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연구 논문

류웨이 디황 완은 NF-κB 신호를 억제하여 골세포형성과 난소 절제술로 인한 골 손실을 억제합니다

116 조회수

⸱

DOI:

10.3791/72270

⸱

2026년 7월 28일

 ,  ,  ,  , 
1School of Medicine, Nankai University, 2School of Basic Medical Sciences, Zhejiang Chinese Medical University, 3Emergency Medical Center, Ningbo Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, 4The Second People's Hospital of Changzhou, the Third Affiliated Hospital of Nanjing Medical University

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

이 연구는 Liuwei Dihuang Wan(LWDHW)이 LC-MS/MS 분석, 네트워크 약리학, 생체 및 시험관 내 검증을 통해 NF-κB 신호 전달 경로를 억제하여 산골세포 분화와 난소 절제술로 인한 골 손실을 억제함을 입증했습니다.

초록

류웨이디�huang Wan(LWDHW)은 고전적인 전통 중의학 처방으로, 신장 결핍과 관련된 다양한 질환 치료에 널리 사용되며, 폐경 후 골다공증(PMOP)에서 만족스러운 임상 효과를 보였습니다. 그러나 그 약리학적 기전은 여전히 명확하지 않습니다. 이를 해결하기 위해 먼저 LC-MS/MS를 사용하여 LWDHW의 화학 성분을 분석하여 1,615개의 성분을 확인했습니다. 네트워크 약리학은 염증과 NF-κB 신호 전달 경로가 LWDHW가 PMOP에 미치는 영향의 잠재적 치료 기전임을 예측했습니다. 이후 27마리의 암컷 C57BL/6J 마우스를 Sham, Model, LWDHW 그룹에 무작위로 배정하였습니다. 후자의 두 그룹의 쥐는 양측 난소 절제술(OVX)을 받았고, LWDHW 그룹의 쥐들은 8주간 하루 9.75 g/kg의 경구 LWDHW를 받았습니다. 혈청 및 대퇴골 샘플은 효소 연관 면역흡착 분석(ELISA), 마이크로 컴퓨터 단층촬영(μCT), 조직학적 검사 및 면역조직화학(IHC)을 위해 채취되었습니다. 1차 골수 유래 대식세포(BMMs)는 LWDHW로 처리한 후 TRAP 염색과 qRT-PCR을 투여하였습니다. OVX 마우스에서 LWDHW는 골 손실과 뼈 미세구조 악화를 유의미하게 완화했으며, 혈청 β-CTX 수치 감소와 대퇴골 조직의 파반구 수치 감소를 동반했습니다. IHC 염색 결과, LWDHW 처리 마우스의 대퇴 조직에서 모델군에 비해 TNF-α, IL-1β, p-P65의 발현이 현저히 낮아졌습니다. 시험관 내 TRAP 염색은 LWDHW가 BMMs의 RANKL/M-CSF 유도 파반 분화를 억제하고 Ctsk, MMP9, Nfatc1의 발현을 하향 조절하는 것으로 나타났습니다. 웨스턴 블롯 분석 결과, LWDHW 처리 후 BMMs에서 P65, p-P65, IκBα, p-IκBα의 단백질 수치가 유의하게 감소함을 보여주었습니다. 전체적으로 LWDHW는 NF-κB 신호전달 매개 골세포형성을 억제함으로써 폐경 후 골다공증을 완화할 수 있습니다.

서론

폐경 후 골다공증(PMOP)은 골량 손실과 뼈 미세구조 악화를 특징으로 하는 흔한 대사 골 질환입니다. 고령화 인구가 증가함에 따라 PMOP 발생률 증가는 전 세계적인 공중보건 문제로 자리 잡아 폐경 후 여성의 건강을 심각하게 위협하고 있습니다. 중국에서는 PMOP의 전체 유병률이 32.1%에 달합니다. 영향을 받은 사람들은 만성 요통, 척추 변형, 취약 골절과 같은 심각한 합병증에 더 취약합니다 4,5. 현재 FDA 승인 골다공증 치료제로는 비스포스포네이트6, 부갑상선 호르몬67, 데노수맙8이 있으며, 임상 실무에서 널리 사용됩니다. 하지만 장기적인 적용은 다양한부작용으로 인해 제한되는 경우가 많습니다. 따라서 PMOP에 대해 더 안전하고 효과적인 치료제 개발이 시급히 필요합니다. 잠재적 대안 중 한약은 그 효능과 우수한 안전성 프로필로 인해 점점 더 주목받고 있습니다10.

류웨이 디황 완(LWDHW)은 전통 중의학(TCM)의 고전 공식으로, 송나라 고대 문헌 『어린이 질병 치료의 열쇠』에 처음 기록되었습니다. 수천 년 동안 LWDHW는 신장 결핍과 관련된 다양한 질병 치료에 임상 현장에서 널리 사용되어 왔습니다. 중의학의 '신장이 뼈를 지배한다'는 이론에 따르면, PMOP 환자의 골량 손실과 골 악화는 주로 신장 에센스에서 영양 부족으로 인해 발생합니다. 따라서 LWDHW는 PMOP의 임상 관리에 흔히 적용되며, 명확한 치료 효능을 입증했습니다16,17. 그러나 동물 및 임상 연구에서 LWDHW가 항산화18, 항염증19, 항섬유화 활성등 여러 약리학적 효과를 발휘한다는 것이 밝혀졌음에도 불구하고, PMOP에 대한 근본 기전은 여전히 대부분 알려져 있지 않습니다.

뼈 항상성은 파골세포에 의한 골 흡수와 조골세포에 의한 뼈 형성 사이의 균형에 의존합니다. 염증 상태에서 파반 분화와 활동이 증가하면서 이 균형이 깨지면서 골 흡수가 가속화됩니다21. 이 과정에서 NF-κB 경로는 핵심 조절자 역할을 합니다. TNF-α과 IL-1β와 같은 염증 인자는 IκBα의 인산화 및 분해를 유도하여 인산화된 p65(p-P65)의 핵 전위를 촉진할 수 있습니다22. 따라서 Ctsk, Mmp9, Nfatc1 등 하류 파반 특이적 유전자가 활성화되어 파반뼈 형성을 촉진합니다23,24.

네트워크 약리학은 컴퓨터 과학, 약리학, 생물정보학을 통합하는 학제간 분야입니다. 한약의 치료 효과에 근거한 약리학적 기전을 포괄적으로 탐구하는 데 있어 뚜렷한 장점을 보입니다26. 본 연구에서는 네트워크 약리학을 활용하여 LWDHW의 항골다공증 효과에 관여하는 잠재적 생물학적 과정과 신호 전달 경로를 예측하였다. 동시에 LWDHW의 화학 성분은 LC-MS/MS를 사용하여 분석되었습니다. 또한, OVX 마우스 모델을 이용한 생체 내 검증과 1차 골수 유래 대식세포(BMMs)를 이용한 시험관 내 실험을 통해 LWDHW가 PMOP에 대한 약리학적 기전을 더 자세히 조사하였습니다. 작업 흐름은 그림 1에 제시되어 있습니다.

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프로토콜

모든 동물 실험은 저장 중화의과대학 동물윤리위원회(IACUC-202402-07)의 승인을 받았습니다.

LWDHW의 제제 및 LC-MS/MS 분석

LWDHW 조제법은 여섯 가지 한약으로 구성되어 있습니다: 레만니아 글루티노사 (Gaertn.), 코르누스 오피시날리스 (Sieb.), 파에오니아 수프루티코사(Andr.), 디오스코레아에(Thunb .), 포리아 코코스 (Schw.), 그리고 알리스마 오리엔탈레 (Sam.). 이 허브들에 대한 자세한 정보는 표 1에 나와 있습니다. 모든 생약은 중국 항저우에 위치한 저장중화의과대학 제1부속병원에서 공급되었으며, 정제수에서 허브 대 물 비율 0.1kg/L로 끓였습니다. 생성된 수용성 추출물은 여과 후 0.5 g/mL의 작동 용액으로 농축되어 이후 LC-MS/MS 분석 및 동물 실험에 사용되었습니다. 또한, 작동 용액은 세포 실험을 위해 동결 건조 분말로 가공되었습니다.

LC-MS/MS 분석에서 액체 크로마토그래피 조건은 다음과 같았습니다: 이동상 A(수용성)와 이동상 B(유기성)는 각각 양이온 모드의 경우 물에 0.1% 개상, 양이온 모드의 경우 아세토니트릴의 5 mM 암모늄 포름테, 음이온 모드는 아세토니트릴로 구성되었습니다. 총 작동 시간은 8분이었으며, 유량은 분당 0.3 mL, 컬럼 온도는 40 °C, 주입 용량은 2 μL였습니다. 질량분석의 경우, 데이터는 풀 MS-ddMS2 모드로 수집되었으며, 분무 전압은 +3.50 kV(양수)와 –2.50 kV(음수)로 설정되었습니다.

생체 활성 성분 및 LWDHW 예측 대상

여섯 가지 성분 허브의 개별 이름이 전통 중의학 약리학(TCMSP) 데이터베이스에 입력되어 LWDHW의 전체 성분 목록을 얻었습니다. 생체 활성 성분은 이후 경구 생체이용률(OB) 30%, 약물 유사성(DL) 0.18,27, 28, 29, 30의 약물동학적 매개변수≥≥ 스크리닝되었습니다. 생체 활성 성분의 해당 단백질을 확인하여 UniProt에 제출하여 표준화된 유전자명을 확보했으며, 이는 LWDHW의 최종 유전자 표적으로 정의되었습니다.

LWDHW와 PMOP의 목표 중복

PMOP와 관련된 유전자 표적은 2024년 10월 2일 GeneCards 및 DisGeNET 데이터베이스에서 "폐경 후 골다공증" 키워드를 검색하여 검색하였습니다. 표적은 DisGeNET에서 >0.1, GeneCards에서 >10의 점수 임계값을 사용하여 필터링되었으며, 중복된 항목은 제거하여 중복되지 않은 PMOP 관련 유전자 집합을 얻었습니다. 이후 LWDHW의 허브 유래 표적과 PMOP 관련 표적을 Venny 온라인 도구에 도입하여 LWDHW와 PMOP 간 겹치는 표적을 나타내는 벤 다이어그램을 생성했습니다.

유전자 온톨로지(GO) 및 신호전달 경로 풍부화 분석

LWDHW와 PMOP 간 겹치는 표적들은 DAVID 데이터베이스를 이용한 GO 농축 분석을 수행하였습니다. 회수된 GO 용어들은 세포 구성 요소, 분자 기능, 생물학적 과정(BP) 세 가지 범주로 분류되었습니다. FDR < 0.01을 필터링한 후, 상위 30개의 BP 용어가 접힘 풍부도의 내림차순으로 버블 다이어그램으로 나열되었습니다.

다음으로, 겹치는 표적들은 교토 유전자 및 유전체 백과사전(KEGG)과 메타스케이프 데이터베이스에 입력되어 신호전달 경로 풍부 분석을 수행하였습니다. KEGG와 Metascape 데이터베이스에서 얻은 풍부화된 경로는 해당 표적 수에 따라 내림차순으로 순위가 매겨졌고, 각 데이터베이스의 상위 25개 경로는 막대 차트로 표시되었습니다.

네트워크 건설

Cytoscape에서는 "포뮬러-허브-성분-표적-질병" 및 "표적-경로" 네트워크가 구성되어 구성 요소 간 상호관계를 시각화하였습니다. 중복되는 표적을 STRING 데이터베이스에 입력하여 단백질-단백질 상호작용(PPI) 네트워크를 생성했습니다. 네트워크 내 허브 타깃은 도수 중심성(DC), 간도 중심성(BC), 근접성 중심성(CC) 등 위상학적 특징을 기반으로 스크리닝하여 식별되었습니다.

동물 그룹화, OVX 유발 골다공증 모델 및 약물 개입

저장 중화의과대학 동물실험센터(저장주 항저우)에서 총 27마리의 암컷 C57BL/6J 마우스(2개월, 22 ± 2g )를 제공하였습니다. 모든 동물은 12시간의 밝고 어두운 주기를 가진 특정 무병원체(SPF) 환경에서 사육되었으며, 대기 온도는 25°C, 습도는 40%에서 60% 사이였으며, 음식과 물은 자유롭게 이용할 수 있었습니다. 1주일간의 적응적 급식 후, 쥐들은 무작위 숫자표를 사용해 세 그룹(n=9개)으로 무작위로 배정되었습니다: Sham, Model, LWDHW. 모델 그룹과 LWDHW 그룹의 쥐들은 PMOP 모델을 확립하기 위해 양측 난소 절제술(OVX)을 받았고, 샴 그룹은 동등한 부피의 세포 지방 조직을 절제하는 가짜 수술을 받았습니다. 수술 후 이틀째부터 LWDHW 그룹의 쥐들은 매일 9.75 g/kg/일(체면적에 따른 인간 등가용량에서 환산) LWDHW 작업 용액을 경구 투여받았으며, 모델 그룹과 샴 그룹은 동일한 양의 식염수를 투여하였다. 혈청 및 대퇴 조직을 포함한 생물학적 표본은 투여 후 8주 후에 수집하여 후속 분석을 수행하였습니다. 실험 기간 동안 어느 그룹에서도 예상치 못한 사망이나 사망은 발생하지 않았습니다.

혈청 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA)

후안과 신경총에서 전혈을 채취하여 1000 x g 에서 4 °C에서 15분간 원심분리하여 혈청을 얻었습니다. 제조사 프로토콜에 따라 해당 ELISA 키트를 사용해 혈청 농도인 Osteocalcin(OCN)과 β-C-말단 1형 콜라겐(β-CTX) 텔로펩타이드를 측정하였습니다.

μCT와 생체역학 분석

대퇴골 샘플은 고해상도 마이크로 컴퓨터 단층촬영(μCT) 장비로 10 μm 등방 해상도로 스캔되었습니다. 원위 대퇴골의 3차원(3D) 미세구조는 NRecon 소프트웨어를 사용해 획득된 이미지를 바탕으로 재구성되었습니다. 이후 원위 대퇴골의 관심 영역(ROI) 내에서 골밀도(BMD, g/mm3), 골량 분율(BV/TV, %), 대망 두께(Tb.Th, mm), 소목 수(Tb.N, 1/mm) 등 다음과 같은 뼈 미세구조 매개변수가 정량화되었습니다.

대퇴골 샘플의 생체역학적 특성(그룹당 n = 3개)은 축-비틀림 피로 시험 시스템을 이용한 3점 굽힘 시험을 통해 평가되었습니다. 구조적 파손이 발생할 때까지 분당 2mm의 일정한 변위율로 중간극단에 압축 하중이 가해졌다. 최대 부하(N)는 시스템 소프트웨어에 의해 자동으로 기록되었습니다.

조직형태학, 면역조직화학(IHC), 면역형광(IF) 염색

4% 파라포름알데히드 고정, 14% EDTA 용액에서 탈석화, 그리고 단계별 에탄올 시리즈를 통한 탈수 과정을 거친 후, 대퇴골 샘플은 앞서 설명한31번과 같이 3μm 두께의 파라핀 조각으로 처리되었습니다. 절편들은 형태학적 평가를 위해 Alcian Blue Hematoxylin(ABH)/Orange G로 염색되었습니다. OsteoMetrics 소프트웨어를 사용하여 원위 대퇴골 골단의 척추골 부위의 정량적 분석이 수행되었습니다.

간과 신장 표본은 고정되어 파라핀에 박힌 후 4 μm 조각으로 절단되었다. 정기적인 탈파라핀화 및 재수화 후, 절편들은 헤마톡실린과 에오신으로 염색되었습니다. 조직학적 검사는 광학 현미경으로 수행되었습니다.

IHC 및 IF 분석은 정해진 절차에 따라 파라핀 삽입 절편에 대해 수행되었습니다. 간략히, 항원 회취는 60°C에서 0.01 M 시트레이트 완충제에 4시간 동안 인큐베이팅하여 수행되었습니다. 절편은 4°C에서 ALP(1:300), IL-1β(1:500), TNF-α(1:500), p-P65(1:300) 등 1차 항체와 함께 하룻밤 배양했습니다. 2차 항체와 함께 20분간 인큐베이팅한 후, 절편을 IHC에 대해서는 디아미노벤지딘(DAB) 용액과 헤마톡실린 카운터 스테인에 노출되거나, IF에서는 핵 표지를 위해 DAPI 염색을 했습니다. 양성 염색 정량을 위해, 샘플당 3개의 조직 절편 각각에서 무작위로 4개의 필드를 채취했습니다. IHC 염색에서는 평균 광 밀도가 Image-Pro Plus 소프트웨어를 사용하여 산출된 통합 광 밀도(IOD)와 해당 공동면적의 비율로 정의되었습니다. IF 염색에서는 양성 염색 면적을 현장 면적에 정규화하여 백분율로 표현했으며, 동일한 소프트웨어로 정량화가 수행되었습니다.

1차 골수 대식세포(BMM) 배양 및 세포 계수 분석

2개월 된 C57BL/6 마우스의 대퇴골과 경골에서 인산염 완충 식염수(PBS)로 골수 세포를 세척하였습니다. 생성된 셀 현탁액은 70 μm 체를 거쳐 200 x g 에서 5분간 원심분리했습니다. 세포 펠릿은 10% 태아 소 혈청이 포함된 α-MEM 완전 배지에 재현탁되었습니다. 5% CO₂ 대기에서 37°C에서 24시간 배양한 후, 비부착 세포를 제거했습니다. 대식세포 분화를 유도하기 위해, 부착 세포는 50 ng/mL 대식세포 콜로니 자극인자(M-CSF)와 40 ng/mL RANKL을 포함한 배지에서 5–7일간 배양하여 성숙한 BMM이 관찰되었습니다.

BMM은 3 x 104 셀/웰로 96웰 플레이트에 도판되었습니다. LWDHW 구배 농도로 24시간 처리한 후, BMMs는 10% Cell Counting Kit-8(CCK-8) 작동 용액과 함께 37°C에서 1시간 동안 배양하였습니다. 각 웰의 흡광도는 마이크로플레이트 리더기를 사용해 450nm 거리에서 측정되었습니다.

1차 BMMs에 대한 정량적 유전자 발현 분석

기생 모미는 6cm 접시에 3 x 106셀 밀도 로 씨앗을 심었습니다. 500 및 1,000 μg/mL LWDHW로 24시간 처리한 후, 제조사 지침에 따라 RNA-신속 정제 키트를 사용해 BMM에서 총 RNA를 추출하였습니다. 분광광도계를 통해 정량화된 후, 총 RNA 500 ng가 cDNA로 역전사되었습니다. 정량적 실시간 PCR(qRT-PCR)은 유전자 특이적 프라이머(표 2)를 사용하여 수행되었으며, PCR 사이클 조건은 다음과 같았습니다: 95°C에서 초기 변성은 30초, 95°C에서 5초, 60°C에서 30초간 40주기. 유전자 발현 수준은 2ΔΔCt 방법으로 분석되었으며, 내부 참조 유전자는 GAPDH였습니다.

1차 BMM에 대한 서부 블롯 분석

6cm 접시에 3 x 106 세포를 접시에 접시에 접시한 후, BMM은 다양한 중재를 받고 RIPA 용해 완충제로 얼음 용해했습니다. 총 단백질은 BCA 단백질 분석 키트로 수집 및 정량화되었습니다. 단백질 샘플(레인당 30 μg)은 SDS-PAGE로 12.5% 폴리아크릴아마이드 겔에 분리되어 0.2 μm PVDF 막에 옮겼습니다. 20분간 차단한 후, 막을 다음 1차 항체인 P65(1:1000), p-P65(1:1000), IκBα(1:1000), p-IκBα(1:1000), β-액틴(1:1000)과 함께 4°C에서 하룻밤 동안 인큐베이팅했습니다. 다음 날, 막을 2차 항체와 함께 실온에서 1시간 배양하였습니다. 단백질 밴드는 ECL 화학발광 탐지 키트를 사용해 시각화하고 자동 화학발광 영상 분석 시스템으로 캡처하였습니다.

대퇴부 조직과 초기 모혈관(BMM)의 TRAP 염색

대퇴골 조직 절편과 BMMs는 1 x 105 세포/웰 24웰 플레이트에 부착되었으며, 제조사 프로토콜에 따라 타르트레이트 내성 인산효소(TRAP) 염색 키트를 사용했습니다. 조직 절편에서 쇄골로 덮인 소엽뼈 표면(Oc.S/BS)과 BMM 배양에서 파반 형성 부위는 Image-Pro Plus 소프트웨어를 사용해 정량화하였습니다.

통계 분석

모든 데이터는 평균 ± 표준편차로 제시되었습니다. SPSS에서는 일원 ANOVA와 더넷 검정을 통계 분석에 사용했습니다. *p < 0.05와 **p < 0.01은 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.

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결과

LC-MS/MS로 분석된 LWDHW의 화학 성분

LWDHW 수용액의 화학 프로파일은 LC-MS/MS 분석을 통해 특성화되었습니다. 총 1615개의 성분이 확인되었으며, 이 중 968개는 양의 이온화 모드에서, 647개는 음의 이온화 모드에서 검출되었습니다(그림 2A). 각 이온화 모드의 상위 10개 성분에 대한 세부 내용은 그림 2B, C에 나와 있습니다.

네트워크 약리학을 이용한 LWDHW의 PMOP 치료 표적 예측

LWDHW가 PMOP에 대해 잠재적 치료 표적을 예측하기 위해 네트워크 약리학...

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토론

전 세계 인구 고령화로 인해 PMOP는 심각한 전 세계 건강 문제로 자리 잡았으며, 매년 수백만 명의 여성에게 영향을 미치고있습니다. 현재 항골다공증 약물의 부작용을 고려할 때, 더 안전하고 효과적인 치료 전략을 개발하는 것이 필수적입니다. LWDHW는 한의학에서 고전적인 신장 강화 제로, 다양한 골질환 치료를 위한 대체의학으로 사용됩니다37,38. 임상적 증거는 PMOP환자에서 골량 증가에 효과가 있음을 입증했으나, 정확한 작용 기전은 명확하지 않습니다. 본 연구에서는 OVX 마우스에서 LWDHW의 골 보호 효과를 확인하고, 네트워크 약리학과 동물 및 세포 검증을 결합한 통합 접근법을 통해 NF-κB 신호를 억제하여 LWDHW가 골세포 매개 골 흡수를 억제함을 밝혔습니다.

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공개 사항

모든 저자는 경쟁하는 재정적 또는 비금융적 이해관계가 없음을 선언합니다.

감사의 글

이 연구는 저장성 자연과학재단(ZCLQN25H2701)의 지원을 받았습니다.

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재료

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이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
0.01 M citrate bufferSolarbioC1010IHC 및 IF 염색을 위한 장골 절편의 항원 재추출에 사용, 프로토콜 단계 10
0.2 μm PVDF membranes BioRad1620177SDS-PAGE에서 멤브레인으로의 단백질 전달을 위한, 프로토콜 단계 13
12.5% polyacrylamide gelsEpizyme BiotechPG113프로토콜 단계 13에서 단백질의 SDS-PAGE 분리
ALP antibody ARIGOARG57422프로토콜 단계 10에서 장골 절편의 IHC 검출
Automatic Chemiluminescence Image Analysis System Tanon 5200프로토콜 단계 13에서 웨스턴 블롯 밴드 시각화
Axial-Torsion Fatigue Testing System Instronmodel 5569R1412프로토콜 단계 9에서 장골 샘플의 생체역학 테스트
BCA Protein Assay KitBeyotimeP0010S프로토콜 단계 13에서 웨스턴 블롯 전의 단백질 정량화
CCK-8BeyotimeC0039프로토콜 단계 11에서 BMM의 세포 생존율 측정
Cytoscape해당사항 없음해당사항 없음버전 3.8.0
DAVID 데이터베이스해당사항 없음해당사항 없음버전 6.8; https://david.ncifcrf.gov/home.jsp
DisGeNET 데이터베이스해당사항 없음해당사항 없음https://www.disgenet.org/
ECL Chemiluminescence Detection KitVazymeE411-04프로토콜 단계 13에서 웨스턴 블롯 신호의 화학 발광 검출
OCN ELISA 키트MEIMIANMM-0551M1프로토콜 단계 8에서 혈청 골칼시토닌 수치 측정
β-CTX ELISA 키트MEIMIANMM-44858M1프로토콜 단계 8에서 혈청 β-CTX 수치 측정
GeneCards 데이터베이스해당사항 없음해당사항 없음https://www.genecards.org/
Green Premix Ex Taq II FASTTakaraCN830A프로토콜 단계 12에서 qRT-PCR 증폭
고해상도 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 (μCT) 장비BrukerSkyscan 1176프로토콜 단계 9에서 장골 뼈 미세구조의 고해상도 μCT 이미징
IL-1β 항체 BIOSSbs6319R프로토콜 단계 10에서 장골 절편의 IHC 검출
IκBα항체CST4812프로토콜 단계 13에서 웨스턴 블롯 검출
Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) 데이터베이스 해당사항 없음해당사항 없음https://www.kegg.jp/
M-CSFAMIZONAAMK1001-S1프로토콜 단계 11에서 BMM 분화 유도
Metascape 데이터베이스해당사항 없음해당사항 없음https://metascape.org/
Orbitrap Exploris 120 Thermo Fisher ScientificBRE725531프로토콜 단계 2에서 LWDHW의 LC-MS/MS 분석
P65 항체CST8242프로토콜 단계 13에서 웨스턴 블롯 검출
p-IκBα 항체CST2859프로토콜 단계 13에서 웨스턴 블롯 검출
p-P65 항체CST3033S프로토콜 단계 13에서 웨스턴 블롯 검출
p-P65 항체Suzhou Ruiying RLP0187프로토콜 단계 10에서 장골 절편의 IHC 검출
PrimeScript RT Reagent Kit TakaraRR047A프로토콜 단계 12에서 qRT-PCR 분석을 위한 BMM의 총 RNA 역전사
QuantStudio 5 시스템Applied BiosystemsA28573프로토콜 단계 12에서 파골세포 마커 유전자의 qRT-PCR 분석
RANKLAMIZONAAMK1001-S1프로토콜 단계 11에서 BMM 분화 유도
RIPA 용해 완충액Epizyme BiotechPC101프로토콜 단계 13에서 BMM의 총 단백질 추출
RNA-Quick Purification Kit TransGen BiotechER501-01-V2프로토콜 단계 12에서 BMM의 총 RNA 추출
SPSS 소프트웨어 IBM버전 26

참고문헌

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  6. Tamechika S, Ohmura S, Maeda S, Naniwa T. Efficacy of denosumab on bisphosphonate-treated osteoporosis and osteopenia in systemic rheumatic disease patients receiving glucocorticoids. J Bone Miner Metab. 2023;41(2):203-11.
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