방법 논문

쥐의 장방광성형술을 위한 표준화 회장방광 확대술(중간선 복강술)

DOI:

10.3791/71123

⸱

2026년 6월 12일

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Urology and Urosurgery, University Medical Center Mannheim, Medical Faculty of the University of Heidelberg, 2Department of General, Visceral, and Transplantation Surgery, Heidelberg University Hospital, 3Division of Intelligent Systems and Robotics in Urology (ISRU), German Cancer Research Center (DKFZ) Heidelberg, 4DKFZ Hector Cancer Institute at the University Medical Center Mannheim, 5Department of Urology, University Hospital Leipzig, 6Department of Plastic Surgery and Hand Surgery, TUM University Hospital Munich, 7ORSI Academy, Innotech

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 프로토콜은 페디클이 있고 혈관이 형성되며 회관화된 회장 패치와 캐뉼라 튜브를 통해 일시적으로 외부 배출된 요로 전환을 통해 재현 가능한 방광 증강을 달성하는 표준화된 쥐 장방막성형술 모델을 설명합니다.

초록

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장 마디를 이용한 방광 증강은 보존적 치료가 실패했을 때 용량이 낮거나 순응이 약한 방광 환자들에게 여전히 핵심 재건 수술로 남아 있습니다. 임상적 관련성에도 불구하고, 통제된 전임상 환경에서 수술 원리를 신뢰성 있게 모델링하는 표준화되고 재현 가능한 프로토콜의 부재로 인해 실험적 진전과 심층 연구가 제한됩니다. 여기서는 혈관화되고 탈관화된 회장 패치를 피판으로 사용하여 자연 방광을 보강하는 단계별 쥐 장방막 성형술 프로토콜을 소개합니다. 시술에는 정중선 복강 절개술, 통제된 노출, 봉합사를 통한 방광 안정화, 외부 캐뉼라 튜브 폴리를 통한 요로 전환, 짧은 장간막 단절과 온전한 장간막 페디클 분리, 탈부화, 그리고 방광벽과의 긴장 없는 문합이 포함됩니다. 장간막 관류 유지, 박근 비틀림 방지, 수밀성 봉합 보장, 카테터 개성 확보에 중점을 두어 시술 성공과 재현성에 매우 중요합니다. 생존이 없는 8마리의 쥐를 대상으로 고분광 영상(HSI)을 사용한 대표적인 수술 중 검증 결과, 주요 수술 단계 후 조직 산소 공급과 장 구간의 관류가 보존되어 이 절차 종료 시점의 조직 생존성을 지지하였습니다. 따라서 이 프로토콜은 쥐 장방막성형술의 재현 가능한 외과적 시행을 위한 표준화된 실험적 접근법을 제공합니다. 모델의 잠재적 후속 응용으로는 대사 및 전해질 변화, 감염 감수성, 점액 생성, 형성 이상증 또는 악성 종양의 유도 등이 있으며, 이는 향후 생존 연구에서 다뤄져야 할 연구입니다.

서론

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생리적 방광 기능은 높은 삶의 질 유지에 필수적이며, 효과적인 소변 저장과 배뇨는 요실금, 사회적 웰빙, 전반적인 건강에 매우 중요합니다. 방광 기능에 영향을 미치는 질환은 요실금, 반복 감염, 신장 기능 저하, 일상생활에 심각한 부정적 영향을 미치는 등 상당한 이환율을 초래할 수 있습니다.

선천성 및 후천성 방광 병리는 심각한 기능 장애를 초래할 수 있으며, 보존적 및 약물적 치료가 불충분할 경우 수술적 개입이 필요할 수 있습니다. 후방 요도 판막1, 방광 및 배설문 외위증, 2,3 상위와 같은 선천적 이상은 종종 용량이 낮고 순응력이 떨어지는 방광과 연관되어 상부 요로 악화 위험을 증가시킵니다. 마찬가지로, 골수이형성증4, 다발성 경화증5, 척수 손상6 등 신경학적 질환은 신경성 방광 기능 장애를 초래하여 저장 및 배출 메커니즘을 모두 저해합니다. 또한 결핵7형, 주혈흡충증8형과 같은 감염성 병인은 방광벽 섬유증을 유도하여 복종도를 감소시키고 2차 합병증에 취약하게 만듭니다. 난치성 환자에서는 방광 증강이 저장 용량을 개선하고 방광 내 압력을 낮추며 신장 기능을 보존하는 효과적인 전략으로 작용하여 궁극적으로 삶의 질을 높이고 장기적인 합병증을 완화합니다.

미국 비뇨기과학회(AUA)의 과활성 방광 가이드라인에 따르면, 방광 증대(장낭막성형술)는 방광 용량 감소, 순응 부족, 보존적 관리에 저항하는 중독근 과활성 환자에게 권장됩니다9. 1888년 Tizzoni와 Foggi가 개 모델10을 사용해 처음 기술했으며, 이후 1899년 von Mikulicz에 의해 인간 적용에 맞게 개조된 장낭막성형술은 신경성 방광, 방광 외위증, 후방요도 판막 등 다양한 방광 기능 장애와 관련된 신장 손상 및 요실금 위험을 완화하는 표준 외과적 접근법으로 남아 있다. 13살.

기존 장낭막성형술 기법은 방광을 관상면 또는 시상면에서 삼각면까지 이중화한 후, 탈관화된 장12 구간을 삽입하는 방식을 포함합니다. 회장은 가장 자주 사용되는 장 구간으로, 일반적으로 회장판막12에서 25-40cm 떨어진 곳에서 채취됩니다. 회장이 적합하지 않을 때는 S결장이 선호되는 대체 부위로 사용됩니다.

이 시술은 장기적인 내구성과 높은 환자 만족도를 제공하지만(14), 위장 조직이 요로로 도입되면 대사 장애, 방광 결석 형성, 악성 위험 증가 등 주목할 만한 단점이 있습니다(15,16,17).

이러한 잠재적 합병증을 고려할 때, 근본 기전을 탐구하고 수술 기법을 개선하며 대체 보강 재료를 평가하기 위한 통제된 연구가 매우 필요합니다. 설치류 모델은 이러한 측면을 조사할 수 있는 구조화되고 재현 가능한 환경을 제공하여 연구자들이 증강 후 산염기 균형과 전해질 교란 등 대사 적응을 분석할 수 있게 합니다. 더 나아가, 방광 조직의 시간에 따른 재형성을 관찰할 수 있어 섬유증, 요로피 재생, 확대된 마디의 통합에 대한 통찰을 제공합니다. 또한, 장방막성형술과 관련된 악성 위험이 증가하는 점을 고려할 때, 설치류 모델은 시간에 따른 조직병리학적 변화를 연구하고 발암의 초기 지표를 식별할 기회를 제공합니다. 중요한 점은, 이러한 모델은 생체재료 및 조직공학 응용 연구를 촉진하여, 발암성 및 면역성 위험이 낮은 대체 보강 재료의 길을 열 잠재력을 제공한다는 것입니다.

설치류 및 기타 종에서 실험적 방광 증강 모델이 보고되었으나, 쥐의 정중 개강 절개술을 통한 장장낭막성형술에 대한 직접적으로 비교할 수 있는 표준화된 단계별 프로토콜은 부족합니다. 초기 쥐 연구들은 고전적 증강 방광성형술을 실험 모델로 확립했으며, 혈청근 및 레이저 보조 장낭막성형술과 같은 변종을 기술했습니다18, 19, 20. 이후 연구에서는 장기적인 조직병리학적 및 세균학적 변화, 종양 발생, 수송 생리학, 기능적 결과에 대해 다루었으며, 부분 방광 이식 및 장점막의 요로피로 광역학 교체와 같은 추가 재건 수정도 탐구 되었습니다 21,22,23,24,25,26,27 . 종합해 보면, 쥐 증강 모델이 존재하지만 범위가 다양하며 주로 실현 가능성, 생물학적 후유증, 생리학 또는 특정 재건 변형에 초점을 맞추고 있음을 보여준다 18,19,20,21,22,23,24,25,26,27. 따라서 본 연구의 목적은 쥐에서 정중 선 복강술을 통한 표준화된 장낭막성형술을 수행하는 상세한 절차 가이드를 제시하는 것입니다. 이 프로토콜은 생존 환경이 아닌 환경에서 확립되었습니다. 장기 관찰이 필요한 적용은 가능하지만, 수술 후 회복과 종단적 추적 관찰이 포함된 생존 연구 환경에 적응해야 할 수도 있습니다. 여기에는 기능적 결과 평가, 수술 후 실패 기전, 시간에 따른 조직 재생, 조직 공학 통합 등이 포함될 수 있습니다.

본 모델은 통제된 쥐 환경에서 임상 장낭막성형술의 핵심 기술 원리를 재현하면서도 표준화된 실험 구현에도 적합하도록 설계되었습니다. 탈관화 회장 패치가 선택된 이유는 탈관화가 장의 내재 수축력을 감소시키고 임상 증강술에서 흔히 사용되는 재건 원리를 더 잘 반영하기 때문입니다. 페디클이 있는 혈관 분절의 사용은 장간막 관류를 보존하고 이식 준비 중과 이후 조직 생존 가능성을 직접 평가할 수 있게 합니다. 캐뉼라 튜브를 통한 외부 요로 전환 시술을 도입하여 시술 중 방광의 조절된 배액을 제공하고 재건된 구간의 표준화된 수술 중 평가를 용이하게 했습니다.

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프로토콜

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이 문서에 명시된 모든 동물 시술은 공인 시설 내에서 수행되었으며, 독일 카를스루에에 위치한 바덴뷔르템베르크 지역 의회 기관 동물 관리 및 이용 위원회(IACUC)의 승인을 받았습니다(35-9185.81/G-62/23). 실험동물은 기관 프로토콜에 따라 취급되었으며, 독일의 동물 복지 관련 법률을 준수했으며, 유럽 공동체 이사회(2010/63/EU)와 ARRIVE 지침이 제시한 지침을 준수하였습니다. Janvier Labs에서 채취한 8주에서 12주 사이의 수컷 Sprague-Dawley 쥐(n = 8)를 사용했으며, 이 쥐는 1주일간의 적응 기간 후에 사용되었습니다.

1. 마취 및 진통

  1. 동물을 유도 챔버에 넣고 100% 산소에 희석된 4vol% 이소플루란을 5L/min의 유량으로 사용하여 마취를 유도합니다.
  2. 해리성 마취, 진통, 진정 시에는 피하 주사로 100 mg/kg(10% 용액; 체중 400g에 0.35 mL에 해당)과 4 mg/kg 자일라진(2% 용액 1:10 희석; 400g에 0.75 mL)을 피하 주사로 투여합니다. 모든 마취제 및 진통제는 체중 단위로 mg/kg 단위로 투여합니다.
    참고: 주사 용량은 체중 400g 쥐의 대략적인 예시이며, 각 동물별로 개별적으로 계산해야 합니다.
  3. 겸자를 사용해 발가락 꼬집음 반응이 없으면 진통 깊이를 확인하고 각막 연고를 발라서 각막 건조를 방지합니다.
  4. 5 mg/kg 카프로펜 피하 주사(5% 용액 1:10 희석; 400 g 당 0.35 mL)를 통해 추가 진통을 달성합니다.
  5. 수술 내내 신생아 마스크를 착용해 보충 이소플루란으로 기면을 유지하세요.
  6. 수술 중 체온 관리를 위해 동물을 40°C로 설정된 온열 패드에 올려놓습니다. 추가로 직장 온도 탐침을 대는 것이 필수는 아닙니다.
  7. 수술 전후 및 수술 후 수분 지원을 위해 37°C 등장성 식염수 용액 25 mL/시간(400g당 10 mL)를 피하 주입하여 20분마다 주사로 나누어 투여합니다. 복부 폐쇄 후 최종 주사를 포함해야 하며, 예상 남은 마취 기간은 보통 30분입니다.

2. 수술 부위 및 기기 준비

  1. 다음 도구를 포함한 도구와 재료로 스크럽 테이블을 준비하세요:
    외상 준비 겸자
    둔한 오버홀트 클램프
    준비 가위
    이중 암 비흡수성 단필라멘트 6-0 봉합사
    단일 팔 고속 흡수성 폴리필라멘트 4-0 봉합사
    즉석 폴리 카테터로서의 20게이지 카테터
    가습 면솜 면봉
    거즈 면봉
    등장성 염화나트륨 용액
  2. 이전 논문에서 설명한 대로 설치류 수술용 노출 장치에 동물을 장착하세요30,31. 복부 접근 부위를 면도하고 70% 에탄올과 포비돈-요오드 또는 클로르헥시딘 기반 소독 면봉을 번갈아 사용해 절개 부위에서 바깥쪽으로 동심원 모양으로 3회 세척하여 소독합니다. 세 번 반복하세요.
  3. 동물을 멸균 커튼으로 덮고, 수술 부위만 노출시키세요.

3. 정중 복강 수술을 통한 접근법

  1. 가위를 사용해 약 5cm 중앙 복부 복강 절개술을 시행하고, 복막강에 접근하기 위해 중앙선을 세로 절개합니다.
  2. 준비용 갈고리와 촉촉한 찜질을 사용해 복벽을 당기고 복강을 노출하세요.

4. 소장 및 요광의 식별 및 준비 (그림 1)

  1. 소장을 확인하고 무외상 준비 겸자와 가습 면봉을 사용해 루프를 부드럽게 움직이세요(그림 1A.1).
  2. 소장 루프와 방광을 대략적으로 비교해 적절한 위치를 식별하세요
  3. 증강 시 약 12mm 길이의 소장 구간(그림 1A.2). 이것은 회두정합부에서 최소 2cm 가까운 최초의 기계적 적합한 장루프여야 합니다.
  4. 준비 가위를 사용해 주변 결합 조직을 해부하여 방광을 움직이게 합니다(그림 1B).
  5. 방광벽의 3, 6, 9, 12시 방향에 단일 암 비흡수성 단섬유 4-0 봉합사를 사용하여 고정 봉합사를 설치합니다(그림 1C.1–1C.5).
  6. 무외상 겸자로 방광 돔을 잡고 해부 가위를 사용해 스테이 봉합선 사이에 약 4mm 길이의 횡방향 결손을 만듭니다(그림 1D.1–1D.2).
  7. 4개의 스테이 봉합사를 절단 가장자리에 포함시키기 위해 교체하세요: 각 봉합사를 순차적으로 당겨 넣으세요. 한 번에 한 개의 봉합사를 하나씩 바늘을 절개 가장자리 주위로 유도하고, 하내막 쪽에서 가장자리 바로 한 입을 물고, 인접한 혈청근층을 통해 나와 고리를 고리로 넣고 마지막을 노출시킵니다(그림 1E.1–1E.6).

5. 외부 요로 전환을 위한 캐뉼라 튜브 폴리의 삽입 및 고정 (그림 1)

  1. 정맥 주사 캐뉼라(G20)를 방광 내강을 통해 삽입하고, 내강 측에서 복벽을 지나 외부로 이동시킵니다(그림 1F.1–1F.3).
  2. 금속 캐뉼라를 튜브에서 제거하고, 임시 폴리 카테터로 핀셋으로 카뉼라를 안정화합니다(그림 1F.4–1F.5).
  3. 캐뉼라 튜브 폴리를 피부에 고정하려면 비흡수성 모노필라멘트 4-0 봉합선을 튜브 내강에 통과시키고, 외부 개구부에서 충분한 안전 여유를 두고 고정하여 이후 이탈 위험을 최소화합니다(그림 1G.1–1G.6).
  4. 캐뉼라관 폴리를 생리식염수로 세척하여 개폐성을 확인하며, 두 번째 정맥 주사 캐뉼라의 튜브를 초기 캐뉼라보다 한 치수 더 큰(예: G18) 사용한다(그림 1G.1–1G.9).
  5. 캐뉼라관을 빠르게 흡수성 4-0 폴리필라멘트 봉합을 사용하여 방광벽에 포레이를 봉합하며, 캐뉼라 튜브 허브와의 안전 마진을 유지하여 우발적 이탈 위험을 줄입니다(그림 1H.1–1H.4).
  6. 겸자로 캐뉼라 튜브 허브를 잡고 가위로 튜브에서 분리합니다(그림 1H.5–1H.7).
  7. 캐뉼라 튜브 폴리를 방광에 삽입합니다(그림 1H.8–1H.9).

그림 1
그림 1: 소변 및 방광 외부 전환 캐뉼라 관 삽입 및 소장 및 방광 준비 과정. (A) 소장 및 방광의 식별 및 근사(A.1–A.2). (B) 복막 박리를 통한 방광 동원 (B.1–B.4). (C) 방광 돔에 스테이 봉합사를 배치하는 (C.1–C.5). (D) 방광벽 박리(방광 절개술) (D.1–D.2). (E) 스테이 봉합선 교체 (E.1–E.6). (F) 방광 절개술을 통한 외부 요로 전환을 위한 캐뉼라 삽입 (F.1–F.5). (G) 복벽에 외부 캐뉼라 관 구간을 고정하는 (G.1–G.9). (H) 캐뉼라 튜브 끝(H.1–H.9)의 고정 및 최종 방광 삽입. (I) 포레이로 설명된 준비 및 캐뉼라 튜브 배치를 요약한 도식 설명. 굵은 점선은 소장을 나타냅니다. 가느다란 점선은 방광을 나타냅니다. 검은 사각형은 다음 사진에서 확대된 이미지 단면을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

6. 소장 구간 분리 (그림 2)

  1. 소장 루프를 멸균 거즈 면봉에 대고, 방광 쪽으로 이동성을 평가한 후 약 12mm 길이의 적절한 구간을 선택한다(그림 2A.1–2A.4).
  2. 선택한 장 구간을 남은 장에서 절단하면서 장간막 혈류를 보존하고, 혈관 피듬의 뒤틀림을 방지하기 위해 올바른 방향을 유지합니다(그림 2B.1–1B.4).
  3. 면봉을 사용해 양쪽 장단 절단된 잔여 내강 내용물을 부드럽게 발현합니다(그림 2C.1–2C.6).
  4. 소장 루프의 인접한 두 가지 팔다리를 위쪽으로 반사하여 선택된 구간만 거즈 면봉에 남게 합니다(그림 2D–2E).

그림 2
그림 2: 방광 증대를 위한 소장 구간 식별 및 분리. (A) 방광 증강을 위한 적합한 소장 구간 동원 및 식별 (A.1–A.4). (B) 남은 장 루프(B.1–B.4)에서 선택된 소장 구간을 절단. (C) 잔류 루미날 내용물의 배출 (C.1–C.4). (D) 남은 소장 루프의 구강 및 복부 끝의 분리 및 위치 조정. (E) 이후 증강을 위해 준비한 분리된 소장 구간. (F) 구간 선택 및 격리를 요약한 도식 일러스트. 굵은 점선은 고립된 소장 구간을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

7. 장 구간 및 방광 증강 준비 (그림 3)

  1. 가위로 장장부를 무장관 경계를 따라 분리된 장부를 열어 약 12 mm × 8 mm 크기의 이관화된 부위를 만듭니다(그림 3A.1–3A.3).
  2. 새로 형성된 이식편의 모서리 가장자리를 절제합니다(그림 3B.1–3B.3).
  3. 양팔 6-0 단섬유 봉합을 이용해 소장 구간 문합술을 진행합니다. 12시 방향에서 바늘을 방광벽을 통해 외광 쪽에서 내광 쪽으로 통과시킵니다(그림 3C.1–3C.2).
  4. 바늘을 소장 구간 오른쪽 아래 구석을 통해 내광부에서 외관측으로 통과시킵니다. 이중 암 봉합사가 대략 중앙점까지 당겨지도록 해야 하며, 이것이 상위 고정점을 정의합니다(그림 3C.3–3C.4).
  5. 봉합사를 조여 장 이식편이 방광에 닿는 위치에 근접하게 하면, 해당 구간이 약 45° 반시계 방향으로 회전하게 됩니다. 외하강면(그림 3D.1–3D.2)에서 매듭을 묶고, 두 번째 바늘을 장 마디의 장간막을 감싸 양쪽에서 이식편을 원형 봉합할 수 있게 합니다(그림 3E.1).
  6. 방광 증강 패치의 원형 문합 시작: 방광 가장자리에서 바깥쪽에서 안쪽으로 물어서 장부를 순차적으로 결손에 봉합하고, 그 후 장 구간을 안에서 바깥으로 교합한 후 다음 봉합을 진행합니다.
  7. 스테이 봉합선을 순차적으로 풀어줍니다(그림 3E.1–3E.15). 작은 장 부위에는 방광보다 약간 더 큰 바이트를 사용하세요; 하지만 패치에는 덮어야 할 길이가 상당히 더 길어져, 봉합하지 않은 과도한 소장 길이가 남도록 의도되어 있습니다.
  8. 방광 결손의 원형 봉합을 마친 후, 한쪽 봉합 끝을 묶습니다. 남은 봉합사를 사용해 장 구간의 잔여 자유 부분을 원뿔형("뾰족한 캡 모양")으로 봉합하고 봉합선을 묶습니다(그림 3F.1–3F.6).
  9. 방광을 해부학적 위치로 되돌리고 장을 재배치하여 장이 꼬이지 않도록 합니다(그림 3G.1–3G.2).

그림 3
그림 3: 소장 부위 및 원형 방광 증강 문합 구조. (A) 소장 구간 해리 및 준비(이식편 준비) (A.1–A.3). (B) 이식편의 모서리 가장자리 절제(B.1–B.3). (C) 접합과 방광 입구 사이에 고정 봉합을 삽입하여 문합 시작(C.1–C.4). (D) 고정점 고정하여 이식편과 방낭절개 경계를 정렬하는 것(D.1–D.2). (E) 방광벽에 대한 방광 증강 패치의 원위 문합 (E.1–E.15). (F) 남은 소장 조직이 원뿔형 뾰족한 캡 형태로 닫히는 경우(F.1–F.6). (G) 장기를 해부학적 위치로 재배치하는 (G.1–G.2). (H) 이식편 준비 및 방광 증강 문합을 요약한 도식 일러스트. 굵은 점선은 소장 구간을 나타냅니다. 가느다란 점선은 방광벽의 입구를 나타냅니다. 흰색 화살표는 바늘을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

8. 종단 간 소장 문합 (그림 4)

  1. 문합은 반으로 잘라낸 이중 암 비흡수성 단섬유 6-0 봉합사를 사용하세요. 바늘을 장 양쪽 끝의 장장부(antimeextic border)를 통과시킵니다. 아직 매듭을 조이지 말고, 장 끝 사이의 봉합 구간에 클램프를 끼워 시야를 유지하는 낙하산 기법을 사용하세요(그림 4A.3–4A.6).
  2. 장 양쪽 끝의 장간막 경계에 봉합선을 삽입하고 유사한 방식으로 클램프로 고정합니다(그림 4A.7–4A.10).
  3. 소장 양쪽 끝 앞벽에 두 개의 봉합사를 삽입하여 이후 봉합을 용이하게 하고, 봉합 끝은 클램프로 고정합니다(그림 4B.1–4B.4).
  4. 장 양쪽 끝을 위로 반사하여 후방 소장벽을 노출시킵니다. 전벽과 유사하게, 후벽에 두 개의 봉합사를 삽입하고 봉합 끝을 클램프로 고정합니다(그림 4C.1–4C.4).
  5. 모든 봉합사가 설치되면, 6개의 봉합사를 순서대로 묶으세요(그림 4D.1–4D.6).
  6. 장간막 결손부위는 2–3개의 중단된 빠른 흡수성 다섬유 4-0 봉합사로 봉합하여 후속 탈출을 방지합니다(그림 4F.1–4F.8).

그림 4
그림 4: 종단 간 소장 문합 및 장간막 결손 봉합. (A) 장막 및 장간막 경계에 정렬 봉합사의 배치 (A.1–A.10). (B) 두 개의 전벽 근사 봉합사 배치(B.1–B.4). (C) 후벽 노출 및 두 개의 후벽 근사 봉합사 삽입(C.1–C.4). (D) 문합을 완성하기 위해 여섯 개의 모든 봉합사를 순차적으로 묶는 것(D.1–D.6). (E) 종단 간 문합 확대 (E.1–E.2). (F) 내부 탈출증을 방지하기 위해 봉합을 중단하여 장간막 결손을 봉합하는 것(F.1–F.8). (G) 끝에서 끝까지 소장 문합의 도식. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

9. 최종 단계와 고려사항

  1. 이전에 발표된 프로토콜29, 30, 31에 따라 멸균 조건에서 복벽을 다층 방식으로 닫아야 합니다.
  2. 생존이 불가능한 시술이나 추적 관찰 후 예정된 종료의 경우, 심마취 상태에서 동물을 급격한 심장절제술, 경추 탈구, 단두대 절단술로 안락사시킵니다.
  3. 필요 시 방광을 절제하여 이후 해부학적 평가(예: 방광 확대 부위 및 장-방광 문합 평가), 생체분자 분석 또는 조직병리학적 영상 검사를 수행합니다.
  4. 이를 위해 증강된 방광을 직접 시각 관찰 하에 단계별로 조심스럽게 해리하고, 주변 유착을 부드럽게 제거하며, 자연 방광, 증강된 장 패치, 문합 경계를 확인한 후, 필요에 따라 원위 방광 출구와 인접한 장간막 또는 장 부착부의 절단을 진행하며, 조직 구조를 보존하여 이후 분석을 위해 표본의 압박이나 변형을 피합니다.

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결과

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이 프로토콜 후 조직 생존 가능성을 확인하기 위해 8마리의 쥐에서 조직 산소 공급과 관류를 평가하였습니다(표 1). 장낭막성형술 이전에 조직 산소포화도(StO₂)와 관류(NIR)를 시각화하기 위해 소장의 고분광 영상(HSI)이 수행되었습니다(그림 5A.1). 음성 대조군으로서 대동맥 클램프를 통해 최대 저관류가 유도되었습니다(그림 5A.2). 대표 조직 영역의 HSI는 지속 관류 평가를 위한 주요 수술 단계 후에 반복되었습니다(그림 5B.1–5B.4).

이 시각적 정량 분석은 복부 접근 후 소장의 생리학적 조직 산소 공급과 관류를 입증했습니다(그림 5C.1

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토론

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이 연구는 정중 복강절개술, 체외 캐논리, 이관화된 회장 절개 삽입을 이용한 쥐 장방막성형술에 대한 재현 가능한 외과적 프로토콜을 제공합니다. 이 기술은 Tizzoni와 Foggi가 방광 증강에 대해 설명한 원리를 따르며, 정밀한 마취, 무균 준비, 소변 우회를 위한 외부 캐논리, 혈관 형성된 소장 패치 채취를 결합하여 설치류 모델에 맞게 적용합니다.

이 프로토콜은 생존 비생존 환경에서 수행되고 검증되었습니다. 그럼에도 불구하고, 연구자들이 종단 관찰을 위한 생존 환경에 적응할 수 있도록 방광 증강을 위한 중개 플랫폼을 구축했습니다. 장기적인 기능 결과 조사는 앞으로도 연구의 주제로 남아 있습니다.

여러 수정을 통해 이 프로토콜의 유용성을 넓힐 수 있습니다. 현재 프로토콜은 말기 환경에 한정되어 있지만, 향후 생존 연구의 기술적 기초가 될 수 있습니다. 이러한 적응은 표...

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공개 사항

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이해 상충은 선언되지 않았습니다.

감사의 글

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저자들은 바덴뷔르템베르크 과학연구예술부(MWK)와 독일연구재단(DFG)이 INST 35/1314-1 FUGG 및 INST 35/1503-1 FUGG를 통해 지원SDS@hd한 데이터 저장 서비스에 감사드립니다. 더불어, 저자들은 독일 하이델베르크 국립종양질환센터(NCT)의 체계적인 박사후 연구원 프로그램과 외과 종양학 프로그램을 통해 지원해 주신 데 깊이 감사드립니다. 또한 바덴뷔르템베르크 주 의회가 승인한 혁신 캠퍼스 헬스 + 라이프 사이언스 얼라이언스 하이델베르크 만하임에 대한 국가 자금 지원을 인정합니다. 이 프로그램은 알렉산더 스터디에-피셔의 구조화된 박사후 프로그램인 DKFZ, EMBL, 하이델베르크 대학교, 하이델베르크 대학교 병원, 만하임 대학교 병원, 중앙 정신 건강 연구소가 협력하여 진행됩니다. 막스 플랑크 의학 연구소 등이 있습니다. 더 나아가, 만하임 대학교 의료센터 내 DKFZ 헥터 암 연구소의 지원에 감사드립니다.

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재료

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이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
비외상성 준비 포스셉스AesculapFB395RDE BAKEY ATRAUMATA 비외상성 포스셉스, 직선
블런트 오버홀트 클램프AesculapBJ012RBABY-MIXTER 준비 및 결찰 클램프, 굽은, 180 mm
칸누라 튜브 폴리를 위한 플러싱 및 전환Mdk Mart23-CA-CD-UL-CD칸누라 G18 (디버전 칸누라를 플러시하는 데 튜브만 사용됨)
카프로펜cp pharma115카프로펜 0.5% (5% 및 50 mg/mL 1:10 희석) (Carprosol)
면화 면봉AmazonASIN: B0FPDB8ZGS비멸균 면화 면봉 (생존 실험을 위한 오토클레이브)
빠르게 흡수되는 폴리필라멘트 4-0 봉합사COVIDIENSV-4941개의 P-13 바늘이 있는 흡수성 폴리글락틴으로 된 단일 팔 폴리필라멘트 외과용 봉합사
고정 막대legefirm‎500343896Y자형 금속 고정 막대로 사용되는 튜닝 포크
폴리 카테터B. Braun4242010-0220 게이지 50 mm Introcan Safety 2 카테터를 디버전 칸누라로 사용
거즈 면봉MedrullASIN: B09164D1JG멸균 거즈 면봉
가열 패드Royal GardineerIP67Royal Gardineer 가열 패드 크기 S, 20 와트
하이퍼 스펙트럴 이미지 카메라 시스템Diaspective VisionTIVITA Tissue Halogen검증을 위한 HSI 시스템
아이소플루란Piramal Critical CarePZN / EAN 09714675 / 4150097146757100% 아이소플루란 250 mL
아이소플루란 기화기UNO ROESTVASTSTAAL BV180000002아이소플루란 기화기
등삼투성 나트륨 염화물 용액B. BraunASIN: B007PZJOQ40.9% 나트륨 염화물 용액
케타민cp pharma1202케타민 10% (100 mg/mL)
금속 칸누라BD (Beckton, Dickinson)30130020 게이지 준비 후크로 사용되는 BD Microlance 3 칸누라
신생아 안면 마스크asia connectionME03016-0신생아를 위한 신생아 안면 마스크 사이즈 #0
비흡수성 모노필라멘트 4-0 봉합사COVIDIENSP-6701개의 C-16 바늘이 있는 비흡수성 폴리-프로필렌으로 된 단일 팔 모노필라멘트 외과용 봉합사
비흡수성 모노필라멘트 6-0 봉합사COVIDIENVP-733-X2개의 CV-22 바늘이 있는 비흡수성 폴리-프로필렌으로 된 이중 팔 모노필라멘트 외과용 봉합사
안과용 연고Bayer Vital GmbH15786815% 덱스판테놀
플라스틱 퍼퓨저 튜브M. Schilling GmbHS702NC150COEX 연결 튜브 150 cm
준비 가위AesculapBC177RJAMESON 준비 가위, 굽은, 세밀한 모델, 둔한/둔한, 150 mm (6인치)
쥐 유도 챔버wpiincEZ-1785마취 유도 챔버
강철 플레이트Maschinenbau Feld GmbHC010206아연 도금 판재, 40 x 50 cm, 두께 4.0 mm
자일라진cp pharma1206자일라진 0.2% (2% 및 20 mg/mL 1:10 희석) (Xylavet)
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재인쇄 및 허가

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