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방법 논문

다종 완보동물 RNA 분리 프로토콜

255 조회수

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DOI:

10.3791/72120

⸱

2026년 9월 1일

 ,  , 
1Biology Department, The University of North Carolina Asheville, 2Department of Biological Sciences, Florida International University, 3Biology Department, The University of North Carolina at Chapel Hill

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 소량의 조직에서 RNA를 분리하여 RNA 시퀀싱 및 상보적 DNA 합성과 같은 후속 응용 분석에 충분한 양의 고품질 RNA를 얻을 수 있도록 설계된 컬럼 기반 RNA 분리 키트를 사용하여 다양한 곰벌레 종으로부터 RNA를 분리하는 절차를 상세히 설명합니다.

초록

물곰(Tardigrades)은 환경적 스트레스에 대한 탁월한 내성으로 잘 알려진 미세 동물입니다. 이 동물들은 건조, 극한의 압력, 저온 및 고수준의 이온화 방사선 환경에서도 생존할 수 있습니다. 하지만 이러한 극한 내성 능력의 기저에 있는 분자적 기제는 아직 완전히 밝혀지지 않았습니다. RNA 시퀀싱, RNA 간섭(RNAi), 박테리아와 같은 시스템에서의 물곰 유전자 이종 발현 등을 포함하여 이러한 기제를 조사하는 데 사용되는 분자 생물학적 접근법들은 제한된 생물학적 시료로부터 고품질의 전령 RNA(mRNA)를 분리하는 과정이 필요합니다. 본 연구에서는 (1) 헤테로타르디그라다(heterotardigrade) 종을 포함한 여러 종에 걸쳐 효과적이며, (2) 체구에 따라 25~200마리 정도의 적은 수만으로 가능하고, (3) 하위 응용 분석에 충분한 양과 품질의 RNA를 얻을 수 있는, 재현 가능한 물곰의 총 RNA 분리 프로토콜을 설명합니다. 본 프로토콜은 적절한 수의 물곰으로부터 효율적인 RNA 회수를 가능하게 하며, 다양한 물곰 종의 스트레스 내성에 대한 분자적 연구를 지원합니다.

서론

곰벌레(Tardigrades)는 건조, 극심한 압력, 극한 온도, 그리고 화학요법 약물이나 전리 방사선과 같은 DNA 손상 유발 인자를 포함하여 다른 동물이라면 견디지 못했을 극심한 스트레스 환경에서 생존하는 능력으로 잘 알려져 있습니다1,2,3,4,5,6,7,8. 최근 몇 년 동안 과학자들은 RNA 시퀀싱, RNA 간섭(RNAi), 그리고 인간 세포 및 박테리아를 포함한 다른 시스템에서의 곰벌레 유전자 이종 발현과 같은 분자 생물학적 접근법을 사용하여 곰벌레의 극단적인 회복력의 근저에 있는 메커니즘을 연구해 왔습니다8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20. 이러한 접근법들은 곰벌레가 어떻게 그토록 극심한 스트레스 내성을 가질 수 있는지에 대한 구체적인 통찰을 제공하는 강력한 도구가 되었습니다8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22. 그러나 곰벌레의 스트레스 내성을 이해하기 위한 이러한 모든 분자 생물학적 접근법은 이 작은 동물로부터 후속 공정에 사용할 수 있을 만큼 충분한 양과 적절한 품질의 RNA를 분리해낼 수 있는 능력에 의존합니다.

이전에 발표된 완보동물 RNA 분리 방법은 Hypsibius exemplaris를 연구하는 연구자들에게 유용함이 입증되었습니다23. 하지만 H. exemplaris에서 이 프로토콜을 재현하려 했을 때, 결과물인 RNA의 농도와 품질이 일정하지 않아 신뢰도가 낮다는 것을 발견했습니다(미발표 데이터). 대안으로 페놀 기반의 RNA 분리 방법이 H. exemplaris, Ramazzottius varieornatus 및 헤테로타디그레이드(heterotardigrade) 종에서 효과적인 것으로 나타났습니다13,21,22,24,25,26. 이 프로토콜은 단일 개체 및 개체 풀(~50마리) 모두에서 후속 공정에 충분한 품질과 양의 RNA를 제공하는 것으로 입증되었습니다. 다만, 이 프로토콜은 사용자가 페놀 함유 시약을 취급해야 합니다. 페놀은 주의 깊은 취급이 필요한 위험 화학 물질이며, 프로토콜을 부적절하게 수행할 경우 페놀이 잔류하여 RNA 순도와 후속 응용 단계에 영향을 줄 수 있습니다. 완보동물 RNA 분리를 위해 이전에 발표된 또 다른 프로토콜은 단일 개체에서 RNA를 분리하는 능력에 집중하고 있습니다27. 이는 정량 PCR(qPCR)과 같은 응용 분야에는 가치 있는 프로토콜이지만27, 동물이 특정 스트레스 요인이나 조건에 어떻게 반응하는지에 대해 보다 전체적인 관점을 얻고자 하는 RNA 시퀀싱과 같은 후속 응용 분야에는 덜 적합합니다.

기존의 RNA 분리 프로토콜들의 이러한 한계로 인해, 완보동물로부터 RNA를 분리하기 위한 대안적 방법들에 대한 연구가 진행되었습니다. 본 프로토콜에서 사용된 컬럼 기반 RNA 분리 키트는 소량의 조직에서 RNA를 분리하도록 시판된 제품입니다. 이 키트는 이전에 후속 RNA 시퀀싱 분석을 위해 곤충 조직에서 RNA를 분리하는 데 사용된 바 있으며, 이는 완보동물과 같이 큐티클을 가진 다른 소형 동물들의 RNA 분리에도 적합할 수 있음을 시사합니다.28본 연구에서는 완보동물을 대상으로 한 컬럼 기반 RNA 분리 키트의 단계별 프로토콜을 설명하며, 완보동물로 본 프로토콜을 수행할 때 주의해야 할 구체적인 사항에 대한 설명을 포함합니다. 본 논문은 6종의 완보동물 종에서 이 프로토콜을 성공적으로 적용했음을 보고합니다.*H. exemplaris*, Milnesium sp., Paramacrobiotus experimentalis, Paramacrobiotus fairbanksi, Paramacrobiotus gadabouti및 이형완보동물(heterotardigrade) Viridiscus celatus). 본 연구는 25마리의 적은 수의 동물로부터도 상당한 품질과 양의 RNA를 얻을 수 있음을 검증하였습니다. 결과물인 RNA 농도 및 품질 데이터의 예시 또한 제공되며, 이는 RNA 시퀀싱(최소 편향, 지수적 라이브러리 증폭 방식) 및 상보적 DNA(cDNA) 합성과 같은 후속 응용 단계에 적합합니다. 본 RNA 분리 프로토콜은 이미 다음과 같은 방사선 내성 메커니즘을 밝히는 데 유용한 것으로 입증되었습니다. H. exemplaris8다양한 완보동물 종에서 이 프로토콜의 성공적인 적용 결과는, 이 방법이 스트레스 내성 기전, 발달 기전 및 진화 과정 연구에 더 광범위하게 적용될 수 있음을 시사합니다.

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프로토콜

무척추동물은 이 요건에서 제외되므로, 다음 프로토콜은 기관 동물 윤리 승인을 필요로 하지 않습니다. 사용된 시약과 장비는 재료 표에 나열되어 있습니다.

1. RNA 분리를 위한 장비 및 구역 준비

  1. RNA 추출 준비를 위해 히트 블록 또는 항온 수조를 42 °C로 켭니다.
  2. 마이크로 원심분리관 랙, 피펫(2 µL, 20 µL, 200 µL, 1000 µL) 및 이에 적합한 크기의 필터 팁을 준비합니다.
  3. 잔류 RNase를 변성시키기 위해 RNase Away, 희석된 표백제 용액(10%) 또는 70% 에탄올로 실험대, 튜브 랙, 피펫 및 팁 박스를 세척합니다.
    참고: 장비나 RNA 분리 작업 구역에 RNase가 과도하게 존재할 경우, 분리 후 RNA가 분해되어 품질이 저하될 수 있습니다. RNase 변성 화학 물질이 충분히 작용할 수 있도록 시간을 두고, 작업을 진행하기 전 해당 구역과 장비를 완전히 건조시켜 이러한 위험을 줄이십시오.
  4. 본 프로토콜의 모든 단계에서 장갑을 착용하고, RNA가 RNase에 의해 분해되는 것을 방지하기 위해 프로토콜 전반에 걸쳐 장갑을 RNase 변성 용액으로 자주 처리하십시오.

2. RNA 분리를 위한 동물 수집

  1. 유리 모세관이 장착된 흡입 튜브 조립 챔버에 연결된 피펫 벌브(그림 1A), Irwin 루프 또는 마이크로피펫을 사용하여, 25~200마리의 동물(종의 크기에 따라 다름)을 배양 접시에서 깨끗한 샘물 적신 접시로 옮겨 비-완보동물 물질(종에 따라 조류 또는 선충, 윤충과 같은 기타 먹이원)의 양을 줄입니다.
  2. 1.5 mL RNase-free 튜브와 페스틀을 준비합니다.
  3. 유리 모세관이 장착된 흡입 튜브 조립 챔버에 연결된 피펫 벌브 또는 Irwin 루프를 사용하여, 동물을 1.5 mL RNase-free 튜브 바닥으로 옮기되 동물을 옮길 때 물이 최대한 적게 섞이도록 각별히 주의합니다.
  4. 4,500 g에서 3분간 원심분리하여 완보동물을 마이크로 튜브 바닥에 펠렛으로 침전시킵니다.
  5. 해부 현미경으로 완보동물이 펠렛된 튜브를 관찰하면서, 20 µL 피펫 또는 RNA를 분리하려는 완보동물보다 개구부가 작은 유리 모세관이 장착된 흡입 튜브 조립 챔버 연결 피펫 벌브를 사용하여 완보동물 펠렛을 건드리지 않고 최대한 많은 물을 조심스럽게 제거합니다. 남겨두어도 적절한 물의 양에 대한 예시는 그림 1B를 참조하십시오.
    참고: 물 제거 후 추출 완충액(XB)을 추가하기 전의 짧은 시간 동안 동물이 건조되지 않도록 소량의 물 층을 남겨두어야 합니다. 동물이 건조되면 분리 후 RNA 품질이 저하될 수 있습니다.
  6. 완보동물이 들어 있는 튜브에 100 µL의 추출 완충액(XB)을 추가합니다.

3. 완보동물의 기계적 파쇄 및 RNA 추출

  1. RNase-free 페스틀을 사용하여, 페스틀로 튜브 바닥을 부드럽지만 단단하게 약 30초 동안 갈아 완보동물을 파쇄합니다. 완보동물을 파쇄하는 데 총 20~30회의 연마 동작이면 충분합니다.
  2. 최대한 많은 양의 액체가 튜브 바닥에 남을 수 있도록 주의하며 튜브에서 페스틀을 제거합니다.
  3. 해부 현미경으로 마이크로 원심분리 튜브의 내용물을 확인하여, 파쇄되지 않은 동물이 남아 있지 않은지 확인합니다.
  4. 혼합물을 쉐이킹 히팅 블록에서 부드럽게 흔들며(300 rpm), 42 °C에서 30분 동안 배양합니다.
    참고: 추출 완충액(XB)은 이 온도에서 RNA가 분해되지 않도록 안정화합니다.

4. RNA 분리 컬럼 컨디셔닝

  1. 추출 배양의 마지막 10분 동안, RNA 수집 및 정제를 위한 컬럼을 조립합니다. 정제 컬럼을 수집 튜브에 넣고 컬럼에 적절한 라벨을 부착합니다.
  2. 250 µL의 Conditioning Buffer (CB)를 컬럼에 직접 첨가합니다.
  3. 실온에서 5분 동안 배양합니다.
  4. 16,000 × g 로 1분 동안 원심분리하고 통과액을 버립니다. 이제 컬럼은 다음 단계의 RNA 상층액을 받을 준비가 되었습니다.
  5. 아래의 6단계를 수행하기 전까지 10x DNase I Reaction Buffer와 Nuclease-Free Water를 냉동고에서 꺼내 완전히 해동합니다.

5. 컬럼에 RNA 결합시키기

  1. 추출 배양 후, 기계적으로 파쇄된 완보(tardigrades)와 추출 완충액(Extraction Buffer, XB)이 들어 있는 튜브를 3,000 × g에서 2분 동안 원심분리합니다.
  2. 새로운 RNase-free 튜브를 준비하고 적절하게 라벨링합니다.
  3. 필터 팁이 장착된 200 µL 피펫을 사용하여, 침전된 완보 큐티클에서 상층액을 조심스럽게 제거합니다. 이때 큐티클 펠렛이 섞이지 않도록 주의하며 상층액만 제거하십시오.
    참고: 큐티클이 다음 단계로 전이되면 컬럼의 물리적 막힘으로 인해 RNA 수율 효율이 낮아질 수 있습니다. 이러한 오류를 방지하기 위해, 현미경으로 상층액이 담긴 피펫 팁을 관찰하여 큐티클이 없는지 확인하십시오. 큐티클이 발견되면 상층액을 다시 튜브에 넣고 원심분리 단계를 반복하십시오.
  4. 상층액을 새로 라벨링한 RNase-free 튜브로 옮깁니다.
  5. RNA가 포함된 튜브에 70% 에탄올 100 µL를 넣고, 피펫팅으로 여러 번 섞어 충분히 혼합합니다. 이 단계에서 에탄올을 추가하면 투명하고 끈적한 필라멘트가 보여야 하며, 이는 상층액에 RNA가 존재한다는 좋은 징후입니다.
  6. 혼합액 전체(200 µL)를 4단계에서 준비한 컬럼에 분주합니다.
    참고: 본 단계 및 이후 단계에서 용액을 컬럼에 분주할 때, 액체를 컬럼 중앙에 분사하고 피펫 팁이 컬럼에 물리적으로 닿지 않도록 주의하십시오. 컬럼에 물리적인 구멍이 생기면 이후 RNA의 품질과 양에 문제가 발생할 수 있습니다.
  7. RNA를 컬럼에 결합시키기 위해 100 × g에서 2분 동안 원심분리한 후, 16,000 × g에서 30초 동안 원심분리하여 통과액(flowthrough)을 제거합니다.

6. DNase I 용액 제조

  1. 용액을 만들기 전 10x DNase I Reaction Buffer와 Nuclease-Free Water를 완전히 해동하십시오.
  2. 각 RNA 분리를 위해, 별도의 1.5 mL microfuge tube에 32 µL Nuclease-Free Water, 4 µL 10x DNase I Reaction Buffer, 4 µL DNase I Enzyme을 혼합하여 40 µL 용액을 준비하십시오. 이 용액은 단계 7.3에서 컬럼에 적용할 때까지 얼음에 보관하십시오.

7. RNA 세척 및 DNase I 처리

  1. RNA가 결합된 정제 컬럼(단계 5.7 참고)에 Wash Buffer 1 (W1) 100 µL를 직접 분주합니다.
  2. 8,000 × g에서 1분간 원심분리하고 통과액을 제거합니다.
  3. 단계 6에서 준비한 DNase I 용액 40 µL를 정제 컬럼에 직접 분주하고, DNA 오염을 제거하기 위해 상온에서 15분간 배양합니다.
  4. 정제 컬럼에 Wash Buffer 1 (W1) 40 µL를 분주하고 8,000 × g 에서 30초간 원심분리합니다.
  5. 정제 컬럼에 Wash Buffer 2 (W2) 100 µL를 분주하고 8,000 × g에서 1분간 원심분리합니다.
  6. 정제 컬럼에 Wash Buffer 2 (W2) 100 µL를 추가로 분주하고 16,000 × g에서 2분간 원심분리합니다. 통과액은 버립니다.
  7. 컬럼을 건조시키기 위해 16,000 × g에서 1분간 원심분리합니다.

8. RNA 용출

  1. 각 RNA 분리를 위해 0.5 mL 튜브(키트에 포함됨)를 준비하고 적절하게 라벨을 부착합니다. 이 튜브는 분리 후 RNA가 담길 튜브가 됩니다.
  2. RNA가 결합 및 세척된 컬럼을 라벨이 부착된 0.5 mL 튜브로 옮깁니다. 컬럼이 튜브에 딸깍 소리가 나며 단단히 고정되어야 합니다.
  3. 튜브의 측면을 보면서 피펫 팁을 컬럼 막 바로 위에 위치시킨 후, 11 µL의 Elution Buffer (EB)를 컬럼 위에 분사하고 실온에서 1분 동안 배양합니다.
    참고: Elution Buffer (EB)를 컬럼 위에 직접 분산시키지 않으면 RNA 회수율이 감소합니다. 컬럼 주변으로 액체 방울이 관찰된다면 Elution Buffer (EB)가 컬럼에 적절하게 분산되지 않았음을 의미합니다. 이 경우, Elution Buffer (EB)가 컬럼 중앙에 직접 분사되도록 하여 단계 8.5의 통과액(flowthrough)으로 이 단계를 반복하는 것을 권장합니다.
  4. 원심분리 시 적절하게 고정될 수 있도록 컬럼이 들어 있는 0.5 mL 튜브를 키트에 제공된 수집 튜브에 넣습니다(그림 2).
  5. 1,000 × g에서 1분 동안 원심분리하여 Elution Buffer (EB)를 분산시킨 다음, 16,000 × g에서 1분 동안 회전시켜 RNA를 용출합니다.
  6. RNA가 담긴 0.5 mL 튜브를 즉시 얼음에 둡니다.

9. 마이크로볼륨 분광광도계를 이용한 RNA 양 및 품질 검증

참고: RNA의 양과 질을 평가하기 위해 다른 방법들을 사용할 수 있습니다. 여기서는 마이크로볼륨 분광광도계를 이용한 방법을 사용합니다. 형광 광도계 또는 마이크로유체 젤 전기영동 도구 또한 사용할 수 있습니다29.

  1. 마이크로볼륨 분광광도계의 페데스탈을 보풀 없는 와이프로 닦아 다른 액체가 남아있지 않도록 깨끗하게 합니다.
  2. 분석을 위해 분광광도계에서 RNA 설정을 선택합니다.
  3. 단계 8.3에서 사용한 용출 완충액(Elution Buffer, EB) 1 µL를 사용하여 분광광도계를 블랭킹(blank)합니다.
  4. 블랭킹 후, 보풀 없는 와이프로 페데스탈에 묻은 용출 완충액(EB)을 닦아냅니다.
  5. RNA가 들어있는 0.5 mL 튜브를 얼음 위에 둔 상태에서, RNA 1 µL를 분광광도계의 페데스탈 위에 피펫팅합니다. 분광광도계의 암(arm)을 내려 샘플의 흡광도를 측정함으로써 분리된 RNA의 양을 정량하고 품질을 평가합니다.
    참고: 후속 응용 단계에서 허용되는 품질 및 양에 대한 자세한 내용은 아래의 “결과(Results)” 섹션을 참조하십시오.

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결과

위에서 언급했듯이, 이 프로토콜의 핵심 단계는 RNA 추출을 위한 추출 버퍼(Extraction Buffer, XB)를 첨가하기 전에 수집된 완보동물로부터 적절한 양의 물을 제거하는 것입니다. 물이 너무 많이 남아 있으면 추출 버퍼(XB)가 희석되어 동물로부터의 RNA 추출 결과가 저하되며(즉, RIN < 7, 260/280 비율 <1.8, 260/230 비율 <1.8 및/또는 농도 <5 ng/µL), 결과적으로 용출 후 RNA 농도와 품질이 감소하게 됩니다. 반대로 물을 너무 많이 제거하면 동물이 빠르게 건조되어 치사율이 높아질 수 있으며, 사망 후 RNase 활성 증가로 인해 RNA 품질이 저하될 수 있습니다. 본 프로토콜을 성공적으로 수행할 수 있도록, 추출 버퍼(XB)를 첨가하기 전 튜브 내 완보동물과 함께 남겨두어야 할 적절한 물의 양을 시각적으로 나타낸 자료가 제공됩니다(그림 1B).

현재까지 ...

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토론

본 프로토콜의 목적은 완보동물의 스트레스 내성 연구를 위한 하위 응용 분석에 적용할 수 있을 만큼 충분한 양과 품질의 RNA를 완보동물로부터 분리하는 것을 돕는 것입니다. 여기에 제시된 프로토콜에서는 추출 버퍼(Extraction Buffer, XB)를 추가하기 전 충분한 수분을 제거하는 단계(단계 2.5), 완보동물의 신체를 파쇄하는 단계(단계 3.1-3.3), 정제를 위해 상층액을 컬럼으로 옮기는 단계(단계 5.3), 그리고 RNA를 용출하는 단계(단계 8.3) 등 사용자가 어려움을 겪을 수 있는 부분들을 명시하였습니다. 이러한 단계 중 어느 하나에서라도 오류가 발생하면 결과 RNA의 농도나 품질이 저하될 수 있습니다. (마이크로 볼륨 분광광도계로 확인했을 때) 결과 RNA 농도가 5 ng/µL 미만인 경우, 사용자는 (1) 더 많은 수의 개체(소형 종의 경우 >100마리, 대형 종의 경우 >50마리)를 사용하여 RNA 분리를 다시 수행하거나, (2) 수분 제거, 완보동물 파쇄 및 용출 단계에 특별히 주의하며 프로...

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공개 사항

저자들은 공개할 사항이 없습니다.

감사의 글

본 연구는 UNC Asheville의 스타트업 펀드(CCH 대상)와 Jason Pienaar(PK의 박사후 지도교수)에게 제공된 NSF 그랜트 2225683의 지원을 받았습니다. 기술적 지원을 제공해 준 UNC High Throughput Sequencing Facility에 감사드립니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1.5 mL Microfuge TubesUSA Scientific1615-5500Seal-Rite 1.5 mL 눈금 표시 마이크로 원심분리 튜브, 내추럴, 폴리프로필렌, 500개/백
70% EthanolVWR71001-654벤치 및 장비 세척용
Arcturis PicoPure RNA Isolation KitFisherKIT0204본 논문에 기술된 분리 프로토콜을 위한 구성 성분이 포함된 키트
원심분리기Eppendorf5405000441Centrifuge 5425, 회전 노브, 비냉장식, Rotor FA-24x2 포함, 120 V/50-60 Hz (US)
Deer Park 생수Any Grocery StoreN/A곰벌레 배양용 배지이자 RNA 분리 전 곰벌레 세척에 사용
해부 현미경ZeissN/AZeiss Stemi 305, 줌 비율 5:1 및 총 배율 8x-40x, transillumination Unit M LED 포함
DNase IFisherFEREN0521Thermo Scientific DNase I, RNase-free (1 U/uL)
필터 팁 10 uLVWR76322-528모든 필터 파이펫 팁 사용 가능
필터 팁 1000 uLVWR76322-154모든 필터 파이펫 팁 사용 가능
필터 팁 20 uLVWR76322-134모든 필터 파이펫 팁 사용 가능
필터 팁 200 uLVWR76322-150모든 필터 파이펫 팁 사용 가능
유리 모세관Fisher50-821-811World Precision Instrument 표준 유리 모세관 - 1B120-6 (6 inch, 외경 1.2 mm, 필라멘트 없음). 이를 화염 상에서 끝이 좁아진 두 개의 유리 모세관으로 뽑아낸 후, 선택한 곰벌레 종을 마우스 파이펫으로 채취하기에 적절한 직경으로 절단하여 사용함.
히팅 블록Eppendorf5382000023Eppendorf ThermoMixer C, 서모블록 제외 기본 장치, 100-130 V/50-60 Hz (US/JP/South America/TW)
High Sensitivity RNA Screen Tape LadderAgilent5067-5581TapeStation 시스템에서 총 RNA의 고감도 분석을 위한 래더
High Sensitivity RNA ScreenTapeAgilent5067-5579TapeStation 시스템에서 총 RNA의 고감도 분석용
High Sensitivity RNA ScreenTape Sample BufferAgilent5067-5580TapeStation 시스템에서 총 RNA의 고감도 분석을 위한 버퍼
미세유체 젤 전기영동 장치AgilentG2991BAAgilent 4200 TapeStation System
마이크로볼륨 분광광도계Fisher13400607Thermo Scientific NanoDrop UltraC FL, 검출기 유형: 2048-element, CMOS Linear Image Sensor, 디스플레이: 10 in. 고해상도 컬러 디스플레이, 지원 언어: 중국어, 영어, 프랑스어, 일본어, 독일어, 광원: Xenon Flash, 스펙트럼 대역폭: 1.8 nm 이하 (Hg 254 nm에서 FWHM), 전압: 12 VDC
마우스 파이펫Millipore SigmaA5177교정된 마이크로 모세관 파이펫용 흡입 튜브 어셈블리
Nuclease-Free WaterFisherFERR0581Thermo Scientific Water, nuclease-free
파이펫 (2.5 uL, 20 uL, 200 uL, 1000 uL)Eppendorf2231300004Eppendorf Research plus, 4-pack
RNase AwayFisher21-402-178Thermo Scientific RNase AWAY 표면 오염 제거제
RNase-Free 튜브 및 페스틀Fisher12-141-368RNA 분리용 RNase-free 튜브 및 페스틀

참고문헌

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