신경 과학 메세지가되면서 더 정교, 뇌 구조의 조사 및 회로 정확성 및 높은 해상도의 향상된 수준을 필요로합니다. 우리는 50 미크론의 팁 직경 borosilicate microcannula을 이용하여 뇌 내에 만성 주입 시스템의 준비와 주입하는 방법을 개발했습니다.
방법 논문
Neuroactive 대리점 지속 배달 Microinfusion 시스템의 구축 및 주입.
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요약
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초록
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두뇌의 지역 내에서 neuroactive 요원의 만성 주입에 사용되는 실험 프로토콜들은 종종 미니 삼투 펌프 시스템을 사용합니다. 에이전트는 일반적으로 0.30 mm 이상의 직경을 가진 스테인레스 스틸 정맥을 통해 전달됩니다. 이 구경의 정맥을 이용한 시스템은이를 구조적 무결성 및 정상적인 기능을 손상, 건축 손상의 결과로 관심의 영역에 충격을 부과할 수 있습니다. 신경 과학 메세지가되면서 더 정교, 뇌 구조의 조사 및 회로 정확성 및 높은 해상도의 향상된 수준을 필요로합니다. 우리는 50 미크론의 팁 직경 borosilicate microcannula을 이용하여 뇌 내에 만성 주입 시스템의 준비와 주입하는 방법을 개발했습니다. 이 기술은 로컬 환경에 피해를 감소하고 주입의 사이트에서 반응 gliosis가 줄어들. microinfusion 시스템의 구성도 따라서 두피 절개의 폐쇄를 촉진하고 감염의 위험을 감소, 큰 두개골 받침대의 필요성을 precluding, 동물의 두개골의 표면에 부합 수 있습니다. 우리는 체외 모델에서 쥐의 생체내 연구에를 사용하는 대표적인 분자량을 가진 염료의 신뢰할 수있는 지속적인 배달을 보여줍니다.
프로토콜
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소개
neuroactive 요원의 직접 주입은 혈액 뇌 장벽을 우회하면서 특정 두뇌 영역이 공부 수 있습니다. 신경 과학이 접근 방식의 애플 리케이션은 다양하고 개별 subregions의 뇌 활동의 레벨 (Berretta 외, 2004 김 외, 2000.,, 글리든 외, 2005..) 변경 포함 (정신 대리인의 행동을 조사 클린턴 외, 2006;.. 메커니즘을 연구, Rosi 외, 2004). Marchalant 외, 2007;.. 디 Benedetto 외, 2004), 뇌 염증의 제어 모델 (Hauss - Wegrzyniak 외, 1998 제공 중독 (김 외, 2005;, 2006 장 외.; 로크먼 외, 2005..) 및 영양 요인 (Naert 외, 2006 수 있도록 장기적인 관리,.. Radecki 외, 2005; 다카하시 외., 2006).
대리인의 만성 제공을위한 표준 방법은 종종 범위 수있는 직경 스테인레스 스틸 정맥을 통해 뇌 내에 배달됩니다 neuroactive 에이전트와 로드된 미니 삼투 펌프 (예 : ALZET 삼투 펌프, 쿠퍼 티노, CA) 활용 0.25에서 mm (윌리엄스 외, 1987.) 0.5 mm지만, 가장 일반적으로 약 0.3 mm (플라스틱, 하나, 로어 노크,....
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토론
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다양한 연구 했습니다만 혼합, 조직 외상과 혈액 뇌 장벽을 모욕에 대한 배달 정맥의 크기를 줄임으로써 (페리 외., 1993) 감소 것을 증명하고있다, 염증이 감소하고있는 면역 응답 감쇠 (Finsen 외 ., 1991), 그리고 반응 gliosis는 (Nikkhah 외., 1994) 감소됩니다. 우리는 여기서 6 배 통상 사용되는 배달 cannulas의에 비해 감소 직경 microcannula 통해 두뇌 속에 neuroactive 요원의 만성 전달 방법을 제시한다. 우리는이 시스템이 안정화된 시간과 외상과 반응 gliosis의 수준이 급격하게 감소를 통해 대표적인 솔루션을 제공하는 것을 증명하고있다. 이러한 연구는 50m의 최종 팁 직경 배달 정맥을 고용하지만, 작은 팁 지름이 활용 수 있습니다. 이러한 microinfusion 시스템의 기본 미덕은 주입의 주변에 최소한의 충격을 발생하면서, 아주 작은, 이산 대상으로 에이전트를 전달하는 능력이다.
우리가 설명하는 주입 시스템의 구축에 사용되는 microcannulas 쉽게 사용자 정의 - 건설 미.......
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| 미니 삼투압 펌프(MOP) | Tool |  ALZET | 모델 #1002 | |
| 전극 풀러 | Tool | Stoelting Co. | ||
| 붕규산 튜빙 | 수술 | World Precision Instruments, Inc. | 1B100F-6 | |
| 마이크로펜치 | 수술 | World Precision Instruments, Inc. | ||
| 폴리에틸렌 튜빙 | 수술 | 플라스틱 One | #C312 VT | |
| LumaBond | 시약 | myNeuroLab, Inc |
참고문헌
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- Berretta, S., Lange, N., Bhattacharyya, S., Sebro, R., Garces, J., Benes, F. M. Long-term effectsof amygdala GABA receptor blockade on specific subpopulations of hippocampalinterneurons. Hippocampus. 14, 876-894 (2004).
- Clinton, S. M., Sucharski, I. L., Finlay, J. M.
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재인쇄 및 허가
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허가 요청정오
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Formal Correction: Erratum: Construction and Implantation of a Microinfusion System for Sustained Delivery of Neuroactive Agents.
Posted by JoVE Editors on 4/01/2012. Citeable Link.
A correction was made to: Construction and Implantation of a Microinfusion System for Sustained Delivery of Neuroactive Agents. A key reference was excluded and a revised abstract was republished.
Additional Reference:
22. Cunningham, M.G., Ames, H.M., Donalds, R.A., & Benes, F.M. Construction and implantation of a microinfusion system for sustained delivery of neuroactive agents. Journal of Neuroscience Methods 167, 213-220, doi:10.1016/j.jneumeth.2007.08.016 (2008).
Revised Abstract:
Sustained delivery of neuroactive agents is widely used in neuroscience, but poses many technical challenges. It is necessary to deliver the agent with high precision while minimizing localized trauma and inflammation. Also, the ability to customize the system to accommodate animals of different species and sizes is desirable. This video presentation demonstrates the construction of an infusion system that can be fitted to any particular research animal. The delivery microcannula diameter is approximately 10-fold smaller than most infusion cannulas presently used. This translates into enhanced accuracy and reduced trauma to the brain region under study. The delivery cannula can also be sculpted to fit the contour of the surface of the animal's skull, thereby allowing closure of the scalp incision neatly over the infusion system, precluding the need for a skull-mounted pedestal, reducing risk of infection, and ensuring a greater level of comfort to the animal. The system is assembled in an air-free environment and requires the researcher to fashion glass micropipettes with a heat source. These construction methods require special skills that are best acquired, if not in person, using video instruction. (This article is based on work first reported in J Neurosci Methods. 2008 Jan 30;167(2):213-20. Epub 2007 Aug 28.).
Original Abstract:
Experimental protocols used for chronic infusion of neuroactive agents within regions of the brain often utilize a mini-osmotic pump system. Agents are commonly delivered via a stainless steel cannula with a diameter of 0.30 mm or greater. Systems utilizing a cannula of this caliber may impose trauma to the area of interest resulting in architectural damage, thereby compromising structural integrity and normal functioning. As neuroscience inquiry becomes more sophisticated, investigation of brain structures and circuitry requires improved levels of accuracy and higher resolution. We have developed a method for the preparation and implantation of a chronic infusion system within the brain utilizing a borosilicate microcannula with a tip diameter of 50 microns. This technique reduces damage to the local environment and diminishes reactive gliosis at the site of infusion. The configuration of the microinfusion system is also able to conform to the surface of the animal's skull, precluding the need for large cranial pedestals, thus facilitating closure of the scalp incision and reducing the risk of infection. We demonstrate reliable sustained delivery of a dye having a representative molecular weight using an in vitro model and in vivo studies in rats.