이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

방법 논문

인터루킨-10 녹아웃 마우스에서 염증으로 인한 대사 변화 연구를 위한 피록시캄 가속 장염 모델

74 조회수

⸱

DOI:

10.3791/71448

⸱

2026년 8월 11일

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, The University of Texas Southwestern Medical Center, 2Department of Pathology, University of Texas Southwestern Medical Center, 3Department of Internal Medicine, University of Texas Southwestern Medical Center

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 인터루킨(IL-10) 녹아웃 마우스 모델에서 피록시캄을 사용하여 대장염 발달을 가속화합니다. 프로토콜은 대장염의 동기화를 보장하여 성별, 배경 변종, 비바리움 상태와 무관하게 엄격하고 재현 가능한 결과를 제공합니다. 이는 장 염증 중 대사 변화를 연구하는 데 유용한 모델로 작용합니다.

초록

염증성 장 질환(IBD)은 전 세계적으로 1,000만 명 이상의 사람들에게 영향을 미치는 소화관의 만성 염증성 질환입니다. IBD의 면역학적 기전과 결과에 대한 상당한 연구가 집중되어 있지만, 점막 염증이 체중 감소와 식욕 감소 등 대사 조절 장애에 어떻게 기여하는지에 대해서는 아직 덜 알려져 있습니다. 여기서 저자들은 인터루킨-10-녹아웃(IL-10-KO) 마우스에서 피록시캄 가속 장염의 마우스 모델을 설명하여 염증에 의한 대사 조절 이상을 연구합니다. IL-10-KO 마우스는 자발성 장염을 앓는 것으로 알려져 있으며, 감염이나 약물에 의해 유발되는 장염에 더 취약합니다. 그러나 이 모델에서 비바리움 환경과 긴장 배경이 대장염 발병의 교란 요인으로 보고된 바 있습니다. 비스테로이드성 소염제(NSAID)인 피록시캄은 동물 모델에서 점막에 하강균 노출을 증가시켜 장염을 유발하거나 가속화하는 것으로 입증되었습니다. 이 프로토콜에서는 수컷과 암컷 IL-10-KO 쥐에게 일반 차우 식이 대신 피록시캄 강화 식이를 제공했습니다. 음식 섭취량과 체중은 전신의 대사 변화와 설사, 직장 출혈 같은 장대장염의 임상 증상을 반영하기 위해 매일 측정되었습니다. 이 프로토콜은 효율적이고 재현성이 뛰어나며, 여러 마우스에서 동시에 장염을 유도하고, 염증성 장질환 모델에서 대사 조절 이상을 평가할 수 있게 합니다. 이 프로토콜을 사용한 추가 연구는 장대장염이 에너지 소비와 체성분 등 대사 조절의 다른 요소에 미치는 영향을 조사하여 염증성 장 질환과 숙주 대사 간의 더 넓은 연관성을 밝힐 수 있습니다.

서론

크론병과 궤양성 대장염은 통칭하여 염증성 장질환(IBD)으로, 점막 염증을 특징으로 하며, 복통, 체중 감소, 혈체화, 설사 등의 임상 증상을 동반하는 만성 자가면역 질환입니다. IBD는 전 세계 수백만 명에게 영향을 미치며, 서구화된 사회에서 가장 높은 유병률을 기록하고 있습니다1. 미국에서는 300만 명 이상이 영향을 받는 것으로 추정되며, 특히 어린이와청소년에서 발생률과 유병률이 증가하고 있습니다.

IBD 발병의 정확한 기전은 아직 완전히 밝혀지지 않았으나, 이 질병은 유전적으로 감수성이 있는 개인에서 장내 미생물군에 대한 과도한 면역 반응에서 비롯된 것으로 널리 알려져 있습니다. 염증 반응을 조절하는 사이토카인은 장내 항상성 유지와 IBD 발생에 중요한 역할을 합니다. 이 중 인터루킨-10(IL-10)은 선천적 및 적응적 면역 반응 팔을 조절하여 인간의 면역학적 항상성을 유지하는 데 도움을 주는 잘 연구된 항염증 사이토카인입니다 6,7. 특히, IL-10과 그 수용체(IL-10RA/B)에서 다형성이 매우 조기 발병된 IBD(VEO-IBD)에서 확인되었으며, 고전적으로생후 몇 달 이내에 항문주질환을 발병하는 8. 이 연관성은 크론병 성인 환자의 대규모 엑솜 시퀀싱으로도 뒷받침되는데, IL-10RA가 비단일유성 IBD9에서 질병 감수성 유전자임을 확인했습니다. 더욱이, VEO-IBD 환자에서 IL-10 중화 항체를 포함하는 비유전적 경로가 보고되어 점막 면역 항상성 유지에 이 경로가 중요함을 더욱 강조합니다.

IL-10이 IBD에 연관이 있음을 밝힌 인간 연구를 바탕으로, 인터루킨-10-녹아웃(IL-10-KO) 마우스를 IL-10이 IBD에서 어떤 역할을 하는지 연구하는 모델로 개발되었습니다. IL-10-KO 마우스는 보통11세 8주에서 12주경에 자극에 과장된 CD4+ Th1 반응을 보이는 자발성 장염을 발병하는 것으로 알려져 있습니다. 그러나 IL-10-KO 마우스에서 가속 요인이 없을 때 자연성 장염의 발병은 유전적 균주, 미생물 구성, 서식 조건에 따라 예측할 수 없을 수 있습니다. 12,13,14. 신뢰할 수 있는 프로토콜을 사용하여 대장염을 유도하는 것은 IL-10-KO 모델이 실용적으로 활용되기 위해 매우 중요합니다. 이전 연구들은 피록시캄과 같은 비스테로이드성 소염제(NSAIDs)를 사용하여 IL-10-KO 마우스에서 장염을 유도한 바 있습니다17,18. 그러나 이 연구들은 주로 면역학적 변화에 초점을 맞추고 있으며, 장대사에 미치는 영향이나 성별이 대장염 중증도에 미치는 역할에 대해서는 상대적으로 덜 강조하고 있습니다. 저자들은 IL-10-KO 마우스에서 장염을 유도하기 위해 피록시캄 강화 식이를 사용하고, 수컷과 암컷 마우스를 모두 이용한 모델에서 대사 조절 이상과 점막 염증 반응을 특성화하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 전신의 대사 변화뿐만 아니라 대장염의 임상 증상과 점막 염증을 반영하는 조직학적 및 전사체 변화를 반영하기 위해 체중과 음식 섭취를 측정합니다. 이 효율적이고 재현 가능한 모델은 IBD와 숙주 대사 간의 연관성을 조사하는 데 귀중한 도구를 제공합니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

모든 동물 실험은 텍사스 대학교 사우스웨스턴 메디컬 센터의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)가 승인한 프로토콜에 따라 수행되었으며, "실험동물 관리 및 사용 가이드"[승인 번호: 2017-102011]에 따라 진행되었습니다. 안락사는 기관 지침에 따라 이루어졌습니다. 시술에 마취는 필요하지 않았습니다. 재료에 대한 구체적인 세부 사항은 재료표에 설명되어 있습니다.

1. IL-10-KO 마우스에서 피록시캄 가속 장염 모델 확립

  1. IL-10-KO 쥐는 특정 병원체가 없는 시설에서 12시간 광 주기로 유지하며, 자유 롭게 식사와 물을 섭취할 수 있도록 합니다.
  2. 7주에서 8주 된 생후 나이와 성별이 일치하는 쥐들을 마이크로아이솔레이터 케이지에 개별적으로 수용합니다. 실험 시작 최소 일주일 전까지 쥐들이 단일 사육과 매일 만지는 환경에 적응할 시간을 두세요.
    참고: 수컷은 체중이 >20g, 암컷은 >17g이어야 하며, 쥐는 싸움 상처가 없어야 합니다.
  3. 쥐를 실험군과 대조군에 배정하세요. 실험 그룹의 경우, 표준 주먹 대신 피록시캄 강화 식사를 하세요. 대조군에게는 신선한 표준 음식을 제공하세요. 각 케이지 호퍼에 50g 차우를 넣으세요.
    참고: 각 그룹마다 성별당 최소 다섯 마리의 쥐를 할당하세요. 피록시캄 강화 음식(200 ppm)은 테클라드가 연구진이 제공한 피록시캄을 이용해 맞춤형 실험동물 사료를 제작하기 위해 준비한 것입니다. 배치별 변동성을 최소화하기 위해, 실험 내 모든 동물이 동일한 생산 배치에서 먹이를 받는 것이 권장됩니다. 가능하다면 동일한 배치를 실험 간에 사용해 재현성을 높여야 합니다.

2. 체중 및 섭식 행동 모니터링

  1. 분석 저울을 사용해 각 쥐의 체중을 기록하세요. 매일 같은 시간에 쥐 한 마리씩 개별적으로 체중을 재세요, 7일 연속으로 매일 측정하세요. 0일차에 기준 체중의 백분율로 일일 체중을 보고하세요(100%로 설정).
    참고: 체중이 20% 이상 감소하면 과도한 스트레스와 임박한 사망 위험을 나타냅니다. 이 임계값에 도달하면 쥐는 안락사해야 합니다.
  2. 분석 저울을 사용해 각 우리에서 피록시캄 강화 주우와 표준 주우의 초기 무게를 기록하세요.
  3. 그 후 매일 같은 시간에 각 케이지 호퍼에 남은 고기를 측정하며, 7일 연속으로 매일 측정합니다.
  4. 하루 차우 섭취량을 전날 남은 차우에서 빼서 계산합니다.
    참고: 식사량을 정기적으로 확인하고 10g 미만이면 리필하세요. 피록시캄 차우의 맛은 섭취에 영향을 주지 않으며 일반 식료와 매우 유사해야 합니다.

3. 질병 활동 모니터링

  1. 0일차와 7일째에는 개별 쥐의 배설 펠릿을 육안으로 확인하여 대변에 혈액이 있는지 확인하세요.
  2. 혈액이 보이지 않으면 검사 카드에 펠릿을 바르고 제공된 현상액을 첨가하여 대변 잠혈 검사를 수행하세요. 점수 결과는 표 1에 따른 것입니다.
  3. 0일차와 7일째에는 새로 배출된 대변 펠릿을 눈으로 확인하여 대변 상태를 확인하세요. 평평한 겸자를 사용해 일관성을 판단하는 데 도움을 주세요. 점수 결과는 표 1에 따른 것입니다.
  4. 0일차와 7일차에는 항문 주위 부위를 검사하여 직장 탈출의 정도를 확인합니다. 점수 결과는 표 1에 따른 것입니다.
  5. 위에서 설명한 대로 체중을 측정하세요. 점수 결과는 표 1에 따른 것입니다.
    참고: 질병 활동 지수(DAI) 점수 산정은 일관성을 보장하고 관찰자 편향을 최소화하며 평가의 신뢰성을 높이기 위해 실험 내내 동일한 연구자가 맹목적으로 수행해야 합니다.

4. 대장 조직 채취

  1. 다른곳에서 보고된 대로CO2 질식사 및 경추 탈구로 쥐를 안락사시키세요.
  2. 쥐를 등을 대고 눕히고 복부 복부에 70% 에탄올을 뿌리세요.
  3. 겸자로 피부를 들어 올리고 수술용 가위로 중앙선을 따라 절단하세요. 복막 강을 노출하고 결장을 찾아보세요.
  4. 둔기 해리로 대장과 맹장을 노출하세요. 맹장과 항문 커프를 포함한 대장을 한 덩 어리 제거하세요.
  5. 대장을 평평한 표면에 놓고 결합 조직을 제거하세요.
  6. 대장 길이를 측정하고 기록하세요.
  7. 대장 길이를 측정한 후, 맹장-대장 접합부를 절단하여 맹장을 제거합니다.
  8. 10mL 주사기와 인산 완충 생리식염수(PBS)를 준비하고, 22게이지 볼 팁 재사용 강철 가베지 바늘을 부착합니다. 바늘을 대장에 꿰어 장 내용물을 씻어내세요.
  9. 플러닝된 대장을 PBS가 포함된 페트리 접시에 넣고 잔여 내용물을 제거하기 위해 세척하세요. 허가가 나면 하류 분석에 사용하세요.

5. 조직학 분석

  1. 대장을 유리 슬라이드 위에 평평하게 눕히세요. 겸자를 사용해 조직을 말단 끝에서 시작해 스위스 롤(Swiss roll)을 만들어 스스로 감아주세요. 이렇게 말위/항문 끝은 내측 롤에 머무르고, 더 근접한 부위는 바깥 롤까지 확장됩니다.
  2. 27게이지 바늘을 사용해 말린 대장을 고정해 필름을 고정한 후 삽입 조직 카세트에 넣으세요.
  3. 조직을 고정하기 위해 조직 카세트를 10% 완충된 포르말린 용액에 4 °C에서 16시간 동안 담근다.
    주의: 10% 포르말린은 피부에 닿으면 해롭고 심각한 피부 화상과 눈 손상을 일으킬 수 있습니다. 보호용 장갑과 과학용 고글을 착용하여 조심하세요. 잔류 포르말린은 기관 지침에 따라 적절히 처리되어야 합니다.
  4. 포르말린 고정 후에는 파라핀 임베딩을 위한 조직을 처리하여 유리 슬라이드에 부착하기 위해 절단합니다.
    참고: 샘플은 조직 카세트를 파라핀 처리, 스크롤 절단, 슬라이드 마운팅, 헤마톡실린 및 에오신 염색을 위한 필요한 장비를 갖춘 조직학 실험실에 제출해야 합니다.
  5. 헤마톡실린과 에오신(HE)으로 염색 조직을 슬라이드하며, 정립된 프로토콜에 따라21.
  6. 표 2에 설명된 조직학적 점수 시스템을 사용하여 각 절의 조직학적 특징을 평가합니다: 장염으로 인한 조직 손상, 고유층 염증 세포 침윤, 그리고 관여 면적 비율. 각 섹션의 점수를 합산하여 총 점수를 산출합니다(표 2).
    총점 = 특징 × 침범(조직 손상) + 특징 × 침범 특징 (Lamina propria 염증 세포 여과) (1)
  7. 조직 손상과 세포 침윤의 대표적인 조직병리학적 이미지는 Erben 등(22)의 논문에서 확인할 수 있습니다.
    참고: 조직학적 점수 매기는 평가의 일관성과 신뢰성을 보장하기 위해 가능하게, 가능하면 훈련된 병리학자가 수행해야 합니다.

6. 포르말린 고정 파라핀 조직의 면역형광 염색

  1. 휴지 슬라이드를 슬라이드 랙에 놓고 55°C 슬라이드 건조기에 1시간 동안 넣어 파라핀을 녹입니다.
  2. 슬라이드를 염색 선반에 놓고, 선반을 3분간 염색 병에 자일렌을 담가둡니다. 이 과정을 세 번 반복하세요.
  3. 스테인링 선반을 100% 에탄올이 담긴 스테인링 병에 3분간 담가세요. 이 과정을 세 번 반복하세요.
  4. 염색 선반을 염색 병에 95% 에탄올과 함께 3분간 담가세요.
  5. 염색 선반을 80% 에탄올이 섞인 염색 병에 3분간 담가세요.
  6. 염색 선반을 염색 병에 5분간 담가두고, 탈이온수(DI)를 담가세요.
    참고: 자일렌 연기 때문에 이전 모든 단계는 환기 후드에서 수행해야 합니다. 보호용 장갑과 과학용 고글을 착용하여 조심하세요. 잔류 자일렌은 기관 지침에 따라 적절히 처리되어야 합니다.
  7. 슬라이드를 슬라이드 랙에 옮기고 1× 시트레이트 추출액이 담긴 염색 병에 담가둡니다.
  8. 스테인링 병을 스테인링 접시 지지대에 넣으세요.
  9. 염색 접시 지지대를 압력솥에 넣으세요.
  10. 압력솥에 15분간 조리하세요.
  11. 압력솥에서 슬라이드를 회수해 실온까지 식히세요.
  12. 300 μL 차단 버퍼(3.5% 염소 혈청을 PBS에 희석한 것)를 사용해 가습 챔버에서 1시간 동안 인큐베이팅합니다. 조직이 차단 완충제로 완전히 덮여 있는지 확인하세요.
  13. 300 μL 1차 항체를 블로킹 버퍼에 희석한 상태에서 4 °C에서 16시간 동안 가습 챔버 안에서 노출시킵니다. 조직이 1차 항체로 완전히 덮여 있는지 확인하세요. 다음 1차 항체가 사용되었습니다: Anti-S100A8/S100A9 (1:500).
    참고: 항체 희석은 시약별로 적용되며 공급자의 권고를 따라야 합니다.
  14. 린스 슬라이드를 PBS에 3번에 걸쳐 5분간 연속적으로 담가서 스테인링 병에 넣습니다.
  15. 슬라이드를 300 μL 희석된 형광 2차 항체를 차단 버퍼 안에서 1시간 동안 실온에서 가습 챔버에서 노출시킵니다. 조직이 2차 항체로 완전히 덮여 있는지 확인하세요. 다음 형광 2차 항체가 사용되었습니다: 염소 항-토끼 알렉사 플루어 555(1:150 희석).
    참고: 이 시점부터는 형광체의 광표백을 방지하기 위해 슬라이드를 빛으로부터 보호해야 합니다. 2차 항체 희석은 시약별 특이적이며, 공급업체의 권고를 따라야 합니다.
  16. 린스 슬라이드를 PBS에 3번에 걸쳐 5분간 연속적으로 담가서 스테인링 병에 넣습니다.
  17. 슬라이드를 핵 염색에 노출시키기 위해 1:5000 PBS에 희석된 호에스트 용액에 20분간 담그고 염색 병에 담가세요.
  18. 린스 슬라이드를 PBS에 3번에 걸쳐 5분간 연속적으로 담가서 스테인링 병에 넣습니다.
  19. 비연마성 조직으로 슬라이드에 묻은 PBS를 조심스럽게 닦아내세요. 50 μL 안티페이드 마운팅 매체와 커버슬립을 추가하세요.

7. RNA 추출

  1. 대장 전체나 조각을 액체 질소에 급동한 후 -80 °C에서 보관하세요. 또는 1.5mL RNALater 보존액에 담근 후 제조사의 지침에 따라 보관하세요.
  2. 미리 냉동된 대장을 녹여서 평평한 표면에 올려놓으세요. 휴대용 호모지나이저로 조직을 파괴하고 균질화하세요.
  3. 제조사의 지침에 따라 키트를 사용해 RNA를 분리하세요.
  4. 분광광도계를 사용해 RNA 농도를 측정하세요. 260/A280 비율 > 1.8, A의260/A230 비율이 2.0–2.2는 허용 가능한 RNA 순도를 나타냅니다.
  5. 역전사를 진행한 후 SYBR 그린 삽입 염료를 사용한 qPCR을 시행합니다.
  6. 정량화 플랫폼이나 유사한 도구를 사용해 결과를 분석하세요.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

수컷과 암컷 IL-10-KO 마우스는 피록시캄 강화 식이에 짧은 노출 후 장대장염이 발생한다(그림 1A–E). 2일째 되자, 피록시캄 노출 쥐는 동성 일반 급여 대조군보다 통계적으로 유의하게 더 큰 체중 감소를 보였으며, 성별에 따라 유사한 체중 감소가 관찰되었습니다(그림 1B). 피록시캄 노출과 장대장염 발병 기간 동안 겉보기 일일 음식 섭취량은 변하지 않았으며, 표준 음식 섭취와 유사하여, 이 모델에서 체중 감소가 주로 섭취 감소에 의해 촉진되는 것이 아니라 대사 소비를 촉진하는 다른 요인에 의해 촉진됨을 시사한다(그림 1C).

장 염증의 진행 과정을 추가로 조사하기 위해, 질병 활동성은 체중 감소, 대변 혈혈, 대변 농도, 직...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

염증성 장 질환은 복잡한 다유전자 질환으로, 전임상 모델이 IBD 발병 기전을 해부하고 새로운 진단 및 치료 전략을 개발하는 데 귀중한 도구가 됩니다. 현재 많은 IBD 전임상 모델은 덱스트란 황산염나트륨(DSS), 옥사졸론, 트리니트로벤젠 설폰산(TNBS)과 같은 화학물질 노출에 의존하고 있습니다. 자발성 대장염을 발병시키는 유전적 모델도 존재합니다. 이 중 IL-10-KO 모델은 특히 가치가 있는데, IL-10 경로의 유전적 변이가 인간에서 장 염증을 유발하는 것으로 알려져 있으며, IL-10-KO 마우스는 인간 질환과 유사한 자발성 만성 장염을 발병하기 때문입니다. 하지만 이 모델의 주요 한계는 표현형 변이를 설명하지 못한다는 점입니다. 장대장염은 자연적으로 발생하지만, 발병 배경과 비바리움 환경에 따라 다양할 수 있습니다.

화학 노출과 유전적 모델을 결합함으로써, 여기서...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

저자들은 관련 공개를 하지 않는다고 선언한다.

감사의 글

이 작업에 기여한 UTSW의 핵심 시설들에 감사드립니다. 이 연구는 NIH K08DK127197(LS-D), T32DK007745(JW), 그리고 Docstars 상을 통한 Southwestern Foundation(LS-D)의 자금 지원을 받았습니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
10% buffered formalinStatLab28600-11 Galllon
27 G needlesBD305109
Anti-S100A8 + S100A9 antibodyAbcamAB288715
BalanceFisher scientificS94792DFisher Science Education Portable Balances, 300 g
Citrate bufferSigma AldrichC9999-1000mL
DI waterFisher scientificSTLSL301
Dissecting forcepsFisher scientific22-327379
Ethanol, 100% 200 proofFisher scientificNC1675398Pharmco Products ETHYL ALCOHOL 200 PROOF
Ethanol, 190 proof, 95%Fisher scientificAC615110010
Ethanol, 80%Fisher scientificT08204K7
EZ-Quick Slide Staining DishIHC worldIW-2511Staining jar
EZ-Quick Slide Staining RackIHC worldIW-2512Slide rack
Feeding needleFisher scientificNC992498622 gauge, 25 mm
Fine scissorsFisher scientific14060-11
Flat forcepsFisher scientific21-125-109
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 555Thermo FisherAB_2535849
Handheld homogenizerFisher scientific15-340-167
HemoCueDanlee Medical Products, Inc.BCK 64151AHemoccult Dev/ Single Slide Test Cards - CLIA Waived
Hoechst 33342Invitrogen62249
IL-10 KO MiceThe Jason LaboratoryStrain #: 002251IL10-KO mice, genotype: B6.129P2-IL-10tm1Cgn/J
IVC mouse cagingAllentownMouse 500
Liquid nitrogenAirgasNI UHP300
Microscope cover glassFisher scientific12541033
NanodropThermo FisherND-ONE-W
Normal Goat serumVector labsS-1000-20
Phosphate buffered saline (PBS)Sigma AldrichD8537
Petri dishesFisher scientificFB0875713
PiroxicamSigma AldrichP0847supply to inotiv for preparation of custom animal diet
Piroxicam-fortified chowInotivCustom200 ppm
Primer: Mouse GAPDH forwardSigma AldrichN/A5' AGGTCGGTGTGAACGGATTTG 3' forward
Primer: Mouse GAPDH reverseSigma AldrichN/A5' TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA 3' reverse
Primer: Mouse IFN-G forwardSigma AldrichN/A5' ACTGGCAAAAGGATGGTGAC 3' forward
Primer: Mouse IFN-G reverseSigma AldrichN/A5' TGAGCTCATTGAATGCTTGG 3' reverse
Primer: Mouse IL-10 forwardSigma AldrichN/A5' CTTGCACTACCAAAGCCACA 3' (common)
Primer: Mouse IL-10 reverseSigma AldrichN/A5' GTTATTGTCTTCCCGGCTGT 3' (Wild type reverse)
Primer: Mouse IL-10 reverse (2)Sigma AldrichN/A5' CCACACGCGTCACCTTAATA 3' (Mutant reverse)
Primer: Mouse IL-1B forwardSigma AldrichN/A5' GCTGAAAGCTCTCCACCTCA 3' forward
Primer: Mouse IL-1B reverseSigma AldrichN/A5' AGGCCACAGGTATTTTGTCG 3' reverse
Primer: Mouse IL-6 forwardSigma AldrichN/A5' GTTCTCTGGGAAATCGTGGA 3' forward
Primer: Mouse IL-6 reverseSigma AldrichN/A5' TTTCTGCAAGTGCATCATCG 3' reverse
Primer: Mouse TNF forwardSigma AldrichN/A5' GCAGGTTCTGTCCCTTTCAC 3' forward
Primer: Mouse TNF reverseSigma AldrichN/A5' AGTGCCTCTTCTGCCAGTTC 3' reverse
QuantStudio 7 ProThermo FisherA43183
RNAlater solutionInvitrogenAM7020RNA Stabilization Solution, 100 mL
Rneasy mini kitQiagen74104
SHURDry SD-II Slide DryerGeneral dataSD-ll-120
Simport Scientific EasyDip Slide Staining RackFisher scientific22-038-494Staining rack
SlowFade Gold antifade reagentInvitrogenS36936
Staining dish supportBioSBBSB7086
Staintray IHC slide staining systemIHC worldM918-1Humidified chamber for IHC
SuperScript VILOInvitrogen11755050
SYBR Green Master mixApplied BiosystemsA46109
Tintoretriever pressure cookerBioSBBSB7008
Tissue cassettesFisher scientific 50-197-8152Research Products International Corp Tissue Processing Cassette, Pink, 500 per Case
XylenePharmco3990000001 Gallon

참고문헌

  1. Hracs L, Windsor JW, Gorospe J, et al. Global evolution of inflammatory bowel disease across epidemiologic stages. Nature. 2025;642(8067):458-466.
  2. Dahlhamer JM, Zammitti EP, Ward BW, Wheaton AG, Croft JB. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease Among Adults Aged ≥18 Years - United States, 2015. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2016;65(42):1166-1169.
  3. Ng SC, Shi HY, Hamidi N, et al. Worldwide incidence and prevalence of inflammatory bowel disease in the 21st century: a systematic review of population-based studies. Lancet. 2017;390(10114):2769-2778.
  4. Caron B, Honap S, Peyrin-Biroulet L. Epidemiology of Inflammatory Bowel Disease across the Ages in the Era of Advanced Therapies. J Crohns Colitis. 2024;18(Supplement_2):ii3-ii15.
  5. Ye Y, Manne S, Treem WR, Bennett D. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease in Pediatric and Adult Populations: Recent Estimates From Large National Databases in the United States, 2007-2016. Inflamm Bowel Dis. 2020;26(4):619-625.
  6. Rubtsov YP, Rasmussen JP, Chi EY, et al. Regulatory T cell-derived interleukin-10 limits inflammation at environmental interfaces. Immunity. 2008;28(4):546-558.
  7. Shouval DS, Biswas A, Goettel JA, et al. Interleukin-10 receptor signaling in innate immune cells regulates mucosal immune tolerance and anti-inflammatory macrophage function. Immunity. 2014;40(5):706-719.
  8. Glocker EO, Kotlarz D, Boztug K, et al. Inflammatory bowel disease and mutations affecting the interleukin-10 receptor. N Engl J Med. 2009;361(21):2033-2045.
  9. Sazonovs A, Stevens CR, Venkataraman GR, et al. Large-scale sequencing identifies multiple genes and rare variants associated with Crohn’s disease susceptibility. Nat Genet. 2022;54(9):1275-1283.
  10. Griffin H, Ceron-Gutierrez L, Gharahdaghi N, et al. Neutralizing Autoantibodies against Interleukin-10 in Inflammatory Bowel Disease. N Engl J Med. 2024;391(5):434-441.
  11. Kühn R, Löhler J, Rennick D, Rajewsky K, Müller W. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis. Cell. 1993;75(2):263-274.
  12. Berg DJ, Davidson N, Kühn R, et al. Enterocolitis and colon cancer in interleukin-10-deficient mice are associated with aberrant cytokine production and CD4(+) TH1-like responses. J Clin Invest. 1996;98(4):1010-1020.
  13. Mizoguchi A. Animal models of inflammatory bowel disease. Prog Mol Biol Transl Sci. 2012;105:263-320.
  14. Hart ML, Ericsson AC, Franklin CL. Differing Complex Microbiota Alter Disease Severity of the IL-10-/- Mouse Model of Inflammatory Bowel Disease. Front Microbiol. 2017;8:792.
  15. Keubler LM, Buettner M, Häger C, Bleich A. A Multihit Model: Colitis Lessons from the Interleukin-10-deficient Mouse. Inflamm Bowel Dis. 2015;21(8):1967-1975.
  16. Büchler G, Wos-Oxley ML, Smoczek A, et al. Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions. Inflamm Bowel Dis. 2012;18(5):943-954.
  17. Berg DJ, Zhang J, Weinstock JV, et al. Rapid development of colitis in NSAID-treated IL-10-deficient mice. Gastroenterology. 2002;123(5):1527-1542.
  18. Hale LP, Gottfried MR, Swidsinski A. Piroxicam treatment of IL-10-deficient mice enhances colonic epithelial apoptosis and mucosal exposure to intestinal bacteria. Inflamm Bowel Dis. 2005;11(12):1060-1069.
  19. Holgersen K, Kvist PH, Markholst H, Hansen AK, Holm TL. Characterization of enterocolitis in the piroxicam-accelerated interleukin-10 knock-out mouse--a model mimicking inflammatory bowel disease. J Crohns Colitis. 2014;8(2):147-160.
  20. B C, K B, V B, et al. Recommendations for euthanasia of experimental animals: Part 2. DGXT of the European Commission. Laboratory animals. 1997;31(1).
  21. Ellis JL, Yin C. Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish. J Vis Exp. 2017;(123):55630.
  22. Erben U, Loddenkemper C, Doerfel K, et al. A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models. Int J Clin Exp Pathol. 2014;7(8):4557-4576.
  23. Holgersen K, Kutlu B, Fox B, et al. High-resolution gene expression profiling using RNA sequencing in patients with inflammatory bowel disease and in mouse models of colitis. J Crohns Colitis. 2015;9(6):492-506.
  24. Ananthakrishnan AN, Adler J, Chachu KA, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Crohn’s Disease. Gastroenterology. 2023;165(6):1367-1399.
  25. Singh S, Ananthakrishnan AN, Nguyen NH, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Ulcerative Colitis. Gastroenterology. 2023;164(3):344-372.
  26. Sifuentes-Dominguez LF, Li H, Llano E, et al. SCGN deficiency results in colitis susceptibility. eLife. 2019;8:e49910.
  27. Sellon RK, Tonkonogy S, Schultz M, et al. Resident enteric bacteria are necessary for development of spontaneous colitis and immune system activation in interleukin-10-deficient mice. Infect Immun. 1998;66(11):5224-5231.
  28. Bábíčková J, Tóthová Ľ, Lengyelová E, et al. Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens. Inflammation. 2015;38(5):1996-2006.
  29. Wagnerova A, Babickova J, Liptak R, Vlkova B, Celec P, Gardlik R. Sex Differences in the Effect of Resveratrol on DSS-Induced Colitis in Mice. Gastroenterol Res Pract. 2017;2017:8051870.
  30. Maite CB, Roy M, Emilie V. The Effect of Sex-Specific Differences on IL-10-/- Mouse Colitis Phenotype and Microbiota. Int J Mol Sci. 2023;24(12):10364.
  31. Dokoshi T, Seidman JS, Cavagnero KJ, et al. Skin inflammation activates intestinal stromal fibroblasts and promotes colitis. J Clin Invest. 2021;131(21):e147614.
  32. Dokoshi T, Chen Y, Cavagnero KJ, et al. Dermal injury drives a skin-to-gut axis that disrupts the intestinal microbiome and intestinal immune homeostasis in mice. Nat Commun. 2024;15(1):3009.
  33. Allard C, Zizzari P, Quarta C, Cota D. Food intake and body weight in rodent studies: the devil is in the details. Nat Metab. 2022;4(11):1424-1426.
  34. M W, R L, S S, et al. Combination therapy using intestinal organoids and their extracellular vesicles for inflammatory bowel disease complicated with osteoporosis. Journal of Orthopedic Translation. 2025;53.
  35. Y G, H Z, Y Y, et al. Injectable body temperature-responsive hydrogel for encephalitis treatment via sustained release of nano-anti-inflammatory agents. Biomaterials translational. 2024;5(3).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

태그

NSAID

이 논문이 게재되었습니다

동영상 곧 제공

문의하기
도서관에 추천하기

개인정보 처리방침

이용 약관

정책

저작권 © 2026 MyJoVE Corporation. 모든 권리 보유.