비타민 C 보조 펜톤 산화가 시험관 내 헬리코박터 파일로리의 산화적 죽음을 개선합니다

요약

본 연구는 비타민 C가 시험 관 내에서 펜튼 반응의 동역학적 행동을 어떻게 조절하는지 조사합니다. 화학 염료 탐침과 박테리아 분석 결과, 조절된 비타민 C 투여가 반응의 산화 행동을 변화시키고, 단순화된 모델 시스템에서 헬리코박터 파일로리 에 대한 항균 활성 증가와 연관되어 있음을 보여주었습니다.

초록

헬리코박터 파일로리 감염은 여전히 전 세계적인 주요 보건 부담이며, 항생제 내성의 증가하는 유병률은 대체 항균 전략의 필요성을 강조합니다. 이 연구는 비타민 C 투여가 정의된 산성 시험관 조건에서 H. pylori에 대한 산화 항균 활성을 조절하고 촉진할 수 있는지 조사하였습니다. 산화 활성은 간접 화학 지표로 산 오렌지 7 탈색을 사용하고, 비타민 C를 보조한 철-과산화물 반응에서 하이드록실 라디칼 관련 산물 형성의 상대적 지표로 테레프탈산 형광 분석법을 사용해 평가하였다. 항균 효능은 표준화된 H. pylori를 노출하여 평가하였다 pH 3의 요소 함유 식염수에서 과산화수소와 철철에 단계별 비타민 C 보충 여부와 관계없이 현탁한 후 군락 형성 단위 열거가 이루어집니다. 비타민 C 보충은 산화 측정값을 변화시키며, 기존 펜튼 화학요법에 비해 생존 가능한 박테리아의 감소가 더 큰 것과 관련이 있었습니다. 데페록사민과 티우레아를 이용한 구조 실험은 항균 활성을 약화시켰으며, 항균 활성이 철분 매개 및 라디칼 관련 산화 과정과 연관되어 있다는 가설을 뒷받침하였다. 생형/죽형광 염색과 주사 전자현미경은 콜로니 형성 단위(CFU) 열거 결과와 일치하는 질적 시각적 관찰을 제공하였습니다. 종합적으로 이 발견들은 조절된 비타민 C 용량이 펜튼 기반 산화 반응을 조절하고 H. pylori에 대한 항균 활성을 단순화한 산성 시험관 내 모델에서 향상시킬 수 있음을 시사합니다.

서론

헬리코박터 속에 속하는 나선형 형태의 그람 음성 박테리아인 H. 파일로리는 인구 건강 연구를 통해 지리적 지역, 성별, 연령 전반에 걸쳐 감염 유병률이 높으며, 전 세계적으로 약 50%의 유병률을 보입니다^1. 국제암연구소(IARC)는 H. pylori를 1그룹 발암물질로 분류하며, 위암 및 점막 관련 림프구(MALT) 림프종과의 강한 연관성을 강조했습니다. 현재 헬리코박터 파일로리 감염의 임상 치료는 주로 약물 요법에 의존하고 있습니다. 가장 광범위하게 연구된 약물로는 위산 분비를 억제하는 양성자 펌프 억제제(PPI); 항생제 효능을 높이는 비스무스 화합물; 그리고 아목시실린, 클라리트로마이신, 메트로니다졸과 같은 항생제가 있습니다. 그러나 단독 요법만으로는 완전한 근절에 충분하지 않다는 것이 밝혀졌고, 이로 인해 일반적으로 삼중 요법이라 불리는 복합 요법이 널리 사용되고 있습니다. 이 방법은 일반적으로 PPI, 클라리트로마이신, 그리고 아목시실린 또는 메트로니다졸을 약^2주간 투여하는 것으로 구성됩니다. 항생제 내성 H. pylori 균주가 증가함에 따라 삼중 요법의 효능은 현저히 감소하여, PPI, 비스무트, 두 가지 항생제를 결합한 4중 요법이 채택되었습니다^. 그럼에도 불구하고 이러한 치료법들은 여전히 근본적으로 항생제에 의존하고 있으며, 항생제 내성은 임상 관리에서 여전히 큰 도전 과제로 남아 있습니다 ^4,5. 이에 따라 대안적이고 항생제 독립적인 항균 전략 탐구가 점점 더 많은 관심을 끌고 있습니다.

직접적인 병리학적 영향 외에도, H. pylori 감염은 위 미량 영양소 항상성 변화와도 관련이 있습니다. 임상 및 역학 연구에서는^{감염자의 위}액과 혈청에서 비타민 C 농도가 감소한 것으로 보고되었으며, 이는 점막 염증, 분비 장애, 산화 섭취 증가와 관련이 있을 수 있습니다 ^7,8,9. 동시에 H. pylori 감염은 위산 감소, 식이 철분 흡수 저하, 박테리아 간 철분 경쟁 등 여러 메커니즘을 통해 철결핍과 연관되어^{있습니다.} 이 관찰들은 H. pylori 감염에 동반되는 복잡한 생화학적 환경을 강조하며, 산성 위 상태에서 산화환원 및 철분 관련 과정의 중요성을 강조합니다.

활성 산소종(ROS)은 산화 특성 때문에 항균 연구에서 상당한 관심을 받고 있습니다. ROS는 산소가 부분적으로 환원되는 과정에서 형성되는 화학적으로 반응성 분자의 한 종류로, 초산화물 음이온(O₂•⁻), 과산화수소(H₂O₂), 단일항 산소(¹O₂), 하이드록실 라디칼(•OH) 등이 있습니다. 생물학적 시스템에서 ROS는 정상적인 생리적 대사에 광범위하게 관여하며 다양한 세포 조절 활동에 필수적이다¹¹. 특히, 과도한 ROS가 지질 과산화를 통해 박테리아 세포막을 파괴하여 막 구조와 기능에 변화를 일으켜 결국 박테리아 불활성화를 초래할 수 있음을 여러 연구에서 입증했습니다¹². 이에 따라 ROS 기반 항균 접근법은 H. pylori^{13, 14, 15, 16}에 대한 비항생제 항균 효과를 조사하는 잠재적 경로로 관심을 받고 있습니다. 다양한 ROS 생성 방법 중에서 펜튼 반응은 매우 효율적인 라디칼 생성으로 큰 주목을 받고 있습니다. 펜튼 반응은 고급 산화 과정¹⁷로, 철 이온(Fe²⁺)이 산성 조건에서 H₂O₂와 반응하여 강한 산화 가능성을 가진 하이드록실 라디칼(•OH)을 생성하며, 이는 세포 내 생체분자를 산화시킬 수 있습니다.

Fe²⁺ +H→Fe³⁺+•OH+OH^-

Fe³⁺+ H→Fe²⁺+•OOH+ H⁺

H₂O→OH+•OOH+H₂O

구체적으로, 약 2.8–4.5 pH에서 H₂O₂는 Fe²⁺에 의해 촉매 분해되어 •OH가 생성되고, Fe²⁺는 산화되어 Fe³⁺으로 변환됩니다. Fe³⁺은 H₂O₂와 반응하여 Fe²⁺를 재생하며, 연속적인 ROS^생성을 유지하는 Fe²⁺/Fe³⁺ 산화환원 사이클을 형성합니다. 그러나 Fe³⁺에서 Fe²⁺으로의 환원은 비교적 느리며, 이는 속도 제한 단계이며, 결과적으로 펜튼 반응의 전체 효율을 낮춥니다. 연구에 따르면 적절한 환원제를 펜톤 반응 시스템에 도입하면 Fe²⁺가 Fe²⁺으로 환원되는 과정을 가속화하여 ROS 생성이 향상될 수 있습니다. 비타민 C는 상황에 따라 산화환원 역할을 합니다. 철분 함유 시스템에서는 Fe²⁺가 Fe²⁺으로 환원되어 펜톤 순환을 지원하며, 높은 농도나 다른 반응 조건에서는 항산화제나 라디컬 스캐^{빈저 역할}도 할 수 있습니다.

이러한 배경을 바탕으로, 본 연구는 비타민 C 보조 펜튼 반응 시스템을 정의된 산성 시험관 조건에서 산화 활성을 조절하는 화학적으로 조절 가능한 접근법으로 연구합니다^20,21. 비타민 C는 Fe²⁺ 재생을 촉진하고 펜톤 반응의 효과적인 산화 거동을 변화시키기 위해 환원제로 사용되었습니다. 여기서 사용된 실험 시스템은 단순화된 산성 식염수-요소 모델이었으며, 점액, 완충 성분, 숙주 세포, 면역 인자, 다양한 유기 기질을 포함하는 생리적 위 미세환경을 완전히 재현하기 위한 것이 아니었습니다. 이 통제된 모델 내에서 산화 활성은 화학적 측정값을 사용하여 특성화되고 박테리아 표현형 반응과 병행하여 시험관 내 H. pylori에 대한 ROS 관련 항균 효과를 탐색하는 실험적 기반을 제공하였습니다.

프로토콜

윤리 선언
이 연구는 시험관 내 박테리아 연구였으며, 인간 참가자, 동물 대상, 환자 유래 물질을 포함하지 않았습니다. 따라서 기관 심사 위원회의 승인과 동물 윤리 승인은 필요하지 않았습니다.

비타민 C 보조 펜톤 시스템에서 AO7 분해 평가
비타민 C가 펜튼 반응의 산화 행동에 미치는 영향을 평가하기 위해, 산화 활성의 간접 화학적 지표로 산성 오렌지 7(AO7) 분해를 사용했습니다. 이 분석법은 개별 활성 산소 종을 구체적으로 정량화하지 않습니다. 5 mg/L의 AO7 용액 100 mL를 준비하고 pH 3으로 조정했습니다. 최종 농도는 각각 2.2 mM과 0.055 mM에 H₂O₂와 FeSO₄를 첨가했습니다. 비타민 C는 반응 시작 시 단일 볼루스로 또는 3단계 투여 방식으로 추가되었습니다. 용량-반응 실험에서는 Vc:^{Fe 2⁺ 2}⁺ 몰 비율이 0, 0.12, 0.24, 0.48, 2, 4, 6, 8을 사용했으며, 이는 FeSO₄를 0.055 mM에서 사용할 때 최종 비타민 C 농도가 0, 0.0066, 0.0132, 0.0264, 0.110, 0.220, 0.330, 0.440 mM에 해당합니다. 3단계 첨가 조건에서는 동일한 비타민 C 양을 세 개의 동일한 알리코트로 나누고, 반응 시작 후 3분, 5분, 7분에 각각 한 알리코트를 추가했습니다. 예를 들어, Vc:^{Fe 2}⁺ 비율이 0.48일 때 알리코트당 0.0088 mM의 비타민 C를 첨가하여 최종 총 농도는 0.0264 mM이 됩니다.

반응액을 어두운 환경에서 10분간 연속으로 저으며 온도를 30°C 이하로 유지했습니다. 반응 전후로 2mL 샘플을 채취했습니다. UV-Vis 분광광도계를 사용해 483 nm에서 흡수를 측정하고, 식 1을 사용해 AO7 분해율을 계산했습니다:

열화율 (%) = [(A₀ − A₁) / A₀] × 100% (1)

여기서 A₀는 반응 전 샘플의 흡광도를, A₁은 반응 후 샘플의 흡수도를 나타냅니다.

TA 프로브를 이용한 •OH 관련 형광 신호 평가
항균 실험에서 사용된 동일한 산성 시험 관 조건에서 하이드록실 라디칼 관련 형광 신호를 평가하기 위해, 형광 프로브로 디나트륨 테레프탈레이트(TA, 1 mM)를 사용하여 세포 자유 화학 시스템을 구축하였습니다. 이 분석은 •OH 관련 생성물 형성의 상대적 지표로 사용되었으며, 하이드록실 라디칼 생성의 절대적인 정량으로 해석되지 않았습니다. 7개 그룹이 포함되었습니다: (1) 빈 상태(반응 완충제 내 1 mM TA), (2) H₂O₂ 단독, (3) Fe²⁺ 단독, (4) Vc 단독(단계적 첨가), (5) 일반 펜톤(Fe²⁺ + H₂O₂), (6) 비타민 C 보조 펜톤과 볼루스 Vc 첨가(Fe²⁺ + H₂O₂ + Vc, 볼루스), (7) 단계별 Vc 첨가를 통한 Vc 보조 펜톤(Fe²⁺ + H₂O₂ + Vc, 단계별로 진행). 단계적 첨가 조건에서는 반응 시작 후 3분, 5분, 7분에 동일한 알리코트로 Vc가 주입되었고, 볼루스 조건에서는 단일 첨가와 동일한 총 양의 Vc를 받았습니다.

알리코틀은 10분 반응 기간 동안 수집되어 즉시 NaOH로 알칼리화하여 추가 급성 반응을 억제하고 형광을 안정화했으며, 측정 전 4°C에 보관되었습니다. TA 유래 산물의 형광 강도는 마이크로플레이트 리더기(Ex/Em: 315/425 nm)를 사용해 측정하였습니다. 근본 생성은 공백 뺄셈 후 형광 강도로 표현되었으며, 근본 생성의 상대적 지표로 사용되었습니다. 최소 세 개의 독립 실험이 수행되었으며, 데이터는 10분 기준 시간 경로 프로필과 평가 지표 비교로 제시되었습니다.

군락 계수를 통한 항균 성능 평가
H. pylori 균주는 25% 글리세롤이 함유된 뇌심장 주입(BHI) 육수에 −80°C에서 보관되었습니다. 주 콜로니 카운팅 분석, 구조 분석, 기질 간섭 분석, 생형/사망 형광 염색, 주사 전자현미경 분석에 사용된 주요 균주는 H. pylori G27이었습니다. 각 실험 전에 박테리아를 콜롬비아 혈액 한천 플레이트에 스트라이크하여 37°C에서 5% O₂, 10% CO₂, 85% N₂²²로 구성된 미세 공기성 조건에서 3일간 배큐했습니다.

1차 균주에서의 군집 계수 분석법
다양한 처리 조건에서 항균 활성을 평가하기 위해 집단 형성 단위(CFU) 열거를 사용했습니다. 다음 그룹을 포함: 미처리 대조군, H₂O₂ 단독, 비타민 C 단독, 기존 펜튼 반응, 비타민 C 보조 펜톤 반응. 원래 실험에 Fe²⁺ 단독 그룹이 포함되지 않았다면, 1차 분석법을 철 단독 효과와 펜튼 반응 매개 산화 효과를 완전히 분리하는 것으로 해석하지 마십시오. 배양된 H. pylori 를 채취하여 생리적 식염수에 박테리아를 재현탁합니다. 600 nm(OD₆₀₀)에서 광학 밀도를 0.5로 조정하고, 현탁액을 pH 3에 조절한 3 mM 요소가 포함된 생리용 식염수로 옮겼습니다. 배정된 치료 그룹에 따라 H₂O₂, FeSO₄, 비타민 C를 추가했습니다. 최종 농도는 2.2 mM H₂O₂와 0.055 mM FeSO₄였습니다. 비타민 C 보조 펜튼 치료의 경우, 3분, 5분, 7분에 세 개의 동일한 알리코트에 비타민 C를 첨가했으며, 최종 총 농도는 0.0264 mM입니다.

10분 처리 후 각 샘플은 즉시 인산염 완충 생리식염수(PBS, pH 7.4)로 100배 희석하여 산성 현탁을 중화하고 잔류 산화제와 철의 도금 단계로의 운반을 줄였습니다. 희석된 박테리아 현탁액을 콜롬비아 혈액 한천 플레이트에 부착하고, 37°C에서 5% O₂, 10% CO₂, 85% N₂의 미세 공기성 조건에서 3일간 배양했습니다. CFU를 계산하고 항균 활성을 log₁₀ CFU 감소로 계산했으며, 방정식 2를 사용했습니다:

log₁₀ CFU 감소 = log₁₀(CFU_제어) − log10(_{CFU 처리 중}) (2)

구조 분석
비타민 C 보조 펜튼 시스템의 항균 활성이 철분 가용성 및 라디칼 관련 과정과 연관되는지 조사하기 위해, 철 킬레이터로 데페록사민(DFO)을, 하이드록실 라디칼 청소제로 티우레아를 사용해 구조 실험을 수행하였다. DFO 또는 티우레아는 FeSO₄와 H₂O₂가 첨가되기 5분 전에 박테리아 현탁액에 첨가되었습니다. DFO와 티우레아는 각각 최종 농도인 100 μM과 5 mM에서 사용되었습니다.

6개의 실험군이 포함되었습니다: 치료받지 않은 대조군, 비타민 C 보조 펜튼, DFO와 함께한 비타민 C 보조 펜튼, 티오레아와 함께한 비타민 C 보조 펜튼, DFO 단독, 티우레아 단독. pH, 식염수/요소 배경, H₂O₂ 농도, FeSO₄ 농도, 비타민 C 투여 일정, 처리 기간, 플레이트 전 희석/중화, 배복 조건 등 모든 실험 매개변수는 1차 콜로니 카운팅 분석법과 동일했습니다. 항균 활성은 CFU 열거로 정량화되었으며, 무처리된 대조군에 비해 log₁₀ CFU 감소로 표현되었습니다.

다중 변형 검증
1차 균주에서 관찰된 항균 효과에 대한 제한적인 교차 변형 지지를 제공하기 위해, 군락 계수 분석법은 추가로 두 개의 H. pylori 참조 균주인 ATCC 43504와 ATCC 26695에도 적용되었습니다. 각 균주별로 세 가지 실험군이 포함되었습니다: 미처리 대조군, 기존 펜톤 반응, 그리고 단계별 비타민 C 첨가를 한 비타민 C 보조 펜톤 반응. 실험 조건과 절차는 1차 집단 계수 분석법과 동일했다. 항균 활성은 각 균주에 대해 처리되지 않은 대조군에 비해 log₁₀ CFU 감소로 표현되었습니다. 각 실험은 n = 3개의 독립적인 생물학적 복제로 수행되었으며, 데이터는 평균 ± 표준편차를 가진 개별 데이터 포인트로 제시되었습니다.

매트릭스 간섭 분석
유기 기질 성분이 비타민 C 보조 펜톤 시스템의 항균 활성을 감소시킬 수 있는지 평가하기 위해, 소 혈청 알부민(BSA)을 이용한 단백질 간섭 모델이 구축되었습니다. BSA는 최종 농도인 0, 1, 3 g·에서 포함되었습니다. L⁻¹. 각 BSA 농도마다 세 가지 실험군이 포함되었습니다: (1) 처리되지 않은 대조군, (2) 기존 펜톤(Fe²⁺ + H₂O₂), (3) 비타민 C 보조 펜톤과 단계별 비타민 C 첨가. 이 분석은 1차 콜로니 계수 분석법에서 설명한 동일한 프로토콜 하에 1차 균주를 사용하여 동일한 pH 조건, 식염수/요소 배경, 시약 농도, 처리 기간(10분), 도금 절차 등으로 수행되었습니다. 항균 활성은 각 BSA 농도에서 비처리된 대조군에 비해 log₁₀ CFU 감소로 표현되었습니다. 각 실험은 최소 세 번 독립적으로 수행되었다. 주요 비교는 단백질 함유 조건에서 향상된 펜튼 상태가 기존 펜튼 상태보다 우월하거나 적어도 약하지 않은지에 초점을 맞췄다.

박테리아 생형/죽음 형광 염색
처리 후에는 위에서 설명한 대로 박테리아 현탁액을 PBS에 100배 희석하여 잔류 산성 및 산화성 잔류를 줄였습니다. 현탁액을 1,800 × g 에서 실온에서 10분간 원심분리한 후 상청액을 버렸습니다. 박테리아 펠릿을 200 μL 생리식염수에 재현탁했습니다. 최종 농도인 6 μM과 30 μM에 각각 SYTO9와 프로피듐 요오다이드(PI)를 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 어두운 곳에서 20분간 인큐베이팅했습니다. 착색된 박테리아 현탁액 5–10 μL를 깨끗한 유리 슬라이드에 바르고 커버슬립으로 덮었습니다. 모든 처리군에 대해 동일한 노출 환경에서 녹색과 적색 형광 채널이 있는 형광 현미경을 사용하여 획득한 형광 영상. 각 그룹별로 최소 세 개의 무작위 선택된 필드를 획득했습니다. 이 이미지를 박테리아의 생존 가능성에 대한 정량적 측정보다는 살아 있는/죽은 염색 패턴에 대한 정성적 시각적 증거로 사용했습니다.

주사 전자현미경을 통한 박테리아 형태 분석
처리 후 박테리아 샘플을 수집하여 0.1M 인산염 완충제(pH 7.4)에서 2.5% 글루타알데히드를 4°C에서 12시간 동안 고정하였습니다. 고정 후에는 잔여 고정제를 제거하기 위해 인산염 완충제로 샘플을 세척했습니다. 샘플들은 50%, 70%, 90%, 100%의 등급별 에탄올 용액에 순차적으로 탈수되었습니다. 탈수 후에는 임계점 건조가 시행되었습니다. 건조된 샘플은 SEM 스텁에 장착되어 약 10nm의 얇은 금층으로 스퍼터 코팅되었습니다. 박테리아 형태는 5 kV의 가속 전압에서 주사 전자현미경을 사용해 조사하였다. 각 치료 그룹별로 저배율과 고배율로 대표적인 이미지를 촬영하였습니다. SEM 이미지는 정의된 손상 메커니즘의 정량적 증거보다는 정성적 형태학적 관찰로 사용되었습니다.

통계 분석
통계 분석은 GraphPad Prism 버전 10.0을 사용하여 수행되었습니다. 모든 정량적 실험은 n = 3개의 독립적인 생물학적 복제로 수행되었으며, 데이터는 평균 표준편차(SD)± 제시되었습니다. TA 형광 분석의 경우, 여러 처리 그룹 간 통계적 비교를 단일 분산분석(ANOVA)과 Tukey의 다중 비교 검정을 사용하였습니다. 다중 치료 조건이 포함된 1차 균주에서 콜로니 카운팅 분석의 경우, 일원 ANOVA를 사용한 통계적 비교와 Tukey의 다중 비교 검정을 사용하였습니다. 구조 검사의 경우, 그룹 간 비교는 일방향 ANOVA를 사용한 후 Dunnett의 다중 비교 검정을 사용했으며, 비타민 C 보조 펜튼 그룹을 기준으로 삼았습니다. 제한적 교차 변형 검증 실험에서는 각 균주 내 기존 펜톤군과 비타민 C 보조 펜톤군 간 비쌍 2측 t-검정을 사용하여 log₁₀ CFU 감소를 비교하였다. 매트릭스 간섭 분석의 경우, 처리와 BSA 농도, 상호작용 항을 포함한 변수로 2방향 ANOVA를 수행하였습니다. 각 BSA 농도별 처리를 쌍별 비교로 Šídák의 다중 비교 검정을 사용했습니다. 통계적 유의성은 P < 0.05로 정의되었습니다. 유의수준은 *p < 0.05, ** P < 0.01, ***P < 0.001, ****p < 0.0001로 표시됩니다.

결과

비타민 C 보조 펜톤 시스템에서 AO7 분해 평가
AO7 분해는 비타민 C가 산성 조건에서 펜튼 반응의 관찰 가능한 산화 거동에 어떤 영향을 미치는지 조사하기 위한 화학 탐침으로 사용되었습니다. 비타민 C가 없을 때, 기존 펜튼 시스템은 10분 반응 기간 동안 부분적으로 AO7이 분해되었습니다. 비타민 C가 도입되면서 염료 분해 정도가 증가했으며, 그 효과는 비타민 C와 Fe2⁺의 몰 비율에 따라 달라졌습니다. 상대적으로 낮은 비타민 C : Fe²⁺ 비율에서는 AO7 비 상태에 비해 분해가 증가했습니다. Vc: Fe²⁺ 비율 0.24에서 약 73.5%의 최대 분해 효율이 관찰된 반면, 비타민 C 없이의 분해율은 약 51.7%였습니다. 비타민 C 농도의 추가 증가는 추가적인 개선으로 이어지지 않았고, 오히려 분해 효율이 점진적으로 감소하는 것과 연관되어 있었습니다.

토론

본 연구는 비타민 C 투여가 정의된 산성 시험 관 조건에서 펜튼 기반 시스템의 산화 행동과 항균 측정값을 조절할 수 있는지 조사하였다. 화학 및 미생물학적 분석에서 단계별 비타민 C 보충은 관찰 가능한 반응 행동을 변화시켰으며, 시험 조건에서 기존 펜튼 반응보다 H . pylori 에 대한 항균 활성이 더 높았다. 중요한 점은, 이 시스템은 완전한 생리학적 위 미세환경이 아니라 단순화된 산-염-요소 모델로 해석되어야 한다는 점입니다. 이 모델은 위 점액, 숙주 세포, 면역 인자, 완충 능력 또는 위 내용물의 이질적 조성을 재생산하기 위한 것이 아니라, 펜튼 기반 산화 활성을 시험하기 위한 통제된 화학적 및 미생물학적 환경을 제공하기 위해 설계되었습니다.

AO7 분해는 개별 활성 산소 종의 특정 측정보다는 산화 활성의 간접 화학적 측정으로 사용되었습니다. 이 시스템에서 비타민 C의 첨가는 ...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Acid Orange 7 (AO7)	알라딘 시약(상하이)유한공사	O113230	AO7 분해 분석을 위한 모델 염료로 사용됨.
Bovine serum albumin (BSA)	상하이 맥클린 생화학 기술 유한공사	B885114	매트릭스 간섭 분석에 사용됨.
Brain Heart Infusion (BHI) broth powder	쓰촨 합이어 바이오엔지니어링 유한공사	N/A	세균 배양 및 냉동 보관에 사용됨.
Columbia blood agar plates (5% sheep blood)	창더 북마 바이오테크놀로지 유한공사	110701028.0	세균 배양 및 CFU 열거에 사용됨.
Critical point dryer (EM CPD300)	라이카 마이크로시스템	EM CPD300	등급화 에탄올 탈수 후 SEM 샘플 준비에 사용됨.
Deferoxamine (DFO)	상하이 맥클린 생화학 기술 유한공사	D873692	구조 분석에서 철 킬레이트제로 사용됨.
Disodium terephthalate	상하이 맥클린 생화학 기술 유한공사	D835937	OH-연관 신호 검출을 위한 TA 형광 프로브로 사용됨.
Ethanol, absolute	시그마 알드리히	E7023	SEM 샘플 탈수를 위한 등급화 에탄올 시리즈를 준비하는 데 사용됨.
Fluorescence microscope (DMi8)	라이카 마이크로시스템	DMi8	생/사 형광 이미징에 사용됨.
Glutaraldehyde solution	시그마 알드리히	G5882	SEM 전 세균 샘플의 고정에 사용됨.
Glycerol	시그마 알드리히	G5516	BHI broth에서의 세균 냉동 보관에 사용됨.
GraphPad Prism 10	GraphPad Software, LLC	Prism 10	통계 분석 및 그래핑에 사용됨.
Helicobacter pylori strain ATCC 26695	미국 유형 세포 배양 컬렉션(ATCC)	700392	제한된 교차 균주 검증에 사용되는 추가 참조 균주.
Helicobacter pylori strain ATCC 43504	미국 유형 세포 배양 컬렉션(ATCC)	43504	제한된 교차 균주 검증에 사용되는 추가 참조 균주.
Helicobacter pylori strain G27	쓰촨 대학 서부 중국 병원 감염병 센터	N/A	콜로니 계수, 구조 분석, 매트릭스 간섭 분석, 생/사 염색, 및 SEM에 사용되는 주 균주.
Hydrogen peroxide solution	시그마 알드리히	H1009	펜톤 반응 분석에서 과산화물 기질로 사용됨.
Iron(II) sulfate monohydrate (FeSO4·H2O)	상하이 맥클린 생화학 기술 유한공사	F904376	펜톤 반응에서 철 이온 공급원으로 사용됨.
Microplate reader (Synergy H1)	애질런트 바이오텍	Synergy H1	TA 유도 형광(Ex/Em = 315/425 nm)을 측정하는 데 사용됨.
Phosphate-buffered saline (PBS), pH 7.4	시그마 알드리히	P4417	배양 전 후 처리 희석/중화 및 샘플 세척에 사용됨.
Physiological saline (0.9% sodium chloride solution)	밀리포어	567442	세균 현탁액 및 산성 염화염 우레아 모델 준비에 사용됨.
Scanning electron microscope (INSPECT F)	FEI 회사	INSPECT F	세균 형태 분석에 사용됨.
Sodium hydroxide	시그마 알드리히	S5881	TA 분석 알리쿼트를 알칼리화하고 형광을 안정화하는 데 사용됨.
Sputter coater (EM ACE200)	라이카 마이크로시스템	EM ACE200	SEM 이미징 전 얇은 금 코팅을 적용하는 데 사용됨.
SYTO 9/PI Live/Dead Bacterial Double Stain Kit	상하이 마오캉 바이오테크놀로지 유한공사	MX4234	형광 기반 생/사 세균 염색에 사용됨.
Thiourea	상하이 맥클린 생화학 기술 유한공사	T81602	구조 분석에서 라디칼 소거제로 사용됨.
Urea	상하이 맥클린 생화학 기술 유한공사	U820349	산성 염화염 우레아 모델을 준비하는 데 사용됨.
UV-Vis spectrophotometer (UV-2600i Plus)