본 프로토콜은 인간 기도 상피 세포에서 안정적인 STAT6 루시퍼레이스 리포터 분석법의 구축 및 검증 방법을 설명합니다. 이 방법은 통제된 in vitro 조건 하에서 STAT6 활성을 조절하는 환경 독성 물질 및 대기 오염 성분을 효율적으로 스크리닝할 수 있게 합니다.
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이 논문에서
요약
초록
대기 오염과 관련된 알레르기성 기도 염증은 점차 심각해지는 공중 보건 문제입니다. 알레르기성 기도 염증의 핵심 매개체인 Signal Transducer and Activator of Transcription 6 (STAT6) 경로를 활성화하는 Interleukin‑4 (IL‑4)와 interleukin‑13 (IL‑13)은 오염 물질의 호흡기 독성을 조절할 수 있습니다. 본 연구에서는 STAT6 신호 전달을 조절하는 환경 독성 물질을 평가하기 위해 인간 기도 상피 세포에서 안정적인 STAT6 루시퍼레이즈 리포터 분석법을 구축하고 검증하는 방법을 설명합니다. 인간 기관지 상피 16HBE14o− 세포에 렌티바이러스 벡터를 사용하여 STAT6 반응성 루시퍼레이즈 리포터를 형질도입하였으며, 이후 puromycin 선택 및 감염 다중도(multiplicity of infection)를 최적화하고 한계 희석법을 통해 단일 클론을 분리하였습니다. 연속 계대 배양 후에도 강력하고 재현 가능한 유도를 보이는 안정적인 클론을 선택하였습니다. 리포터의 반응성은 IL-4/IL-13 자극을 통해 검증하였으며, STAT6 의존성은 선택적 STAT6, STAT5 및 STAT3 억제제를 사용하여 확인하였습니다. 분석 성능은 Z′-factor 분석으로 정량화하였으며, 이를 통해 재현 가능한 신호 분리가 가능함을 확인하였습니다. 나아가 본 분석법을 개별 대기 오염 성분에 적용한 결과, benzo[b]fluoranthene과 미세먼지가 STAT6 리포터 활성을 유의하게 증가시켰습니다. 이 방법은 기도 상피 세포에서 STAT6 활성을 측정하고 알레르기성 기도 신호 전달을 조절하는 환경 독성 물질의 우선순위를 정하는 데 유용한 확장 가능한 접근 방식을 제공합니다.
서론
대기 오염은 심각한 건강 영향과 사회경제적 파급 효과를 동반하며, 전 세계적으로 가장 시급한 공중 보건 과제 중 하나입니다. 현재 대기 오염은 연간 810만 명의 사망자를 발생시키는 두 번째로 주요한 사망 위험 요인으로 꼽힙니다1,2,3. 공기 중 오염 물질 중에서 직경 2.5 µm 미만의 미세먼지(PM2.5)는 호흡기 깊숙이 침투할 수 있는 능력 때문에 가장 큰 건강 위험을 초래합니다4,5. PM2.5 노출 증가와 폐 기능 저하 및 호흡기 질환으로 인한 입원율 증가 사이에는 일관된 연관성이 있음이 밝혀졌습니다6. 천식, 알레르기성 비염, 아토피 피부염을 포함한 알레르기성 염증성 질환의 유병률은 전 세계적으로 증가하고 있으며, 특히 오염이 심한 거대 도시에서 불균형적으로 높게 나타납니다4.
아토피성 천식과 같은 알레르기성 기도 질환은 주로 인터루킨-4 (IL-4) 및 인터루킨-13 (IL-13) 사이토카인의 수치 상승과 신호 전달 및 전사 활성화 인자 6 (STAT6) 신호 전달 경로의 활성화를 특징으로 하는 제2형 염증 반응에 의해 매개됩니다7. 기도 상피 세포에서 IL-4 및 IL-13에 의해 유도되는 STAT6의 인산화는 점액 과분비와 상피 장벽 붕괴를 촉진하며, 이는 STAT6가 알레르기성 기도 병리의 핵심 매개체이자 관련 치료 표적임을 시사합니다8,9. 마우스 모델의 실험적 증거에 따르면 PM2.5와 이산화황에 노출될 경우 STAT6 신호 전달이 증강되고 알레르기성 기도 염증이 악화되는 것으로 나타났습니다10,11. 그러나 개별 대기 오염 성분이 인간 기도 상피 세포에서 STAT6의 전사 활성을 직접적으로 조절하는지 여부는 아직 체계적으로 평가되지 않았습니다.
대기 오염은 미세먼지, 다환방향족탄화수소(PAHs), 중금속 및 무기염을 포함한 화학적으로 복잡한 성분들의 혼합물로 구성되어 있으며, 이러한 개별 성분들이 기도 STAT6 활성화에 기여하는 정도는 아직 명확하게 정의되지 않았습니다12,13. 종말점 인산화 분석이나 일시적 형질전환 기반 리포터 시스템과 같이 기도 상피 세포에서 STAT6 활성을 측정하는 현재의 방법론들은 대규모 화학 물질 스크리닝에 적합하지 않습니다. 따라서 인간 기도 상피 세포 내에 안정적인 세포 기반 STAT6 리포터 플랫폼을 구축한다면, 알레르기성 기도 신호를 조절하는 오염 유래 화합물을 식별할 수 있는 확장 가능한 도구를 제공할 수 있을 것입니다. 본 프로토콜에서는 16HBE14o− 기도 상피 세포에서 안정적인 STAT6 루시퍼레이즈 리포터 분석법의 개발 및 검증 과정을 설명하며, 이를 통해 환경 시료 및 개별 화학 독성 물질의 체계적인 스크리닝을 위한 STAT6 활성의 정량적 평가가 가능해집니다.
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프로토콜
본 연구에서는 기성 16HBE14o− 인간 기관지 상피 세포주를 사용하였으므로, 인간 대상자 윤리 승인은 해당되지 않습니다.
1. 16HBE14o 생성− STAT6 활성 리포터를 안정적으로 발현하는 세포
참고: 그림 1에서 전체 워크플로의 개요를 확인할 수 있습니다.
- 세포 배양
참고: 모든 과정은 II등급 생물안전 작업대(biosafety cabinet)에서 무균 기법을 사용하여 수행하십시오. 사용 전 세포에 마이코플라스마 오염이 없는지 확인하십시오.- 16HBE14o− 세포를 10% 태아 송아지 혈청(fetal bovine serum)과 1% 페니실린-스트렙토마이신(penicillin–streptomycin)이 첨가된 최소 필수 배지(minimum essential medium)에서 배양하십시오. 세포를 5% CO2가 포함된 가습 분위기의 37 °C에서 배양하고, 이틀마다 배양액을 교체하십시오.
- 세포가 약 80%의 합류도(confluence)에 도달할 때까지 배양하십시오. 배양액을 흡입하여 제거하고 인산염 완충 식염수(phosphate-buffered saline)로 세포 단층을 1회 세척하십시오.
- 세포 단층이 충분히 덮일 정도로 인산염 완충 식염수를 넣고 37 °C에서 20분 동안 배양하십시오. 인산염 완충 식염수를 완전히 제거하십시오.
참고: 20분간의 인산염 완충 식염수 배양은 이 세포주에서 형성되는 견고한 세포 간 결합(tight intercellular junctions)의 분리를 촉진하기 위함입니다. 이 시간은 내부적으로 최적화된 수정 사항입니다. - 세포 단층을 충분히 덮을 정도로 0.25% 트립신-에틸렌디아민테트라아세트산(trypsin–ethylenediaminetetraacetic acid) 용액을 넣으십시오. 세포를 37 °C에서 10분 동안 배양하십시오.
참고: 도립 광학 현미경을 사용하여 세포 박리 상태를 모니터링하십시오. 박리를 돕기 위해 필요한 경우 배양 용기를 가볍게 두드리십시오. - 효소 활성을 중단시키기 위해 트립신-에틸렌디아민테트라아세트산 용액 부피의 약 5배에 해당하는 완전 배양액을 넣으십시오. 현탁액을 가볍게 파이펫팅하여 단일 세포 현탁액을 얻으십시오.
- 세포 현탁액을 15 mL 원심 분리 튜브로 옮기십시오. 25 °C에서 300 × g로 5분 동안 원심 분리하십시오.
- 상층액을 주의 깊게 제거하고 신선한 배양액으로 세포 펠릿을 재현탁하십시오. 현탁액을 부드럽게 분쇄(triturate)하고 도립 광학 현미경 하에서 단일 세포 현탁액 상태인지 확인하십시오.
- 헤모사이토미터(hemocytometer)를 사용하여 세포 수를 세고, 이후 실험에 필요한 밀도로 세포 농도를 조정하십시오. 일반적인 분할 비율은 1:8로 합니다.
참고: 배양 용기의 성장 면적과 그에 해당하는 인산염 완충 식염수 및 트립신-에틸렌디아민테트라아세트산 용액의 부피는 부록 표 1과 부록 표 2를 참조하십시오.
- 퓨로마이신 유도 세포독성 결정
참고: 렌티바이러스 컨스트럭트에 의해 인코딩된 내성 유전자에 따라 항생제를 선택하십시오.- 웰당 100 µL의 완전 배양액이 담긴 96-웰 배양 플레이트에 16HBE14o− 세포를 웰당 2 × 104 cells로 분주하십시오. 세포를 하룻밤 동안 배양하십시오.
- 배양액을 퓨로마이신 최종 농도가 0.5, 1, 2 또는 4 µg/mL인 신선한 배지로 교체하십시오. 24, 48, 72시간 시점별로 별도의 플레이트를 준비하십시오.
- 각 웰에 5 µL의 세포 계수 시약을 넣으십시오. 플레이트를 37 °C에서 1시간 동안 배양하십시오.
참고: 흡광도 측정에 방해가 될 수 있으므로 웰 내에 기포가 생기지 않도록 주의하십시오. - 650 nm를 기준 파장으로 하여 450 nm에서 흡광도를 측정하십시오. 엔드포인트 모드(endpoint mode)로 흡광도를 기록하기 직전에 플레이트를 15초 동안 흔들어 주십시오.
- 식 1을 사용하여 세포 생존율14을 계산하십시오.
여기서:
참고: 처리하지 않은 세포를 대조군으로, 분석 시약이 포함된 세포 없는 배지를 공시료(blank)로 정의하십시오. 48~72시간 이내에 형질전환되지 않은 세포를 완전히 제거하는 가장 낮은 퓨로마이신 농도를 선택하십시오.
- 최적 감염 다중도(MOI) 결정
주의: 렌티바이러스 입자는 등록된 생물안전 2등급(BSL-2) 시설 내의 BSL-2 조건에서 기관의 생물안전 규정에 따라 취급하십시오. 모든 바이러스 조작은 II등급 생물안전 작업대에서 수행하십시오. 바이러스에 오염된 소모품 및 유출물은 생물학적 위험 폐기물로 처리하기 전 최소 1시간 동안 10% 표백제로 덮어 두십시오.
참고: 감염 다중도는 형질전환 효율에 직접적인 영향을 미치므로 최적화가 필요합니다.- 식 2를 사용하여 필요한 렌티바이러스 스톡 부피15를 계산하십시오.
여기서:
참고: 본 프로토콜에 사용된 STAT6 루시페레이스 리포터 렌티바이러스 스톡의 기능적 역가는 5 × 107 transducing units/mL였습니다. 표적 세포 2 × 104개에 대해 MOI 20은 웰당 8 µL의 렌티바이러스 스톡에 해당합니다. 역가가 다른 바이러스 제제의 경우 바이러스 부피를 다시 계산해야 합니다. - 웰당 100 µL의 완전 배양액이 담긴 96-웰 화이트 투명 바닥 플레이트에 16HBE14o− 세포를 웰당 2 × 104 cells로 분주하십시오. 세포가 약 80%의 합류도에 도달할 때까지 하룻밤 동안 배양하십시오.
- 배양액을 5 µg/mL polybrene과 MOI 1, 5, 10, 20의 STAT6 루시페레이스 리포터 렌티바이러스가 포함된 신선한 배지로 교체하십시오. 렌티바이러스를 넣지 않은 비형질전환 모의 대조군(mock-control) 웰을 포함하십시오.
참고: 스톡의 기능적 역가로부터 각 MOI에 필요한 렌티바이러스 부피를 계산하십시오. - 세포를 렌티바이러스 입자와 함께 48시간 동안 배양하십시오. 형질전환 배지를 신선한 배양액으로 교체하고 24시간 동안 추가로 배양하십시오.
- 배양액을 각각 10 ng/mL의 인터루킨-4(interleukin-4) 및 인터루킨-13(interleukin-13)이 포함된 신선한 배지로 교체하십시오. 세포를 24시간 동안 배양하십시오.
- 각 웰에 25 µL의 루시페레이스 분석 시약을 넣으십시오16. 플레이트를 빛으로부터 보호하고 상온에서 20분 동안 배양하십시오.
- 플레이트를 20초 동안 선형으로 흔들어 주십시오. 전체 플레이트 리드(full-plate read)와 게인(gain) 설정 120을 사용하여 엔드포인트 모드로 발광을 측정하십시오.
주의: 최대 신호를 포착하기 위해 루시페레이스 분석 시약을 넣은 후 1시간 이내에 발광을 기록하십시오. 시약 제조사의 안전 및 취급 지침을 따르십시오.
참고: 모든 흡광도 및 발광 측정에 동일한 멀티모드 마이크로플레이트 리더기와 획득 설정을 사용하십시오.
- 식 2를 사용하여 필요한 렌티바이러스 스톡 부피15를 계산하십시오.
- 형질전환된 세포의 선택
- 24-웰 배양 플레이트에 16HBE14o− 세포를 2 × 105 cells/mL로 분주하십시오. 세포를 하룻밤 동안 배양하십시오.
- 배양액을 MOI 20의 STAT6 루시페레이스 리포터 렌티바이러스와 5 µg/mL polybrene이 포함된 신선한 배지로 교체하십시오. 세포를 48시간 동안 배양하십시오.
- 형질전환 배지를 신선한 배양액으로 교체하십시오. 세포를 24시간 동안 추가로 배양하십시오.
- 배양액을 제거하고 1 µg/mL 퓨로마이신이 포함된 신선한 배지를 넣으십시오. 선택 배지를 2일마다 교체하며 세포를 5일 동안 배양하십시오.
- 비형질전환 모의 대조군 웰의 모든 세포가 제거될 때까지 퓨로마이신 선택을 계속하십시오.
참고: 내성 유전자가 발현될 수 있도록 형질전환 후 항생제 선택을 적용하기 전 최소 24시간의 간격을 두십시오.
- 한계 희석법을 통한 단일 세포 클론 분리
- 퓨로마이신으로 선택된 STAT6 리포터 세포를 박리하여 수를 세십시오. 연속 희석을 통해 5 cells/mL의 단일 세포 현탁액을 준비하십시오.
참고: 희석 중 세포 뭉침을 방지하십시오. 필요한 경우 현탁액을 세포 스트레이너(cell strainer)에 통과시키십시오. - 96-웰 배양 플레이트의 각 웰에 세포 현탁액 200 µL를 분주하여 웰당 평균 약 1개의 세포 밀도를 얻으십시오.
- 24시간 이내에 도립 현미경을 사용하여 각 웰을 검사하고 단일 세포가 포함된 웰을 확인하십시오. 두 개 이상의 세포가 있거나 공간적으로 분리된 여러 세포 초점이 있는 웰은 제외하십시오.
- 클론 성장을 확인하기 위해 첫 일주일 동안 선택된 웰을 모니터링하십시오. 배양액을 3일마다 교체하십시오.
- 각 클론을 원래의 96-웰 플레이트에서 약 20일 동안 또는 세포가 합류도에 도달할 때까지 확장 배양하십시오. 각 클론을 순차적으로 6-웰 플레이트로 옮긴 후 T-25 배양 플라스크로 옮기십시오.
참고: 세포를 T-25 플라스크로 옮기기 전 6-웰 플레이트에서 약 6일 동안 배양하거나, 적절한 합류도에 도달했을 때 옮기십시오.
일시 중단 지점: 클론 확장을 계속하거나, 90% 태아 송아지 혈청과 10% 디메틸설폭사이드(dimethyl sulfoxide)가 포함된 1 mL의 동결 보존 배지에 1 × 106 cells/vial 농도로 동결 보존하십시오. - 확장된 각 클론을 96-웰 화이트 투명 바닥 플레이트에 2 × 105 cells/mL로 분주하십시오. 세포를 하룻밤 동안 배양하십시오.
- 배양액을 각각 10 ng/mL의 IL-4 및 IL-13이 포함된 신선한 배지로 교체하십시오. 세포를 24시간 동안 배양하십시오.
- 단계 1.3.6~1.3.7에 설명된 대로 루시페레이스 활성을 측정하십시오. 개별 클론 간의 유도된 리포터 활성을 비교하십시오.
- 세포 계대 수를 늘려가며 루시페레이스 분석을 반복하십시오. 계대 전반에 걸쳐 일관된 사이토카인 유도 리포터 활성을 유지하는 클론을 선택하십시오.
참고: 기초 발광(basal luminescence)이 낮고 연속 계대 동안 일관된 사이토카인 유도 활성 신호를 유지하는 능력이 있는 클론 3을 선택하였습니다.
- 퓨로마이신으로 선택된 STAT6 리포터 세포를 박리하여 수를 세십시오. 연속 희석을 통해 5 cells/mL의 단일 세포 현탁액을 준비하십시오.
2. STAT6 활성 리포터 분석법의 구축 및 검증
참고: 그림 2에서 워크플로의 개요를 확인할 수 있습니다.
- STAT6 활성 리포터 분석법의 검증
- STAT6 리포터 세포를 96-well white clear-bottom 플레이트에 웰당 100 µL의 완전 배지를 사용하여 2 × 105 cells/mL 농도로 분주한다. 세포를 하룻밤 동안 배양한다.
- 배양액을 최종 농도가 각각 10 ng/mL인 IL-4 및 IL-13이 포함된 새 배지로 교체한다. 다음과 같이 선택적 억제제를 동시에 첨가한다: 100 nM AS1517499 (STAT6 억제제), 2.5 µM AC-4-130 (STAT5 억제제), 또는 2.5 µM Stattic (STAT3 억제제).
- 0.1% dimethyl sulfoxide (DMSO)가 포함된 용매 대조군(vehicle control)을 포함한다. 세포를 24시간 동안 배양한다.
- 단계 1.2.3-1.2.5에 기술된 세포 계수 분석법을 사용하여 세포 생존율을 측정한다.
- 단계 1.3.6-1.3.7에 기술된 대로 루시퍼레이스(luciferase) 활성을 측정한다.
- 각 웰의 발광 신호를 해당 세포 생존율로 정규화한다. 정규화된 값을 사이토카인 처리 대조군에 상대적인 값으로 표시한다.
참고: 세포 생존율의 감소는 STAT6 활성과 무관하게 루시퍼레이스 신호를 감소시킬 수 있다. 허용 가능한 세포 생존율을 확인한 후에만 리포터 활성을 해석한다.
- 분석법의 견고성 평가
- 양성 및 음성 대조군 그룹에 대해 각각 21개의 반복 웰을 사용하여 Z′-인자를 계산함으로써 분석법의 견고성을 평가한다.
- 식 3을 사용하여 Z′-인자를 계산한다.
여기서:
참고: Z′-인자가 0.5에서 1.0 사이이면 해당 분석법이 고속 대량 스크리닝(high-throughput screening)에 적합함을 나타낸다.
3. 환경 독성 물질 스크리닝을 위한 STAT6 리포터 분석의 응용
주의: 다환 방향족 탄화수소와 중금속 염은 독성 및 잠재적 발암 물질로 취급하십시오. 적절한 개인 보호 장구를 사용하고, 모든 조작은 인증된 화학 흄 후드 내에서 수행하며, 오염된 물질은 기관의 유해 폐기물 처리 절차에 따라 폐기하십시오.
- 환경 독성물질 스크리닝
- 96-well 화이트 투명 바닥 플레이트의 각 웰에 완전 배양액 100 µL를 사용하여 STAT6 리포터 세포를 2 × 105 cells/mL 농도로 분주한다. 세포를 하룻밤 동안 배양한다.
- 배양액을 본 프로토콜의 최종 농도인 10 µM로 설정한 각 테스트 화합물이 포함된 신선한 배지로 교체하고, IL-4 및 IL-13이 없는 상태에서 세포를 처리한다.
- 0.1% dimethyl sulfoxide를 포함하는 음성 대조군과 각각 10 ng/mL의 IL-4 및 IL-13을 포함하는 양성 대조군을 포함한다. 세포를 24시간 동안 배양한다.
- 단계 1.2.3~1.2.5에 기술된 세포 계수 분석법을 사용하여 세포 생존율을 결정한다.
- 단계 1.3.6~1.3.7에 기술된 방법으로 루시페라제 활성을 측정한다.
- 각 웰의 발광 신호를 해당 세포 생존율 값으로 정규화한다. 정규화된 결과는 음성 대조군에 대한 상대값으로 표시한다.
- 세포 생존율을 80% 미만으로 감소시키는 화합물은 STAT6 리포터 활성 해석에서 제외한다.
참고: 세포 생존율 감소는 STAT6 경로 활성과 무관하게 발광에 영향을 줄 수 있으므로, 세포 독성 조건에서 얻은 리포터 신호는 신뢰할 수 없는 것으로 간주한다.
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결과
안정적 선택(stable selection)을 위한 최적의 puromycin 농도를 결정하기 위해, parental 16HBE14o− 세포에 puromycin의 농도를 점진적으로 높여(0.5–4 µg/mL) 처리하고, 24, 48, 72시간 후에 세포 생존율 분석법을 이용하여 세포 생존율을 평가하였다. Puromycin은 농도 및 시간 의존적으로 세포 생존율을 감소시켰으며, 모든 농도에서 48–72시간 후 생존율이 20% 미만으로 감소하였다(그림 3). 1 µg/mL 농도는 비형질전환 세포를 완전히 제거하는 가장 낮은 농도였으며, 48시간 이내에 잔류 생존 신호를 약 4.5%까지 감소시켰다(p < 0.0001). Puromycin 농도를 더 높여도 세포 생존율의 추가적인 감소는 나타나지 않았다. 따라서 이후 형질전환된 세포의 선택을 위해 1 µg/mL의 puromycin을 선정하였다.
...
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토론
IL-4/IL-13–JAK–STAT6 신호 전달 체계는 중요한 치료 표적일 뿐만 아니라 천식 및 알레르기성 비염을 포함한 알레르기 질환 발병 기전의 핵심 동인입니다22. 본 프로토콜은 STAT6 활성 조절제를 식별하기 위한 간단하고 안정적인 세포주 기반 리포터 분석법을 설명합니다. 이 분석법은 광범위한 환경 화합물의 STAT6 조절 효과를 평가하는 데 적용할 수 있으며, 개념 증명 스크리닝 연구(그림 8)에서 입증된 바와 같이 고속 스크리닝에 용이하게 적용 가능합니다. 루시퍼레이스 리포터와 병행 세포 생존력 분석을 결합함으로써, 이 방법은 화합물로 인한 세포 독성에서 비롯되는 혼란 효과를 최소화하면서 STAT6 경로 조절에 대한 정량적 평가를 가능하게 합니다.
이 방법의 특징은 안정적으로 형질도입된 인간 기관지 상피 16HBE14o− 세포를 사용하는 것으로, 이는 ...
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공개 사항
저자들은 이해관계의 충돌이 없음을 선언합니다.
감사의 글
본 연구는 태국 국립연구위원회(NRCT)(Grant No. N42A680388)의 지원을 받았으며, 본 연구 프로젝트는 마히돌 대학교(전략 연구 기금: 2025)(Grant No. 35)의 지원을 받았습니다. 그림 1과 2는 BioRender.com(Pothipan, P. (2026). https://BioRender.com/h44gy3h)을 사용하여 작성되었습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 0.25% Trypsin-EDTA | Gibco | 25200072 | 세포 해리 시약 |
| 15 mL 원뿔형 원심분리 튜브 | Corning | CLS430791 | 멸균 폴리프로필렌 원심분리 튜브 |
| 16HBE14o- 인간 기관지 상피 세포주 | Nawiya Huipao 박사(태국 송클라 왕립대학교)와 Dieter C. Gruenert 교수(미국 캘리포니아 대학교 샌프란시스코 캠퍼스)의 제공분 | RRID:CVCL_0112 | 인간 기관지 상피 세포주 (계대 배양 35회–40); 마이코플라스마 음성이 확인되었으며, 분화된 기도 상피 형태 및 장벽 특성을 유지하고 있습니다. 참고 문헌: Cozens AL, et al. Am J Respir Cell Mol Biol. 1994;10(1):38–47. |
| 24웰 투명 평저 조직 배양 처리 플레이트 | Corning | 3527 | 세포 배양 플레이트 |
| 6-웰 투명 평저 조직 배양 처리 플레이트 | Corning | 3516 | 세포 배양 플레이트 |
| 96-웰 투명 평저 폴리스티렌 조직 배양 처리 마이크로플레이트 | Corning | 3599 | 세포 생존율 분석 플레이트 |
| 96-well 백색 투명 바닥 폴리스티렌 조직 배양 처리 마이크로플레이트 | Corning | 3610 | 루미네선스 분석 플레이트 |
| AC-4-130 (STAT5 억제제) | MedChemExpress | HY-124500 | 선택적 STAT5 억제제 |
| AS1517499 (STAT6 억제제) | MedChemExpress | HY-100614 | 선택적 STAT6 억제제 |
| 벤조[b]플루오란텐 | AccuStandard | H-128N | 다환방향족탄화수소 |
| 생물안전작업대, 2등급 | Nuaire | NU-543-400E | 무균 세포 배양 절차를 위해 |
| 염화카드뮴 (CdCl2)2) | 시그마 | 202908 | 중금속 화합물 |
| 세포 계수 키트-8 (CCK-8) | MedChemExpress | HY-K0301 | 세포 생존율 분석 |
| 세포 배양 플라스크, 25 cm² (T-25) | Corning | 430639 | 조직 배양 플라스크 |
| 일산화탄소2 배양기 | Nuaire | NU-5710E | ~로 유지됨 37 °C, 5% CO22, 가습 분위기 |
| 디메틸설폭사이드 (DMSO) | 시그마 | D2650 | 용매(최종 농도 0.1%) 및 동결보호제(10%) |
| 소태아혈청 (FBS) | 시그마 | F7524 | 배지 보충제(10%) 및 동결 보존 배지(10%) |
| 혈구계수기 | BOECO | BOE14 | 수동 세포 계수 |
| 倒立 위상차 광학 현미경 | ZEISS | Primovert | 세포 형태 관찰 |
| 루시퍼라제 분석 시스템 (원스텝) | BPS Bioscience | 60690 | 루시페라제 리포터 분석 |
| 염화수은 (HgCl2) | 시그마 | 215465 | 중금속 화합물 |
| 마이크로플레이트 리더 | BioTek | Synergy Neo2 | Gen5 소프트웨어(v3.08.01)로 제어되는 멀티모드 마이크로플레이트 리더/루미노미터. 15분 후 650 nm 참조 파장을 사용하여 450 nm에서 흡광도 측정–20초간 선형 진탕. 20초간의 선형 진탕 후, 검출기 게인을 120으로 설정하여 엔드포인트 모드로 발광을 측정함. |
| 최소 필수 배지 이글 (MEM) | Gibco | 11095-080 | 기초 배양 배지 |
| 황산니켈 (NiSO4) | Tokyo Chemical Industry | N1203 | 중금속 화합물 |
| 미세먼지 (PM) | 미국 국립표준기술연구소 | SRM 2975 | 미세먼지 표준 참조 물질 |
| 페니실린-스트렙토마이신 (100×) | Gibco | 15140122 | 항생제 보충제 (최종 농도 1%) |
| 인산완충생리식염수 (PBS) | Gibco | 18912014 | 세척 완충액 |
| 폴리브렌(Polybrene) | 시그마 | TR-1003-G | 렌티바이러스 형질도입 증강제 |
| 퓨로마이신 | MedChemExpress | HY-B1743A | 안정적 세포 선택을 위한 항생제 |
| 재조합 인간 IL-13 | Thermo Fisher Scientific | A42526 | 자극용 사이토카인 |
| 재조합 인간 IL-4 | Thermo Fisher Scientific | A42602 | 자극용 사이토카인 |
| STAT6 루시퍼레이스 리포터 렌티바이러스 | BPS Bioscience | 78799 | 렌티바이러스 리포터 구조체; 스톡 역가 5 × 107 TU/mL |
| Stattic (STAT3 억제제) | MedChemExpress | HY-13818 | 선택적 STAT3 억제제 |
참고문헌
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