림프와 혈관 동시 샘플링을 통한 간 수송 경로를 평가하는 포괄적인 쥐 모델

요약

이 실험 프로토콜은 간 림프관 캐뉼 쥐 모델을 설명하여 간 림프 및 혈관 배출을 직접적이고 정량적으로 평가할 수 있게 합니다. 이 모델은 간림프와 전신 혈액을 동시에 샘플링하여 간 수송, 대사, 면역 신호 전달을 조사할 수 있게 하며, 약물 약물동학과 간 특이적 생물학 연구를 지원합니다.

초록

간은 영양소, 외계생물, 순환 면역 매개체를 처리하는 중심 대사 및 면역학 허브입니다. 물질은 문맥을 통해 장에서 혈액을 받고, 간동맥을 통해 전신순환을 통해 혈액을 받는 사인파 모세혈관을 통해 간세포와 기타 간 세포에 도달합니다. 사인파 모세혈관에서 나온 혈장 여과액은 디세의 공간으로 흘러들어가 대사 변형을 거치거나 면역 감시에 참여하거나 림프관으로 흘러 간 림프를 형성할 수 있습니다. 간 림프와 혈액 샘플링은 간 수송, 대사 과정, 면역 활성에 대한 상세한 분석을 가능하게 합니다. 간 림프관 유출과 전신 혈액을 세 개의 뚜렷한 캐뉼 부위(간 림프관, 경동맥, 경정맥)를 통해 동시에 샘플링할 수 있는 외과용 쥐 모델이 기술되어 있습니다. 간림프 및 동맥 캐논리는 연속적인 샘플링을 가능하게 하는 반면, 경정맥 캐뉼라는 지속적인 수분 보강과 수분 보조 또는 정맥 혈액 수집에 사용되어 동맥혈과 정맥 혈액 간 비교를 가능하게 합니다. 성공적인 관식 시술은 마취 중인 쥐에서 약 0.1 mL/h의 간 림프 유량을 제공하여, 동시 동맥 및 정맥 혈액 샘플링을 수행하는 동안 최대 8시간 동안 연속 림프 샘플링을 할 수 있습니다. 이 구조는 전신 동맥혈과 간 림프 유출을 직접 비교할 수 있게 하여, 간 수송 및 배출, 대사 및 면역 신호 전달 과정을 포괄적으로 검사할 수 있게 합니다. 모델을 확장하기 위해 간동맥과 문맥의 말단 샘플링을 시행하여 간유출, 림프 배출을 직접 비교할 수 있습니다. 궁극적으로 이러한 기법들은 다양한 병태생리학적 조건에서 약물 약물동역학, 영양소 흐름 및 대사, 간 특이적 반응 등 간 과정을 평가하는 데 다목적 플랫폼을 제공합니다.

서론

간은 영양 처리, 외계 해독, 면역 감시를 담당하는 중심 대사 및 면역 기관입니다. 간은 신체에서 가장 큰 림프를 생성하는 기관입니다. 대형 포유류 연구에서는 전체 림^{프류 유}량의 25%–50%를 차지하는 것으로 나타났습니다^1,2. 설치류의 경우 캐닐레이션 연구에서 흉부 림프류 전체의 약 10%–20%가 간에서 유래하는 것으로 나타^{났습니다.} 간림프는 간실질 내 사인파 모세혈관의 창문형 내피를 통과하는 혈장에서 기원합니다. 이 여과액은 간세포와 사인파 내피 세포 사이의 간질성 구획인 디세(Disse) 공간에 모입니다. 여과액은 이후 몰 공간을 통과해 문맥 림프 모세혈관으로 들어가 간구문과 시스토나 ^5,6으로 배출되는 모혈관으로 모순됩니다.

간 림프계는 해부학적으로 문맥, 아캡슐 네트워크, 그리고 상막 네트워크로 나뉩니다 ^6,7. 최근 체적 영상 연구들은 간 림프가 주로 문맥에 국한된 매우 분열된 혈관 내피성장인자 C(VEGF-C) 의존 네트워크를 형성함을 보여줍니다. 이 네트워크는 주로 문맥 쪽으로 역행하여 배출되는 림프 모세혈관으로 구성되어 있습니다. 반면, 간표면과 중심정맥 부위에 분포하는 피막하림프와 상막 림프는 추가적인 배관 경로입니다. 인간 사후 영상 촬영은 간정맥을 따라 밀집된 림프관 네트워크가 추가로 드러났으며, 이는 문맥 주위와 간정맥 림프관이 간 림프^유출을 공동으로 조절함을 시사합니다.

간 림프는 대사와 면역 과정을 모두 반영하는 혈장 유래 초음파 검사입니다 ^9,10. 생화학적 분석 결과, 간 림프에는 알부민, 지단백질, 사이토카인, 간실질 활동에서 유래한 대사산물이 포함되어 있음을 알 수 있습니다 ^{3,4,6 3,6}은 다른 조직에서 보고된 림프액의 일반적인 단백질체 프로필과 일치합니다¹⁰. 초기 연구들은 간 림프에 뚜렷한 지단백질 계열이 존재하며, 고밀도 지단백(HDL)이 우성 분열을 차지한다는 것이 밝혀졌으며, 이는 간이 HDL 합성과 재형성에서 중심적 역할을 한다는 점과^{일치합니다.} 특히 최근 연구에서는 간림프가 장간막 림프에 비해 HDL과 콜레스테롤 에스터가 풍부하다는 사실이 밝혀지며, 지질 수송과 콜레스테롤 역수송에 뚜렷한 기여를 합니다^. 더불어, 간 림프는 면역 매개체, 항원 제시 세포, 세포외 소포를 운반하는 면역 통로 역할을 하며, 간 미세 환경을 전신 면역과^{연결합니다.}

간 림프 형성과 배출의 변화는 간 질환의 주요 특징입니다. 간경변과 문맥 고혈압에서는 상승한 사인파 압력이 림프 생성을 몇 배 증가시켜 배액 용량이 초과되면 림프관 확장증, 섬유증, 복수가 발생합니다. 만성 간 손상은 또한 VEGF-C/VEGFR-3 의존성 림프관 형성을 촉진하며, 과도하거나 이상한 림프관 재형성은 간 염증, 부종, 지질 축적에 기여합니다 ^9,12. 또한, 대사 기능 장애 관련 고혈성 간 질환(MASLD)과 간세포암에서는 간 림프 밀도 증가가 질병 진행 및 전이와 상관관계가 있음이 밝혀졌습니다^13,14.

간림프가 중심적인 생리학적·임상적 역할을 함에도 불구하고, 순수 간 림프를 분리하는 데 기술적 어려움 때문에 실험 연구에서 연구가 부족하고 탐구도 부족합니다. 흉부 및 장간막 림프 수집 모델은 더 널리 기술되었으나, 이는 간 수송 메커니즘에 대한 간접적인 통찰만을 제공합니다. 이 분야의 한계는 쥐 간 림프 캐논열 모델을 개발하여 간림프를 직접 채취할 수 있게 하여 해결^{되었습니다.} 이 접근법을 통해 정맥 주사 치료 단백질의 림프내 흡수가 간과 장간막에서 발생한다는 것이 밝혀졌습니다. 이 발견들은 간 림프가 혈액과 림프계 간 고분자 교환의 핵심 경로임을 강조하며, 생물학적^치료제의 약동학과 분포에 중요한 시사점을 지닙니다.

남은 공백을 메우기 위해, 본 연구는 간림프관, 경동맥, 경정맥을 관식하여 간림프와 전 신혈을 동시에 샘플링할 수 있는 포괄적인 쥐 모델을 설명합니다. 이 접근법은 간 간질과 전신 구획 간 수송 및 교환을 실시간으로 평가할 수 있게 하여, 생리적·병리학적 조건 하에서 간 수송, 대사, 면역 신호 전달 및 약물 처분을 연구할 수 있는 견고한 실험 플랫폼을 제공합니다. 또한 간동맥과 문맥의 선택적 말단 샘플링을 포함하여 간 유입, 유출, 림프 배출을 직접 비교할 수 있습니다.

그림 1. 림프관 및 혈액 동시 채취를 위한 다중 캐논럴 모델 도식. 경동맥, 경정맥, 간동맥, 간 림프관, 문맥에서 동시에 샘플링하는 포괄적인 캐뉼레이션 모델. (A) 경동맥을 삽입하여 간헐적 혈액 채취를 합니다. (B) 외부 경정맥을 캐뉰큘링하여 지속적인 식염수 주입을 통해 수분 유지와 샘플링 중 체액 손실을 보상합니다. (C) 간림프관과 평행하게 흐르는 총간동맥이 말단 혈액 채취를 위해 캐뉴럴 처리됩니다. (D) 간림프관을 캐뉴럴하여 지속적인 림프 수집을 수행합니다. (E) 문맥은 말기 혈액 채취를 위해 바늘 천자 로 접근합니다. (A), (B), (D)에서 제시된 절차는 말단 샘플링 전에 시행되며, 이어서 (C) 간동맥 샘플링, 그리고 (E) 문맥 샘플링이 이어집니다. 약어: EJV, 외경정맥; 경동맥 CA; SVC, 상정맥; IVC, 하대정맥; Ao, 대동맥; CHA, 총간동맥; HL, 간림프관; 장간막 림프관(ML); SMA, 상장간막동맥; PV, 문맥. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

프로토콜

동물을 대상으로 한 모든 실험 절차는 모나시 약학 연구소 동물윤리 위원회(윤리 ID #46283)의 검토 및 승인을 받았으며, 호주 및 뉴질랜드 동물 관리 연구 및 교육 위원회(ANZCCART) 지침과 호주 동물 관리 및 과학 목적 규범(국가 보건 및 의학 연구 위원회)에 엄격히 따라 수행되었습니다. 호주)¹⁵.

동물 모델: 수컷 또는 암컷 외교 백화종 Rattus norvegicus 또는 Sprague–Dawley(SD) 쥐(250–350g)를 사용했습니다. 동물들은 허가된 실험동물 공급업체(모나시 동물 연구 플랫폼)로부터 확보되었으며, 개별 환기가 되는 우리에 수용되었으며, 22 ± 2 °C의 조절된 온도와 12시간의 밝고 어둠 주기 하에 안전하게 보관되었으며, 실험 전에 음식과 물을 자유롭게 이용할 수 있었습니다. 동물들은 스트레스 관련 생리학적 변이를 최소화하기 위해 수술 최소 일주일 전에 고대에 적응시켰습니다.

간림프관, 경동맥, 경정맥 캐닐레이션 모델을 기술하여 간 림프와 전신 혈액의 동시 샘플링이 가능합니다. 간동맥과 문맥의 선택적 말단 샘플링은 간유출과 림프류 유출의 비교 분석을 위해 마취 하에 시행될 수 있습니다. 사용되는 시약과 장비는 재료 표에 나열되어 있습니다.

1. 수술 전날 준비

1. 특정 실험 프로토콜에 따라 필요하다면 밤새 단식시키세요. 항상 자유롭게 물을 이용할 수 있도록 하세요.
2. 림프 채취 시 정맥 주입을 위해 멸균 식염수를 준비하세요. 림프 및 혈액 채취로 인한 체액 손실과 소변 배출량과 같은 생리적 손실을 보완하기 위한 권장 주입 속도(1.5–3.0 mL/h)를 기준으로 필요한 양을 결정합니다.
3. 간림프관, 경동맥, 경정맥 캐뉼레이션을 위해 폴리에틸렌 캐뉼라 3개를 준비하세요:
   1. 간 림프관
      1. 0.8 mm 외경(O.D.), 0.5 mm 내경(I.D.) 캐뉼라를 30–35 cm 길이로 절단합니다. 길이가 팽팽하지 않고 수집할 수 있는지 확인하세요.
      2. 삽입 팁을 약 45° 각도로 멸균 수술용 칼날로 경사하여 삽입을 용이하게 합니다.
   2. 경동맥
      1. 0.8mm 내경, 0.5mm 내경 캐뉼라를 20–30cm 길이로 절단하세요. 내부 끝에서 약 2–2.5cm 지점에 표시하여 삽입 깊이를 표시합니다.
   3. 경정맥
      1. 0.8mm 내경, 0.5mm 내경 또는 0.96mm 내경, 0.58mm 내경 캐뉼라를 50cm 이상으로 자르세요. 내부 끝에서 1–1.5cm 지점에 삽입 깊이를 표시하세요. 장력 없이 주입 펌프에 닿을 수 있도록 길이를 확인하세요.
4. 멸균수에 0.1% EDTA를 넣거나 멸균 식염수에 20 IU/mL 헤파린을 넣은 항응고제 용액을 준비합니다.
5. 1mL 주사기에 항응고제 용액을 채우고, 0.8mm O.D. 캐뉼라에는 25G 바늘을, 0.96mm O.D. 캐뉼라에는 23G 바늘을 연결합니다.
6. 각 캐뉼라를 내부 부피의 약 3배로 세척하여 기포가 남지 않도록 하세요.
7. 캐뉼라에 항응고제를 채우고 연결된 바늘과 주사기로 하룻밤 막아두세요. 항응고제로 미리 담그는 것은 혈전 형성을 최소화합니다.
8. 혈액과 림프를 위한 채취관을 준비하세요. 샘플 채취 후 항응고제 용액을 추가하여 최종 농도는 1 mg/mL EDTA 또는 10 IU/mL 헤파린으로 만듭니다.

2. 수술 직전 준비

1. 모든 캐뉼라에 항응고제를 세척해 개폐를 확인하세요. 기포가 없는지 확인하세요.
2. 유도 챔버에서 산소 내 5% 이소플루란을 1리터/분의 속도로 쥐에게 마취를 유도합니다.
3. 호흡을 모니터링하고 호흡 수가 약 1.5회 호흡/분(약 90회/분)으로 느려졌는지 확인하여 적절한 마취 깊이를 나타냅니다.
   주의: 이소플루란은 휘발성 마취제이므로 직업적 노출을 최소화하기 위해 적절히 환기된 마취 시스템이나 훈제구 내에서 사용해야 합니다.
4. 쥐를 가열된 수술용 패드(37°C)로 옮기고, 코 원추세포 를 통해 산소 속 0.4–0.6 L/min의 산소 중 1–3% 이소플루란을 투여하여 마취를 유지합니다.
5. 각막과 발가락 꼬집는 반사가 없어 적절한 마취 깊이를 확인하세요. 수술 및 림프 채취 기간 내내 마취를 유지하세요.
   참고: 지속적인 마취는 수술 중 통증을 예방하고 움직임으로 인한 캐뉼라 탈락을 방지하기 위해 필수적입니다.
6. 오른쪽 복부 사분면(중앙선에서 오른쪽 옆구리, 갈비뼈 약 2cm 아래)과 오른쪽 또는 왼쪽 쇄골 부위를 포함한 수술 부위를 제도합니다.
7. 수술 부위는 0.5% 클로르헥시딘과 70% 에탄올로 소독하세요.

3. 경동맥 캐닐레이션

참고: 경동맥 캐뉼레이션은 경정맥 캐뉼 전후에 시행될 수 있습니다.

1. 등쪽 위치와 경추 절개 부위는 동일하게 유지하세요.
2. 목 아래에 작은 지지대(예: 3mL 주사기)를 놓아 경동맥 부위를 올려주세요.
   참고: 이 단계는 선택 사항입니다.
3. 목 근육을 분리하여 피부 표면에서 약 1cm 아래에 있는 경동맥을 노출시킵니다.
4. 곡선 홍채 겸자를 사용해 동맥을 분리하세요. 인접한 미주신경을 찾아 부드럽게 분리하여 신경 손상을 막으세요.
5. 동맥 아래에 직선 그라페 겸자를 놓아 혈류를 막고, 그 아래에 4-0 실크 봉합사 두 개를 꿰매세요. 근위(두개골) 봉합선을 단단히 묶으세요.
6. 동맥 표면에 작은 절개를 하세요.
7. 렌즈 겸자 끝으로 혈관 덮개를 부드럽게 들어 올려 캐뉼라 삽입을 위해 혈관 내강을 안정시키세요.
8. 캐뉼라를 미리 표시된 2–2.5cm 깊이에 삽입하세요. 경미한 역류가 예상되세요; 과도한 경우, 진행 전에 다시 차단하고 청소하세요.
   주의: 혈관 천자와 캐뼉은 날카로운 기구를 사용하므로 우발적 부상을 방지하기 위해 신중하게 시행해야 합니다.
9. 저항을 느끼거나 피하 부종을 관찰하지 않고 소량의 혈액을 부드럽게 빼내고 항응고제 용액을 캐뉼라에 다시 주입하여 올바른 위치를 확인하세요.
10. 캐뉼라를 봉합사로 고정하고 외부 끝을 플러그로 밀봉하세요.
11. 경동맥 캐닐레이션 후 마취를 유지하면서 시술을 잠시 중단할 수 있습니다.
12. 목 상처는 멸균 봉합사로 봉합하세요. 경동맥 격리와 성공적인 캐논레이션에 대한 개요는 그림 2에 나와 있습니다.

그림 2: 경동맥 캐논리. (A) 경동맥을 둘러싼 쌍으로 연결된 목 근육들(주황색 화살표). 침샘(파란 화살표)은 두개골에 숨어 있습니다. (B) 노출된 경동맥은 피부 표면 아래 약 1cm 아래에 위치해 있습니다. 침샘(파란 화살표)은 두개골에 숨어 있습니다. (C) 캐뉼라 삽입 전 외과적 세팅, 직선 Graefe 겸자와 두 개의 실크 봉합사로 동맥을 분리하고 상부 끝이 묶인 채 혈류를 막는 모습. (D) 약 2cm 정도의 캐뉼라가 경동맥에 성공적으로 삽입됨(노란색 화살표). 경동맥 캐뉼라는 초록색 화살표로 표시되어 있습니다. (E) 경동맥 삽입이 성공하여 혈액을 캐뉼라에 채취하여 확인됨. (F) 경동맥과 고정을 위해 캐뉼라 3개(4-0) 봉합사(보라색 화살표)를 감습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

4. 경정맥 캐뉜션

1. 쥐를 등을 누운 자세로 목을 펴고 머리를 약간 왼쪽으로 돌리세요.
2. 쇄골 위의 경정맥을 위치와 눈에 보이는 혈류로 식별하세요. 쇄골에서 기관 쪽으로 1–1.5cm 비스듬한 절개를 하세요.
3. 피하 조직을 무딘 채로 해리하여 정맥을 노출시킨다.
4. 곡선형 홍채 겸자를 사용해 주변 결합 조직에서 정맥을 분리합니다. 정맥 아래에 겸자를 넣어 분리 여부를 확인하세요.
5. 노출된 마디 양 끝 정맥 아래에 4-0 실크 봉합사 두 개를 놓으세요. 두개(상부) 봉합선을 단단히 묶어 혈류를 막으세요.
6. 혈액 역류를 막기 위해 직선 그라페 겸자를 정맥 아래에 놓고 손잡이를 주사기나 지지대 위에 올려놓으세요.
7. 정맥 상단, 분리된 구간을 따라 3분의 1 지점에 작은(~1 mm) 절개를 가위로 만듭니다.
8. 렌즈 겸자 끝으로 혈관 덮개를 부드럽게 들어 올려 캐뉼라 삽입을 위해 혈관 내강을 안정시키세요.
9. 홍채 겸자를 사용해 캐뉼라 끝을 절개 부위에 삽입하고 미리 표시된 깊이(1–1.5 cm)까지 밀어줍니다.
10. 캐뉼라가 안정되면 혈류가 허용되도록 폐쇄를 풀어주세요.
    참고: 정맥 역류를 방지하기 위해 안정적인 손잡이를 유지하세요. 출혈이 발생하면 즉시 다시 차단하고 필드를 청소한 후 진행하세요.
11. 저항을 느끼거나 피하 부종을 관찰하지 않고 소량의 혈액을 부드럽게 빼내고 항응고제 용액을 캐뉼라에 다시 주입하여 올바른 위치를 확인하세요.
12. 근위와 원위 양쪽 끝에 봉합사로 캐뉼라를 고정하세요.
13. 외부 튜브를 일시적으로 막고, 주사기를 제거한 뒤 플러그로 캐뉼라를 밀봉하세요.
14. 경동맥 관이 완성될 때까지 절개 부위를 따뜻한 식염수로 적셔 두세요. 경정맥 격리와 관식 삽입의 대표적인 이미지는 그림 3에 나와 있습니다.

그림 3: 경정맥 관식 삽입. (A) 경정맥(검은 점선이 있는 윤곽)은 쇄골 바로 아래 피부 아래에 위치합니다. 정착된 경동맥 캐뉼라는 경정맥 근처에서 관찰할 수 있습니다(녹색 화살표). (B) 경정맥이 두 개의 실크 봉합사로 분리되어 있습니다; 윗부분은 묶여 있습니다. (C) 약 1cm 정도의 캐뉼라가 경정맥에 성공적으로 삽입됩니다(노란색 화살표). 경정맥 캐뉼라는 파란색 화살표로 표시되며; 경동맥 캐뉼라는 초록색 화살표로 표시됩니다. (D) 세 개의 봉합사(사이즈 4-0)가 경정맥과 캐뉼라를 감아 고정합니다(보라색 화살). 경정맥 삽입에 성공했으며, 부드러운 식염수 주입으로 확인되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

5. 간 림프관 관내 관식

1. 쥐를 수술용 현미경 아래 등쪽 누운 자세로 위치시킵니다.
2. 갈비뼈 아래 약 1.5–2cm 지점에서 오른쪽 옆구리까지 4–5cm 수평 피부 절개를 합니다(그림 4A, B).
3. 피부를 당기고 외복사근과 내복사근에 일치하는 절개를 하세요.
4. 과도한 출혈을 막기 위해 큰 혈관을 지혈하거나 결찰하세요.
5. 식염수에 적시 면봉을 사용해 장기를 부드럽게 재배치하세요: 간은 횡격막 쪽으로, 위는 왼쪽으로, 소장은 아래쪽으로 이동시킵니다.
6. 장기는 식염수에 적신 거즈로 후퇴시키세요. 절개 부위와 장기 위치는 그림 4C에 나타났습니다.
7. 확립된 해부학적 랜드마크를 사용하여 간림프관(직경 ~0.6 mm)을 식별합니다. 관은 간동맥과 평행하고 약간 꼬리쪽에 위치하며, 오른쪽 신장 내측에 위치하고 하대정맥과 인접해 있습니다.
8. 간림프관의 모습을 관찰하세요. 보통 반투명하고 좁아 보입니다.
9. 간림프관과 장간막 림프관을 구분하는데, 후자는 더 크고 보통 킬로미크론 함량 때문에 불투명하거나 흰색으로 보입니다. 따라서 장간막 림프관은 두개골에 위치한 간 림프관을 식별하는 데 도움을 주는 해부학적 이정표 역할을 할 수 있습니다.
10. 림프관과 대정맥 위에 있는 결합 조직을 직선 그라페 겸자를 사용해 제거하세요.
11. 오른쪽 신장 아래 지방층을 통해 직선 그라페 겸자를 삽입하여 대정맥 아래에 통로를 만듭니다. 간담관과 평행하게 대정맥 아래에서 끝이 나올 때까지 진행합니다.
12. 준비된 캐뉼라의 외부 끝을 직선 그라페 겸자로 잡고, 대정맥 아래에 생긴 터널을 통해 끝이 반대편으로 나올 때까지 당깁니다.
13. Halsted-Mosquito 지혈기 겸자를 사용해 25G 바늘 끝을 약 90°로 구부립니다. 구부린 바늘을 사용해 오른쪽 간림프관(수술자와 가장 가까운 곳)을 찔러 주세요.
    주의: 림프관 천자 시 날카로운 바늘을 다룰 때는 부상을 방지하기 위해 주의해야 합니다.
14. 캐뉼라에 공기 방울 없이 항응고제 용액이 채워져 있는지 확인하세요. 경사진 끝을 약 2mm 정도 덕트 안에 삽입하세요.
15. 림프관 외부 끝을 관찰하여 림프류를 관찰하세요(~ 100 μL/h). 유류가 관찰되지 않으면 캐뉼라를 조정하거나 다시 삽입하세요.
16. 림프 흐름이 확인되면 삽입 부위를 고정하기 위해 카뉼라를 막고 수의사용 접착제를 소량 발라주세요. 마르면 튜브를 통해 림프 흐름을 확인하세요.
17. 거즈를 제거하고 장기를 원래 위치로 돌려놓으세요.
18. 항응고제 용액이 담긴 채집관을 캐뉼라 출구 아래에 놓으세요. 림프가 관으로 낙하 방향으로 흐르는지 확인하세요.
19. 복벽을 봉합하여 내복사근, 외복사근, 피부층을 차례로 봉합합니다. 간 림프관의 식별과 성공적인 캐닐레이션은 그림 5에 나와 있습니다.
    참고: 간림프관 삽입이 성공적으로 완료된 후, 마취와 수분 공급이 유지되는 동안 림프 채취를 시작하기 전에 시술을 잠시 중단할 수 있습니다.

그림 4: 간 림프관 노출. (A) 절개를 위한 오른쪽 갈비뼈 아래 1.5–2cm 지점을 나타내는 해부학적 기준점. (B) 피부와 복근을 관통한 절개, 내부 장기 노출. (C) 간 림프관을 노출시키기 위해 장기 위치를 재조정하는 것. 간은 횡격막 쪽으로 이동하고, 위는 동물의 왼쪽에 위치하며, 소장은 아래쪽에 접혀 있습니다. 간림프관은 간동맥(초록색 화살표)과 장간막동맥(파란색 화살표) 사이에 위치해 있습니다. L: 간; SI: 소장; IVC: 하정맥; RK: 오른쪽 신장. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

그림 5: 간 림프관 식별 및 캐뼼리화. (A) 장기 재배치 후 주변 결합 조직 제거 전 림프 및 동맥 구조를 관찰할 수 있습니다. 간동맥(녹색 화살표)은 인접한 간림프관(노란색 화살표)과 두개골 쪽에 위치해 있습니다. 장간막 림프관(보라색 화살표)은 장간막 동맥 위에 위치하며(검은 점이 있는 윤곽선). 이 구조들은 하대정맥에 수직으로 뻗어 있습니다. IVC: 하정맥; RK: 오른쪽 신장. (B) 주변 결합 조직을 제거한 후 간림프관(노란색 화살표)이 명확히 관찰될 수 있습니다. 간림프관은 간동맥(녹색 점선 윤곽)과 평행하게 뻗어 있으며, 뇌 방향으로는 장간막 림프관(보라색 화살표)과 장간막동맥(검은색 점선 선)과 관련되어 있습니다. (C) 캐뉼라(흰색 화살표)는 림프관에 생긴 작은 구멍(주황색 화살표) 을 통해 간림프관(노란색 화살표)에 삽입됩니다. 장간막 림프관(파란색 화살표)은 시각적으로 확인할 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

6. 수술 후 기간

1. 간림프 캐뉼레이션에 성공한 직후, 경정맥 캐뉼라를 통해 1.0–2.0 mL/h의 멸균 생리식염수를 주입하여 수분 보급을 시작하세요.
2. 림프 수거 내내 주입을 유지하세요. 또는 위 캐뉼라나 십이지장 캐뉼라 를 통해 수분 보급을 할 수 있어, 필요 시 경정맥 캐뉼라를 정맥 혈액 채취에 사용할 수 있습니다.
3. 채취 기간 내내 동물을 마취 상태에 두고, 37°C의 가열된 수술용 패드 위에 두세요.
4. 코 콘을 통해 이소플루란 마취를 유지하면서 호흡 패턴과 반사 반응을 관찰하여 실험 내내 호흡 박수와 마취 깊이를 모니터링하세요.
5. 수분 공급은 경정맥 캐뉼라 를 통한 연속 식염수 주입(1.0–2.0 mL/h)으로 유지되었습니다.
6. 생리학적 교란을 최소화하기 위해, 최종 샘플링 전 채취된 총 혈액량은 기관 동물 윤리 지침에 따라 추정 순환 혈액량의 <10%로 제한되었습니다.
7. 간림프를 항응고제 함유관에 지속적으로 수집하세요. 수집관은 매시간 또는 필요에 따라 교체하세요.
8. 지정된 시점에 동맥 혈액 샘플을 채취하세요:
   1. 외부 튜브를 잠시 막고 빈 주사기를 연결하세요.
   2. 튜브가 채워질 때까지 혈액을 빼세요.
   3. 샘플 채취를 위해 주사기를 새 주사기로 교체하고, 각 지정된 시점마다 약 100–200 μL의 동맥혈을 채취합니다.
   4. 각 채취 후 캐뉼라를 항응고제 용액으로 세척하세요.
   5. 플러그로 캐뉼라를 밀봉하세요.
9. 샘플 채취가 완료된 후에는 간동맥과 문맥의 말단 샘플링을 진행하거나, 경동맥 또는 경정맥 캐뉼라 를 통해 펜토바르비톤나트륨(>100 mg/kg)으로 인도적으로 쥐를 사살합니다.

7. 간동맥 및 문맥의 말단 샘플링

1. 림프와 혈액 채취가 완료되면, 심마취를 유지하고 호흡이 안정된 상태인 후 말단 혈관 채취를 진행하세요.
2. 복부 절개를 조심스럽게 다시 열어 상복부를 노출시키세요.
3. 간을 부드럽게 횡격막 쪽, 위를 왼쪽, 소장 아래쪽으로 당기고, 식염수 촉촉한 거즈를 사용해 관식 간 림프관을 드러냅니다.
4. 간동맥을 식별하라. 간동맥은 간림프관과 평행하고 후방에 위치해 있다.
   참고: 동맥은 문맥보다 작고 연하게 보이며, 더 맥박이 심한 흐름을 보입니다.
5. 0.61mm O.D., 0.28mm 내경 폴리비닐 캐뉼라를 준비하세요. 이 카뉼라에는 항응고제 용액이 미리 채워져 있고 기포가 없습니다.
6. 곡선형 홍채 겸자를 사용해 간동맥의 짧은 구간을 분리하고 그 아래에 4-0 실크 봉합사를 삽입합니다.
7. 동맥을 부드럽게 들어 올리고 첫 번째 봉합사 원위에도 두 번째 봉합사를 삽입하세요. 원위 봉합선은 역류를 조절하기 위해 묶고, 근위 봉합선은 나중에 닫을 수 있도록 묶지 않은 채로 두세요.
8. 미세 끝 마이크로 가위를 사용해 봉합선 사이 동맥벽에 약 0.5mm 크기의 작은 횡절개를 만듭니다.
9. 듀몽 겸자 끝으로 혈관 덮개를 부드럽게 들어 올려 캐뉼라 삽입을 위해 혈관 내강을 안정시킵니다.
10. 폴리비닐 캐뉼라의 경사진 끝을 입구에 삽입하고 약 2–3mm 앞으로 나갑니다.
11. 혈관과 캐뉼라 모두에 근위 봉합선을 묶어 캐뉼라를 고정하세요.
12. 캐뉼라로 뛰는 혈류를 관찰하거나 소량의 밝은 빨간색 동맥혈을 부드럽게 흡인하여 올바른 위치를 확인하세요.
13. 0.5–1 mL의 혈액을 항응고제가 포함된 사전 표지된 튜브에 채취합니다.
14. 채취 후 캐뉼라를 빼고 양쪽 봉합사를 조여 지혈을 달성하세요. 간 동맥 노출 및 캐닳 삽입 절차는 그림 6에 나와 있습니다.
15. 간동맥에 내측과 수직으로 뻗은 문맥을 식별하세요. 문맥은 간동맥에 비해 직경이 더 크고 색이 더 어둡습니다.
16. 23G 또는 25G 바늘을 항응고제 용액으로 미리 세척된 1mL 주사기에 맞춥니다.
17. 혈관 붕괴나 찢어짐을 방지하기 위해 바늘 베벨업을 문맥에 얕은 각도(약 20°–30°)로 삽입하세요.
18. 필요한 혈액량을 부드럽게 흡입하세요.
19. 문맥 천공은 말기이므로, 동물이 심마취된 상태에서 경동맥 또는 경정맥 캐뉼을 통해 >100 mg/kg의 펜토바르비톤 나트륨을 투여하여 샘플 채취 직후 인도적으로 사살해야 합니다. 문맥 위치와 말단 샘플링 방법은 그림 7에 나와 있습니다.
    주의: 펜토바르비톤 나트륨은 통제 물질이므로 기관 규정과 적절한 안전 절차에 따라 취급 및 투여되어야 합니다.
20. 호주 과학적 목적을 위한 동물 관리 및 사용 규정(NHMRC)¹⁵ 및 ANZCCART 지침에 따라 사체 폐기 전에 호흡 및 심장 활동 중단으로 인한 사망을 확인해야 합니다.

그림 6: 간동맥 식별 및 관식 삽입. (A) 간동맥 노출(초록색 화살표). 간동맥은 장간막림프관(검은 점선)과 인접해 위치하며, 하대정맥에 수직입니다. IVC: 하정맥; L: 간. (B) 곡선 겸자를 이용한 간동맥 분리. (C) 0.61mm × 0.28mm 폴리비닐 캐뉼라(주황색 화살표)를 간동맥(녹색 화살표)에 성공적으로 삽입하고, 말단 동맥 혈액 샘플을 위해 4-0 실크 봉합사로 고정함. 장간막 림프관(검은 점선)은 시각적으로 볼 수 있습니다. PV: 문맥. (D) 캐뉼라가 고정된 후, 혈액을 캐뉼라에 채취하여 캐뉼라의 개완도를 확인합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

그림 7: 문맥 식별 및 말단 샘플링. (A) 문맥(25G 바늘로 표시)은 간동맥(흰색 점선)과 담관(검은색 점선) 사이에 위치한다. 문맥은 간동맥보다 크고 어둡게 보이며, 말기 혈액 채취를 위해 심마취 하에 접근됩니다. PV: 문맥; IVC: 하정맥; L: 간; SI: 소장; RK: 오른쪽 신장. (B) 말단 정맥 혈액 채취를 위해 25G 바늘을 문맥(검은 점선 테두리)에 성공적으로 삽입함. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

결과

프로토콜 섹션에서 설명된 수술적 접근법은^{이전에 보고된} 대로 오른쪽 신장 내측에 위치하며 셀리악병 및 간동맥과 평행하게 뻗은 간림프관을 명확히 식별할 수 있게 합니다. 대표적인 해부학과 캐닐레이션은 그림 5에 나와 있습니다. 성공적인 관식 삽입은 즉시 투명하거나 약간 탁한 림프액이 나타나며, 우유 같은 킬로미크론 오염이 없어 장간막 림프와의 혼합이 최소화되었음을 시사합니다. 이 관찰은 간림프의 보고된 특성과 일치^합니다. 간 림프의 식별은 간동맥과 하대정맥에 대한 해부학적 위치와 장간막 림프의 불투명하거나 우유빛 외관과 대조되는 특징적인 투명한 외관에 기반했습니다.

간 림프류 수류는 채취 기간 내내 안정적이어야 하며, 평균 속도는 약 0.1 mL/h ^3,4,11입니다. 간에서의 림프류 흐름은 마취 상태에서 관식 후 약 2–3시간 동안 가장 안정적이지만, 최적의 실험 조건에서는 더 긴 채취 기간(최대 ~6–8시간)이 가능할 수 있습니다. 이전^연구에서 보고된 대표적인 림프류 수치는 표 1에 요약되어 있습니다. 간림프류는 일반적으로 마취된 쥐의 장간막 및 흉부 림프관 유량보다 낮습니다.

림프 부위(의식 상태)	평균 림프류 속도 (mL/h)
흉부 림프(의식 있음)	1.74 ± 0.33
흉부 림프(마취 상태)	0.65 ± 0.10
장간막림프(마취)	0.45 ± 0.11
간 림프(마취)	0.12 ± 0.02

표 1: 의식 있는 쥐와 마취된 쥐에서 흉부, 장간간막, 간 림프관 캐닐레이션을 통한 평균 림프류 유량(mL/h). 데이터는 n = 3–5마리± 쥐에 대한 평균 SEM 형태로 제시됩니다. Yadav 등(2018^)의 표 3에서 각색함.

고분자의 림프 수송을 대표하는 결과는 그림 8에 나와 있습니다. 이 사례들은 약 60 kDa의 페길화 인터페론 α2a(IFN-PEG40), 약 31 kDa의 페길화 인터페론 α2b(IFN-PEG12), 그리고 단클론 항체 트라스투주맙을 포함한 치료용 고분자 정맥 투여 후 림프 회복을 평가하는 데 모델이 어떻게 활용될 수 있는지를 보여줍니다. 이는 간이 고분자^치료제의 유출 및 림프 접근의 주요 부위임을 시사합니다.

그림 8: 흉부, 장간막, 간 림프에서 정맥 주사 고분자 치료제의 림프 회복. 다양한 분자 크기의 PEGylated 인터페론(IFN-PEG12 및 IFN-PEG40)과 단클론 항체(트라스투주맙)를 정맥 주사한 후 흉부, 장간막, 간 림프에서 회복된 총 용량 비율. 데이터는 8시간 동안 회량 회복의 평균 ± SEM을 나타냅니다. Yadav 등(2018^)에서 각색함. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

이 모델은 또한 간림프³의 지단백 프로파일링을 상세히 가능하게 합니다. 림프 지질 조성의 대표적인 분석 결과는 그림 9에 나와 있습니다. 흉추 및 장간막림프와 비교할 때, 간 림프는 총 지질 함량이 현저히 낮지만, 단백질 농도는 다른 림프원과 비슷합니다. 간 림프의 지단백질 분석은 간이 지질 수송과 콜레스테롤 역수송에서 독특한 역할을 한다는 점을 강조합니다. 대표적인 지질 조성 데이터는 표 2에 요약되어 있습니다. 간림프 HDL은 콜레스테릴 에스터가 풍부하며, 장간막 림프인 HDL은 주로 중성지방이 풍부하며, 흉부 림프 HDL은 상대적으로 더 높은 인지질 함량을 포함하고 있습니다. 이러한 조성 차이는 각 림프원이 지질 대사와 운송에서 뚜렷한 역할을 함을 나타냅니다.

	%wt/wt
분수	인지질	자유 콜레스테롤	콜레스테릴 에스터	중성지방
장간막림프
D-HDL	20 ± 3	1 ± 0	5 ± 1	16 ± 1
L-HDL	21 ± 4	2 ± 0	8 ± 2	23 ± 5
간 림프
D-HDL	24 ± 1	3 ± 0	12 ± 3	8 ± 1
L-HDL	23 ± 1	6 ± 1	13 ± 2	14 ± 2
흉림프
D-HDL	25 ± 1	1 ± 0	7 ± 0	11 ± 3
L-HDL	29 ± 1	2 ± 0	11 ± 1	11 ± 0
혈장
D-HDL	29 ± 2	2 ± 0	20 ± 3	2 ± 0
L-HDL	36 ± 6	2 ± 0	18 ± 3	4 ± 1

표 2: 장간막, 간, 흉부 림프와 혈장에서 분리된 밀도(D-HDL) 및 경량(L-HDL) 고밀도 지단백 분획의 지질 조성. 값은 인지질, 자유 콜레스테롤, 콜레스테릴 에스터, 중성지방의 무게 비율(% wt/wt)을 전체 지질 분율에 대해 나타냅니다. 데이터는 SEM± 평균으로 제시됩니다. Gracia 외(2020^)의 표 1에서 수정됨.

그림 9: 장간막, 간, 흉부 림프의 단백질 및 지질 조성. 장간막, 간, 흉림프에서 단백질과 총 지질의 비례 함량. 지질 함량에는 인지질(PL), 중성지방(TG), 콜레스테릴 에스터(CE), 자유 콜레스테롤(FC)이 포함되며, 이는 단백질과 지질 총 무게에 대한 지질 무게의 비율로 표현됩니다. 데이터는 SEM± 평균으로 제시됩니다. Gracia 외 (2020^)에서 각색. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

토론

간 림프관 캐뉼레이션은 경험 많은 미세외과 의사에게도 기술적으로 어려운 수술입니다. 림프관 무결성을 보존하고 안정적인 림프류 달성 가능성을 높일 수 있는 여러 중요한 단계가 있습니다. 간림프관을 확인하고 격리할 때(프로토콜 단계 5.7-5.10), 첫 단계는 간림프관 근처의 장간막 림프관 및 대정맥 위에 덮인 결합 조직과 지방을 제거하는 것입니다. 간림프관은 두껍고 불투명한 장간막 림프관에 비해 투명하고 연약하며, 직접 만지면 쉽게 파열될 수 있습니다. 장간막 림프관은 그 위에 있는 조직을 제거하면 위에 위치한 간 림프관이 드러나기 때문에 해부학적 중요한 이정표 역할을 합니다. 간림프관은 종종 휘어지거나 휘어지기 때문에, 수술자는 직선 구간을 따라 캐뉼레이션 지점을 선택하고 캐뉼라를 관의 자연스러운 경로와 평행하게 배치하여 폐쇄나 찢어짐의 위험을 최소화해야 합니다(단계 5.11-5.14).

관식 자체가 성공의 가장 중요한 결정 요소입니다. 관을 천공한 후(단계 5.13), 겸자 끝을 입구에 삽입하고 한 혈관 벽만 기구 위에 덮이도록 하여 눈으로 내부 접근을 확인할 수 있습니다. 서로 마주 보는 두 벽이 나타나면 관통 구멍이 있음을 알 수 있습니다. 하내관이 확인되면 캐뉼라를 같은 각도로 관을 따라 부드럽게 전진시킬 수 있습니다. 인접한 혈관을 손상시키지 않도록 주의해야 하며, 현장 출혈은 림프 집집 캐뉼라로 혈액을 유입시켜 샘플을 오염시키고 혈전 형성 위험을 크게 높일 수 있습니다. 림프류 형성(단계 5.15) 후에는 캐뉼라의 수집 끝을 덮고, 수의용 접착제를 조심스럽게 발라서 내강 내로 들어가지 못하게 해야 합니다. 캐뉼라에 공기 방울이 있는지 점검해야 하는데, 갇힌 공기는 역압을 높이고 림프 흐름을 방해할 수 있습니다. 간림프는 낮은 구동압 하에서 생성되기 때문에, 캐뉼라의 수집 끝은 중력에 의한 배액을 용이하게 하기 위해 항상 수술 부위 아래에 위치해야 합니다.

간관 림프관 삽입의 성공은 림프관 혈류가 즉시 시작됨을 나타냅니다. 일단 자리 잡으면 간 림프는 일반적으로 약 0.1 mL/h로 흐르며, 몇 시간 동안 안정적인 배출을 유지합니다. 유량은 동물의 해부학, 생리학, 실험 조건에 따라 달라질 수 있습니다. 예를 들어, 이 프로토콜에서는 이소플루란 마취 하에서 림프를 채취했습니다. 이소플루란 마취는 림프 기능과 관련된 생리학적 매개변수에 영향을 미칠 수 있으므로, 림프 형성률을 해석할 때 마취와 관련된 실험적 조건을 고려해야 합니다¹⁶. 간염 림프관 관식 삽입은 복부 림프관의 복부 개방술과 섬세한 미세수술적 조작이 필요하므로, 이 모델에서는 의식이 있는 쥐로부터 림프를 채취하는 것이 불가능합니다. 마취 상태와 의식 상태에서의 림프 수송 또는 서로 다른 마취 요법을 비교한 이전 연구들은 마취가 절대 림프류 수에 약간의 영향을 미칠 수 있지만 전체 림프 수송 패턴에 실질적인 변화를 일으키지는 않는다는 것을 보여주었다⁴. 따라서 이 모델에서 얻은 림프류 값은 마취 실험 조건의 맥락 내에서 해석되어야 합니다.

채취 중 혈류가 점진적으로 감소하거나 중단되는 현상은 주로 혈액 오염이나 섬유소 침착으로 인한 캐뉼라 내 혈전 형성에 의해 발생합니다. 혈류를 복원하려면 때때로 캐뉼라를 고운 겸자로 부드럽게 집어 기계적으로 혈전을 조각내거나, 캐뉼라의 수집 끝을 통해 부드럽게 흡인해 폐물을 제거함으로써 회복할 수 있습니다. 막힘이 외부 부분에 국한되어 있다면, 혈전 근처에서 카뉼라를 잘라 멸균 실리콘 커넥터로 새 관에 다시 연결할 수 있습니다. 혈전이 캐뼉션 부위에 형성되면 보통 재캐논레이션이 필요합니다. 이런 경우에는 유관이나 인접 혈관이 파열되지 않도록 접착제를 제거하는 데 매우 주의를 기울여야 합니다. 캐뉼라에 약간의 혈액 누출도 저압 간 림프계 내 응고를 현저히 촉진시키므로, 캐뉼라 재시도 전에 반드시 혈전을 완료해야 합니다.

생리학적 요인도 림프 흐름과 개폐력에 영향을 미칩니다. 쥐의 간통 림프류는 기저 조건에서도 장간막이나 흉관 흐름보다 본질적으로 느립니다^17,18. 더불어, 전신마취는 의식이 있고 자유롭게 움직이는 쥐에 비해 다른 림프관의 림프관 흐름을 줄일 수 있다¹⁹. 간 림프 캐뉼은 마취와 복강 절개술이 필요하기 때문에, 이러한 요인들이 장기간 채취 시 관찰되는 상대적으로 낮은 유속과 혈전 경향 증가에 기여할 가능성이 높습니다. 채취 시 경정맥이나 위장관 캐뉼라를 통해 수분을 유지하면 림프 흐름을 안정시키고 혈전 형성을 줄이는 데 도움이 됩니다. 이 모델에서는 간림프류 안정이 보통 2–3시간 동안 유지되며, 이후 혈류가 악화되고 응고 가능성이 높아집니다. 하지만 최적의 실험 조건에서는 림프 수집을 더 오랜 기간 유지할 수 있으며, 최대 지속 시간은 최대 ~8시간^{으로 보고되었습니다}.

간동맥과 문맥 샘플링(그림 6 및 그림 7)의 포함은 간 유입, 림프 유출, 전신 순환 간의 직접적인 비교를 가능하게 하여 모델의 적용 범위를 확장합니다. 이 말단 샘플링 단계는 단일 동물 내 간 미세혈관 수송과 간질성 정리를 동시에 평가할 수 있게 합니다. 이러한 비교는 간혈관과 림프반 구획 간 간 혈관 구획 간 용질의 분포에 대한 귀중한 통찰을 제공하며, 특히 간질 확산에 의존하는 큰 고분자 또는 친지성 화합물에 대해 그렇습니다.

이러한 어려움에도 불구하고, 간림프 관식 모델은 여전히 가치 있고 유익한 기법으로 남아 있습니다. 간은 전체 림프류 중 상당 부분을 차지하며, 간 림프에는 간간질액에서 유래한 단백질과 기타 구성 요소들이 포함되어 있습니다. 간에서 직접 배출되는 림프를 샘플링함으로써, 이 모델은 흉관에서 장간막 및 전신 림프에 의해 희석되기 전에 간을 떠나는 분자와 세포를 분석할 수 있게 합니다. 간 림프의 생화학적 분석은 간간질성 대사와 지질 수송 과정에 대한 통찰을 제공합니다^12,20. 이는 간맥 대사와 간외 교환의 효과를 통합하는 관문 또는 전신 혈액에서 얻은 정보를 보완합니다. 중요한 점은, 간림프, 경동맥, 경정맥 캐논을 결합한 이 구성은 간유출과 혈관 유입 사이의 용질 구배를 동적으로 평가하여 간 운반과 정액 배출을 보다 포괄적으로 파악할 수 있게 한다는 것입니다.

이 모델을 사용한 이전 연구들은 간 림프 샘플링이 고분자 치료제의 림프 회복 평가와 간 림프와 전신순환 간의 용질 운반 비교를 가능하게 함을 보여줍니다. 간 림프 캐논리, 동시 혈관 샘플링, 생화학적 프로파일링이 함께 간 미세혈관 및 간질의 역학을 연구할 수 있는 견고한 실험 플랫폼을 제공합니다. 이 모델은 간 수송, 대사, 지질 처리, 면역 신호 전달을 동시에 평가할 수 있게 하며, MASLD나 간 염증과 같은 병태생리학적 조건에서의 변화를 조사하는 데 적합하게 활용될 수 있습니다.

결론적으로, 간림프, 간동맥, 문맥 접근을 통합한 이 정교한 외과 모델은 간 수송 경로를 검사하는 데 포괄적이고 재현 가능한 접근법을 제공합니다. 혈관 유입, 간질성 유출, 림프 배출을 직접 비교할 수 있게 하여, 간 특이적 운반, 대사 및 약물동학 과정에 대한 기전적 통찰을 제공하는 연구를 지원합니다. 또한, 간 림프를 샘플링하는 능력은 간에서 발생하는 면역 세포 및 항원 수송을 연구할 수 있는 독특한 기회를 제공하여 간 면역 감시, 염증, 내성 기전에 대한 귀중한 통찰을 제공합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
항응고 용액(EDTA 0.1%)	Invitrogen	AM9261	주사 바늘과 채취한 샘플의 응고 방지
항응고 용액(Heparin 20 IU/mL)	Pfizer	00409-2723-01	주사 바늘과 채취한 샘플의 응고 방지
클로르헥시딘(0.5%)	McFarlane Medical	12120-OR	수술 부위 소독에 사용
채취 튜브(마이크로센트리퓨지)	Greiner Bio-One	616201	임파액 및 혈액 채취에 사용
면화	Winc Australia	18874125	장기 조작 및 수분 유지에 사용
면봉	Pacific Laboratory	1005199	수술 중 장기 위치 재조정에 사용
곡선형 홍채 팽창 포셉	Macquarie Medical Systems	TTP5002-5	혈관 분리 및 조직 조작에 사용
Dumont 포셉	Fine Science Tools	11251-35	간동맥 구멍의 혈관 개방 및 안정화에 사용
에탄올(70%)	Ajax	AJA214-2.5PL	수술 부위 소독에 사용
Halsted-Mosquito 혈관 클램프	Fine Science Tools	13009-12	간 림프관 절취를 위한 25G 바늘 굽힘에 사용
가열 외과 수술 패드(37 °C)	Ratek	IC-WT1	수술 중 체온 유지
유도 챔버	Darvall	1859	최초 마취 유도에 사용
주입 펌프	Adelab Scientific	NE-300	주사 바늘을 통해 염화나트륨 용액 조절 주입
홍채 가위	Stark Medical	E-AC985-11	피부 및 근육 절개에 사용
이소플루란	Provet Pty Ltd	ISOF07	마취 유도 및 유지에 사용되는 흡입 마취제
Kelman-McPherson 렌즈 포셉	ProSciTech	TY-1301	경정맥 및 경동맥 구멍의 혈관 개방 및 안정화에 사용
바늘(23G × 1")	Livingstone	DN23GX1.0LV	문맥 구멍 절취 및 혈액 채취에 사용
바늘(25G × 1")	Livingstone	DN25GX1.0LV	주사 바늘 세척 및 간 림프관 절취에 사용
코콘 마취 시스템	Darvall	7885	수술 중 마취 유지
흐름 계측기가 부착된 산소 공급	BOC	400NE	이소플루란 마취의 운반 가스
폴리에틸렌 주사 바늘(0.8 mm O.D., 0.5 mm I.D.)	Microtube Extrusions	PE8050	경동맥, 경정맥 및 간 림프관 주사 바늘 삽입에 사용
폴리비닐 주사 바늘(0.61 mm O.D., 0.28 mm I.D.)	Microtube Extrusions	PIV6128	간동맥 주사 바늘 삽입에 사용
실크 봉합사(4-0)	SMI AG	SM8015	혈관 및 주사 바늘 고정에 사용
나트륨 펜토바르비탈	Lyppard Australia Pty Ltd	LETH250	안락사(>100 mg/kg)에 사용
멸균 생리 식염수(0.9% NaCl)	FreeFlex	K690531	재수화 및 세척에 사용
직선형 Graefe 포셉	Fine Science Tools	11150-10	섬세한 혈관 분리에 사용
수술용 현미경	Zeiss	Stemi 2000-CS	간 림프관 주사 바늘 삽입 중 시각화에 사용
수술용 멸균 날카로운 날(스칼펠 사용용)	Livingstone	SBLDCL15	준비 중 주사 바늘 끝 경사 조절에 사용
주사기(1 mL)	Terumo	19032-TE	주사 바늘 세척에 사용
주사기(3 mL)	Terumo	19048-TE	혈액 채취에 사용
주사기(30 mL)	Terumo	19034-TE	식염수 주입에 사용
Vannas 가위	Fine Science Tools	91500-09	혈관 절개에 사용
수의학용 조직 접착제	3M	1469SB	간 림프관 주사 바늘 고정에 사용