Name: Zebrafish 태아의 mRNA와 Morpholino의 안티 센스 Oligonucleotides의 Microinjection. (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-07T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 33 s
Description: 배우세요 제브라피시 태아에 mRNA와 morpholino를 마이크로인젝션하는 기법으로 유전자 발현 조절 및 발달생물학 연구를 수행하는 방법. 이 기술은 신경과학과 유전학 분야에서 유전자 기능을 연구하는 데 필수적입니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 ZS에 NIH와 PKD 기초에 의해 지원되었다. 모든 동물 실험은 예일 동물 자원 센터 (YARC) 및 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC) 지침에 따라 실시되었다.

1 부 : micropipettes의 작성, 그리고 microinjection 챔버 플레이트 <ol><li> 난방 및 micropipette의 끌어당기는 장치 borosilicate 유리 모세관 튜브 (세계 정밀 계측기, 주식 회사, 1B100 - 4) 당기 (셔터 인 스트 루먼트 주식 회사, 플라밍 / 브라운 P - 97)에 의해 micropipettes를 조작. 점토 또는 접착 테이프의 소량 위에는 배양 접시에 보관하십시오. </li><li> (같은 &#39;Zebrafish 도서 &quot;에서 설명)를 주사하는 동안 태아를 들고위한 쉬운 방법으로 될 것입니다 쐐기 모양의 골짜기로 성형 1X E3 중간 플레이트에서 1.5 % 아가로 오스를 (미국 Bioanlytical, 주식 회사, AB00972 - 00500) 부어 1. 한천 챔버 플레이트 4 º C.에서 사용하고 저장하기 전에 응고하자 </li></ol> 2 부 : RNA의 준비 유전자 기능 연구에 대한 하나의 강력한 접근 방식은 zebrafish 배아의 체외 베꼈는데 덮인 RNA에 microinject하는 것입니다. 뒤덮힌 RNA는 CAP 아날로그의 존재에 의한 생체내에있는 진핵세포 mRNAs와 비슷하게 동작합니다. Zebrafish 연구자들은 일상적으로 관심이 자신의 유전자를 overexpress 또는 misexpress이 방법을 활용합니다. 이 예제에서 우리는 EGFP - 태그 사본을 microinject하고 성공적인 주사에 대한 눈에 띄는 판독으로 살고 전체 - 배아 GFP 표현을 사용합니다. <ol><li> 관심의 사본에 체외 CAP RNA의 전사 반응을 수행합니다. 우리가 실험실에서, 우리는 정기적으로 pCS2 + 벡터에 관심이 cDNA를 삽입하고 mMessage mMachine SP6 키트 (앰비온, 주식 회사, AM1340)를 사용 덮인 RNA의 대량의 체외 합성 반응을 수행합니다. </li><li> RNeasy 미니 키트 (Qiagen, 주식, 74104)를 통해 그것을 실행하거나 페놀에 의해 RNA 샘플을 정화 : 클로로포름 추출 및 이소프로판올 석출합니다. </li><li> 신중하게 사용하기 위해 준비까지 -80 º C에서 RNA의 준비와 저장소의 농도를 결정합니다. </li><li> 주사 당일, 가볍게 RNA 샘플, 소용돌이를 해동하고 간단히 스핀 다운. </li><li> 0.050 % 페놀 레드 (시그마 - 알드리치 (주), P0290) - 살균 물, 0.025의 최종 농도와 함께 작동하는 솔루션을 준비합니다. 페놀 레드는 배아로 솔루션의 주입에 대한 눈에 띄는 표지 역할을합니다. 이 문서에서는, 우리는 0.050 % 페놀 레드 100 NG / UL EGFP의 mRNA의 작업 솔루션을 준비합니다. </li><li> -80 ° C.에 얼음과 반환 RNA 재고 작업 샘플을 보관 </li><li> 경우이 샘플을 주입 준비 4 부로 진행합니다. </li></ol> 파트 3 : morpholino의 작성 Morpholino 안티 센스 oligonucleotides 널리 타겟 단백질의 번역을 차단하거나 사전 mRNA의 splicing 2,3를 수정하여 유전자 발현을 수정하는 데 사용됩니다. zebrafish에 Morpholinos는 유전자 기능을 쓰러뜨린하여 강력한 반대 유전학의 도구로 제공하고 있습니다. 이 문서에서는, 우리는 pkd2의 translational 개시 사이트 (5&#39; - AGGACGAACGCGACTGGAGCTCATC - 3 &#39;)를 타겟으로하는 morpholino oligo를 microinject 것입니다. 이전에 설립 작업을 바탕으로, 우리는 주입된 배아가 phenotypically pkd2 돌연변이 물고기 4 모방 것으로 기대합니다. <ol><li> 우리는 일상적으로 특별히 진 도구에서 관심의 유전자, LLC (필로 매스, OR)을위한 morpholino oligo 300 nmol 주문. </li><li> 3 MM 주식 솔루션을 100 UL 멸균 물을 추가합니다. 사용을위한 준비까지 -20 ° C에서 나누어지는 솔루션 및 저장합니다. </li><li> 주사 당일, 65에서 morpholino 솔루션을 열 5 분 ° C. 즉시 얼음에 냉각 스냅 그리고 짧게 스핀. 이 단계는 oligo에 보조 구조 denatures 및 솔루션 완전히 solubilized 것을 보장합니다. </li><li> 0.050 % 페놀 레드 - 살균 물, 0.025의 최종 농도에 morpholino 솔루션을 diluting에 의해 작동하는 솔루션을 준비합니다. 이 예제에서, 우리는 0.050 % 페놀 레드와 0.50 MM pkd2 morpholino의 작업 솔루션을 준비할 것이다. </li><li> 실온에서 솔루션을 계속해. </li><li> 경우이 샘플을 주입 준비 4 부로 진행합니다 .---- </li></ol> 4 부 : 귀하의 작업 솔루션 micropipette를 필링 <ol><li> 포셉와 micropipette의 말초 팁 또는 50X 배율에서 해부 현미경 (니콘 인스 트루먼 트 주식 회사, SM2645)의 단지 보이는 개방을 만드는 수술 razorblade 컷. </li><li> coverslip에 드롭으로 작업 솔루션의 플레이스 2 UL. </li><li> 피하 주사 바늘과 약간 잠수함 작업 솔루션의 드롭에 micropipette의 말초 팁을에 튜브가 장착되어 5 ML의 주사기에 micropipette의 뒷면을 연결합니다. micropipette의 팁을 휴식 않도록주의를 가져가라. </li><li> 주사기의 플런저를 당기는하여 micropipette의 말초 끝에 통해 작업 솔루션을 사이픈. </li></ol> 5 부 : micropipette 사출 볼륨을 눈금 보정 <ol><li> 마이크로 미터 슬라이드에 광유의 드롭 (미국 Bioanalytical, 주식 회사, AB00921 - 00025) (FI를 배치쉐어, 12-561 - SM1). </li><li> 압력 펄스 마이크로 연료 분사 장치 (세계 정밀 계측기 주식 회사, PV830)에 전원 및 공기 공급을 켜십시오. </li><li> 마이크로 연료 분사 장치의 micropipette 홀더에 micropipette을 첨부합니다. 마이크로 연료 분사 압력과 배출 규제가 발 페달을 눌러 활성화됩니다있다. </li><li> 해부 현미경 아래에서 마이크로 미터 기름에 귀하의 작업 솔루션의 한 방울을 배치하기 위해 마이크로 인젝터를 사용하여 사출 볼륨을 테스트합니다. 그것은 기름 위에 구형의 수레로 드롭의 직경을 측정합니다. </li><li> 기간 및 신중하게 분사의 볼륨을 조정하기 위해 사출 압력을 조정합니다. 이 단계는 microinjection 실험의 재현성에 에이즈. 이 예제에서는 모든 microinjections은 0.15 mm (볼륨에서 약 1.76 NL)의 드롭 직경 할 것입니다. </li><li> 주사 볼륨이 보정되면 backfilling 및 micropipette의 누출을 방지하기 위해 마이크로 인젝터에있는 &quot;대기&quot;노브를 사용합니다. </li></ol> 6 부 : microinjection에 대비하여 수정된 zebrafish의 배아 <ol><li> Zebrafish는 무작위로 매일 아침의 처음 몇 시간 짝짓기합니다. 1 세포 단계에서 배아를 수집하고 1X E3 미디어에서 그들을 놓으십시오. </li><li> 3 ML 전송 pipet (백톤 디킨슨 Labware, 357,524)를 사용하여 microinjection 챔버 플레이트에 쐐기 모양의 골짜기를 따라 배아를 준비. </li><li> 배아가 shallowly 잠수과 침수되지 않도록 매체를 제거합니다. 이 단계는 아니라 micropipette하여 chorion의 침투에로 골짜기의 바닥에 배아를 정착 에이즈. </li></ol> 7 부 : chorion 통해 Microinjection <ol><li> 1 세포 단계의 배아의 세포질은 해부 현미경으로 볼 수 있도록 micropipette으로 배아를 조작. micropipette의 팁을 휴식 않도록주의를 가져가라. </li><li> 배아에 주입하기 위해 micropipette와 chorion 노른자를 침투. 이 예제에서, 우리는 먼저 직접 셀에 아래의 노른자에 microinjecting 수 있으며, 세포로 작업 솔루션을 제공할 수 세포질 유동 및 확산을 수 있습니다. 이 흐름은 작업 솔루션에 추가 페놀 레드로 인해 볼 수 있습니다. </li><li> 우리는 또한 세포 세포질에 직접 주입을 설​​명합니다. 셀에 직접 microinjection 더 강력한하지만 적절한 배아 오리 엔테이션과 microinjection 기술이 필요합니다 같은 시간 소모됩니다. 세포막은 노른자 막보다 엄격한이기 때문에, 그것은 세포 세포질에 도달 노른자를 통해 micropipette를 입력하는 것이 빠르다. 여물 하단으로 동물 극을 Orienting하고 지속적인 손으로 작업하는 것은 주입이 방법에 도움이됩니다. </li><li> microinjection 후, E3 매체와 페트리 접시에 배아를 장소와 28.5에서 그들을 품어 ° C를 일반 개발. </li><li> 배아 개발의 다음 몇 시간 일 동안 관심의 phenotypes에 대한 배아를 관찰합니다. </li></ol> 8 부 : 대표 결과 EGFP의 mRNA의 overexpression : microinjection의 성공을 확인하려면, 우리는 (Leica 마이크로 GmbH를, MZFLIII) 생체내 전체 - 배아 형광 현미경에 의해 보호막 단계 (~ 6 HPF)에서 시작 개발 배아에서 GFP의 표현을 모니터링합니다. 구조 표현 배아 발달의 초기 이벤트 기간 동안 가장 강력한이며 주입 뒤덮힌 RNA가 점진적으로 저하되고 표현 단백질의 안정성에 따라 자주 개발하는 동안 감소됩니다. pkd2 translational 차단 morpholino : 이전에 게시된 결과를 바탕으로, 우리가 pkd2 morphants과 같이 약 2 pkd2 돌연변이 zebrafish와 현재 신장 cysts에있는 등 지느러미 본문 축 곡률 모방 기대 - 3 DPF 4. <img src="/files/ftp_upload/1113/1113fig1.png" alt="그림 1" /> 그림 1 : EGFP의 mRNA와 pkd2 AUG morpholino의 microinjection에서 대표 발생합니다. (A) 탭 배아는 EGFP mRNA의 0.17 NG와 1 세포 단계에서 microinjected 및 생체내 GFP 발현에 1 DPF에 시각되었습니다. (B, C) ​​탭 배아는 0.50 밀리미터에서 pkd2 translational 차단 morpholino의 ~ 1.7 NL과 1 세포 단계에서 microinjected 4 DPF에서 지느러미 신체 곡률에 대한 채점했다.

<ol><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book.++A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio)</a>. , 4th, University of Oregon. (2000).</li>
<li>Nasevicius, A., Ekker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+targeted+gene+%27knockdown%27+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish.</a> Nat Genet. 26, 216-220 (2000).</li>
<li>Draper, B., Morcos, P., Kimmel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+zebrafish+fgf8+pre-mRNA+splicing+with+morpholino+oligos%3A+a+quantifiable+method+for+gene+knockdown%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Inhibition of zebrafish fgf8 pre-mRNA splicing with morpholino oligos: a quantifiable method for gene knockdown.</a> Genesis. 30, 154-156 (2001).</li>
<li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+screen+in+zebrafish+identifies+cilia+genes+as+a+principal+cause+of+cystic+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A genetic screen in zebrafish identifies cilia genes as a principal cause of cystic kidney.</a> Development. 131, 4085-4093 (2004).</li>
<li>Stuart, G., McMurray, J., Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication%2C+integration+and+stable+germ-line+transmission+of+foreign+sequences+injected+into+early+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Replication, integration and stable germ-line transmission of foreign sequences injected into early zebrafish embryos.</a> Development. 103, 403-412 (1988).</li>
<li>Stuart, G., Vielkind, J., McMurray, J., Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+lines+of+transgenic+zebrafish+exhibit+reproducible+patterns+of+transgene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Stable lines of transgenic zebrafish exhibit reproducible patterns of transgene expression.</a> Development. 109, 577-584 (1990).</li>
<li>Culp, P., Nüsslein-Volhard, C., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+germ-line+transmission+of+plasmid+DNA+sequences+injected+into+fertilized+zebrafish+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">High-frequency germ-line transmission of plasmid DNA sequences injected into fertilized zebrafish eggs.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88, 7953-7957 (1991).</li>
<li>Strehlow, D., Heinrich, G., Gilbert, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fates+of+the+blastomeres+of+the+16-cell+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The fates of the blastomeres of the 16-cell zebrafish embryo.</a> Development. 120, 1791-1798 (1994).</li>
<li>Helde, K., Wilson, E., Cretekos, C., Grunwald, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+early+cells+to+the+fate+map+of+the+zebrafish+gastrula%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Contribution of early cells to the fate map of the zebrafish gastrula.</a> Science. 265, 517-520 (1994).</li>
<li>Lin, S., Long, W., Chen, J., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+germ-line+chimeras+in+zebrafish+by+cell+transplants+from+genetically+pigmented+to+albino+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Production of germ-line chimeras in zebrafish by cell transplants from genetically pigmented to albino embryos.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 89, 4519-4523 (1992).</li>
<li>Long, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GATA-1+expression+pattern+can+be+recapitulated+in+living+transgenic+zebrafish+using+GFP+reporter+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">GATA-1 expression pattern can be recapitulated in living transgenic zebrafish using GFP reporter gene.</a> Development. 124, 4105-4111 (1997).</li>
<li>Murphey, R., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecule+screening+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Small molecule screening in the zebrafish.</a> Methods. 39, 255-261 (2006).</li>
</ol>

zebrafish 배아에 Microinjection 개발에서 특정 유전자의 역할을 탐험 잘 설립하고 강력한 기술입니다. 응용 프로그램 overexpression, misexpression와 관심뿐만 아니라 여러 유전자 간의 epistatic 분석의 유전자의 최저의 assays를 포함합니다. zebrafish의 Microinjection은 널리 유전자 변형 동물을 생성하고, 초기 배아 blastula 5,6,7,8,9의 세포 운명을 매핑에 사용되고 있습니다. 또한,이 기법의 응용 프로그램은 세포 이식 방법 10 세균 온라인 chimeras을 생성의 주요 단계로 제공하고 있습니다. 유전자의 &#39;이득의 기능을&#39;표현형을 탐험에 대한 하나의 대안 방법은 유전자의 constitutively 적극적인 양식을 microinject하는 것입니다. 또한, 유전자의 의사 &#39;손실 함수&#39;표현형은 그 유전자의 지배 부정적인 형태의 mi...

다른 모든 자료는 프로토콜에 나열되어 있습니다.

zebrafish 태아의 mrna와 morpholino의 안티 센스 oligonucleotides의 microinjection.

Microinjection of mRNA and Morpholino Antisense Oligonucleotides in Zebrafish Embryos.

개발하는 동안 유전자의 역할을 조사하는 필수적인 도구가 유전자 최저, overexpression, 그리고 misexpression 연구를 수행하는 능력입니다. zebrafish에서 (<em&gt; Danio rerio</em&gt;), 개발 배아에 RNA, DNA, 단백질, 안티 센스 oligonucleotides와 다른 작은 분자의 microinjection은 연구자에게 유전자 기능을 탐험에 대한 신속하고 강력한 분석을 제공합니다<em&gt; 생체내에</em&gt;. 이 동영상 기사에서는, 우리는 준비하고 microinject하는 방법을 보여줍니다 것입니다<em&gt; 체외에서</em&gt; 합성 EGFP의 mRNA와 translational 차단 morpholino oligo에 대한<em&gt; pkd2</em&gt; 1 - 세포 단계의 배아 zebrafish에 autosomal 지배 polycystic 신장병 (ADPKD)과 관련된 유전자. 우리는 다음 GFP 표현 및 표현형 분석을 확인하여 mRNA 및 morpholino의 microinjections의 성공을 분석합니다. 이 기술의 광범위한 응용 프로그램을 생성하는 유전자 변형 동물 및 세균 라인 chimeras, 세포 - 운명의 매핑 및 유전자 검사를 포함합니다. 여기에 우리의 EGFP와 최저의 overexpression을위한 프로토콜을 설명<em&gt; pkd2</em&gt; mRNA와 morpholino의 oligonucleotide 주입에 의해.

Microinjection은 수정된 zebrafish의 배아에 이물질을 소개하는 잘 설립하고 효과적인 방법입니다. 여기, 우리는 강력한 mRNA의 overexpression을 수행하기위한 microinjection 기술 및 zebrafish에서 morpholino의 oligonucleotide 유전자 최저 연구를 보여줍니다.

Zebrafish 태아의 mRNA와 Morpholino의 안티 센스 Oligonucleotides의 Microinjection.

발달 과정 중 유전자의 역할을 조사하기 위한 필수적인 도구는 유전자 넉다운(knockdown), 과발현 및 오발현(misexpression)을 수행할 수 있는 능력입니다...

이 절차는 먼저 morpho와 시험관 내 전사(in vitro transcribed)된 cap mRNA를 준비하는 것으로 시작합니다. 마이크로 피펫에 morpho 함유 용액을 사이펀 방식으로 채운 후, 마이크로미터-정밀 1-셀 스테이지를 사용하여 주입량을 보정합니다. 그런 다음 제브라피시 배아를 수집하여 난황 미세 주입을 위해 미세 주입 챔버에 배치합니다.작동 용액을 세포 바로 아래의 난황에 주입하고, 세포 미세 주입을 위해 세포질의 움직임을 이용하여 용액을 이동시킵니다. 주입 후 용액을 세포 세포질로 주입하십시오. 배아를 E3 배지에서 28.5 °C로 배양하고, 이후 단계에서 관심 있는 표현형이 나타나는지 확인하십시오.안녕하세요, 저는 Yale University School of Medicine 유전학과의 Sasha 박사님 연구실 소속이자 아들인 Shiloh Yuen입니다. 오늘은 제브라피시에서 mRNA 과발현 및 morpho 올리고뉴클레오타이드 유전자 넉다운 연구를 수행하기 위한 강력한 미세주입 기술을 시연하겠습니다. 저희 연구실에서는 낭성 신장 질환에서 섬모의 역할을 연구하기 위해 이 절차를 활용하고 있습니다.이제 시작하겠습니다. 유전자 기능 연구를 위한 하나의 강력한 접근법은 시험관 내에서 전사된 캡핑된 RNA를 제브라피쉬 배아에 미세 주입하는 것입니다. 본 시연에서는 EGFP 태그가 붙은 전사체를 미세 주입하고, 성공적인 주입의 가시적 판독값으로 살아있는 전체 배아의 GFP 발현을 이용하겠습니다.먼저, 관심 있는 전사체에 대해 인 비트로(in vitro) 캡 RNA 전사 반응을 수행합니다. 본 실험실에서는 일반적으로 관심 있는 cDNA를 pCS2+ 벡터에 삽입하고, Mmessage mMachine SP6 키트를 사용하여 다량의 캡핑된 RNA 인 비트로 합성 반응을 수행합니다. 그다음, RNeasy Mini 키트를 사용하거나 페놀-클로로포름 추출 및 이소프로판올 침전법을 통해 RNA 샘플을 정제합니다.RNA 준비물의 농도를 주의 깊게 측정하고, 주입 당일 사용할 때까지 -80 °C에서 보관하십시오. RNA 샘플을 해동한 후 가볍게 볼텍싱하고 잠시 원심 분리하십시오. 이제 멸균수와 최종 농도 0.025~0.05% phenol red를 사용하여 작업 용액을 준비하십시오. phenol red는 배아 내로 용액이 주입되었음을 확인하는 가시적 마커 역할을 합니다.여기서는 0.05% phenol red가 포함된

microinjection-mrna-morpholino-antisense-oligonucleotides-zebrafish

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 동영상은 morpholino 또는 mRNA가 감소 또는 후속 개발 중에 특정 유전자 제품의 수준을 높일 수있는 한 세포 단계에서 zebrafish 배아에 주입 수있는 방법을 보여줍니다.

유전자 기능을 분석 Zebrafish 배아들 중 Microinjection

24hpf에서 zebrafish otocyst에 직접 morpholinos를 전달하는 방법이 개발되었습니다. 귀의 소포 및 침투력을 효과 electroporation의 루멘에 morpholinos의 microinjection을 사용하여, 우리는 두뇌에 morpholinos의 효과를 무시하고 내이 (内耳)에 특정 효과를 얻을 수 있었다.

사출 및 Electroporation에 의해 Zebrafish Otocyst으로 MIF Morpholinos 직접 배달 내이 (内耳)의 개발 미치는 영향

조건부 성인 zebrafish의 망막에서 대상 단백질의 표현을 분해하는 방법은 intravitreally 안티 센스 morpholinos를 주입하여 망막에 그들을 electroporating 포함하는, 설명되어 있습니다. 그 결과 단백질은 재생이나 그대로 망막에있는 단백질의 역할을 테스트 수 며칠에 대한 무너뜨렸다입니다.

Morpholinos의 생체내의 Electroporation에서 성인 Zebrafish의 망막에

이 프로토콜은 꼬리에 모르폴리노 주입에 의한 제브라피쉬의 유전자 발현의 표적 녹다운을 설명합니다.

Morpholino 주입: 제브라피쉬의 기능을 연구하기 위해 표적 유전자 발현을 knockdown하는 방법

이 비디오는 제브라피시 난황낭에 화합물을 전달하는 배아 미세주입 기술에 대해 설명합니다.

배아 미세주입: 제브라피시 노른자에 화합물을 전달하는 기술

여기, 우리는 개발을위한 체계적인 접근 방법을 제시 생리 학적 관련성이 민감하고...

Danio rerio를 사용하여 병적 인 인간 게놈의 생체 모델링에

이 문서에서는, 우리는 안티센스 모르의 올리고 뉴클레오티드를 이용하여 성인 제브라 피쉬 telencephalon의 심실 세포에서 유전자 발현을 조작하는 방법을 보여줍니다. 우리는 성인 척추 뇌 기능 연구에 사용할 수있는 효율적이고 빠른 프로토콜로이 방법을 제시한다.

모르 올리고 뉴클레오티드의 Cerebroventricular 미세 주입을 사용하여 성인 Zebrafish의 두뇌에서 유전자 발현의 미세 조작

이러한 유전자의 특정 morpholinos와의 뇌 실내 주사를 사용하여 조직 재생 등의 개발 및 생리 학적 항상성 이후 단계에서 유전자 기능을 평가하는 제브라 피쉬에 대한 적응력이 역 유전 방법.

Zebrafish의 유충의 여러 어려운 대상 조직을 형질 심장 심실 사출을 사용하여 유전 모르 폴리 노의 접근을 반전

이 비디오에서는 Nijole Jasinskiene는 뎅그열 발열에 대한 벡터 아르 유전자 변형 Aedes aegypti 모기를 생성하기 위해 사용된 방법을 보여줍니다. 정확하게, microinjection의 바늘을 준비하는 배아를 d​​essicating, 그리고 microinjection을 수행하기위한 기술은 증명됩니다.

트렌스 제닉 모기를 구하는 A. aegypti의 태아의 Microinjection

여기 우리는 장기적인 영상, 두 광자 이미징 및 조직 손상을 기술하고, 시간 경과 공촛점 이미징에 대한 zebrafish 배아를 장착하는 방법을 설명합니다.

라이브 zebrafish의 배아에서 두 광자의 axotomy하고 시간이 경과 공촛점 영상

배우세요 제브라피시 태아에 mRNA와 morpholino를 마이크로인젝션하는 기법으로 유전자 발현 조절 및 발달생물학 연구를 수행하는 방법. 이 기술은 신경과학과 유전학 분야에서 유전자 기능을 연구하는 데 필수적입니다.

Zebrafish 태아의 mRNA와 Morpholino의 안티 센스 Oligonucleotides의 Microinjection.

더 많은 동영상 탐색