프로그래밍 풀러와 패치 - pipettes와 샤프 전극을 만들기

Summary

이 동영상은 전기 생리학에 대한 패치 pipettes과 날카로운 전극을 만들 수있는 프로그램 풀러를 사용하는 방법을 보여줍니다. 동일한 절차는 주사 바늘을 포함한 유리 다양한 도구를 만드는 데 사용할 수 있습니다.

Abstract

유리 microelectrodes는 (또한 pipettes라고도 함) 수십 년 동안 전기 생리학의 일하는 말이되어 왔습니다. 오늘날과 같은 pipettes은 프로그램 풀러를 사용하여 유리 모세관에서 만들어집니다. 이러한 악기 열 금속 필라멘트 또는 레이저와 중력, 모터 또는 둘 모두를 사용하여 유리를 그릴 중 하나를 사용하여 모세관. 세포내 레코딩을위한 날카로운 전극은 열, 중력, 그리고 모터의 조합을 사용하는 동안 패치 - 클램프 녹음 Pipettes은 단 열과 중력을 이용하여 형성됩니다. 세포내 기록 pipettes를 만들기 위해 사용되는 절차는 Xenopus의 oocytes에 cRNA 분사를 포함한 다양한 어플 리케이션을위한 주사 바늘을 만들기 위해 사용하는 것과 비슷합니다. 좁은 유리 세포 기록 (외경 = 1.0 ㎜)에 사용되는 동안 일반적으로, 모세관 유리에 직경 <1.2 mm은 패치 클램프 녹음 pipettes을하는 데 사용됩니다. 각 도구에 대한, 풀러가 약간 다르게 프로그램입니다. 이 비디오는 사전에 설립 풀러 프로그램을 사용 기록 pipettes 두 가지를하는 방법을 보여줍니다.

Protocol

풀링 pipettes

풀러 등 서터 P - 97 플라밍 / 브라운으로 microelectrode를 사용하여 약 10-20 pipettes 세트를 가져옵니다.

1. 당신의 모세관 유리를 선택합니다. 우리는 borosilicate 모세관 (서터 BF150 - 110 - 10, 1.5mm 외경, 내경 1.1mm, 길이 10cm)을 사용합니다. 그것이 깨끗하고 먼지가 무료로 남아 있도록 신중하게 유리를 저장합니다.
2. 당기는 프로그램을 디자인합니다. 우리는 내림차순 열과 속도의 각 단계에서, 그리고 마지막 단계에있는 작은 당겨와 5 단계 프로그램을 사용합니다. 서터의 피펫 요리책은 적합한 프로그램을 개발하기위한 훌륭한 레퍼런스입니다.
3. 개방 직경과 매끄러운를 결정하는 현미경 피펫 팁을 검사합니다. 거친 고르지 또는 불규칙 조언을​​ 폐기하십시오. 좋은 당기는 프로토콜이가 드문 있도록해야합니다. 표준 패치 - 클램프 녹음, 팁 구멍은 직경 1-3 미크론해야합니다. 가파른 테이퍼 (뭉툭한 끝)은 같은 오프닝 직경에 대한 저항을 낮은 발생합니다. 모양과 크기가 압력 연마에 의해 수정할 수 있습니다.

소방 연마 pipettes

1. 발 ....

Discussion

프로토콜 그림 여기에 전기 생리학 실험실에서 일상 사용되고 또한 세포 및 동물 주입 바늘을하는 데 사용됩니다. 프로그램 풀러와 함께, 그것은 사용의 다양한 pipettes를 만들기 위해 쉽습니다. 관심과 관리를 통해 귀하의 풀러의 필라멘트는 1 년 이상 지속됩니다. 실험과 함께 행운을 빕니다.

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
마이크로 피펫 풀러	기기	Sutter Instrument Co.	P-97	또는 이와 유사한 기기(예: Sutter P-87 또는 P-2000)
유리 모세혈관	시약	Sutter Instrument Co.	BF150-86-10	또는 유사한 모세관 유리. 피펫을 더 쉽게 주입하려면 유리 필라멘트가 있는 모세관을 사용하십시오.