Name: 와이드 필드 현미경을 사용하여 장기 이미징 포유 동물 세포 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min
Description: 학습하세요 포유동물 세포의 장기 이미징을 위한 와이드 필드 현미경 기법을 사용하여 신경과학 연구에서 세포 분열 과정을 관찰하는 방법을 배우세요. 37도 온도 제어와 GFP 형광 이미징을 활용합니다.

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와이드 필드 현미경을 사용하여 장기 이미징 포유 동물 세포

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

실제로 제가 진행할 방법은, 먼저 여기에 장착한 다음 교체하는 것입니다. 이제 최대한 조심스럽게 흡입하겠습니다. 좋습니다. 몇 초 동안 그대로 유지합니다. 좋습니다. 됐습니다.따라서 저희 라이브 셀 이미징 시스템의 중요한 특징은 도립 현미경이라는 점이며, 이는 대물렌즈가 샘플 아래에 위치함을 의미합니다. 즉, 대물렌즈가 위쪽을 향하고 있으며, 대물렌즈와 샘플을 포함한 현미경의 거의 전체 시스템이 37 °C로 유지됩니다. 따라서 이 플라스틱 박스 내부의 모든 요소는 37 °C 상태입니다.그리고 스테이지 바로 위에는 공기와 CO2 혼합 가스가 있습니다. 이는 5%CO2입니다. 즉, 시료가 세포 배양기 형태의 챔버 안에 들어 있다는 개념입니다.따라서 여기 공기와 CO2를 위한 혼합기가 있으며, 가습 및 가열 과정을 거친 후 스테이지 위의 샘플로 파이프를 통해 전달됩니다. 오늘은 단일 채널인 GFP 형광 분석을 진행하겠습니다. 이 호스는 5% CO2가 유입되는 경로이며, 스테이지 홀더에 맞게 장착됩니다.그 점이 중요합니다. 그런 다음 이것들을 닫고 내린 후 첫 번째 위치로 이동합니다. 제가 할 일은 제 대조군 샘플인 첫 번째 시야로 가서 화면에 보이는 내용을 바탕으로 위치를 선택하는 것입니다.따라서 각 웰마다 현미경으로 직접 확인해야 합니다. 각 웰의 초점 평면이 서로 다르고, 디시 바닥면이 완전히 평평하지 않기 때문입니다. 따라서 웰을 이동할 때마다 미세 조정이 필요합니다. 현재 첫 번째 웰에 있으며, 초점을 맞추기 위해 현미경의 투과광을 켜겠습니다.그런 다음 모든 빛이 접안렌즈로 전달되는지 확인합니다. 접안렌즈를 통해 시야가 깨끗하게 확보되었는지 확인한 후, 일반 조명을 끄고 형광 조명을 켭니다. 이때 관찰 중인 세포들이 건강한 상태인지, 그리고 세포 사멸(apoptotic)이 일어나지 않았는지 확인합니다.그리고 이것을 끕니다. 다음으로 제가 할 일은 전송하는 것입니다. 이제 위치를 선택하기 시작할 것이며, 이는 광로를 카메라로 보내야 함을 의미합니다. 카메라가 바로 여기에 있습니다.현미경이 모든 빛을 카메라로 보내도록 설정하면, 접안렌즈로는 아무것도 보이지 않게 됩니다. 이제 현미경 제어 소프트웨어에서 목적에 맞는 필터 세트인 psy를 선택한 다음, 노출 시간을 설정하겠습니다.저는 이 세포들에 대해 매우 잘 알고 있으며, 노출 시간이 0.2초가 필요하다는 점을 알고 있습니다. 그래서 소프트웨어에 그렇게 설정합니다

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

실시간 이미징 배아 조직은 오랜 기간 동안 도전합니다. 여기에서 우리는 높은 공간과 시간적 해상도를 가진 오랜 기간 동안 여자가 척수의 세포와 하위 세포 변화를 감시하기위한 분석을 제시. 이 기술은 신경계와 개발 배아의 다른 지역에 맞게 조정 할 수 있습니다.

개발 Neuroepithelium의 세포 문제의 고해상도 라이브 영상

시간 경과 영상은 특정 행동 매개 변수 독특한 유전 적 병변 사이에 상관 관계가 있는지 확인하기 위해 유방암 위험 유전자 변형 마우스 모델에서 파생 된 기본 preneoplastic 유방 상피 세포의 행동을 평가하는 데 사용됩니다.

기본 Preneoplastic 유방 상피 세포의 시간 경과 영상은 유방암의 유전자 변형 마우스 모델에서 파생

세포 외 기질은 상처 치유, 염증과 종양 발생시 상당한 개조를 겪는다. 우리는 섬유의 역학뿐만 아니라 표면 형광 또는 이광자 현미경을 사용하여 높은 공간 및 시간 해상도를 가진 메쉬 형상의 매트릭스 성분을 시각화하는 신규의 intravital 면역 형광 현미경 방식을 제시한다.

표면 형광을 가진 조직 매트릭스 구성 요소 및 두 개의 광자 현미경의 장기의 intravital 면역 형광 이미징

손의 발달 과정 10 일 임시 그라데이션에서 작동하기 때문에 배아 포유류의 달팽이관의 라이브 영상은 도전이다. 여기에서 우리는 오일을 통해 형광 기자 마우스에서 촬영 배아 인공 절편 조직을 이미징 한 후 배양 및 방법을 제시한다.

마우스 인공 와우의 Explants의 장기 시간 경과 영상

이 프로토콜은 다광자 현미경을 사용하여 진공 안정화 이미징 창을 사용하여 실시간으로 온전한 폐의 장기 고해상도 단일 세포 이미징을 수행하는 방법을 설명합니다.

진공 안정 이미징 창으로 폐의 장기 고해상도 생체 내에 현미경

여기에 제시된 방법은 포유류 문화 내에서 공간 조직을 드러내기 위하여 양적 화상 진찰과 함께 마이크로 패터닝을 이용합니다. 이 기술은 표준 세포 생물학 실험실에서 확립하기 쉽고 시험관 내에서 패터닝을 연구할 수있는 견인 시스템을 제공합니다.

마이크로패턴과 정량적 이미징을 사용하여 포유류 세포의 응급 공간 조직 매핑

여기에 제시된 것은 깨어 있고 머리가 억제 된 마우스에서 뇌 세포의 종방향 이미징을위한 만성 두개골 창을 이식하기위한 프로토콜입니다.

깨어있는 마우스 에서 반복되는 생체 내 이미징을위한 두개골 창 이식

관심 조직/기관 및 피부에 직접 접착할 수 있는 광학적으로 투명한 실리콘 창을 사용하여 장기간 생체 내 이미징을 위한 접근법이 제시됩니다. 이 창문은 현재 현장에서 사용되는 다른 창문보다 저렴하고 다재다능하며 외과 적 삽입은 동물에게 제한된 염증과 고통을 유발합니다.

투명한 실리콘 윈도우를 통한 종방향 생체 내 이미징

이 프로토콜은 교체 가능한 뚜껑 (R.MIW)이있는 새로운 유방 이미징 창을 설명합니다. R.MIW의 이식 후 생체 내 현미경 검사는 다른 발달 단계에서 세포 해상도로 건강하고 병든 유선의 종방향 및 다일 이미징을 허용합니다.

교체 가능한 뚜껑이있는 유방 이미징 창을 사용하는 종방향 생체 내 현미경 검사

본 프로토콜은 식품 랩, 투명 실리콘 및 커버 유리를 사용하여 큰(6 x 3 mm2) 두개골 창을 만드는 방법을 설명합니다. 이 두개골 창은 동일한 마우스에서 생체 내 광시야 및 2광자 칼슘 이미징 실험을 허용합니다.

생체 내 큰 두개골 창을 사용한 마우스의 광시야 및 2광자 칼슘 이미징

본 프로토콜은 이미지 정량화 방법을 사용하여 접안 렌즈의 주변 구조를 시각화하기 위한 새로운 전체 마운트 이미징을 설명합니다. 이러한 프로토콜은 렌즈 마이크로스케일 구조와 렌즈 발달/기능 간의 관계를 더 잘 이해하기 위한 연구에 사용할 수 있습니다.

Whole Mount Imaging을 통해 Peripheral Lens 구조, 세포 형태 및 조직을 시각화하고 정량화할 수 있습니다.

학습하세요 포유동물 세포의 장기 이미징을 위한 와이드 필드 현미경 기법을 사용하여 신경과학 연구에서 세포 분열 과정을 관찰하는 방법을 배우세요. 37도 온도 제어와 GFP 형광 이미징을 활용합니다.

와이드 필드 현미경을 사용하여 장기 이미징 포유 동물 세포

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