방법 논문

NOD 마우스에서 인돌 생성 감쇠 브 루셀라 단일 정맥 주사: 제1형 당뇨병 발병 및 섬 면역 재형성 평가

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DOI:

10.3791/71193

⸱

2026년 5월 26일

 ,  ,  , 
1Department of Microbial Pathogenesis and Immunology, Texas A'M University Health Science Center, 2Department of Veterinary Pathobiology, College of Veterinary Medicine ' Biomedical Sciences, Texas A'M University, 3Bond Life Sciences Center, The University of Missouri

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 인돌을 생성하는 약화된 브루셀라 멜리텐시스 균주를 NOD/ShiLtJ 마우스에 정맥 주사로 투여한 후, 종단 당뇨병 모니터링, 췌장 조직학, 선택적 고플렉스 공간 단백질체학 및 단세포 RNA 시퀀싱을 통해 섬 면역 재프로그래밍을 평가하는 방법을 설명합니다.

초록

제1형 당뇨병(T1D)은 췌장 β세포의 자가면역 파괴로 인해 발생하며, 현재의 치료법은 지속적인 면역 내성을 회복하지 못하고 있습니다. 면역조절 대사산물을 생성하는 대사공학 박테리아는 유망한 단일 투여 치료 전략을 나타냅니다. 본 논문은 인돌을 생성하는 감쇠된 브루셀라 멜리텐시스 균주 BmΔvjbR::tnaA를 단일 정맥 주사로 사용하여 당뇨병 전단계 암컷 NOD/ShiLtJ 마우스에서 자가면역 당뇨병 발병에 미치는 영향을 평가하는 포괄적인 프로토콜을 제시합니다.

프로토콜은 냉동 글리세롤 스톡에서 BmΔvjbR::tnaA를 준비하고, 선택적 배지에서 중간 로그 단계까지 배양하며, 광학 밀도를 기반으로 집락 형성 단위를 계산하는 것으로 시작됩니다. <주 된 암컷 NOD 마우스는 마취 없이 구속된 상태에서 측측 꼬리정맥을 통해 정맥 주사로 인산염 완충 식염수에 정맥 주사를 투여하며, 온열 패드 위에 유지됩니다. 혈당은 2시간 금식 후 주 2회 70–105일 동안 모니터링되며, 당뇨병은 두 번 연속 측정 시 혈당≥250 mg/dL)으로 정의됩니다. 실험 평가 단계에서, 채취된 췌장은 중성 완충 포르말린에 72시간 고정되고, 파라핀 임베드링을 하며, 헤마톡실린 및 에오신 염색, 인슐린 면역조직화학, 전체 섬 면적 정량을 위해 절개됩니다. 포르말린 고정 파라핀 내버림 절편은 25마커 항체 패널을 사용하여 공간 단백질체학을 위해 제출되어 조절 및 효과 면역 집단을 시각화합니다. 마지막으로, 신선한 췌장 조직은 단세포 분리, 3′ 라이브러리 준비, 서열 분석 및 쇠라 기반 생물정보학 분석을 거쳐 면역 및 기질 집단 전사의 변화를 프로파일링합니다.

이 통합 프로토콜은 단일 용량 박테리아 치료 전달과 섬 면역 재형성의 다중 모달 특성 분석을 가능하게 하여, 자가면역 모델에서 대사산물 조작 미생물을 시험하고 조직 특이적 면역 기전을 단일 세포 해상도로 해부할 수 있는 틀을 제공합니다.

서론

제1형 당뇨병(T1D)은 인슐린 생성 췌장 β세포가 면역 매개 파괴되어 평생 인슐린 의존과 혈관 합병증 위험 증가를 특징으로 하는 만성 자가면역 질환입니다. NOD/ShiLtJ 마우스는 자발성 당뇨병과 명백성 당뇨병으로의 진행 등 인간 자가면역 당뇨병의 주요 특징을 재구성하며, 기전 및치료 연구의 전임상 모델로 널리 사용되고 있습니다. 현재의 T1D 치료법—면역억제제, 단클론 항체, 채택형 조절 T세포(T-세포) 치료제—는 일시적으로 질병 진행을 늦출 수 있지만, 면역 내성 지속 회복이나 β세포 질량 1,2,4,5,6,7,8,9,10의 지속적 보존에는 실패하는 경우가 많습니다. 11.

Tregs 및 기타 조절 집단을 표적으로 하는 것은 자가형 다클론 Treg 주입, 엔지니어링 항원 특이적 Treg, IL-2 기반 요법 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11 등 신흥 T1D 치료제의 주요 초점입니다 . 그러나 췌장 섬 내 염증 촉진 미세환경은 이러한 접근법의 효능을 저해할 수 있어, 조직 내 면역망을 국소적으로 재프로그래밍할 필요성을 강조합니다 2,7. 미생물 유래 트립토판 대사산물, 특히 인돌 및 관련 화합물은 조절 T세포 분화를 촉진하고, 항염증 대식세포 분열을 유도하며, Th17 반응을 억제함으로써 선천 및 적응 면역을 조절할 수 있습니다12,13. 따라서 생미생물 치료제와 대사적으로 조작된 박테리아는 면역조절 대사산물을 현장에서 전달하고 조직 면역을 재구성하는 유망한 전략을 제시합니다. 12,13,14,15,16,17,18.

우리는 이전에 대사적으로 조작된 브루셀라 멜리텐시스 균주인 BmΔvjbR::tnaA를 개발했으며, 이 균주는 인돌을 지속적으로 생성하고 Treg를 확장하고 염증성 미세환경을 재구성하여 자가면역 관절염을 조절합니다. BmΔvjbR과 같은 소석화된 브루셀라 균주는 백신 플랫폼으로 광범위하게 특성화되었으며, 면역조절 페이로드14, 15, 16을 운반하도록 유전자 변형이 가능합니다.

여기서는 NOD/ShiLtJ 모델에서 BmΔvjbR::tnaA 단일 정맥 주사 용량을 평가하기 위한 상세 프로토콜을 제시하며, 여기에는 박테리아 준비, 표준화된 정맥 주사 투여, 당뇨병 모니터링, 조직학, 고플렉스 공간 단백질체학, 단세포 RNA-seq에 의한 췌장 조직 다중 모달 분석을 포함합니다. 이 워크플로우는 장기 특이적 자가면역에서 대사산물 조작 미생물을 단일 투여 면역치료제로 시험하는 실용적인 틀을 제공합니다. 이전 용량-반응 분석에서는 약화된 균주에 대해 최대 1 ×10 10 CFU까지 안전성과 내약성이 입증되었습니다.

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프로토콜

모든 동물 실험은 윤리 지침에 엄격히 따라 수행되었으며, 텍사스 A&M 대학교의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)의 승인을 받았습니다(프로토콜 번호: 2021-0123).

1. BmΔvjbR::tnaA 조제 및 특성 분석

  1. 박테리아 균주 배경 및 저장
    참고: BmΔvjbR::tnaA는 Brucella melitensis 16M에서 유래했으며, vjbR 병원성 조절인자가 결실되고 Escherichia coli tnaA 유전자가 삽입되어 인돌 생성을 위해 구성적 인돌 생성을 담당합니다.
    1. 글리세롤 재고는 20% 글리세롤에 −80 °C로 유지하세요.
  2. 선택적 한천에서 박테리아 배양
    1. −80 °C 저장 상태에서 냉동 글리세롤 재고를 회수하세요. 10–20 μL 스트릭을 트립틱 대두 한천(TSA) 플레이트에 클로람페니콜(25–30 μg/mL)을 보완하여 투여합니다.
    2. 37°C에서 CO₂ 환경에서 48–72시간 동안 배양하여 개별 군락(직경 2–3mm)이 보이도록 합니다.
      주의: 브루셀라 균주를 다루는 작업은 적절한 생물안전 수준(최소 BSL2) 시설이 필요합니다. 기관의 생물안전 프로토콜과 필요한 승인을 준수하세요.
  3. 액체 배양 준비
    1. ≤주 된 신선한 TSA 번호판을 선택하세요. 멸균 루프를 사용해 2–3개의 분리된 군집을 선택하세요.
    2. 멸균된 15mL 튜브에 클로람페니콜(25–30 μg/mL)을 보충한 트립티스 콩 육수(TSB) 10mL에 접종합니다. 37°C에서 250rpm 속도로 진동시키고 주변 CO₂ 조건에서 배양합니다.
      참고: 스케일업 시에는 250mL 배플이 있는 Erlenmeyer 플라스크를 사용하세요.
  4. 성장 모니터링 및 수확
    1. 멸균 TSB에 클로람페니콜을 보충하여 분광광도계를 블랭크합니다.
    2. 2–3시간마다 OD₆₀₀를 측정하세요.
    3. OD₆₀₀₀가 2.0 ± 0.2(약 18–24시간)에 도달할 때까지 계속 인큐베이션을 진행합니다.
      중요한 단계: 박테리아 농도와 생존력을 일정하게 유지하기 위해 OD₆₀₀₀ = 2.0 ± 0.2에서 수확하세요.
      참고: 이 조건에서 OD₆₀₀₀ ≈ 2.0은 로그 중후반에 해당합니다.
  5. CFU 추정
    1. 박테리아 농도를 추정하려면 다음 관계를 사용합니다:
      OD₆₀₀ = 1은 5 × 109 CFU/mL에 해당합니다.
      참고: OD₆₀₀₀ = 2.0 10mL 배양 시 약 1×10 11 CFU가 포함되어 있습니다.
    2. 선택 사항: 멸균 PBS에 10배 연속 희석(10⁻6 에서 10⁻9)을 준비합니다. TSA에 100 μL 플레이트를 넣고 클로람페니콜을 보충합니다. 37°C에서 48–72시간 배양합니다. CFU를 확인하려면 식민지를 개수하세요.
  6. 박테리아 채취 및 농도
    1. 10 mL 배양 양을 멸균된 15 mL 원뿔 튜브로 옮깁니다.
    2. 3,000–4,000 g × 원심분리기를 실온에서 10분간 가열합니다.
    3. 상청액을 조심스럽게 흡입하고 제거하면서 펠릿을 흔들지 마세요.
  7. 주입을 위한 재현전
    1. 박테리아 펠릿에 멸균되고 내독소가 없는 1× 인산 완충 생리식염수(PBS, pH 7.4)를 1mL 첨가합니다. 피펫팅으로 10–15회 부드럽게 재현탁하여 눈에 띄는 덩어리가 보이지 않는 균질한 현탁액이 나올 때까지 사용하세요.
      참고: 최종 농도는 약 1 × 1011 CFU/mL입니다.
  8. 보관 및 사용
    1. 박테리아 현탁액은 닫힌 튜브에 얼음 위에 보관하세요. 정맥주사 주사 준비 후 4시간 이내에 현탁액을 사용하세요.
      참고: 박테리아의 생존 가능성이 감소하므로 냉동하거나 하룻밤 보관하지 마세요.
      멈춤 지점: 박테리아는 최대 4시간 얼음 위에 보관할 수 있습니다; 당일 사용이 권장됩니다.

2. NOD/ShiLtJ 쥐 조달, 주거 및 준비

  1. 암컷 NOD/ShiLtJ 마우스를 확보하세요. 실험 전 최소 7일 동안 쥐를 적응시키세요.
    참고: 당뇨병 발생률이 높고 일관되기 때문에 암컷 쥐를 사용하세요.
  2. 특정 병원체가 없는 환경에서 개별 환기가 되는 우리에 있는 집쥐. 한 우리당 최대 다섯 마리의 쥐를 유지하세요.
  3. 침구, 환경 보충, 음식, 물을 자유롭게 제공하세요. 온도는 20–24°C, 습도는 40–60%, 12시간의 빛과 어둠 주기를 유지하세요.
  4. 5주 미만의 쥐를 사용하세요. 기본 체중 기록.
  5. 케이지 레벨의 쥐를 무작위로 치료군과 대조군으로 나누었습니다. 각 마우스에 고유 식별자(귀 태그나 꼬리 문신)를 할당하세요.
    참고: 모든 마우스와 그룹 할당에 대한 마스터 기록을 유지하세요.
  6. 주사 최소 30분 전에는 케이지를 시술실로 옮기세요. 꼬리 정맥 확장을 촉진하기 위해 37–40 °C로 설정된 온열 패드 위에 케이지를 올려놓으세요.

3. 측측 꼬리정맥을 통한 정맥 투여

  1. 멸균 기법을 사용하여 박테리아 현탁액 100 μL을 멸균 인슐린 주사기(29G–30G)에 흡입합니다. 각 주사기마다 해당 마우스 ID를 적으세요.
  2. 멸균 PBS 100 μL가 들어 있는 대조 주사기를 준비합니다.
    참고: 주사 직전에 주사기를 준비하세요.
  3. 각 쥐를 꼬리에 접근할 수 있도록 구속기에 넣으세요.
    참고: 꼬리 정맥 주사에 마취를 사용하지 마세요.
  4. 꼬리를 70% 에탄올로 닦고 자연 건조시키세요.
  5. 적절한 조명 아래에서 측꼬리 정맥을 시각화하세요.
    팁: 정맥이 보이지 않으면 꼬리를 따뜻하게 하세요.
  6. 꼬리의 마지막 3분의 1을 부드럽게 장력으로 잡으세요. 바늘 베벨업을 얕은 각도(10–15°)로 측정맥에 삽입합니다.
  7. 100 μL을 5–10초 동안 천천히 주입하세요. 바늘을 빼고 멸균 거즈로 부드럽게 압박하세요.
    중요한 단계: 저항, 부기, 하얗게 변하지 않음으로써 정맥 주사 성공을 확인하세요.
  8. 마우스를 다시 케이지에 넣어 온열 패드를 올려 두세요. 5분에서 10분 동안 고통의 징후를 관찰하세요. 부작용 기록을 남기세요.
  9. 2시간 이내에 모든 마우스에 무작위 순서로 주사를 시행하세요.

4. 혈당 모니터링 및 당뇨병 정의

  1. 주사 후 7일째부터 혈당 모니터링을 시작하세요. 연구 종료 지점까지 주 2회 혈당을 측정하세요.
  2. 측정 2시간 전에 음식을 제거하면서 물 접근은 유지하세요.
  3. 쥐를 제압해. 꼬리 끝을 70% 에탄올로 닦으세요.
  4. 멸균 란셋이나 바늘로 꼬리를 베어 주세요. 첫 방울의 피를 버리세요. 두 번째 방울을 혈당측정기 테스트 스트립에 모으세요. 혈당 수치와 마우스 식별 및 날짜를 기록하세요.
    참고: 꼬리 끝에 흉터가 생기면 새 부위를 사용하세요.
  5. 당뇨병을 최소 24시간 간격으로 두 차례 연속 측정≥ 혈당 수치가 250 mg/dL 이상으로 나타난 것으로 정의합니다.
  6. 심각한 질병 징후를 보이는 쥐는 기관 지침에 따라 안락사하세요.

5. 췌장 수확, 고정 및 가공

  1. 승인된 프로토콜에 따라 쥐를 안락사하세요. 췌장을 조심스럽게 해부하고 채취하세요, 모든 엽을 포함해서요.
  2. 췌장을 10% 중성 완충 포르말린에 최소 10:1 고정액 대 조직 부피 비율로 넣습니다. 상온에서 72시간 동안 고정하세요.
    주의: 적절한 개인 보호 장비와 함께 화학 연기 후드에서 포르말린을 다룰 수 있습니다.
  3. 고정 후 조직을 70% 에탄올로 옮기세요.
  4. 고정 조직을 조직학 코어 시설에 제출하여 파라핀 임베딩, 양전하 슬라이드에서 5 μm 두께의 절절, 헤마톡실린 및 에오신 염색, 인슐린 면역조직화학 검사를 수행합니다.
    참고: 추가 하류 분석이 계획된 경우 염색되지 않은 구간을 요청하세요.

6. 조직학적 평가 및 섬 면적 정량화

  1. 슬라이드 스캐너나 현미경을 사용해 전체 슬라이드 이미지를 획득하세요.
  2. 참조된 소프트웨어에서 이미지를 열어보세요. 적절한 도구를 사용해 섬들을 수동으로 주석 달으세요.
  3. 주석 도구를 사용해 섬 면적을 측정하세요.
  4. 분석을 위해 측정값 내보내기.
    참고: 전체 섬 면적에는 내분비 및 침윤 세포가 포함됩니다.

7. 다양한 하위 분석

  1. 쥐 한 마리당 평균 섬 면적을 계산하세요. 적절한 통계 검정을 사용하여 그룹을 비교하세요.
  2. 선택 사항: 공간 단백질체학 분석 ( 보충표 S1 참조)
    1. 양전하를 띤 슬라이드에 FFPE 섹션을 준비하세요. 공간 단백질체 서비스 제공자에게 샘플을 제출하세요. 항체 패널 사양을 제공하세요.
  3. 선택사항: 단일 세포 RNA 시퀀싱 ( 보충 표 S2 참조)
    1. 췌장을 채취해 차가운 매체에 넣으세요.
    2. 단일 세포 분리 및 라이브러리 준비를 위해 유전체학 핵심 시설에 샘플을 제출하세요.
    3. 적절한 파이프라인(예: Cell Ranger, Seurat)을 사용하여 데이터를 시퀀싱합니다.
    4. 출판 전에 시퀀싱 데이터를 공개 저장소에 보관하세요.

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결과

이 원고에서 설명한 광범위한 프로토콜은 이후 단일 복용 예방 요법으로 최적화되었으나, 이 파일럿 결과는 이 워크플로우로 달성할 수 있는 예상되는 조직학적 및 혈당 수치를 보여주기 위해 제시됩니다.

전체 질병 맥락과 건강한 1형 당뇨병 췌장 간의 대조는 그림 1A에 도식적으로 나타난다. 이 도식에 나타난 자가β면역 세포 파괴와 인슐린 생산 손실은 인간과 NOD 마우스 1B 모두에서 T1D 발병 기전이 확립됨을 반영합니다. 암컷 NOD/ShiLtJ 마우스는 그림 2A에 요약된 실험 계획에 따라 등록되었습니다.

그림 3에 표시된 대표적인 개념 증명 데이터(혈당 경로 및 총 섬 면적)는 2회 투여 일정(0일차와 21일차...

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토론

여기에 제시된 대표성 결과의 중요한 한계는 분석 평가 지표를 설명하기 위해 제공된 데이터가 초기 파일럿 코호트에서 2회 투여 일정을 사용한 것이라는 점입니다(그림 3). 이 프로토콜이 단일 투여 예방 요법으로 정제되었기 때문에, 향후 최적화된 단일 투여 프로토콜을 활용한 대규모 연구가 공식적인 통계적 효능을 입증할 필요가 있습니다.

이 JoVE 프로토콜은 NOD/ShiLtJ 마우스에서 인돌을 생성하는 약화된 브루셀라 멜리텐시스 균주를 단일 용량 정맥 주사로 투여하고, 표준화된 모니터링 및 조직학적 평가와 결합하여 이 워크플로우가 제1형 당뇨병에서 파일럿 효능 신호를 포착할 수 있음을 입증합니다. 여기 제시된 파일럿 코호트에서 BmΔvjbR::tnaA는 종단 혈당 측정과 인슐린 염색 유지 시 총 섬 면적 증가로 입증된 바와 달리 차량 대조군에 비해 당뇨...

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공개 사항

저자들은 재정적 이해관계가 상반되지 않습니다.

감사의 글

이 연구는 국립보건원(NIH)의 R01CA273002 및 J.S.와 P.D.F.에 대한 R21AI167793 보조금과 KD를 지원하는 NIH 기관 국립연구서비스(T32) 지원금의 지원을 받았습니다. 텍사스 A&M 대학교 보건과학센터의 기관적 지원에 감사드립니다. 우리는 야바 존스-홀 박사에게 블라인드 조직병리학 평가, 파일럿 및 동물 기술 지원을 위한 송 연구소, 단일 세포 RNA-seq 라이브러리 준비 및 시퀀싱을 위한 텍사스 A&M 유전체 과학 연구소(TIGSS) 분자 게놈 워크스페이스, 데이터 분석 및 해석을 위한 TIGSS 생물정보학 코어, 공간 단백질체학 서비스를 제공한 아코야 바이오사이언스에 감사드립니다. 텍사스 A&M 유전체 과학 및 사회 연구소(TIGSS) 생물정보학 핵심 연구소(TBC)의 지원에 감사드립니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
10% 중성 완충 포르말린(NBF)VWR10790-714
10배 유전체 크롬 컨트롤러TIGSS 분자 유전체학 작업실, 텍사스 A& M 대학교
에탄올 70%VWR89125-164
FFPE용 접착 현미경 슬라이드라이카 바이오시스템3800084E
Akoya 마우스 FFPE 항체 패널 (~25 마커)아코야 바이오사이언스[패널 ID/맞춤 패널]
DNA HS 키트가 포함된 바이오분석기 또는 테이프스테이션TIGSS 분자 유전체학 작업실, 텍사스 A& M/ 애질런트
BM과 델타; vjbR::tna박테리아 균주실험실 재고 (Song/de Figueiredo labs)
셀 레인저 파이프라인10배 유전체학v7.1
클로람페니콜리서치 프로덕츠 인터내셔널56-75-7
크롬 넥스트 GEM 단셀 3피트 키트TIGSS 코어를 통한 10배 유전체
클로스트리디움 히스톨리티쿰에서 추출한 콜라게나제밀리포어 시그마C7657-100MG
DAPI 핵 염색아코야 바이오사이언스[서비스 제공]
FFPE 임베딩, H& E 염색, 인슐린 IHC, 슬라이드 스캔VMBS 조직학 연구소, 텍사스 A& M 대학교https://vetmed.tamu.edu/vmbs-histology-lab/
포도당 테스트 스트립EKF 진단 / 피셔 사이언티브22-022-649
포도당 테스트 스트립 (대체)아센시아 당뇨병 관리컨투어 넥스트 테스트 스트립
글리세롤 (대용량, 500 mL)밀리포어 시그마G7893-500ML
글리세롤 (멸균, 100 mL)시그마 올드리치 (G 생명과학)G5516-100ml
그래프패드 프리즘 (또는 R 서바이벌 패키지)그래프패드 소프트웨어 / Rv10.2
휴대용 혈당측정기아센시아 당뇨병 관리컨투어 넥스트 이즈
일루미나 넥스트세퀀 2000 시퀀서TIGSS 분자 유전체학 작업실, 텍사스 A& M 대학교
인슐린 주사기, 29– 30G (U-100)VWR10002-702
당뇨병 검사용 란셋벡튼, 디킨슨 앤 컴퍼니 (BD)366594
Liberase TL 연구 등급밀리포어 시그마5401020001
저온 온열 패드과학 수행RWD-69025
밀텐니 핵/세포 분리 키트TIGSS 분자 유전체학 작업실, 텍사스 A& M/ 밀텐니 바이오텍
마우스 온열 패드 (대체)켄트 사이언티픽라이트템프
마우스 제약장치브레인트리 사이언티브TV-RED 150-STD
NOD/ShiLtJ 마우스 (암컷, 5주)잭슨 연구소스트레인 #001976
P2 XLEAP 100사이클 플로우셀 키트TIGSS 코어를 통한 일루미늄
PhenoCycler 데이터 수집 및 품질 관리 서비스아코야 바이오사이언스
PhenoCycler 시약 및 영상 워크플로우아코야 바이오사이언스[서비스 제공]
페노사이클러-퓨전 시스템아코야 바이오사이언스
인산염 완충식염수(PBS), 1배써모피셔10010023
프로텍터 RNase 억제제밀리포어 시그마3335402001
큐비트 형광도계 및 dsDNA HS 분석 키트TIGSS 분자 유전체학 작업실, 텍사스 A& M/ 써모 피셔
쿠파트오픈 소스v0.4.3
R 소프트웨어R 프로젝트v4.0+
Seurat (R 패키지)사티자 연구소 / CRANv4.3
스타디스트오픈 소스v0.8.3
트립톤 대두 아가르 (TSA)VWRCA90002-706

참고문헌

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  2. Yang, S. J., et al. Pancreatic islet-specific engineered Tregs exhibit robust antigen-specific and bystander immune suppression in type 1 diabetes models. Sci Transl Med. 14, eabn1716 (2022).
  3. . NOD/ShiLtJ (001976) datasheet Available from: https://www.jax.org/strain/001976 (2026)
  4. Raeber, M. E., et al. Interleukin-2 immunotherapy reveals human regulatory T cell subsets with distinct functional and tissue-homing characteristics. Immunity. 57 (9), 2232-2250.e10 (2024).
  5. Efe, O., et al. A humanized IL-2 mutein expands Tregs and prolongs transplant survival in preclinical models. J Clin Invest. 134 (5), e173107 (2024).
  6. Haque, M., et al. Stem cell-derived tissue-associated regulatory T cells suppress the activity of pathogenic cells in autoimmune diabetes. JCI Insight. 4 (7), e126471 (2019).
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  8. Hassan, M., Elzallat, M., Mohammed, D. M., Balata, M., El-Maadawy, W. H. Exploiting regulatory T cells (Tregs): cutting-edge therapy for autoimmune diseases. Int Immunopharmacol. 155, 114624 (2025).
  9. Chen, X., et al. Differential roles of human CD4+ and CD8+ regulatory T cells in controlling self-reactive immune responses. Nat Immunol. 26 (2), 230-239 (2025).
  10. Huang, Q., Zhu, J. Regulatory T cell-based therapy in type 1 diabetes: latest breakthroughs and evidence. Int Immunopharmacol. 140, 112724 (2024).
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