생리적 맥박성 전단 응력과 진동성 고혈당 하에서 내피 기능 장애를 모델링하는 마이크로플루이딕 시스템

Summary

여기서는 내피세포를 동기화된 진동성 고혈당과 맥동성 전단 스트레스에 노출시키는 마이크로유체 시스템을 제작하고 작동시키는 프로토콜을 제시합니다. 이 접근법은 당뇨병 내피 기능 장애 연구를 위한 생리학적으로 적합한 시험관 내 모델을 제공합니다. 이 프로토콜은 산화 스트레스와 내피 세포 반응의 정량적 측정을 가능하게 합니다.

Abstract

당뇨병 혈관 합병증에서 내피 기능 장애는 대사 장애, 특히 진동성 포도당(OG)과 맥동성 전단 스트레스(PSS) 간의 복잡한 상호작용을 포함합니다. 이러한 요인들은 개별적으로 연구되었으나, 기존 모델은 여전히 정적인 고혈당 또는 단순화된 층류에 국한되어 있으며, 당뇨병 혈관에서 발견되는 통합된 시공간적 결합을 모방할 능력이 부족합니다. 프로그래밍 가능한 마이크로플루이딕 플랫폼을 활용하여 이 프로토콜은 동기화 진동성 고혈당과 생리적 PSS가 내피 세포에 미치는 통합적 영향을 조사할 수 있는 귀중한 플랫폼을 제공합니다. 이 프로토콜은 생리학적으로 관련된 결합된 대사 및 기계적 조건 하에서 내피 기능 장애를 모델링하는 것을 목표로 합니다. 압력 제어 시스템과 결합된 폴리디메틸실록산(PDMS) 칩의 사용은 유동 파형과 포도당 농도 프로파일의 정밀하고 독립적인 변조를 가능하게 합니다. 시스템의 혈역학적 충실도는 마이크로입자 영상 속도계(Micro-PIV)로 검증되며, 세포 반응은 세포 내 활성 산소종(ROS) 수치와 세포 생존 가능성을 모니터링하여 정량적으로 특징지어집니다. 대표적인 결과는 생리학적 PSS가 OG에 의해 유발되는 산화 손상을 효과적으로 완화한다는 것을 보여줍니다. 이 효과는 세포 내 ROS 감소와 결합 자극 조건 하에서의 세포 생존력 향상으로 입증됩니다. 연구 질문에 따라 전단 응력 패턴, 포도당 진동 주파수, 채널 기하학과 같은 매개변수를 조정할 수 있습니다. 이 방법은 당뇨병 혈관 질환에 대한 기계적 생물학적 경로의 기전적 연구와 치료 중재를 위한 약물 스크리닝에 다용도로 활용됩니다.

Introduction

내피 기능 장애는 대사 장애와 비정상적인 혈역학적 힘에 의해 유발되는 당뇨병 혈관 합병증의 초기 발생에 중요한 사건입니다(^1,2). OG 수치는 지속성 고혈당만이 아니라 내피세포에서 산화 스트레스와 염증 신호를 강력하게 유발하는 요인으로 점점 더 인식되고 있으며, 이는 혈관 손상과 항상성 장애를 초래합니다 ^3,4,5. 동시에 혈역학적 전단 응력은 내피 표현형의 주요 결정 요인이며, 생리적 운동 조건에서 PSS는 산화질소 생성, 항산화 방어 및 혈관 보호를 촉진합니다 ^6,7,8. 따라서 진동성 고혈당과 혈역학적 자극의 통합적 효과를 이해하는 것은 내피 기능 장애의 기전을 밝히는 데 필수적입니다.

정적인 고포도당 조건이나 단순화된 층류 방식에 의존하는 기존 시험관 내 모델은 생체 내 대사 및 기계적 신호 간의 복잡하고 역동적인 상호작용을 재현하지 못합니다. 동물 모델은 당뇨병의 전신적 측면을 포착하지만, 통제된 미세 환경 조건에서 신호를 해부하는 데 필요한 세포 수준의 해상도는 부족하다¹². 마이크로플루이딕 기술은 생화학 및 생역학적 자극을 생리학적으로 중요한 기하학에서 정밀한 시공간적 제어를 제공하는 효과적인 대안을^{제공하며, 다양한} 혁신적인 생의학 응용 분야에서 중요한 최근 발전을 이끌어냈습니다^14,15. 예를 들어, Chen 등은 공간 및 시간적 벽 전단 응력과 ATP 신호를 이용한 마이크로플루이딕 ^{장치를 설계하여} 내피세포 내 Ca²⁺ 역학을 연구하였습니다. Yu 등은 생리적 PSS와 높은 포도당 농도의 다양한 조합에서 세포 반응을 감지하기 위한 혈역학적 마이크로유체 칩 ^{시스템을 개발했습니다}. 이들 시스템은 전단 스트레스나 단일 요인 대사 교란에 대한 내피 반응을 연구하는 데 사용되었지만, 포도당 진동과 PSS를 모두 단일 시스템 내에 성공적으로 통합한 것은 드물다. 따라서 두 요소를 제어된 마이크로플루이딕 환경에서 동기화하는 표준화되고 재현 가능한 프로토콜이 부족합니다.

이 방법은 결합된 OG와 PSS를 제공할 수 있는 재현 가능한 마이크로유체 시스템을 구축함으로써 이 격차를 해소합니다. 이 접근법의 주요 목표는 산화 스트레스, 세포 생존력 저하 및 내피 기능 장애의 기계생물학적 반응을 생리학적으로 관련성 있게 모델링하는 것입니다. 정적 배양이나 기존 관류 챔버와 달리, 이 접근법은 기존 모델을 개선하여 대사 및 기계적 자극을 동시에 조절할 수 있게 하여 당뇨병 혈관 미세환경을 더 가깝게 유사하게 합니다. 더불어 이 시스템은 생세포 영상, 실시간 모니터링, 분자 분석과 호환되어, 기전 연구, 질병 모델링, 내피 기능 및 손상에 대한 약물 선별 등 다양한 응용 분야에 적합합니다.

Protocol

윤리 진술:

참고: 이 프로토콜에서 사용되는 모든 시약, 장치 및 소프트웨어는 재료표에 나열되어 있습니다.

1. 마이크로플루이딕 칩 제작

1. 컴퓨터 지원 설계(CAD) 소프트웨어를 사용해 마이크로플루이딕 칩의 구조(W x L x H = 2 mm x 30 mm x 0.1 mm, 그림 1A)를 설계하고, 상업 업체를 통해 SU-8 마스터 몰드를 제작하세요.
2. PDMS 경화제와 프리폴리머를 무게 대비 10:1 비율로 깨끗한 믹싱컵에 섞고 5분간 세게 저어줍니다.
3. 혼합 과정에서 갇힌 기포를 제거하기 위해 -0.08 MPa 이하의 진공 챔버에 최소 15분간 보관하세요.
   참고: 기포 제거를 신속히 하고 넘침을 방지하기 위해, 챔버를 임시로 대기압으로 환기시켜 큰 기포를 터뜨린 후 즉시 진공을 다시 적용하세요. 이 배출 사이클을 2–3번 반복하여 벌크 혼합물이 완전히 투명해지고 거시적 기포가 사라질 때까지 반복합니다.
4. PDMS를 유리 페트리 접시에 놓은 웨이퍼 위에 부어줍니다.
5. PDMS는 주조 과정에서 형성되었을 수 있는 기포를 제거하기 위해 추가로 15분간 건조기 위퍼 위에 부어졌습니다.
   참고: SU-8 마스터 몰드 구조 근처나 내부에 고집스러운 미세 기포가 남아 있다면, 부드럽게 가장자리까지 불어넣거나 수동 고무 에어 블로워로 터뜨리세요. 마이크로채널의 구조적 결함을 예방하기 위해서는 공기 방울을 완전히 제거하는 것이 매우 중요합니다.
6. 곰팡이와 폴리머가 들어있는 페트리 접시를 80°C로 설정한 뜨거운 오븐에 2시간 동안 넣습니다.
   주의: 뜨거운 물질을 다룰 때는 내열 장갑을 착용하세요
7. 메스를 사용해 마스터 몰드에서 굳어진 폴리머 슬래브를 조심스럽게 벗겨내세요.
8. 코어 펀치 도구(예: 직경 1.2mm)를 사용해 폴리머 슬래브의 지정된 채널 끝에 입구와 출구 포트를 만듭니다.
9. 유리 커버슬립과 폴리머 슬래브의 무늬가 있는 면을 접착 테이프로 닦아주세요.
   멈춘 지점: 경화되고 천공된 PDMS 슬래브는 플라즈마 처리 및 접착 전에 실온에서 몇 주간 깨끗한 용기(예: 밀봉된 페트리 접시)에 보관할 수 있습니다.
10. 폴리머 슬래브와 유리 커버슬립을 플라즈마 클리너로 65W 출력으로 실내 공기에서 60초 처리하세요.
11. 즉시 폴리머 채널 면을 유리 커버슬립의 처리된 면에 맞추세요.
12. 부드럽게 눌러 영구적이고 닫힌 마이크로플루이딕 채널을 만듭니다.

2. 내피세포 준비 및 시딩

1. 결합된 마이크로플루이딕 칩을 탈이온수가 채워진 붕소 유리병에 넣고, 121°C, 15psi에서 20분간 오토클레이빙으로 멸균합니다.
   참고: 오토클레이빙 시 압력을 평형화하고 PDMS 마이크로채널의 변형을 방지하기 위해 칩을 물에 담가야 합니다. 이것은 또한 갇힌 공기 방울을 제거하고 이후 유체 유입을 위한 채널을 준비하는 데 도움을 줍니다.
   잠시 멈춘 점: 멸균된 마이크로플루이딕 칩은 밀봉된 유리병에 실온에서 최대 몇 주간 안전하게 보관할 수 있으며, 세포 시딩에 필요할 때까지 사용할 수 있습니다.
2. 멸균된 칩을 인산염수(PBS)와 저포도당 Dulbecco's 변형 이글 배지(DMEM)의 1:1 혼합물을 채운 60mm 배양 접시에 넣습니다.
3. 1 mL 주사기로 100 μg·^mL-1 피브로넥틴을 채널에 주입하고 37 °C에서 4시간 배양합니다.
   참고: 마이크로플루이딕 칩이 액체 수준 아래에 위치하도록 하세요. 어댑터 호스를 주사기 바늘에 연결하고, 호스에 액체를 채운 뒤 액체 수위 아래로 삽입한 뒤, 인렛을 연결한 후 기포가 들어가지 않도록 주입하세요.
4. 삼투압을 높이기 위해 24.5 mM D-만니톨을 저포도당 DMEM(5.5mM 포도당)에 첨가합니다. 5 mM D-포도당을 고포도당 DMEM(25mM 포도당)에 추가하여 최종 30 mM 포도당에 추가합니다. 정상 포도당(NG) 배양지와 고포도당(HG) 배양지를 각각 20% 태아 소 혈청(FBS), 1% 페니실린/스트렙토마이신(P/S)을 보충하여 만듭니다.
5. 37°C의 물에 1× PBS, 트립신, NG, HG 배양 배지를 데웁. 배양 접시에서 인간 탯줄 내피세포(HUVECs)를 90% 합류율로 채취합니다. 0.25% 트립신-EDTA 용액으로 세포를 분리하고 37°C에서 30초간 인큐베이션합니다. 채취한 세포를 세고 농도를 NG 배지와 HG 배지에서 각각 1 x 10⁶ cells/mL로 조절합니다.
6. 1mL 주사기를 사용해 마이크로플루이딕 칩의 입구 포트에 세포 현탁액 100 μL을 주입하며, 대조군은 NG 배지, 실험군은 HG 배지를 사용합니다. 마이크로플루이딕 칩을 37°C의 가습 인큐베이터에 5%_CO2 를 48시간 동안 넣습니다.
   참고: 추가 처리하기 전에 세포가 최소 4시간 정도 부착되도록 하세요. 정적 배양 단계에서 진동성 고혈당을 자극하기 위해 2시간마다 두 배양 배지를 수동으로 교체하세요. 세포를 밤새 5.5 mM 혈당으로 유지하여 생체 내 상황을 모방합니다(그림 1B).

3. 동적 자극 설정

1. 각각 NG와 HG 배양 배양지를 100mL 저장소 두 개에 채우고, 이를 프로그래머블 압력 제어 시스템의 해당 채널에 연결합니다.
2. 저장소, 2단계 3방향 자기 밸브, 그리고 실리콘 튜빙으로 마이크로플루이딕 칩을 연결한다.
3. PDMS 칩의 입구 및 출구 포트를 튜빙에 연결할 때 직경 1.3mm, 90° 각도의 스테인리스 스틸 커넥터를 사용하세요.
   참고: 100 mL 저장소, 실리콘 튜브, 스테인리스 커넥터는 사전에 고압·고온 오토클레이브에서 멸균하세요.
4. 목표 PSS(τ)를 달성하는 데 필요한 유량(Q)을 계산합니다. 점도μ w, 채널 폭, h가 채널 높이인 τ = (6μQ)/(wh²)를 사용한다.
5. 목표 생리학적 PSS(τ = 10 ± 2 dyn·^cm-2, 1 Hz)를 설정하는데, 이는 계산된 유량 200 ± 40 μL·^min-1에 해당합니다.
6. 프로그래밍 가능한 공기 펌프를 프로그래밍하여 PSS를 유지하기 위해 사인파 함수를 생성하도록 합니다. 밸브 컨트롤러를 5분마다 채널을 전환하도록 프로그래밍하여 동적 자극 중에 정사각파 포도당 진동을 생성하세요.
7. 프로그래머블 펌프 시스템을 시작해 총 30분 동안 OG와 PSS를 합쳐 공급하세요.

4. 유동 필드 검증을 위한 마이크로-PIV

1. 형광 미세입자 부피 농도가 0.05%인 NG 및 HG 배지(1 μm)를 준비합니다. 입자들이 고르게 분산되어 있고 뭉치지 않도록 하세요.
2. 세포 실험에 사용된 것과 동일한 깨끗하고 세포 없는 마이크로플루이딕 칩을 역형 형광 현미경 스테이지에 올려놓습니다.
3. 시스템 내 모든 부품을 연결하세요(그림 1C).
   1. 압력원을 압력 컨트롤러에 연결하세요.
   2. 압력 조절기를 밸브 제어기에 연결하고, 밸브 제어기는 컴퓨터와 연결되어 압력 파형을 자동으로 제어합니다.
   3. 압력 조절 콘센트를 HG와 NG 저장소에 별도의 튜빙 라인으로 연결하세요.
   4. 두 저장소를 3/2 압력 밸브에 연결하는데, 이 밸브는 프로그래밍된 진동 포도당 프로토콜에 따라 HG와 NG 매체를 전환합니다.
   5. 3/2 압력 밸브의 출구를 튜빙으로 마이크로플루이딕 칩의 입구에 연결하세요.
   6. 마이크로플루이딕 칩의 출구를 폐기물 저장소에 연결하세요.
   7. 실험 내내 생세포 영상을 위해 마이크로플루이딕 칩을 현미경 스테이지에 올려놓으세요.
      참고: 유입을 시작하기 전에 모든 튜빙 연결부가 안전하고 누수가 없는지 확인하세요.
4. 흐름이 안정된 후 고속 카메라(더블 프레임 모드 15Hz로 작동)를 작동시켜 흐르는 미세입자의 순차적인 이미지 쌍을 캡처합니다. 각 두 프레임 간의 정확한 시간 지연(Δt)을 80μs로 설정하세요.
5. 채널 내 관심 영역(ROI)을 위한 이미지를 캡처하세요. 진입과 출구에서 같은 거리에 위치한 직선 수로 구간 중앙(그림 2A)에서 ROI를 선택하여 최종 효과를 피하고 대표적인 유량 측정을 보장합니다.
6. 획득한 이미지 쌍을 PIV 분석 소프트웨어를 사용해 처리합니다. 적응형 다중 패스 교차상관 알고리즘을 사용하여, 초기 64 픽셀의 질의 영역을 시작해 최종 영역 16 ×× 16픽셀, 8 × 8 픽셀 격자 스텝 크기를 정제하여 두 프레임 사이 입자의 변위 벡터(Δx)를 결정합니다.
7. 각 심문 구역의 속도 벡터(v)를 v = Δx / Δt의 공식 사용으로 계산합니다.

5. 데이터 수집

참고: 칼세인-AM/프로피디움 요오다이드(PI) 키트와 생세포 산화 스트레스 형광 탐침을 사용하여 혈당 변동으로 인한 손상을 확인하고 공동 자극의 효과를 평가하기 위해 세포 생존 가능성과 기능을 정량화합니다.

1. 세포 생존 가능성
   1. 실험 종료 지점에서 제조사 지침에 따라 Calcein-AM/PI 작동 용액을 준비하세요.
      주의: PI는 알려진 돌연변이 유발 물질이자 DNA에 삽입되는 발암물질로 의심됩니다. 극도로 조심해서 다루세요. 지정된 안전한 작업 공간에서는 장갑과 손잡이를 착용하세요.
   2. 채널을 PBS로 한 번 헹구고 Calcein-AM/PI 작업 용액을 채널에 도입하세요. 장치를 37°C에서 5%_CO2 와 함께 어둠 속에서 30분간 인큐베이팅하세요.
   3. 10× 대물렌즈가 장착된 역형 형광 현미경을 사용해 염색된 세포의 형광 이미지를 즉시 포착합니다. 칼세인-AM에는 FITC(녹색) 필터를, PI에는 TRITC 또는 Rhodamine(빨간색) 필터를 사용하세요.
2. 세포 내 ROS 측정
   1. 제조사가 지정한 농도(5 μM) PBS에서 생세포 산화 스트레스 형광 프로브 (재료표 참조) 작업 용액을 준비합니다.
      주의: 형광 탐침과 그 일반적인 용매(예: DMSO)는 독성이 있을 수 있으며 피부를 통한 유해 물질 흡수를 촉진할 수 있습니다. 지정된 안전한 작업 공간에서는 장갑과 손잡이를 착용하세요.
   2. 채널을 PBS로 세 번 세척한 후 생세포 산화 스트레스 형광 탐침 용액을 채널에 주입합니다. 칩을 37°C에서 5% CO2에 넣어 어두운 곳에서 30분간 인큐베이팅하세요.
   3. 채널을 PBS로 세 번 세척하여 분리된 프로브를 제거하세요. 20× 대물렌즈를 통해 원적색 필터 세트(여기 640 nm, 방출 665 nm)를 사용해 즉시 형광 이미지를 포착하며, 모든 그룹에 대해 동일한 노출 파라미터를 유지합니다.
      참고: 형광 강도가 증가하면 ROS 수치가 높아집니다.

6. 데이터 분석

일시정지: 모든 원시 형광 이미지와 고속 카메라 이미지를 수집하여 하드 드라이브에 안전하게 저장하면, 이후 이미지 처리, 정량 분석 및 통계 비교를 일시정지하고 나중에 언제든지 수행할 수 있습니다.

1. 세포 생존 가능성을 정량화하기
   1. 획득한 칼세인-AM(녹색)과 PI(빨간색) 이미지를 ImageJ에서 열어보세요(재료표 참조). 각 채널의 임계값을 수동으로 조정하여 형광 신호와 배경을 구분하세요. 세포 카운터 함수를 사용해 형광 세포를 세고, 관찰된 세포 크기에 따라 최소 세포 크기를 조정하며, 여러 시야에서 살아있는 N개의 생존 세포와 죽은 세포(N개의_죽음) 세포 수를 세어보세요.
      참고: N_Live 는 칼세인-AM 양성(녹색) 세포의 수를 의미하며, N_Dead 는 PI 양성(빨간색) 세포의 수를 의미합니다.
   2. 스프레드시트 소프트웨어를 사용해 각 실험 조건별 생존 세포 비율(N_라이브 / (N_라이브 + N_사망) x 100% 비율을 계산합니다. 통계 분석 소프트웨어를 사용해 여러 시야의 평균 및 표준편차를 계산하여 그룹 간 비교를 합니다.
2. 세포 내 ROS를 정량화합니다
   1. ImageJ에서 선택한 드래그 이미지. 현미경의 메타데이터(또는 알려진 기준 격자)를 사용해 픽셀 크기를 보정하여 축척을 설정하세요: 분석 | 스케일을 설정하세요.
   2. 배경 뺄셈 함수를 사용하여 전체 이미지에서 비특이적인 균일한 배경 신호를 제거합니다: 과정 | 배경을 빼기.
   3. 임계값 슬라이더를 수동으로 세그먼트로 조정하고 세포 내 ROS 신호를 정의하세요: 이미지 | 조정 | 임계점. 임계값이 설정되면 Analyze | 측정값을 설정하여 면적과 평균 회색값을 선택하세요. 관찰된 셀 크기에 따라 최소 셀 크기를 설정하고, 셀 단층 ROI 내에서 분할된 신호의 평균 강도를 측정하세요: 분석 | 입자 분석.
   4. 각 실험 조건의 ROS 수준을 칩당 최소 세 개의 무작위 선택 시야에서 도출된 측정값(예: 평균 강도)의 평균으로 보고합니다.
3. 통계적 비교 수행
   1. 정량적 결과(생존 가능성 백분율과 ROS 평균 강도)를 데이터 분석 및 그래프 소프트웨어(재료 표 참조)에 입력하세요.
   2. 양방향 분산분석(ANOVA)을 사용한 후 Tukey의 사후 검정을 사용하여 실험군과 대조군을 비교하여 통계적 유의성을 결정하며, 유의수준은 p = 0.05입니다. 소프트웨어를 사용해 분석을 수행하고 표준편차(SD)를 나타내는 오차 바가 포함된 그래프를 생성하세요.

Results

마이크로-PIV 마이크로 유체 채널 내 유동장 검증
그림 1D 는 결합된 대사 및 기계적 자극에 대한 내피 반응을 조사하는 데 사용되는 마이크로플루이딕 플랫폼의 개요를 제공합니다. 이 시스템은 직선 채널 PDMS 마이크로플루이딕 칩과 압력 구동 흐름 제어 모듈을 통합하여 OG 조건과 생리학적 PSS를 함께 적용할 수 있게 합니다. 프로그래밍 가능한 밸브 전환 전략을 사용하여 NG와 HG 매체 간 주기적 교대를 생성하고, 펄서틸 유동 파형은 컴퓨터 제어 압력 조절을 통해 동기화되었습니다.

마이크로플루이딕 시스템의 혈역학적 충실도를 검증하기 위해 마이크로채널 내 흐름 특성을 Micro-PIV를 이용해 정량적으로 분석하였습니다. 이 ROI 내에서 측정된 실제 유량은 프로그래밍된 입력 파형과 밀접하게 일치하는 안정적이고 반복 가능한 진동...

Discussion

여기서 설명하는 마이크로유체 시스템은 OG와 PSS가 내피 세포 기능에 미치는 통합적 효과를 조사할 수 있는 견고하고 생리학적으로 적합한 플랫폼을 제공합니다. 이 방법의 주요 장점은 정의된 미세 환경 내에서 기계적 및 생화학적 자극을 정밀하게 제어하고 분리할 수 있다는 점에 있습니다. 혈역학적 힘이 없는 기존 정적 배양이나 세포 수준^{신호전달을} 종종 가리는 동물 모델과 ^{달리, 이} 프로토콜은 흐름 패턴과 포도당 농도 프로파일을 독립적으로 조절할 수 있게 합니다^20,21. 대사 장애와 혈역학적 힘 간의 역동적 상호작용을 재현함으로써, 이 시스템...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.25% Trypsin-EDTA	NEST Biotechnology Co., Ltd.	211052	세포 분리
1 mL 주사기	Shanghai Zhengbang Medical Science Co., Ltd.	1mL	유체 주입
60 mm 배양 접시	NEST Biotechnology Co., Ltd.	705001	세포 배양
90° 각도 스테인리스 강 커넥터	Luoyang Mayer Trading Co.,Ltd.	1.3 mm	어댑터 밀봉 장치
AutoCAD 소프트웨어	Autodesk	RRID:SCR_014981	컴퓨터 지원 설계 소프트웨어
붕소화 유리 병	Hunan Aidete Scientific Instruments Co., Ltd.	Double-pass 100mL	저장소
Calcein-AM/PI Kit	Beyotime	byt-c2015	염색
세포 배양기	ESCO	Esco CelMate	세포 배양
CellROX Deep Red	Invitrogen	C10422	염색
D-glucose	Sigma Aldrich	47249	포도당
D-mannitol	Macklin	M813423	삼투압 균형
DynamicStudio	Dantec Dynamics	V8.6	PIV 분석 소프트웨어
태아 우 혈청 (FBS)	Gibco	14190-094	배지
Fibronectin	Sigma Aldrich	F-2006	세포 접착
형광 마이크로 입자	Thermo Scientific	G0100	마이크로 PIV
유리 커버슬립	Citotest Scientific Co.,Ltd.	#1	마이크로 유체 칩
고당 DMEM	Solarbio	12100	배지
고속 카메라	Dantec Dynamics	FlowSense EO	마이크로 PIV
ImageJ	NIH	RRID:SCR_003070	이미지 처리 소프트웨어
거꾸로 된 형광 현미경	Olympus	IX73	세포 생존율
거꾸로 된 형광 현미경	Olympus	IX83	관찰 및 획득
저당 DMEM	Solarbio	31600	배지
Origin	OriginLab	RRID:SCR_014212	데이터 분석 및 그래핑 소프트웨어
PDMS	Dow lnc.	184	마이크로 유체 칩
페니실린/스트렙토마이신 (P/S)	NEST Biotechnology Co., Ltd.	211092	배지
인산염 완충액 생리식염수 (PBS)	NEST Biotechnology Co., Ltd.	211031	세포 배양
플라즈마 청소기	Jiarun Wanfeng Technology Co., Ltd.	PC-6D	마이크로 유체 칩
프로그래머블 압력 제어 시스템	Elvesys	OB1 MK4	흐름 제어
실리콘 튜브	Nanjing Runze Fluid Control Equipment Co., Ltd.	96410	1mm*3mm
SU-8 마스터 몰드	Boao Biology Group Co. Ltd.	N/A	마이크로 유체 칩
밸브 컨트롤러	Elvesys	MUX Wire V3	흐름 제어