하는 것을 목표로 합니다. TFRD 치료의 다성분, 다중 표적, 다중 경로 기전에 대한 체계적인 연구는 신약 개발을 진전시키고 GA 임상 관리를 위한 혁신적인 옵션과 실용적 해결책을 제공할 것으로 기대됩니다.

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프로토콜

이 연구는 중일 우호병원 동물윤리위원회(승인 번호: zryhyy21-22-08-10)의 검토 및 승인을 받았으며, 실험동물의 윤리적 관리 및 사용에 관한 기관 지침을 따릅니다.

TFRD 관련 및 GA 관련 표적의 예측 및 선별
Rhizoma Drynariae의 화학적 성분은 "Rhizoma Drynariae"를 검색어29로 사용하여 전통 중의학 시스템 약리학 데이터베이스 및 분석 플랫폼(TCMSP)에서 검색어로 검색되었습니다. 잠재적 생활성 성분에 대한 선별은 경구 생체이용률(OB) 30%≥ 약물유사성(DL) 0.1830, 31, 32≥ 기준을 기준으로 수행되었습니다. 생성된 화합물 풀에서 플라보노이드 성분이 분리되어 화학 구조에 따라 선택되었습니다. 이 플라보노이드 성분들은 이후 Rhizoma Drynariae의 총 플라보노이드(TFRD)라고 불리며, 하류 분석에 포함되었습니다. TCMSP 데이터베이스에서 TFRD와 관련된 표적 유전자를 검색한 후, 해당 표준화된 유전자 기호가 UniProt 데이터베이스33을 사용해 주석을 달았습니다. "통풍"이라는 검색어를 사용해 GeneCards 데이터베이스에서 질병 관련 표적을 검색하여 후보 유전자 집합을 구축했습니다34.

복합물-표적 네트워크 구축
TFRD 관련 표적과 GA 관련 표적 간의 교차점을 TFRD의 항GA 효과를 매개하는 주요 치료 표적으로 식별 및 정의되었으며, 겹치는 집합을 벤 다이어그램을 통해 시각화하였다. 또한 Cytoscape 소프트웨어35를 사용하여 "TFRD - 표적 - GA"의 조절 네트워크가 구축되고 분석되었습니다.

단백질-단백질 상호작용 네트워크
TFRD의 GA 치료 표적은 온라인 데이터베이스에 수입되어 단백질-단백질 상호작용(PPI) 네트워크를 생성했으며, 최소 요구 상호작용 점수는 "높은 신뢰도(0.700)"로 설정되었습니다36. PPI 네트워크는 Cytoscape 소프트웨어를 사용해 최적화되었고, 정도 중심성으로 순위가 매겨진 상위 30개의 핵심 표적을 선정하여 막대 플롯37,38을 생성했습니다.

KEGG 경로 농축 분석
KEGG 경로 농축 분석은 R 소프트웨어와 바이오컨덕터 데이터베이스를 사용하여 이 핵심 표적에 대해 수행되었습니다38,39. p 값 0.05< 경로는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다. 질병 및 대사 관련 경로를 제외한 후, Cytoscape에서 경로-표적 상호작용 네트워크를 시각화하였습니다. 이 경로들 중에서, P 값이 오름차순으로 순위가 매겨진 상위 20개 경로가 막대 그래프로 제시되었습니다.

약물 준비
일나트륨 우산염(MSU) 결정 현탁액을 제조하기 위해, 분석 저울을 이용해 500mg의 MSU 결정이 계량되고, 10mL의 정상 식염수와 2mL의 Tween 80에 분산된 후 자기적으로 저어주면서 가열했습니다. 혼합물을 정상 식염수와 함께 최종 부피 20 mL로 조절하여 25 mg/mL 현탁액을 얻었습니다. 오토클레이빙 후에는 현가가 4°C에서 보관되어 사용되었습니다. TFRD의 일반적인 임상 용량은 70kg 성인의 경우 하루 750mg으로, 이는 쥐 체중당 하루 67.5mg에 해당합니다. TFRD는 증류수에서 6.75 mg/mL 농도로 용해되어 4 °C에서 보관하여 나중에 사용했습니다. 체표면적 정규화 방법에 따르면, 임상 인간 용량(0.6 mg/60 kg)에서 전환된 쥐의 콜히친(양성 약물)의 경구 용량은 0.062 mg/kg입니다. 콜히친 용액은 0.0062 mg/mL 농도로 증류수에서 준비되어 4 °C에서 보관하여 나중에 사용했습니다.

동물
총 36마리의 6주 된 수컷 Sprague–Dawley(SD) 쥐(220 ± 10g)가 이 연구에서 사용되었습니다(동물 허가 번호는 SCXK [징] 2025-0008). 동물들은 중국-일본 우정병원 실험동물센터에서 표준 식이 조건, 22–24°C, 습도 50–70%에 수용되었습니다.

모델 설립 및 개입
1주일간의 적응 후, 쥐들은 무작위로 네 그룹(각 그룹 n = 9)으로 나누었습니다: 대조군, 모델군, TFRD, 양성 약물군. 무작위화는 난수 표를 사용하여 수행되었습니다. 데이터 수집 및 분석은 블라인드 조건에서 수행되었습니다. 모든 치료는 하루 한 번 경구 개베이지로 시행되었습니다. 모든 중재는 7일 연속 08:00에 하루 한 번씩 경구 개비지로 투여되었습니다. 빈 대조군과 모델 그룹은 정상 식염수(10 mL/kg)를 투여받았고, TFRD군과 양성 약물 그룹은 동일한 용량(10 mL/kg)으로 각각 약물 현탁액을 투여받았습니다. 개입 4일째에는 빈 대조군이 관절 내 멸균 생리식염수 주사를 받았고, 모델, TFRD, 양성 약물군의 쥐들은 급성 통풍성 관절염을 유도하기 위해 MSU 결정 현탁액을 주사했습니다. 주사 전에 쥐는 이소플루란 마취 시스템을 사용해 마취했습니다. 모델, TFRD, 양성 약물군의 각 쥐는 MSU 현탁액 200 μL을 왼쪽 발목 관절 강에 투여했습니다. 바늘 빼기 후, 누출을 막기 위해 멸균 면봉으로 주사 부위에 몇 초간 부드럽게 압력을 가했습니다.

샘플 채취 및 처리
모델 유도 72시간 후, 쥐들은 마취를 받고 등을 대신으로 눕혔습니다. 복부 소독 후 복막강을 열고, 장을 부드럽게 당겨 복부 대동맥을 노출시켰습니다. 혈액 채취 바늘을 혈관과 평행하게 삽입하여 복부 대동맥 혈액을 채취했고, 즉시 얼음물에 미리 냉각된 헤파린화된 튜브로 옮겼습니다. 샘플은 3000 × g 에서 4°C에서 10분간 원심분리하여 혈청을 얻었고, 이를 -80°C에서 저장하여 이후 대사체 프로파일링을 진행했습니다. 그 후 동물들은 CO₂ 질식사로 안락사되었습니다. 왼쪽 발목 관절 주변의 털은 면도되었고, 주변 피부와 근육은 조심스럽게 제거되어 온전한 관절 구조를 드러냈다. 관절낭을 덮고 있는 얇고 희끄무레한 막처럼 보이는 활막 조직은 미세한 겸자를 이용해 인접한 근막에서 부드럽게 분리되었습니다. 채취된 조인트 샘플은 4% 파라포름알데히드에 4°C에서 72시간 고정되었습니다. 그 후 관절 조직 일부를 EDTA 탈석화 용액에 녹석화하여 8주 동안 매주 갱량했습니다. 완전한 탈석화는 바늘 천공 검사로 확인되었으며, 저항이 있을 경우 조직이 완전히 관통될 때까지 탈석화를 계속했습니다.

탈석화 후에는 발목 관절을 시상상 절단하여 가공 카세트에 넣고, 경사형 에탄올 탈수를 시켰습니다. 조직은 자일렌으로 제거되고, 파라핀으로 침투된 후 파라핀 블록에 박혔습니다. 6 μm 두께의 조각은 자동 미세절기를 사용해 절단하여 40 °C 수조에 띄운 후 접착 슬라이드에 장착했습니다. 60°C에서 30분간 건조한 후, 절편을 탈파라핀 처리하고, 표준 프로토콜에 따라 헤마톡실린과 에오신(H&E)으로 염색한 후 중성 발삼으로 커버슬리핑했습니다. 전체 슬라이드 이미지는 디지털 슬라이드 스캐너를 사용해 촬영되었습니다.

세럼 대사체 분석
모델 및 TFRD 그룹의 혈청 샘플은 처리 전 4 °C에서 해동되었습니다. 각 샘플마다 100 μL의 혈청을 마이크로 원심분리관에 옮기고, 내부 표준체를 포함한 400 μL 예냉 추출용매(메탄올: 아세토니트릴, 1:1, v/v)와 결합했습니다. 혼합물은 1분간 소용돌이 처리된 후 얼음물에 10분간 초음파 검사를 했습니다. 그 후 단백질 침전을 용이하게 하기 위해 -40°C에서 1시간 배양한 후, 12,000 × g 에서 4°C에서 15분간 원심분리했습니다. 원심분리 후 얻은 상청액은 신중히 수집되어 UHPLC–MS 분석을 위해 오토샘플러 바이알로 옮겨졌습니다. 또한, 동일한 그룹 내 각 샘플에서 동일한 양의 상청액을 모아 품질 관리(QC) 샘플을 생성했습니다.

두 그룹의 혈청 샘플에서 대사물이 검출된 후, 원시 질량분석법 데이터는 전용 소프트웨어로 자동 피크 검출, 추출, 정렬, 통합 작업을 수행하여 이온 스펙트럼 특징의 구조화된 데이터 매트릭스를 생성했습니다. 검출된 스펙트럼 특징은 기존 대사체학 스펙트럼 라이브러리와 대조하여 전신 순환에 진입한 TFRD에서 유래한 대사산물을 식별하였습니다. 식별되지 않은 특징과 과도한 누락 값을 포함하는 특징은 데이터셋에서 제거되었습니다. 큐레이션된 데이터셋은 재색인화되어 표준화된 형식으로 구조화되었습니다.

두 그룹 간 대사산물의 차별 발현은 접수 변화(FC, 그룹 간 비율로 표현)와 통계적 유의성(p-값)을 모두 계산하여 평가하였다. |log₂FC| 임계값을 충족하는 대사산물은 ≥ 1과 P < 0.05는 차별발현 대사산물(DEMs)으로 정의되었습니다. 선별 결과는 화산 도표와 같은 방법으로 시각적으로 요약되었습니다. 선별된 차별 대사산물은 이후 PubChem 데이터베이스에 수입되어 표준 식별자(CID)를 얻었습니다41. 이후 CID를 기반으로 대응하는 KEGG ID가 확보되었습니다. 마지막으로, KEGG ID를 대사체 분석 플랫폼에 도입하여 대사 경로 풍부도 분석을 수행하고 DEM과 유의미하게 연관된 신호 전달 경로를 식별하였습니다.

엘리사
유활 조직 샘플은 액체 질소에 급속 냉동되어 미세한 분말로 분쇄되었습니다. 약 100mg의 분말을 전자 정밀 저울로 계량하고, 1mL의 얼음 냉각 PBS와 혼합한 뒤, 유리 호모제이저로 얼음 위에 균질화했습니다. 호모지네이트는 10,000 × g 에서 4°C에서 5분간 원심분리한 후, 상원액을 수집하여 이후 ELISA 검출을 수행했습니다. 분석 전에 ELISA 키트는 30분간 상온에 평형을 맞춰 방치했습니다. 연속 희석 표준, 세척 완충제, 비오틴 표지 항체 작동 용액, 효소 결합액 등 모든 시약은 제조사의 지침에 따라 조제되었습니다. 이후 100 μL 용량의 다양한 농도와 샘플을 미리 코팅된 마이크로플레이트의 지정된 웰에 추가했습니다. 플레이트는 밀봉되어 37°C에서 90분간 배양되었습니다. 부화 후 내용물을 버리고 우물을 네 번 세척했습니다. 그 후 각 웰에 100 μL 비오틴화 항체 작업 용액을 첨가하고, 37 °C에서 60분간 배양한 후 또 한 번 세척 단계를 거쳤습니다. 다음으로 효소 결합 작동 용액 100 μL을 투여하고, 플레이트를 37 °C에서 30분간 배양한 후 추가 세척을 진행했습니다. 그 후 염색 기판을 추가하고, 37°C에서 어두운 환경에서 10분간 배양했습니다. 반응은 100 μL 정지 용액을 첨가하여 종료되었고, 마이크로플레이트 리더기를 사용해 450 nm에서 흡광도를 측정했습니다. 표준 곡선은 표준의 광 밀도(OD) 값을 해당 농도에 맞춰 계산하여 구성되었고, 이에 따라 시료 농도도 계산되었습니다.

서부 블롯
놀이 조직은 빠르게 냉동되어 기계적으로 미세한 가루로 분쇄되었다. 가루의 일부를 적절한 양의 얼음 냉각 RIPA 버퍼에 프로테아제 및 인산효소 억제제(1:100, v/v)를 첨가한 후 얼음 위에서 30분간 배양하였습니다. 용해액은 4°C에서 10,000 × g 에서 5분간 원심분리한 후 상청액을 신중히 수집했습니다. 단백질 농도는 BCA 분석법을 사용해 정량화하였고, 모든 샘플은 RIPA 버퍼로 동일한 농도로 조정되었습니다. 단백질은 SDS-PAG를 통해 분리되어 PVDF 막에 전달되었습니다. 막을 차단한 후 1차 항체(1:1000 희석)와 함께 배양한 뒤, 이어서 2차 항체(1:5000 희석)를 투여했습니다. 단백질 신호는 ECL 검출 시스템을 통해 시각화되었고, 밴드 강도는 Image Lab 소프트웨어(버전 5.2.1)를 사용해 정량화되었습니다. 상대적 발현 수준은 β-악틴에 대해 정규화되었습니다.

통계 분석
통계 분석은 SPSS 소프트웨어(버전 20.0)를 사용하여 수행되었습니다. 데이터는 평균 ± 표준편차(SD)로 제시됩니다. 다군 간 비교에서는 분산의 동질 가정이 충족되면 일방향 분산분석(ANOVA)을 사용했고, 사후 쌍별 비교에는 LSD 검정을 사용하였습니다. 분산 균질성이 충족되지 않을 경우, 웰치의 ANOVA를 수행한 뒤 다중비교를 위해 던넷의 T3 검정을 수행했습니다.  p 값 0.05< 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.

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결과

TFRD의 주요 구성 요소
Rhizoma Drinariae의 잠재적 생체 활성 성분이 TCMSP 데이터베이스에서 검색되어 71개의 후보가 나왔습니다. 이 71개의 활성 성분들은 경구 생체이용률(OB ≥ 30%)과 약물 유사성(DL ≥ 0.18)을 기반으로 한 선별 과정을 거쳐 18개의 화합물이 확인되었습니다. 이 목록을 더 정밀하게 다듬어보면, 이 중 10종이 플라보노이드임이 밝혀졌으며, 여기에는 (2R)-5,7-디하이드록시-2-(4-하이드록시페닐)크로만-4-원, 아우레우시딘, 에리오딕티올(플라바논), 캐프페롤, 나린게닌, (+)-카테킨, 에리오딕티올, 루테올린, 다발리오사이드 A_qt, 잔토갈레놀 등이 포함됩니다. 이들의 화학적 세부사항은 표 1에 제시되어 있습니다.

GA 치료에서 TFRD의 "성분-표적" 조절 네트워크

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토론

GA는 흔한 염증성 관절염의 한 형태입니다. 현재 임상 치료는 주로 비스테로이드성 소염제(NSAIDs), 코르티코스테로이드, 요산 감소제에 의존하고 있습니다42. 그러나 이 약물들의 병용 투여는 환자에게 다양한 부작용을 일으키고 간과 신장에 상당한 대사 부담을 가합니다43. 이는 기존 간 또는 신장 기능 장애가 있는 환자에게 특히 치명적입니다. 플라보노이드는 식물에 널리 존재하는 폴리페놀 화합물군으로, 항산화, 항염증 및 기타 약리학적 활성으로 상당한 주목을 받고 있습니다. 안전한 용량 범위 내에서는 부작용을 일으키거나 간과 신장에 과도한 부담을 주는 경우가 드뭅니다. Rhizoma Drynariae에서 유래한 천연 플라보노이드 혼합물로서, TFRD는 효능과 안전성에 대해 점진적인 인정을 받고 있습니다44. 본 연구는 네트워크...

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공개 사항

저자들은 이 연구에서 이해 상충이 없다고 보고합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
4% 파라포름알데히드솔라비오P1110
5배 단백질 로딩 버퍼솔라비오P1040
AKT 항체세포 신호 전달 기술4691S
항체 희석제 용액비요타임 바이오테크놀로지컬P0268
바이오컨덕터 데이터베이스  https://www.bioconductor.org/
콜히친상하이 위안예 유한회사
GeneCards 데이터베이스  https://www.genecards.org/
헤마톡실린과 이오신(H& E) 염색 키트솔라비오G1120
MetaboAnalyst 6.0 온라인 플랫폼  https://www.metaboanalyst.ca/
마우스 IL-17A ELISA 키트4a 바이오텍 주식회사CME0041
마우스 IL-6 ELISA 키트4a 바이오텍 주식회사CME0006
쥐 TNF-&α; 엘리사 키트4a 바이오텍 주식회사CME0004
NF-& 카파; B p65 항체세포 신호 전달 기술8242T
무지방 건조 밀크솔라비오D8340
p38 MAPK 항체아클론A14401
포스파타제 억제제 칵테일비요타임 바이오테크놀로지컬P1081
인산-AKT (Ser473) 항체세포 신호 전달 기술4060S
인-NF-&카파; B p65 항체세포 신호 전달 기술3031S
인산-p38 MAPK 항체아클론AP0526
페닐메틸설포닐플루오라이드 (PMSF)솔라비오R0010
폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF) 막밀리포어IPVH00010
PubChem 데이터바https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/
R 소프트웨어 www.r project.org/
RIPA 용해 버퍼솔라비오R0010
RNase 없는 물암비온AM9937
SD 쥐베이징 바이탈 리버 실험동물기술유한회사(유한회사)  
SDS-PAGE 전기영동 버퍼서비스바이오G2144
STRING 데이터베이스https://string-db.org/
TBST 버퍼 (10배)솔라비오T1085
TCMSPhttps://old.tcmsp-e.com
트리스-글리신 전이 완충제서비스바이오G2017
TFRD베이징 치황 제약유한회사.
UniProt 데이터베이스 https://www.uniprot.org/
β-액틴 항체중산 징차오 생명공학TA-09

참고문헌

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