만노스 수용체 C 유형 2는 교모세포종에서 부정한 결과를 예측하며, 침습성 표현형 및 β-카테닌/EMT 관련 변화와 연관되어 있습니다

요약

공개 코호트 분석과 교모세포 기반 실험은 MRC2가 교모종에서 증식, 이동, 침윤 및 β-카테닌/EMT 관련 변화와 관련된 예후가 좋지 않은 지표임을 확인했습니다.

초록

교모세포종은 여전히 중추신경계의 치명적인 악성 종양이며, 예후 층화를 개선하고 치료 탐색에 정보를 제공하는 추가 바이오마커가 여전히 필요합니다. 본 연구는 공개된 전사체 코호트와 시험관 내 검증을 통합하여 만노스 수용체 C-type 2(MRC2/Endo180)를 평가하였습니다. 종양-정상 비교 및 범암 선별을 위해 암 게놈 아틀라스(TCGA)와 유전자형-조직 발현(GTEx) 프로젝트에서 발현 프로필과 일치하는 임상 주석을 얻었으며, 중국 교모세포종 아틀라스(CGGA) 코호트에서 예후 연관성도 추가로 조사하였다. MRC2 발현은 교모세포종 세포주에서 역전사 정량 PCR(RT-qPCR)과 면역블롯팅을 통해 평가되었으며, 렌티바이러스 단검 RNA(shRNA)를 사용하여 U87 및 U251 세포에서 안정적인 MRC2 노크다운이 확립되었습니다. 세포 성장과 클로노생성성은 CCK-8 및 콜로니 형성 분석법을 사용해 평가했으며, 이동과 침투는 다공성 막 삽입 검사로 평가하였다. CDK4, CDK6, β-카테닌/상피-중엽 전이(EMT) 관련 마커를 면역블롯팅으로 분석하였습니다. 데이터셋 전반에 걸쳐 MRC2는 교모세포종에서 높았으며, 발현이 높을수록 전체 생존율, 질병 특이적 생존율, 무진행 기간과 연관되어 있었습니다. 시험관 내에서 MRC2 소모는 증식, 클로노생성, 이동 및 침범을 감소시키며, CDK4 및 CDK6 단백질 수치 감소와 β-카테닌 및 EMT 관련 표지자의 변화를 동반했습니다. 이 결과들은 MRC2가 공격적인 교모세포종 표현형과 관련된 예후 바이오마커 후보임을 지지하며, 추가적인 기전적 및 생체 내 연구를 필요로 합니다.

서론

교모세포종은 중추신경계에서 가장 흔히 발생하는 원발성 종양이며, 두개내 신생물의 상당 부분을 차지합니다 ^1,2. 역학 연구에 따르면 매년 인구 10만 명당 몇 건의 발생률이 보고되며, 인구 전체에서 지리적·성별 관련 차이가 보고되었습니다^. 임상적으로 교모세포종은 광범위한 행동 스펙트럼을 아우르는데, 저등급 교모세포종은 장기간 진행될 수 있지만, 특히 교모세포종 같은 고등급 질환은 대부분의 환자에게 빠르게 치명적이다 5,6,7,8. 현대 WHO 분류는 조직학과 주요 분자 특징(예: IDH 돌연변이, TERT 프로모터 변형, MGMT 프로모터 메틸화, 1p/19q 공동 결실)을 통합하여 진단을 정교하게 하고 예후를 안내합니다 ^9,10. 수술, 방사선 치료, 화학요법을 결합한 다중 치료 치료에도 불구하고 재발이 흔하며, 고등급 종양의 장기적 예후는 여전히 좋지 않습니다. 따라서 추가적인 예후 지표와 표적 대상 취약점을 식별하는 것이 시급한 우선순위로 남아 있습니다.

MRC2(만노스 수용체 C-type 2; Endo180/CD280/uPARAP라고도 함)는 C형 렉틴 수용체 계열에 속하는 막관통 구성원입니다.¹¹. 섬유아세포와 대식세포 같은 기질 및 면역 구획에 풍부하며, 세포외 기질(ECM) 교체, 섬유증 관련 재형성, 종양-미세 환경 상호작용에 참여합니다^12,13. 구조적으로 MRC2는 N-말단 시스테인 풍부 영역, 콜라겐에 결합하는 피브로넥틴 타입 II 도메인, 여러 C형 렉틴 유사 도메인, 막 관통 분절, 그리고 세포질 꼬리를 포함합니다^14,15. 콜라겐 내화와 재형성을 통해 MRC2는 세포 운동성과 조직 침범을 촉진할 수 있으며, 상승한 MRC2는 유방암, 췌장암, 전립선암, 흑색종, 교모세포종 등 여러 암에서 공격적 행동과 연관되어 있습니다^{11, 14, 16, 17, 18}. 이전 연구들은 또한 MRC2와 침습적 신호 전달 프로그램(예: TGF-β 관련 경로), 기질 금속단백효소 활성, EMT 유사 표현형 변화 간의 연관성을 시사하며, 암 관련 섬유아세포 및 대식세포 상태에서의 역할도 제시합니다 ^{17,18,19,20,21}. 그러나 교모종에서 MRC2의 임상적 중요성과 교모종세포에서 MRC2 조절 이상이 미치는 기능적 결과는 명확하지 않습니다.

MRC2는 여러 악성 종양에서 세포외 기질 재형성과 침습적 행동에 연관된 것으로 알려져 있으나, 교모세포종에서의 임상적 중요성은 독립적인 전사체 코호트에 걸쳐 체계적으로 확립되지 않았으며, 교모세포에서의 표현형 관련 효과도 공개 데이터셋 분석과 기능적 검증을 결합한 통합 틀 내에서 평가되지 않았습니다. 따라서 본 연구는 MRC2가 교모세포종에서 부정적 임상 결과 및 악성 표현형과 연관되어 있다고 가정하였습니다. 이 질문을 해결하기 위해 범암 선별검사, 독립적인 교모종 코호트 검증, 그리고 교모세포종 세포주에서 안정적인 넉다운 실험을 통합하여 MRC2의 예후 유의성과 증식, 이동, 침윤, β-카테닌/EMT 관련 표지자의 변화와의 연관성을 평가하였습니다. MRC2는 만노스 수용체 계열에 속하며 교모세포종 진행도 종양 미세환경에 의해 형성되기 때문에, 교모세포종 아형별 면역 관련 차이에 대한 맥락적 정보를 제공하기 위해 IDH 상태에 따른 MRC1 발현에 대한 추가 탐색적 분석이 포함되었습니다.

이 연구의 새로움은 MRC2를 공개 교모세포종 데이터셋과 시험관 내 기능 검사에서 통합하여 MRC2의 교모세포종 관련 성과에 대한 보완적 임상 및 실험적 증거를 제공했다는 점에 있습니다. 단일 코호트 분석이나 세포 단독 연구와 비교할 때, 이 통합 워크플로우는 여러 실용적인 이점을 제공합니다. TCGA, GTEx, CGGA의 도입은 교차 코호트 검증을 가능하게 하고 단일 데이터셋에 대한 의존도를 줄입니다. 또한, 공개 코호트 분석과 교세포종 낙출 분석의 결합은 임상적 연관성을 표현형 수준의 증거와 연결시킨다. 마지막으로, RT-qPCR, 면역블롯, CCK-8, 콜로니 형성, 다공성 막 삽입 분석 등 보완적 측정값을 사용하여 전사, 단백질 수준, 증식, 운동성 관련 변화를 병행하여 평가할 수 있습니다. 전체 연구 설계와 분석 워크플로우는 그림 1에 요약되어 있습니다. 이 전략은 생물정보학 단독 또는 단일 분석법에 비해 결과의 견고성과 생물학적 해석 가능성을 향상시킵니다.

프로토콜

이 연구는 공개적으로 이용 가능한 식별 해제 데이터셋(TCGA, GTEx, CGGA)과 확립된 상업용 세포주를 사용하였습니다. 새로 모집된 인간 참가자, 식별 가능한 환자 정보, 환자 유래 샘플은 포함되지 않았습니다. 모든 분석은 공개 데이터 사용에 관한 관련 기관 및 국제 지침에 따라 수행되었습니다. 따라서 이 연구에는 추가적인 기관 윤리 승인이나 사전 동의가 필요하지 않았습니다.

1. 생물정보학 워크플로우 및 데이터 전처리

유전자 발현 프로필과 임상 일치 주석은 암 게놈 아틀라스(TCGA), 유전자형-조직 발현(GTEx) 프로젝트, 중국 교모세포종 아틀라스(CGGA) 등 공개 자료에서 얻었습니다. 발현 매트릭스와 임상 메타데이터는 R에 가져와 샘플 식별자에 따라 조화되었습니다. 중복되거나 매칭되지 않은 항목은 제거하였고, 필수 생존 정보가 부족한 샘플은 생존 분석에서 제외하였습니다. MRC2 발현 값과 해당 임상병리학적 변수를 추출하여 후속 분석을 수행하였습니다. 종양-정상 비교에서는 정상 조직이 일치할 경우 TCGA-단독 데이터를 사용하고, 추가 정상 대조군이 필요할 때는 통합 TCGA–GTEx 데이터를 사용하여 MRC2 발현을 암 유형별로 비교하였습니다. 교모종 중심 분석에서는 TCGA-LGG 및 CGGA 코호트 환자들을 코호트 MRC2 중앙값 발현 수준에 따라 고발현군과 저발현군으로 계층화하였습니다. 이후 Kaplan-Meier 생존 분석, 시간 의존 수신자 운행 특성(ROC) 분석, Cox 비례 위험 회귀분석을 수행하여 MRC2의 예후 관련성을 평가하였습니다. Cox 모델은 각 코호트 내 데이터 완전성에 따라 나이, 성별, WHO 등급 및 기타 임상 병리학적 변수와 같은 이용 가능한 공변수를 포함했습니다. 연령, 조직학적 하위 유형, WHO 등급, IDH 돌연변이 상태, 1p/19q 코드렛 상태, 치료 관련 정보 등 변수에 따라 하위 그룹 분석이 수행되었습니다. 도표는 R과 GraphPad Prism의 표준 통계 플롯 워크플로우를 사용해 생성되었습니다.

2. 범암 발현 및 생존 분석

MRC2 발현은 TCGA 및 GTEx 데이터셋을 사용하여 암 유형별 종양과 정상 조직 간 비교되었습니다. 차이는 박스플롯을 사용해 시각화하고 레이더 플롯으로 요약했습니다. MRC2 발현과 전체 생존율(OS), 질병 특이 생존율(DSS), 무진행 간격(PFI) 간의 연관성을 평가하기 위해 Cox 비례 위험도 회귀분석을 수행하였습니다. 위험비와 이에 대응하는 유의수준은 산림 플롯과 히트맵을 사용하여 시각화되었습니다.

3. 교모종 코호트에서의 예후 검증 및 하위 그룹 분석

TCGA 저등급 교모종(TCGA-LGG) 코호트에서는 환자들이 MRC2 발현 고그룹과 저그룹 MRC2로 층화되었습니다. 카플란-마이어 생존 분석을 수행하여 그룹 간 OS, DSS, PFI를 비교하였습니다. 시간 의존 수신기 작동 특성(ROC) 곡선을 생성하여 예측 성능을 평가하였습니다. MRC2의 독립 예후값을 평가하기 위해 단변량 및 다변량 Cox 회귀분석을 수행하였습니다. 외부 검증은 카플란-마이어 생존 분석, ROC 분석, 콕스 회귀분석을 포함한 CGGA 교세포종 데이터셋을 사용하여 수행되었습니다. 연령, 종양 등급, 조직학적 아형, IDH 돌연변이 상태, 1p/19q 코드렛 상태 및 치료 관련 변수 등 임상병리학적 변수 전반에 걸쳐 MRC2 발현을 평가하기 위해 하위군 분석이 수행되었습니다.

4. IDH 돌연변이 교 세포종과 IDH 야생형 교세포종에서의 MRC1 발현

MRC1 발현과 IDH 돌연변이 상태 간의 연관성은 GlioVis 웹 플랫폼과 TCGA GBMLGG 데이터셋을 사용하여 평가하였습니다. 사례들은 주석이 달린 IDH 상태에 따라 IDH 돌연변이 교세포종과 IDH 야생형 교세포종으로 분류되었습니다. 선택된 데이터셋 내에서 MRC1 mRNA 발현을 조회하고, 플랫폼 내장의 통계 분석 기능을 사용해 두 그룹 간 발현 수준을 비교하였습니다. 그룹별 표현 분포는 플랫폼에서 생성된 대로 표시되었으며, 통계적 유의성은 P < 0.05로 정의되었습니다.

5. 세포 배양

인간 교모세포주와 정상 인간 성상교세포는 기존 세포 저장소에서 얻었습니다. 세포는 10% 태아 소 혈청(FBS)을 보충한 Dulbecco's 변형 독수리 배지(DMEM)에서 배양하였으며, 5% CO₂와 약 95% 상대습도를 포함한 가습 인큐베이터에서 37°C에서 유지되었습니다. U87과 U251 세포는 검사된 교모종 세포 패널 전체의 기저선 스크리닝 결과 이 두 세포주가 상대적으로 더 높은 MRC2 수치를 발현하여 녹다운 기반 기능 분석에 적합하다는 것을 확인하여 기능 상실 실험에 선정되었습니다.

6. MRC2의 렌티바이럴 폭발

MRC2와 비표적 대조군을 표적으로 하는 짧은 헤어핀 RNA(shRNA)를 렌티바이러스 벡터로 클론링하였다. 렌티바이럴 입자는 HEK293T 세포를 전이 플라스미드와 공동 형질전환하여 생성하고, 표준 형질전환 시약을 사용해 플라스미드를 포장했습니다. 바이러스 상청액은 형질전환 후 48시간과 72시간에 채취되어, 2,100 × g에서 5분간 원심분리하여 포장 세포와 세포 이물질을 제거한 후, 즉시 사용 또는 −80°C¹⁹에서 보관하기 전에 0.45 μm 필터를 통과시켰습니다. 바이러스 함유 상청액은 즉시 사용하거나 분리하여 −80 °C에 보관했습니다. 반복되는 동결-해동 사이클은 피했다. 폴리브렌 존재 하에서 교모세포 세포는 렌티바이러스 입자에 감염되었습니다. 감염 후, 푸로마이신으로 세포를 선별하여 안정적인 노크다운 세포주를 형성하였습니다. 사용된 서열은 다음과 같다: sh-MRC2-1: 5′-GAAATGAATGAGCAAGAA-3′; sh-MRC2-2: 5′-CCGGTATTGCTATAAGGTGTT-3′; sh-NC: 5′-TTCTCCGAACGTGTGTCACGT-3′.

7. RT-qPCR 및 면역블롯을 통한 MRC2 넉다운 검증

총 RNA는 TRIzol 시약으로 추출되었고, 제조사 지침에 따라 역전사 키트를 사용해 cDNA를 합성했습니다. 정량적 PCR은 SYBR Green 화학을 사용하여 다음과 같은 사이클 조건에서 수행되었습니다: 95°C에서 초기 변성은 30초, 95°C에서 5초, 60°C에서 30초간 40회, 증폭 종료 시 해리 곡선 분석이 수행되었습니다. 프라이머 서열은 다음과 같다: MRC2 전방, 5′-GGCAAGGACAAGAGTGGT-3′; MRC2 역방향, 5′-CTTTGGTGACGTGTGTGCTGCTT-3′; GAPDH 포워드, 5′-TCCACCCATGGCAAATTCC-3′; 그리고 GAPDH 후진, 5′-TCGCCCCACTTGATTTTGG-3′. 상대 mRNA 발현은 비교 C_t (2^-ΔΔCt) 방법을 사용하여 계산되었으며, 내부 대조는 GAPDH로 사용되었다²⁰. 면역블로팅은 MRC2의 단백질 수준 녹다운을 확인하기 위해 병행하였습니다. RT-qPCR의 경우, 세 개의 독립적인 생물학적 복제체가 분석되었고, 각 샘플은 기술적으로 3회로 분석되었습니다.

8. 세포 증식 분석

세포 증식은 CCK-8 검사법을 사용하여 평가하였습니다. 세포는 적절한 밀도로 96웰 플레이트에 시딩되어 지정된 기간 동안 배양되었습니다. 각 시점마다 CCK-8 시약을 각 웰에 첨가하고 제조사 지침에 따라 인큐베이션한 후, 마이크로플레이트 리더기를 사용해 450nm 흡입도를 측정했습니다. 최소 세 번의 독립적인 생물학적 복제가 수행되었습니다.

9. 군집 형성 분석

세포는 6웰 플레이트에 저밀도로 시딩되어 10일에서 14일간 배양되었습니다. 콜로니는 4% 파라포름알데히드로 상온에서 15분간 고정하고, 0.1% 크리스탈 바이올렛으로 15분간 염색했습니다. 군체는 인산염 완충식염수(PBS)로 세척한 후 공기 건조 후 수동 또는 이미지 분석 소프트웨어를 사용해 수적으로 계수했다²¹. 최소 세 번의 독립적인 생물학적 복제가 수행되었습니다.

10. 세포 이동 및 침입 분석

세포 이동 및 침입은 다공성 막 삽입 검사법을 사용해 평가하였다²². 침윤 검사에서는 상단 삽입물이 세포외 기질 젤로 미리 코팅되었고; 이동 분석에는 코팅되지 않은 삽입물이 사용되었습니다. 혈청 없는 배지에 부유된 세포가 상부 챔버에 추가되었고, 혈청이 포함된 배지는 화학유인제로 하부 챔버에 배치되었다. 배양 후, 상부 막 표면에 남아 있는 이동하지 않은 세포는 면봉으로 부드럽게 제거했습니다. 하부 표면으로 이동하거나 침입한 세포는 4% 파라포름알데히드로 15분간 고정하고, 0.1% 결정 바이올렛으로 15분간 염색한 뒤, 차가운 인산염 완충 식염수로 세척한 후 공기 건조한 후 ×200 배율로 역현미경으로 영상 촬영하였습니다. 각 삽입물마다 무작위로 선정된 5개의 현미경 영역에서 세포를 세었습니다. 최소 세 번의 독립적인 생물학적 복제가 수행되었습니다.

11. 서부 블롯 분석

세포는 프로테아제 억제제를 보완한 RIPA 버퍼에 용해되었고, 단백질 농도는 BCA 분석법으로 측정되었습니다. SDS-PAGE에 의해 동일한 양의 총 단백질이 분리되어 PVDF 막으로 전달되었습니다. 막은 5% 무지방 우유에 실온에서 1시간 동안 차단한 후, 4°C에서 1차 항체와 함께 하룻밤 배양하였습니다. 서부 블롯팅에 사용된 1차 항체 및 작용 희석은 다음과 같습니다: 항-MRC2 (1:5,000), 항-CDK4 (1:1,000), 항-CDK6 (1:2,000), 항-β-카테닌 (1:5,000), 항-E-카데린(1:10,000), 항-N-카데린(1:3,000), 항-β-액틴 (1:5,000). 세척 후, 막은 고추냉이 퍼옥시다아제가 결합한 염소 항생쥐 IgG 또는 염소 항토끼 IgG 2차 항체(1:5,000)와 실온에서 1시간 동안 배양하였습니다. 신호는 화학발광법을 사용해 시각화되었고, 밴드 강도는 정량화되어 β-액틴으로 정규화되었습니다. 최소 세 번의 독립적인 생물학적 복제가 수행되었습니다.

12. 통계 분석

통계 분석은 R과 GraphPad Prism을 사용하여 수행되었습니다. 생존 곡선은 로그 랭크 검정을 사용하여 비교하였다. Cox 비례 위험도 회귀 모델은 단변량 및 다변량 분석에 사용되었습니다. 세포 기반 실험의 경우, 데이터는 평균 ± SD로 제시됩니다. 모수 검정 이전에는 샤피로-윌크 검정을 사용하여 정규성을 평가했습니다. 정규분포 데이터의 경우, 두 그룹 간 차이는 학생 t-검정을 사용해 평가했으며, 여러 그룹 간 비교는 일원 분산분석(ANOVA)을 사용했습니다. 정규성 가정이 충족되지 않을 경우, 해당 비모수 검정이 사용되었습니다. P 값은 Benjamini–Hochberg 거짓 발견률 절차^23,24를 사용하여 다중 검사를 위해 조정되었습니다. 양측 P < 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.

결과

MRC2의 범암 발현 및 예후 전망
범암 분석은 처음으로 인간 악성 종양에서 MRC2의 발현 패턴과 예후 관련성을 특성화하기 위해 수행되었습니다. TCGA와 GTEx 데이터셋을 비교한 결과, 다중 암 유형에서 MRC2 발현이 종양과 정상 조직 간에 유의하게 차이가 있음을 보여주었습니다(그림 2A, 2B). 레이더 플롯 요약은 암 간 MRC2 발현의 광범위한 변동성을 추가로 보여주었습니다(그림 2C). MRC2 발현이 범암 수준에서 임상적으로 유의한지 평가하기 위해, Cox 회귀분석을 통해 전체 생존율(OS), 질병 특이적 생존율(DSS), 진행 무진행 간격(PFI)을 수행하였습니다(그림 2D, 2F). 히트맵 요약은...

토론

교모세포종에 대한 표준 치료는 최대한의 안전한 절제술 후 방사선 치료와 화학요법, 가장 흔한 테모졸로마이드⁴에 의존합니다. 그럼에도 불구하고, 확산성 침윤은 완전한 외과적 제거를 제한하는 경우가 많으며, 특히 고등급 질환에서 불가피한 재발에 기여합니다 ^3,25. MGMT 프로모터 메틸화, IDH 돌연변이, 1p/19q 공동 결실, EGFR 변형 등 여러 분자 특징이 임상적으로 예후 및 치료 계획에 사용됩니다^{26, 27, 28}. 그러나 이러한 마커들은 실용적 또는 생물학적 한계가 있으며, 많은 환경에서 단독으로는 정확한 위험 층화에 충분하지 않습니다 26,27...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
항-CDK4 항체	프로틴테크 그룹, 주식회사, 미국	11026-1-AP	서부 블롯팅을 위한 1차 항체. 리드: AB_2078702.
항-CDK6 항체	프로틴테크 그룹, 주식회사, 미국	66278-1-Ig	서부 블롯팅을 위한 1차 항체. 리드: AB_2881661.
항-E-카데린 항체	프로틴테크 그룹, 주식회사, 미국	20874-1-AP	서부 블롯팅을 위한 1차 항체. 리드: AB_10697811.
항MRC2 항체	프로틴테크 그룹, 주식회사, 미국	86028-1-RR	서부 블롯팅을 위한 1차 항체. RRID: AB_2879692.
항-N-카데린 항체	프로틴테크 그룹, 주식회사, 미국	22018-1-AP	서부 블롯팅을 위한 1차 항체. RRID: AB_2813891.
항-&베타;-액틴 항체	프로틴테크 그룹, 주식회사, 미국	66009-1-Ig	서부 블롯을 위한 로딩 대조 항체. RRID: AB_2687938.
항-&베타;-카테닌 항체	프로틴테크 그룹, 주식회사, 미국	51067-2-AP	서부 블롯팅을 위한 1차 항체. 리드: AB_2086128.
BCA 단백질 분석 키트	비오타임 바이오테크놀로지, 중국	P0012	단백질 농도 측정을 위한 BCA 단백질 분석 키트.
세포 계수 키트-8 (CCK-8)	도진도 연구소, 일본	CK04-500T	세포 생존성/증식 검사.
화학발광 영상 시스템	우비텍 리미티드, 프랑스	얼라이언스 Q9 고급 매뉴얼	서부 얼룩 검출을 위한 이미지 획득 시스템.
CO2 인큐베이터	일반 실험실 장비	명시되지 않음	가습 CO2 인큐베이터는 37 & 도; C와 5% CO2.
크리스탈 바이올렛 용액 (0.1%)	비오타임 바이오테크놀로지, 중국	C0121-100 mL	0.1% 작업 농도로 크리스탈 바이올렛 염색 용액을 사용함.
DMEM, 고혈당	깁코, 서모피셔 사이언티픽, 미국	C11995500BT	교모세포 배양을 위한 기저 배지.
태아 소 혈청(FBS)	엑셀 바이오, 중국	FSP500	세포 배양을 위한 혈청 보충제.
글리오비스	gliovis.bioinfo.cnio.es	해당되지 않음	뇌종양 발현 데이터셋, 특히 교모종의 시각화 및 분석을 위한 웹 기반 플랫폼입니다.
그래프패드 프리즘	그래프패드 소프트웨어, 미국	버전 10.4.0	통계 분석 및 그래프 작성 소프트웨어. RRID: SCR_002798.
HEK293T 세포	중국 과학원 유형 문화 컬렉션, 상하이, 중국	GNHu43	렌티바이러스 생산에 사용되는 세포주 포장. RRID: CVCL_0063.
HRP 결합 염소 항쥐 IgG (H+L)	프로틴테크 그룹, 주식회사, 미국	SA00001-1	서부 블롯팅을 위한 2차 항체. RRID: AB_2722565.
HRP 결합 염소 항토끼 IgG (H+L)	프로틴테크 그룹, 주식회사, 미국	SA00001-2	서부 블롯팅을 위한 2차 항체. RRID: AB_2722564.
인간 성상교세포	중국 과학원 유형 문화 컬렉션, 상하이, 중국	공개되지 않음	종양 통제가 아닌 일반 인간 성상교세포; 카탈로그 번호는 공개되지 않음.
역현미경	일반 실험실 장비	명시되지 않음	이동 및 침입 분석에서 이미지 획득에 사용되는 역현미경.
마트리겔 행렬	코닝, 미국	354234	침윤 분석용 인서트를 코팅하는 데 사용되는 저저막 매트릭스.
마이크로플레이트 리더	일반 실험실 장비	명시되지 않음	CCK-8 분석에서 450 nm 흡광도 측정에 사용되는 마이크로플레이트 리더.
PAGE 젤 준비 키트, 10%	에피자임, 중국	PG212	SDS-PAGE 젤 준비 키트.
PAGE 젤 준비 키트, 7.5%	에피자임, 중국	PG111	SDS-PAGE 젤 준비 키트.
파라포름알데히드 용액 (4%)	비오타임 바이오테크놀로지, 중국	P0099-100 mL	4% 파라포름알데히드 고정제를 군집 형성 및 이동/침입 분석에 사용합니다.
페니실린-스트렙토마이신 용액	깁코, 서모피셔 사이언티픽, 미국	15140163	세포 배양을 위한 항생제 보충제.
폴리브렌	비오타임 바이오테크놀로지, 중국	C0351-1 mL	렌티바이러스 전도(lentiviral transduction)를 촉진하는 헥사디메트린 브로마이드 용액(10 mg/mL)을 사용했습니다.
전침 단백질 마커	엘라브사이언스, 중국	E-IR-R331	단백질 분자량 마커.
PrimeScript RT 시약 키트	타카라 바이오 주식회사, 일본	RR047A	cDNA 합성을 위한 역전사 키트.
푸로마이신	비오타임 바이오테크놀로지, 중국	ST551-10mg	안정적인 녹다운 세포 선택에 사용되는 푸로마이신 디하이드로클로라이드.
PVDF 멤브레인	비오타임 바이오테크놀로지, 중국	FFP20	친수성 PVDF 막 (0.45 & micro; M) 웨스턴 블롯 전이.
R	R 통계 컴퓨팅 재단, 오스트리아	버전 4.5.1	생물정보학 분석에 사용되는 통계 컴퓨팅 환경. RRID: SCR_001905.
RIPA 용해 완충제	비오타임 바이오테크놀로지, 중국	P0013B	단백질 추출을 위한 RIPA 용해 완충제(강력함).
SDS-PAGE 로딩 버퍼 (5×)	비오타임 바이오테크놀로지, 중국	P0015L	단백질 샘플 로딩 버퍼.
SYBR 프리믹스 엑스 타크 II	타카라 바이오 주식회사, 일본	RR066A	qPCR 마스터 믹스.
트랜스웰 인서트, 8.0-&마이크로; m 공극 크기	코닝, 미국	3422	세포 배양 인서트는 8.0 & 마이크로 등급을 사용하며; m개의 기공 크기 폴리카보네이트 막; 이동 및 침입 분석용 표준 24웰 형식.
트리졸 시약	인비트로젠, 서모피셔 사이언티픽, 미국	10296010CN	RNA 추출 시약.
U251 교모세포	중국 국가 인증 세포 배양 컬렉션	SCSP-559	인간 교모세포주 중 누킹 및 기능적 분석에 사용됩니다. RRID:CVCL_0021.
U87 교세포	중국 국가 인증 세포 배양 컬렉션	SCSP-5432	인간 교모세포주 중 누킹 및 기능적 분석에 사용됩니다. 리드: CVCL_0022.