Name: 인간의 배아 줄기 (ES) 세포의 전파 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 52 s
Description: 배우세요 인간 배아 줄기 세포의 콜라게나제 분열 기법을 이용한 배양 및 유지 방법을. H1과 H9 세포주를 활용한 이 기술은 줄기세포 연구와 재생의학 발전에 필수적입니다.

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<ol><li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+midbrain+dopaminergic+neurons+from+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Induction of midbrain dopaminergic neurons from ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Neuron. 28, 31-40 (2000).</li>
<li>Perrier, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 12543-12548 (2004).</li>
<li>Pruszak, J., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human embryonic stem cells into dopaminergic neurons.</a> , John Wiley and Sons. (2007).</li>
<li>Pruszak, J., Sonntag, K. C., Aung, M. H., Sanchez-Pernaute, R., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+and+methods+for+cell+sorting+of+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Markers and methods for cell sorting of human embryonic stem cell-derived neural cell populations.</a> Stem Cells. 25, 2257-2268 (2007).</li>
<li>Sonntag, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+yield+of+neuroepithelial+precursors+and+midbrain-like+dopaminergic+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+using+the+bone+morphogenic+protein+antagonist+noggin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enhanced yield of neuroepithelial precursors and midbrain-like dopaminergic neurons from human embryonic stem cells using the bone morphogenic protein antagonist noggin.</a> Stem Cells. 25, 411-418 (2007).</li>
<li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+dopaminergic+neurons+and+pigmented+epithelia+from+primate+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Generation of dopaminergic neurons and pigmented epithelia from primate ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 1580-1585 (2002).</li>
<li>Ko, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+as+a+continuous%2C+stable%2C+and+on-demand+source+for+human+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived neural precursors as a continuous, stable, and on-demand source for human dopamine neurons.</a> J Neurochem. 103, 1417-1429 (2007).</li>
<li>Hong, S., Kang, U. J., Isacson, O., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+precursors+derived+from+human+embryonic+stem+cells+maintain+long-term+proliferation+without+losing+the+potential+to+differentiate+into+all+three+neural+lineages%2C+including+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neural precursors derived from human embryonic stem cells maintain long-term proliferation without losing the potential to differentiate into all three neural lineages, including dopaminergic neurons.</a> J Neurochem. , (2007).</li>
<li>Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+subtype+specification+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neural subtype specification from embryonic stem cells.</a> Brain Pathol. 16, 132-142 (2006).</li>
<li>Pankratz, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+neural+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+via+an+obligated+primitive+anterior+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Directed neural differentiation of human embryonic stem cells via an obligated primitive anterior stage.</a> Stem Cells. 25, 1511-1520 (2007).</li>
<li>Lazzari, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+derivation+of+neural+rosettes+from+cloned+bovine+blastocysts%3A+a+model+of+early+neurulation+events+and+neural+crest+specification+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Direct derivation of neural rosettes from cloned bovine blastocysts: a model of early neurulation events and neural crest specification in vitro.</a> Stem Cells. 24, 2514-2521 (2006).</li>
<li>Pomp, O., Brokhman, I., Ben-Dor, I., Reubinoff, B., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+peripheral+sensory+and+sympathetic+neurons+and+neural+crest+cells+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Generation of peripheral sensory and sympathetic neurons and neural crest cells from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 23, 923-930 (2005).</li>
</ol>

인간의 배아 줄기 (es) 세포의 전파

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

인간의 배아 줄기 (ES) 세포의 전파

안녕하세요, 저는 Lauren Deon입니다. 저는 MGH의 Human Amgen 줄기세포 공동 시설(Human Amgen stem cell co facility)을 담당하고 있습니다. 네, 저는 Lauren이며, MGH의 Human AM 줄기세포 공동 시설을 책임지고 있습니다.저는 이전에 George De Lab에서 박사후 연구원으로 근무했을 때부터 4년 동안 인간 Amgen 줄기세포를 다루어 왔습니다. 현재 저희는 Y 세포 유래의 H1과 H9라는 두 가지 세포주를 보유하고 있습니다. 저희가 배양액에서 이 세포들을 확장하거나 유지하는 방법, 특히 세포를 분할하는 방식은 콜라게나아제를 사용하는 것입니다.따라서 제가 보통 하는 방법은 세포를 파종한 후 처음 몇 번의 계대 배양 동안 콜로니 피킹(picking colonies) 기술을 사용하는 것입니다. 이 경우 현미경으로 어떤 콜로니가 상태가 좋고 분화가 잘 되었으며 형태가 양호한지 확인할 수 있으며, 이러한 콜로니들만 수집하여 몇 개의 조각으로 자른 뒤 새로운 플라스크에 옮겨 심습니다. 그리고 분화가 덜 된 것으로 보이는 콜로니들은 그대로 둡니다.세포를 계대 배양하는 또 다른 방법은 트립신을 사용하는 것입니다. 여기서는 이 기술을 사용하지 않습니다. 인간 줄기세포는 개별화되거나 단독으로 존재하는 것을 선호하지 않기 때문에 콜라게나아제가 조금 더 안전하다고 생각합니다.따라서 트립신을 처리할 때 처리 시간이 조금이라도 길어지면, 즉 다른 유형의 세포에 사용하는 것처럼 3~4분 정도 처리하게 되면, 인간 줄기세포는 개별 세포로 분리되어 대부분 사멸하거나 분화하거나 혹은 배양 접시에 부착되지 않게 됩니다. 따라서 세포를 덩어리 형태로 유지해야 하며, 플라스크 내에서 세포가 단독으로 존재하게 해서는 안 됩니다.따라서 콜라게나제(collagenase)를 사용하면 세포를 식물 상태로 유지할 수 있다는 장점이 있습니다. Chipsy를 사용하는 경우에는 매우 가혹한 옵소닌화(opsonization) 과정을 견뎌낼 세포들만을 선택하게 됩니다. 따라서 이러한 세포들은 대개 증식 능력이 매우 높습니다.따라서 세포를 이러한 트립신 공정에 적응시킬 수 있습니다. 문제는 일부 세포들이 다르게 행동하여 훨씬 더 빠르게 성장한다는 점입니다. 그리고 한 가지 위험 요소는 이러한 매우 빠른 분열 과정으로 인해 일부 염색체 이상이 발생할 수 있다는 것입니다.따라서 말씀하신 내용은 배양 시 대부분의 증식성 세포에서 선택 과정이 일어날 수 있다는 것이군요. 맞습니다. 다른 세포들에 비해 더 활성도가 높고 아마 생존율도 더 높을 것입니다. 따라서 증식 후, 기본적으로 트립신 처리 후 여러 번의 계대 배양을 거치면 이러한 서로 다른 특성들로 인해 다른 배양물이 됩니다.따라서 이들이 완전히 동일한지 판단하기는 어렵습니다. 일반적인 테스트를 수행하여, 예를 들어 OC4, nano one 60 SC4 C, C3와 같이 완전히 분화된 세포의 일반적인 마커들을 확인하더라도, 이 모든 분자들이 여전히 발현될 수 있습니다. TER 형성을 확인하면, 이 세포들은 여전히 분화하여 일반 세포처럼 형성될 수 있습니다.핵형을 살펴보면 이상이 있을 수도 있지만, 여전히 정상 핵형일 수도 있습니다. 선택적 이점은 단순히 핵형 분석으로는 확인할 수 없는 돌연변이 때문일 수 있습니다. 따라서 이들이 훨씬 더 빠르게 성장한다는 사실 그 자체가 어느 정도 더 좋지 않은 징후라고 생각합니다.그리고 만약 어느 시점에 이 세포들을 이식에 사용하고자 한다면, 저는 분명히 이런 유형의 세포들은 사용하지 않을 것입니다. 좋습니다. 그렇다면 세포 계대를 위해 이 기술을 사용할 때 발생하는 주요 기술적 문제점이 무엇인지 말씀해 주시겠습니까? S를 사용하는 경우 말이죠.시간이 조금 더 오래 걸릴 뿐만 아니라, 세포 성장 속도가 느리기 때문에 실험에 필요한 충분한 수의 세포를 확보하는 데 훨씬 더 많은 시간이 소요됩니다. 따라서 편의성이 떨어진다고 할 수 있습니다. 이번 실험의 목적에 대해 간단히 말씀해 주시겠습니까?CS 세포를 어떻게 사용하나요? 우선, 저의 주요 프로젝트는 인간 AB 줄기세포로부터 혈관 내피세포를 얻는 것입니다. 그리고 그 목적은 혈액을 생성할 수 있도록 하는 것입니다.저희는 조직 생체공학 연구실과 많은 협업을 진행하고 있으며, 그들의 목표 중 하나는 체외에서 조직을 제작하는 것입니다. 하지만 이에 대한 제약 중 하나는 이러한 조직을 관통하는 혈관이 부족하다는 점입니다. 따라서 조직 내에 혈관내피세포를 도입하거나 배치할 수 있다면, 해당 조직의 성장을 더욱 촉진할 수 있을 것입니다.따라서 혈액이나 혈압과 같은 내피 세포의 세포원으로는 몇 가지 소스만 알려져 있는데, 인간의 귀와 같은 또 다른 세포원을 확보하는 것은 매우 흥미로운 일일 것입니다. 인간의 귀는 거의 무한하게 확장 가능하다는 장점이 있어, 이러한 세포를 수정하고 유도 시스템을 구축하여 활용할 수 있습니다. 그리고 이를 통해 최종 생성물, 즉 이 사례에서의 재료 세포를 얻을 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

자기 갱신과 신체의 모든 세포 유형으로 차별화하는 인간 배아 줄기 세포의 능력은 그들이 모두 의료 어플 리케이션을위한 개발과 질병의 근본적인 질문을 해결하기위한 연구 도구로 큰 약속을 개최하는 것이 좋습니다. 여기서 우리는 내부 세포 질량 immunosurgical 절연에 의해 배아에서 인간 배아 줄기 세포의 유도에 대한 간결한, 단계별 절차를 제공합니다.

Immunosurgery에 의해 인간 배아 줄기 세포의 유도

ESC의 차별은 셀 타입의 특정 구조의 변화와 염색질의 구성과 일치한다. 이러한 변화의 감지는 stemcellness 및 세포 분화를 정의하는 메커니즘에 중요한 통찰력을 제공합니다. 염색질 immunoprecipitation (칩)은 줄기 세포 분화를 기본 분자 메커니즘을 해부하다하는 소중한 방법을 나타냅니다.

인간 배아 줄기 세포에서 염색질의 Immunoprecipitation

이 동영상은 피더 세포가없는 조건에서 어떻게 피더에서 연속 통과 hESCs 세포가없는 조건에 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)의 성장을 유지하는 방법을 보여줍니다. hESC의 확인은 pluripotency immunofluorescence 현미경으로 피더 셀없는 조건을 재배도 증명됩니다. 3 부 3.

MEFs에서 Matrigel 3 : Matrigel에 Matrigel에서 Passaging hESCs

특정 세포로 hESCs의 감독 차별은 재생 의학에 많은 관심을 생성했다. 우리는 결정을위한 간결하고 단계별 절차를...

기형 종의 형성에 의해 인간 배아 줄기 세포의 운명 매핑

유전자 변형의 최근 발전에도 불구하고, 인간 배아 줄기 세포 (HESCs)의 transfection은 변덕 과정 남아있다. 우리의 지식, 인간 유도 만능 줄기 세포를 (iPSCs) transfect하는 체계적이고 효율적인 방법은보고되지 않았습니다. 여기, 우리는 효율적으로 transfect과 인간 iPSCs를 nucleofect하는 강력한 프로토콜을 설명합니다.

인간 유도 만능의 줄기 세포를 Transfecting 및 Nucleofecting

우리는 인간의 연결을 progenitors 및 신경 수리 개발 CNS에의 연결을 세포 유형의 대형 공급 파생을 가능하게 작은 분자와 함께 정의된 조건 하에서 유지 pluripotent 인간 배아 줄기 세포에서 직접 neuroblasts의 유도를위한 프로토콜을 설립했습니다.

작은 분자와 유도 Pluripotent 인간 배아 줄기 세포에서 인간의 연결을 Progenitors과 뉴런의 효율 유도

단일 세포 유전자 발현 분석은 줄기 세포 이질성을 이해하는데 필요하다.

정량적 RT-PCR에 의해 개별 인간 배아 줄기 세포를 프로파일 링

리포터 세포주 시각화 추적 이종 집단의 관심의 세포를 분리 할 수​​있는 수단을 제공한다. 그러나, 유전자 - 표적 인간 배아 줄기 세포에서 종래의 상동 재조합을 사용하여 매우 비효율적이다. 여기서, 우리는 아연 핑거 클레아 향상된 상동 재조합을 사용하여 EGFP CNS 중뇌 특정 전사 인자 PITX3 궤적 타겟팅 기술한다.

인간 배아 줄기 세포에 표적으로 아연 손가락 핵산 분해 효소 향상된 유전자

여기서 제시된 것은 인간 배아 줄기 세포의 단일 세포 배양및 이들의 후속 분화를 신경 전구 세포로 의하기 위한 프로토콜이다. 이 프로토콜은 간단하고 견고하며 확장 가능하며 약물 스크리닝 및 재생 의학 응용 분야에 적합합니다.

인간 배아 줄기 세포의 단세포 배양을 이용한 효율적인 신경 분화

여기 우리 연구소 색채 인간의 배아 줄기 세포 라인을 멈추 방법을 보여줍니다.

냉동 인간 ES 세포

배우세요 인간 배아 줄기 세포의 콜라게나제 분열 기법을 이용한 배양 및 유지 방법을. H1과 H9 세포주를 활용한 이 기술은 줄기세포 연구와 재생의학 발전에 필수적입니다.

인간의 배아 줄기 (ES) 세포의 전파

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