박테리아 콜로니에서 군집 DNA 추출

JoVE 과학 교육
Environmental Microbiology
JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다.  전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
JoVE 과학 교육 Environmental Microbiology
Community DNA Extraction from Bacterial Colonies

28,536 Views

09:59 min
April 30, 2023

개요

출처: 이안 페퍼 박사와 찰스 게르바 박사의 연구소 – 애리조나 대학교
데모 저자: 루이사 이크너

토양 내의 미생물 지역 사회에 대한 전통적인 분석 방법은 일반적으로 선택적 및 차동 매체 또는 직접 카운트 분석에 희석 및 도금 방법론을 활용하는 문화적 분석과 관련이 있습니다. 직접 카운트는 존재하는 박테리아의 총 수에 대한 정보를 제공하지만, 지역 사회 내에 존재하는 인구의 수 또는 다양성에 대한 정보를 제공하지 않습니다. 판 수는 총 문화 또는 선택 된 문화 인구의 열거를 허용하고, 따라서 존재하는 다른 인구에 대한 정보를 제공합니다. 그러나 토양 박테리아의 1% 미만이 쉽게 배율로 나오기 때문에 문화 정보는 그림의 한 조각만 제공합니다. 문화가 될 수 있는 공동체의 실제 분수는 문화적 수에 따라 선택된 매체에 따라 달라집니다. 단일 매체는 특정 매체에 가장 적합한 채우기를 선택합니다.

최근 몇 년 동안, 토양 샘플에서 추출 된 지역 사회 DNA를 연구의 장점이 명백해지고있다. 이 비문화 기반 접근 방식은 문화 기반 접근 방식보다 존재하는 실제 커뮤니티를 보다 더 대표하는 것으로 생각됩니다. 존재하는 인구의 모형에 관하여 정보를 제공하는 것 이외에, 이 접근은 또한 그들의 유전 잠재력에 관하여 정보를 제공할 수 있습니다. 다른 기술과 마찬가지로 DNA 추출로 얻을 수 있는 데이터에는 한계가 있습니다. 따라서 많은 연구자들은 현재 직접 및 문화적 수와 함께 DNA 추출을 사용하여 환경 샘플에서 얻은 데이터를 최대화합니다.

Principles

Procedure

1. 세균 성 지역 사회 DNA 추출 절차를 시작하려면 체질 토양 100 g의 무게를 측정합니다. 폴리 프로필렌 용기에 이것을 추가하고, 토양 매트릭스에서 박테리아의 방출을 촉진하기 위해 EDTA로 개정 된 트리스 버퍼로 구성된 추출 버퍼 100 mL을 추가 한 다음 손으로 흔들어. 다음으로, 유리 구슬 의 100 g의 무게, 믹싱 용기에 추가합니다. 15분 동안 비드 구타 장치 또는 기계식 손목 동작 셰?…

Applications and Summary

배양 된 식민지에서 또는 토양에서 추출 된 지역 사회 DNA는 샘플 내에서 원래 박테리아의 특성화를 허용하는 생물 정보학 및 “omic”접근 방식을 받을 수 있습니다. omic 접근은 metagenomics를 포함합니다 – 16S rRNA 시퀀싱을 통해 지역 사회 내의 “누구”의 결정. 이것은 지역 사회 내의 다양성에 대한 추정을 제공합니다.

원래 토양 샘플에서 세균 세포의 수를 계산할 수도 있다. 지역 ?…

내레이션 대본

1. 세균 성 지역 사회 DNA 추출 절차를 시작하려면 체질 토양 100 g의 무게를 측정합니다. 폴리 프로필렌 용기에 이것을 추가하고, 토양 매트릭스에서 박테리아의 방출을 촉진하기 위해 EDTA로 개정 된 트리스 버퍼로 구성된 추출 버퍼 100 mL을 추가 한 다음 손으로 흔들어. 다음으로, 유리 구슬 의 100 g의 무게, 믹싱 용기에 추가합니다. 15분 동안 비드 구타 장치 또는 기계식 손목 동작 셰?…