Name: 암 보레알리스 Stomatogastric 신경계의 해부 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-23T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 37 s
Description: 배우세요 Cancer borealis의 위신경계(STNS) 해부법으로 전기생리학 기록을 위한 신경회로 준비 방법을 익히세요. 이 기법은 중추 패턴 생성기와 신경조절 연구에 필수적입니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

우리는 기꺼이 Marder 연구실의 구성원을 인정합니다. 우리는 그녀의 지원과 격려를위한 고문, 박사 이브 Marder을 감사합니다. 이 연구는 국립 신경 장애 뇌졸중 연구소 보조금 NS - 17813 및 NS - 058110에 의해 지원되었다.

1. 총 해부 <ol><li> 동물의 무딘 감각과 모터 시스템에 30 분간 얼음에 게 놓으십시오. 얼음 사방에 포위하라. 게를 다룰 때 장갑을 착용하여야한다. </li><li> 해부의 팬 및 사용 도구를 밖으로 누워하여 총 해부 준비. Rongeurs는 뼈가 절단 가위, 작은 가위, 톱니 포셉, 테이퍼 에지있는 주걱, 검은 Sylgard - 코팅 요리, 그리고 곤충 핀이 필요합니다. </li><li> 곤란 않도록하고 해부 냄비에 배치하기 위해 뒷다리 다리로 얼음 양동이에서 게를 제거합니다. </li><li> 안으로 각 하나를 복잡하게 먼저 발톱을 제거합니다. 그런 다음 동일한 비틀 모션을 사용하여 각 다리를 제거합니다. </li><li> rongeurs 사용하여 입을 덮고있는 maxilla를 제거합니다. 또한 부드러운 maxillule를 제거합니다. </li><li> rongeurs를 사용하면 다시 등딱지의 측면 후부 월말부터 시작하고 그것의 가장자리에 좋은 입씨름을. rongeurs로 다운 클램프와 등딱지의 일부를 끊다. 주걱가 시작을 입력할 수 있도록 충분히 등딱지의를 제거했는지 확인하십시오. 눈 등딱지 가장자리를 제거 계속 반대쪽에 반복합니다. </li><li> 주걱의 테이퍼 측면으로 부드럽게 등의 등딱지의 지붕에서 떨어져 부드러운 내부 조직을 다쳤어요. STNS 손상을 방지하기 위해 등딱지 접촉에 주걱 보관하십시오. 조직에서 분리되었습니다 등딱지의 일부를 떨어져 부수 rongeurs을 사용합니다. 또한 등딱지에 조직을 연결하는 내전근 근육을 분리해야하는 복부 등딱지에서 부드러운 조직의 일부를 별도의. </li><li> 등딱지에서 튀어나온 두 개의 작은방이 ossicles가 심장까지 후부로 등의 등딱지 멀리 떨어져. 멀리 앞쪽에 가능한 컷. 등의 등딱지의 가장 앞쪽에 부품을 떠나 어길 때 한 손가락으로 cephalon을 (이하 &quot;얼굴&quot;) 안정화. </li><li> 등딱지의 복부 측면에서 그들에게 부착 epistome에서 mandible을 이동시키다하는 바깥쪽을 왜곡하고,​​ 그것을 돌아서, mandible에 rongeurs를 고정하여 한 번에 mandibles 하나를 빼낸다. 정상적으로 완료하면 근육을 가진 두 개의 긴 ossicles가 추출 mandible에 첨부해야합니다. </li><li> 주걱을 사용하여 눈을 근처 cephalon의 측면에서 조직을 멀리 분리합니다. 계층에 의해 가능한 레이어로 소골편의 능선에 가까운 조직을 가로질러 작은 절개 가위와. </li><li> 해부의 냄비의 벽에 게를 휴식과 (발톱이에 사용할 수 있습니다) 장소에 고정 그것을 소품. 멀리 어느 조직이 첨부된 떠나지 않도록하는 epistome에서 labrum (이하 &quot;윗입술&quot;) 잘라. 뼈가 절단 가위를 사용하면 cephalon를 제거하는 복부 등딱지 두개의 대각선 인하합니다. </li><li> 톱니 포셉로 labrum를 타고 거리에 복부 측면에있는 소골편에서 labium (이하 &quot;아랫입술&quot;) 했네요. 그런 다음 부드럽게 남아있는 복부 등딱지 떨어져 입술을 리프트. 등딱지를 안감 조직에서 복부의 복부 부분을 분리하는 작은 가위를 사용합니다. 위는 게에서 추출한 때까지 pyloric ampullae 볼 때, 멀리 그것의 양쪽에있는 조직에서 배를 잘라. </li><li> 아직 손바닥에 대한 배를 휴식과 입안에 부어 호수, 포셉있는 입술로 배를 들고. 이것은 위장을 확대하고 쉽게 갈라 수 있습니다. 아래 ampullae 사이의 소골편 통해 pylorus 오른쪽 사이의 입을에서 열 컷. 그런 다음 두 가지를 통해 cardial 대각선 아래로 했네요. 안쪽 위 세 치아의 끝을 잘라. </li><li> 아래 복부의 내부와 대형, 검정, Sylgard - 코팅 접시에 배를를 놓습니다. 곤충 핀으로 준비 다섯 모서리를 핀과 (그림 1 참조) 전체 준비를 immersing, 차가운 식염수에 접시를 입력합니다. </li></ol> 2. 파인 해부 <ol><li> , 미세 해부 도구는 미세 절개를 위해 필요합니다. 특히, 포셉 및 봄 가위는 텅스텐 바늘로 핀 홀더뿐만 아니라 필요합니다. 분명 Sylgard - 코팅, 배양 접시 및 일부 미세 와이어 핀도 준비되어 있어야합니다. </li><li> 가장 낮은 배율에서 시작, 입 열어야하는 데 사용되는 입술 근처에 펄럭를 달아하여 시작합니다. 준비가 긴장하고 필요한 다른 영역에 핀으로 핀의 나머지 부분을 재배열. </li><li> 조심스럽게 준비의 하단 부분을 덮고있는 발견 hypodermis를 들고 두 흰색 점들과 hypodermis의 패치를 떠나 전체를 잘라. </li><li> 준비의 하단에있는 노란색, 작게 묶은, 막의 조직까지 필. mvns은 약하게이 조직의 아래쪽에 첨부됩니다. 그것이 뽑아므로 조심스럽게 노란색 조직에서 mvns를 구분한다. 노란색 조직을 따라 뇌 함께 했네요. </li><li> 머리를 종료 두꺼운 프로세스를 따라 그 연장 laterallY. 이들은 commisural 신경입니다. commissural 신경의 끝에 도달하면, 거리에 두뇌의 측면에서 절단되어 해면, 오프 화이트 조직의 덩어리를 제거합니다. </li><li> 이온와 아들이 톱니바퀴를 충족 어디, 이온와 아들의 길이를 나타내기 위해 근육과 조직을 버려야. </li><li> 스파 티드 hypodermis 패치로 돌아가기 그것을 잘라. 이것은 STG 주변 동맥의 개통을두고해야합니다. 두 근육되는 측면 STG을 분리하기 위해 개방을 통해 잘라요. 이러한 근육의 끝부분을 들어 그들 동맥에서 분리하고 alns 및 agns을 폭로하기 위해 아래의 오른쪽 컷. 역 흩어져 연골처럼 멀리까지 측면 근육을 분리합니다. </li><li> 어디 mvns, dgn에 STG를 둘러싼 동맥 조직을 떼어 버리기, 그리고 DVN 만나. lvns에 DVN을 작업하고 lvns를 덮고 약간 흰, 섬세한 조직을 통해 했네요. </li><li> 준비 하단 소골편 통해 PSN을 찾습니다. PSN은 lvn 및 dlvn 접합을 찾습니다하는 데 사용할 수 있습니다. </li><li> 다음 pyn 및 pdn를 찾습니다 dlvn을 따르십시오. pyn는 종종 오프닝 pyloric ampulla 이상 래핑합니다. pdn은 dlvn의 포크에서와 pyloric ampulla과 심장 pyloric 밸브 근육 사이에 있습니다. 준비가 맑은 Sylgard 요리로 전송되었을 때 그들이 쉽게 혼동 수 있기 때문에 이러한 신경 중 하나에 연결된 근육 둡니다. </li><li> 일단 신경의 모든 STNS과 위장의 조직과 불필요한 신경 사이에 남아있는 연결이 끊어 밝혀왔다. 조심스럽게 모든 놓친 연결을 절단, 거리 위의 나머지 부분에서 STNS 이동합니다. </li><li> Sylgard 더 이상 너무 끈적 거리거나 건조한 느낌이 없을 때까지 Sylgard의 표면 위에 바르고하여 위 조직의 나머지 질량과 맑은 Sylgard 요리 상태. Sylgard은 소수성이고 Sylgard - 코팅 요리이 방식으로 에어컨하지 않은 경우 STNS 그것을 적극 준수합니다. </li><li> 접시 일부 차가운 호수를 추가합니다. 포셉와 commissural 신경의 위쪽 끝을 잡고 맑은 Sylgard 요리에 STNS 가져. </li><li> Sylgard에 STNS을 핀. commissural 신경에서 두뇌 세버 아래 먼저 톱니바퀴의 네 끝을 보호를 위해 minuten 핀을 사용합니다. 준비가 ivn 떠나 Sylgard부터 가리키는 것을 선택하여 오른쪽까지 있는지 확인하십시오. STG는 오른쪽까지 때 dgn는 STG 아래 약간 종료해야합니다. 신경의 나머지 부분을 핀 미세 철사 핀과 함께 아래로 끝납니다. </li><li> STNS에서 남아있는 근육이나 조직을 멀리 청소하십시오. </li><li> Desheath 핀 홀더와 약간 중독, 괜찮아요, 텅스텐 바늘을 사용하여 STG합니다. 멀리 세포 기관에서 STG 칼집의 모서리에 작은 구멍을 만들어 칼집의 레이어 사이에 접근하기 위해 구멍을 사용합니다. 조심스럽게 STG neuropil와 세포 기관을 폭로 분리된 껍질을 떼어 잘라. </li><li> 세포 기관에 접근을 증가하고 세포 레코딩을위한 STG 안정화를 아래로 껍질의 펄럭 핀. 각 신경 긴장 늦추지하고 잘 세포외 기록 (그림 3 참조) 간격 있도록 STNS의 나머지 부분을 다시 핀. </li></ol> 3. 검색 결과 <ol><li> 이상적으로, 신경의, 특히 깨진 손상에서 기록되는 것들 무료로해야합니다. 신경의 어느 것도 리게하거나 트위스트해야합니다. STG는 neuropil 주위에 수염 형성에 배열 세포의 모두 손상됩니다. 그대로 STNS는 양자 대칭이고 다리, 팔, 머리로 앞쪽에 엔드로 mvns로 lvns와 homunculus 같다. </li></ol> 약어 : <table border="1"><tbody><tr><td> STNS </td><td> Stomatogastric 신경계 </td></tr><tr><td> STG </td><td> Stomatogastric 신경절 </td></tr><tr><td> 코그 </td><td> Commissural 신경절 </td></tr><tr><td> OG </td><td> Oesophageal 신경절 </td></tr><tr><td> mvn </td><td> 미디언 심실 신경 </td></tr><tr><td> 이온 </td><td> 열등 oesophageal 신경 </td></tr><tr><td> 아들 </td><td> 우수한 oesophageal 신경 </td></tr><tr><td> agn </td><td> 앞쪽에 위의 신경 </td></tr><tr><td> ALN </td><td> 앞쪽에 측면 신경 </td></tr><tr><td> dgn </td><td> 도설 위의 신경 </td></tr><tr><td> DVN </td><td> 도설 심실 신경 </td></tr><tr><td> lvn </td><td> 측면 심실 신경 </td></tr><tr><td> PSN </td><td> 후부 위 신경 </td></tr><tr><td> pyn </td><td> Pyloric 신경 </td></tr><tr><td> pdn </td><td> Pyloric 확장시키는 신경 </td></tr><tr><td> dlvn </td><td> 측면 심실 신경의 도설 지점 </td></tr><tr><td> ivn </td><td> 열등 심실 신경 </td></tr></tbody></table><img src="/files/ftp_upload/1207/figure_1_90ppi.jpg" alt= &quot;그림 1&quot;/&gt; 그림 1 : 해부하기 전에 복부에 STNS의 대략적인 위치를 설명하는 다이어그램. <img src="/files/ftp_upload/1207/figure_2_90ppi.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2 : 밝은 녹색의 위장과 STNS의 오버레이의 하단 부분에 다양한 근육의 다이어그램. STG의 각 세포 유형은 그들이 신경을 분포시키다하는 것으로 알려져있는 근육과 함께 나열됩니다. 주어진 셀 (Nadim 연구실의 호의)에서 신호를 전달 신경을 해부하다 계획 때이지도는 유용합니다. <img src="/files/ftp_upload/old/1207_2009_1_12_5/figure_3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3 : 세포내 전극과 세포외 우물 (Marder과 부처, 2007)로 STNS의 도식 다이어그램.

<ol><li>Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarris-Warrick%2C+RM+%22Dynamic+Biological+Networks%3A+The+stomatogastric+nervous+system%22">Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system</a>. , MIT Press. Boston. (1992).</li>
<li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+circuit+dynamics+using+the+stomatogastric+nervous+system+of+lobsters+and+crabs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.</a> Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).</li>
<li>Maynard, D. M., Dando, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+stomatogastric+neuromuscular+system+in+Callinectes+sapidus%2C+Homarus+Americanus+and+Panulirus+argus+%28Decapoda+crustacean%29%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.+Trans.+R.+Soc.+Lond.+B+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean).</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268 (892), 161-220 (1974).</li>
<li>Selverston, A. I., Russell, D. F., Miller, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Stomatogastric+Nervous+System%3A+Structure+and+function+of+a+small+neural+network%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The Stomatogastric Nervous System: Structure and function of a small neural network.</a> Prog. Neurobiology. 7, 215-290 (1976).</li>
</ol>

STNS의 해부는 전기 생리학 또는 immunohistochemistry 실험, 또는 세포 배양을위한 세포를 얻기위한 수행의 첫 단계입니다. 상관없이 의도 실험, 총 해부는 변경되지 않습니다. 그러나, 미세 절개가 다를 수 있습니다. 앞으로도에서 기록 세포와 신경 어느 시간 계획하는 것이 중요합니다. STG 대부분의 뉴런은 복부에있는 하나 이상의 근육 신경을 분포시키다 (그림 2 참조)하고 innervated 대상에 따라 분류되어 프로세스가 있습니다. 따라서, 세포외 음반 완전히 intracellularly 기록되고 세포의 신원을 확인하기 위해 필요합니다. pyloric 리듬의 주파수와 견고은 준비의 건강을 모니터링하는 데 사용됩니다. 따라서, 많은 실험 lvn에서 세포외 기록을 포함합니다. dgn은 일반적으로 위장 리듬을 모니터링하는 데 사용됩니다. 거기에 많은 modulatory 세포가 STNS의 앞쪽에 결국에는하고 신경을 severing하면 pyloric과 위장 리듬이 불규칙를 중지하거나이...

<table><tbody><tr><td>Black Sylgard 170</td><td>기타</td><td>Dow Corning</td><td>170</td><td>대조해부</td></tr><tr><td>미세 가위</td><td>수술</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>곤충 핀 6번</td><td>수술</td><td>Fine Science Tools</td><td>26000-65</td><td></td></tr><tr><td>마요 가위</td><td>수술</td><td>Fine Science Tools</td><td>14110-17</td><td></td></tr><tr><td>미세 스파출라</td><td>수술</td><td>WARD&amp;rsquo;s Natural Science</td><td>15 V 4313</td><td></td></tr><tr><td>론저 (골삭제 겸자)</td><td>수술</td><td>Fine Science Tools</td><td>16000-14</td><td></td></tr><tr><td>조직 포셉</td><td>수술</td><td>Fine Science Tools</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>미세 텅스텐 와이어 (0.001 in. 직경)</td><td>수술</td><td>California Fine Wire Company</td><td></td><td>미세 해부</td></tr><tr><td>포셉 #5</td><td>수술</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>미누텐 핀</td><td>수술</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>모리아 스프링 가위 (7mm 날)</td><td>수술</td><td>Fine Science Tools</td><td>15370-52</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시 (100x15mm)</td><td>기타</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>핀 홀더</td><td>수술</td><td>Fine Science Tools</td><td>26018-17</td><td></td></tr><tr><td>초미세 포셉 #5SF</td><td>수술</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 182</td><td>기타</td><td>Dow Corning</td><td>182</td><td></td></tr><tr><td>텅스텐 바늘</td><td>수술</td><td>Fine Science Tools</td><td>10130-05</td><td></td></tr><tr><td>해부 현미경</td><td>현미경</td><td>Wild</td><td>MC3</td><td>기타</td></tr><tr><td>요나게 ( &lt;em&gt;C. borealis&lt;/em&gt;)</td><td>동물</td><td>Commercial Lobster</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

암 보레알리스 stomatogastric 신경계의 해부

Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

그것이 잘 특징 세포의 비교적 적은 수의 (약 25 C. 보레알리스)를 포함하고 있기 때문에 stomatogastric 신경절 (STG)는 휴대 전화 및 네트워크 상호 작용을 공부를위한 훌륭한 모델입니다. STG의 세포는 출력의 광범위한 전시와 복부의 모터 동작에 대한 책임이 있습니다. 위 세 가지 내부 치아와 음식, 그리고 midgut에 도달하기 전에 음식을 필터 pylorus를 나누기 위의 밀 포함되어 있습니다. STG는 위장 공장 및 중앙 패턴 발생기 (CPGs)로 알려진 pylorus를 제어하는​​ 두 리듬 출력을 생산하고 있습니다. STG의 각 세포는 이러한 리듬 중 하나 또는 둘 모두에 참여할 수 있습니다. 이러한 CPGs는 neuromodulation의 연구, 항상성, 휴대 전화 및 네트워크 다양성, 네트워크 개발 및 네트워크 복구를 위해 수 있습니다. 요나 크랩 (암 보레알리스)에서 stomatogastric 신경계 (STNS)의 절개는 두 부분으로 이루어집니다, 총 훌륭한 절개를. 총 해부에서 전체 복부는 게에서 해부하는 것입니다. 미세 절개 동안 STNS은 해부 현미경과 미세 해부 도구를 (그림 1 참조)를 사용하여 위장에서 추출됩니다. STNS는 STG, oesophageal 신경절 (OG), 그리고 commissural 신경 (COG)뿐만 아니라 복부 근육을 신경을 분포시키다 신경을 포함합니다. 여기, 우리는 세포 레코딩에 사용 될 STG의 세포가 intracellularly와 주변 신경에서 녹화한 것입 전기 생리학 실험 준비 STNS의 전체 절개를 수행하는 방법을 보여줍니다. 원하는 신경을 찾기위한 적절한 기술은 somata와 neuropil을 나타내기 위해 신경을 desheathing 우리의 기술뿐만 아니라 표시됩니다.

요나 크랩의 stomatogastric 신경계 (STNS) (<em&gt; C. 보레알리스</em&gt;) 전기 생리학, immunohistochemistry, 그리고 세포 배양 연구에 사용될 수 있습니다. STNS 추출은 두 부분으로 이루어집니다 : 총 훌륭한 절개를.

암 보레알리스 Stomatogastric 신경계의 해부

위식도 신경절(stomatogastric ganglion, STG)은 비교적 적은 수의 ...를 포함하고 있어 세포 및 네트워크 상호작용을 연구하기 위한 탁월한 모델입니다.

본 절차는 게의 부속지와 등쪽 손목마디를 제거하는 게 위장의 육안 해부로 시작합니다. 동물로부터 위장 전체를 적출합니다. 위장을 절개한 후 검은색 샤드 접시(sard dish)에 평평하게 펴서 핀으로 고정합니다.정밀 해부를 준비하기 위해, Steamatic 위 신경계를 위에서 분리하여 투명한 Sard 코팅 페트리 접시에 옮긴 후, 전기생리학 실험 준비를 위해 외피를 제거합니다. 안녕하세요, Brandeis University의 Martyr Lab 소속 Rachel Au입니다. 그리고 저 또한 Martyr Lab 소속인 Gabrielle Gutierrez입니다.오늘은 Crab Cancer Borealis에서 체성 위 신경계를 박리하는 절차를 보여드리겠습니다. 저희 실험실에서는 전기생리학, 면역조직화학 및 세포 배양 실험을 위해 게의 St NS를 사용합니다. 이 신경망을 통해 신경 조절 항상성, 네트워크 가변성, 네트워크 발달 및 네트워크 회복과 같은 신경생물학의 여러 기본 원리를 연구할 수 있습니다.이제 시작하겠습니다. 해부를 시작하기 전, 게를 얼음 속에 30분 동안 묻어 마취시켜야 합니다. 게의 모든 방향이 얼음으로 둘러싸여 있는지 확인하십시오.얼음은 게의 감각 및 운동 체계를 마비시키지만, 게가 냉각되는 동안 얼음에서 꺼내면 여전히 반응을 보일 수 있습니다. 프로토콜의 이 단계에 필요한 장비를 준비하여 육안 해부를 준비하십시오. 시작 전, 해부 팬, 론 턱(Ron jaws), 골절 가위, 소형 가위, 치과용 핀셋, 끝이 좁은 스패튤라, 검은색 실가드(sill guard) 코팅 접시 및 곤충 핀을 준비합니다.장갑을 착용하여 준비하십시오. 30분이 경과하면, 뒷다리를 잡아 얼음 버킷에서 게를 꺼냅니다. 집게발에 물리는 것을 방지하기 위해, 각 집게발을 안쪽으로 비틀어 제거한 후 해부 팬에 놓으십시오.다음으로, 동일한 회전 동작을 사용하여 각 다리를 제거합니다. 동물의 부속지가 모두 제거되면, Ron Jos를 사용하여 입을 덮고 있는 상악골과 연성 상악골을 제거합니다. 다시 Ron Jos를 사용하여 carpus의 외측 후단부터 시작하여 그 가장자리를 단단히 잡습니다. Ron Jos로 강하게 집어 해당 carpus 조각을 분리합니다.스패튤라가 개구부에 들어갈 수 있도록 손목(carpus) 부위를 충분히 제거하십시오. 눈 부위까지 손목 가장자리를 계속해서 제거하고, 반대편에서도 동일하게 반복하십시오. 스패튤라의 가늘어지는 부분을 사용하여 등쪽 손목(dorsal carpus) 천장 부분에서 부드러운 내부 조직을 조심스럽게 긁어내십시오.이 과정을 수행하는 동안 스패튤라를 carus에 계속 접촉 상태로 유지하십시오. STNS의 손상을 방지하기 위해 Ron Jos를 사용하여 조직에서 분리된 carus 부분을 떼어내십시오. carus에서 두 개의 작은 S가 돌출된 지점까지 배측 carus를 제거하십시오.가능한 한 앞쪽으로 절개하십시오. 한 손가락으로 머리 부분을 고정한 상태에서 등쪽 갑각의 가장 앞부분을 떼어냅니다. 배쪽 갑각에서 연조직 일부를 분리하십시오.carus의 복측면에서 조직을 carus에 부착시키고 있는 모든 내전근을 반드시 분리하십시오. 턱의 한쪽 끝을 하악에 고정한 뒤 밖으로 비틀며 당겨 하악을 하나씩 추출하십시오. 이때 두 개의 긴 장애물과 근육이 추출된 하악에 부착되어 있어야 합니다. 적절하게 수행되었다면, 눈 근처의 cephalon 측면에서 조직이 분리됩니다.작은 해부 가위를 든 스파출라를 사용하여 이석(ossicle)의 능선 바로 옆 조직을 층별로 가로질러 절개합니다. 게의 남은 부분을 해부 팬에 기대어 세웁니다. 분리된 집게다리를 사용하여 상순(labrum) 전체를 상악(epistle)에서 분리합니다.골 절단용 소형 가위를 사용하여 복측 수근골(ventral carpus)에 대각선으로 두 번 절개합니다. 두부(cephalon)를 제거하기 위해, 치과용 핀셋으로 상순(labrum)을 잡고 복측의 구공(osci)에서 하순(labium)을 절단하여 분리합니다. 남은 복측 수근골에서 입술 부분을 조심스럽게 들어 올려 떼어냅니다.작은 가위를 사용하여 위(stomach)의 복측 부분을 위장관(carus)을 둘러싼 조직으로부터 분리합니다. 공공 캐뉼라(pori canula)가 보이면, 핀셋으로 위(stomach)의 입술 부분을 잡고 위(stomach)가 게로부터 완전히 추출될 때까지 양옆의 조직을 잘라냅니다. 위(stomach)를 손바닥 위에 올리고 입 부분에 식염수를 붓습니다.이렇게 하면 위가 확장되어 소형 가위를 이용해 절개하기가 더 쉬워집니다. 입구부터 혀밑샘 사이를 통해 장애물까지 일직선으로 절개하십시오. 그런 다음 두 개의 심장 분지를 따라 대각선 아래로 절개하십시오.마지막으로 위 내부에 있는 세 개의 치아 끝부분을 절단합니다. 정밀 해부를 준비하기 위해 위 내부가 아래로 향하도록 검은색 사드 코팅 접시 위에 위를 올립니다. 곤충 핀을 사용하여 위의 다섯 모서리를 고정하고, 준비된 시료를 차가운 식염수에 담급니다.정밀 해부는 실체 현미경 하에서 수행하며, 핀셋과 스프링 가위, 그리고 텅스텐 바늘이 장착된 핀 홀더가 필요합니다. 코팅된 투명 실 가드 페트리 접시와 미세 와이어 핀을 미리 준비해야 합니다. 최저 배율부터 시작하여, 이전의 입 개구부였던 입술 근처의 플랩을 핀으로 고정합니다. 이제 필요에 따라 핀을 재배치하거나 추가하여 표본을 팽팽하게 만듭니다.포셉을 사용하여 표본 하단을 덮고 있는 점박이 모양의 하피(hypodermis)를 조심스럽게 들어 올린 후, 두 개의 흰색 점이 있는 하피 패치 형태로 남도록 가로로 다듬어 절단합니다. 이제 표본 하단 근처의 노란색의 가느다란 막성 조직을 벗겨냅니다. M vns는 이 조직의 아래쪽에 약하게 부착되어 있습니다.가위 날을 사용하여 M VNS를 위로 끌어올리면서 주변의 노란색 조직으로부터 조심스럽게 분리하십시오. 뇌의 가시적인 몇몇 두꺼운 흰색 돌기 옆에 있는 노란색 조직을 잘라내십시오. 현재 뇌의 대부분은 조직에 묻혀 있습니다.측면 및 입술 방향으로 뻗어 있는 경로를 따라가십시오. 이것들이 두 개의 교차신경(commissural nerves)입니다. 교차신경의 끝부분을 찾았다면, 뇌의 측면에서 절단된 거대한 스펀지 모양의 흰색 조직을 제거하십시오.교차 신경절(commis ganglia)과 만나는 지점에서 iOS 및 sos를 찾습니다. 근육과 조직을 절개하여 IO ns와 so ns의 길이를 드러나게 합니다. 이 두 신경은 교차 신경절에서 내측으로 주행하여 식도 신경과 만납니다. 반점으로 표시된 하피 패치로 돌아가 이를 절단하여 제거합니다.이렇게 하면 STG를 둘러싸고 있는 동맥에 개구부가 생깁니다. 이 개구부를 통해 절개하여 STG 양옆에 위치한 두 근육을 분리하십시오. 이 근육들의 끝부분을 들어 올리고 그 아래쪽을 절개하여 동맥으로부터 분리합니다. 이 단계에서 ALNs가 노출됩니다.STN 위의 연골선까지 측면 근육들을 제거하십시오. TN은 STG에서 위로 뻗어 있는 신경이며 약간 돌출되어 있습니다. 다음으로, M vns DGN과 DVN이 만나는 지점까지 STG 주변의 동맥 조직을 잘라내십시오.DVN이 두 개의 LVN으로 갈라지는 지점을 따라가십시오. 각 LVN이 완전히 노출되어 DLVN과 만날 때까지 희백색의 섬세한 조직을 절개하십시오. Osco 위에 있는 PSN의 위치를 찾으십시오.표본의 하단 부근에서 PSN을 이용하여 LVN과 DLVN의 접합부를 찾을 수 있습니다. 따라서 DV DLV는 이 방향으로 진행됩니다. 여기로 내려옵니다. 네.그런 다음 분지되어 이 방향으로 진행합니다. 맞습니다. 그래서 제가 보통 하는 방식은 여기서 그것들을 찾아낸 다음 다시 위쪽으로 거슬러 올라가는 것입니다. PDN은 DLVN에서 분지되며 ULA와 cardio Pylori 밸브 근육 사이에 위치합니다. 네. 여기에 ampule ula, ula ampule, 그리고 바로 여기 PYN이 있습니다.이들 신경을 서로 구분하기 위한 표식으로 일부 근육을 신경에 부착된 상태로 남겨두십시오. 모든 신경이 노출되면 STNS와 위 사이의 남은 연결 부위를 모두 절단합니다. 마지막으로, STNS를 위의 나머지 부분으로부터 조심스럽게 분리하십시오.놓친 연결 부위를 절단합니다. 위 조직을 투명한 S 가드 디쉬(S guard dish) 표면에 젖은 느낌이 들고 끈적임이 줄어들 때까지 문질러 준비합니다. 그러면 STNS가 소가(sogar)에 강하게 부착됩니다.디시를 이런 방식으로 전처리하지 않은 경우에는, 디시에 신선하고 차가운 식염수를 약간 추가하십시오. 포셉으로 교차 신경(commissional nerves)의 상단 끝부분을 잡고 st NS를 깨끗한 소가(sogar) 디시로 옮깁니다. 엉킴을 방지하기 위해 뇌는 여전히 교차 신경에 부착된 상태로 유지됩니다.이제 뇌를 Commis 신경에서 분리하여 STNS를 핀 고정할 준비를 합니다. minuchin 핀을 사용하여 Commis 신경의 네 끝부분을 실 가드(sill guard)에 고정합니다. IVN이 위를 향하고 DGN이 STG 핀 약간 아래로 나오도록 확인하여 표본이 정방향으로 놓였는지 확인하십시오.미세 핀셋과 가위를 사용하여 나머지 신경 끝부분을 미세 와이어 핀으로 고정합니다. STNS에서 남아 있는 근육이나 조직을 조심스럽게 제거합니다. 이제 핀 홀더와 약간 굽은 미세 텅스텐 바늘을 사용하여 STG의 외피를 벗겨내야 합니다.세포체에서 떨어진 STG 초의 모서리에 작은 구멍을 냅니다. 텅스텐 바늘을 구멍 속으로 부드럽게 밀어 넣어 초와 Samara 사이에 위치시킵니다. 분리된 초의 일부를 자르거나 부드럽게 떼어내어 STG neuro pill과 세포체가 드러나게 합니다.세포체에 대한 접근성을 높이고 세포 내 기록을 위해 STG를 안정시키려면 시스(sheath)의 덮개 부분을 핀으로 고정하십시오. 나머지 STNS를 고정하되, 세포 외 기록을 위해 각 신경이 팽팽하게 유지되고 충분한 간격을 두도록 하십시오. 이상적으로는, 특히 기록 대상이 되는 신경들을 포함하여 모든 신경에 굴곡(neck)이나 손상이 없어야 합니다.어떤 신경도 엉키거나 꼬여서는 안 됩니다. STG는 손상되지 않아야 하며, 모든 세포가 NI bill 주변에 수염 모양으로 배열되어 있어야 합니다. TNS는 양측 대칭이며, LVN이 다리 역할을 하는 호문쿨루스(homunculus)와 같은 형태를 띱니다.M vns는 팔이며 앞쪽 끝부분은 머리입니다. 지금까지 전기생리학 실험 준비를 위해 게의 체성 위장 신경계를 해부하는 방법을 살펴보았습니다. 이 절차를 수행할 때, 기록하려는 신경이 지배하는 것으로 알려진 근육을 따라가며 해당 신경을 해부하는 것이 중요하다는 점을 기억하십시오.STNS의 피복이 벗겨진 면이 위를 향하도록 하여 투명한 시가 접시 위에 팽팽하게 고정하십시오. 이것으로 모든 과정을 마쳤습니다. 시청해 주셔서 감사하며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

cancer-borealis-stomatogastric-nervous-system-dissection

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

우리는 미국의 바닷가재의 뱃속에서 stomatogastric 신경계의 미세 절개를 설명...

Homarus Americanus Stomatogastric 신경계의 해부

우리는 미국의 바닷가재의 뱃속의 총 절개를 설명...

랍스터의 뱃속의 총 해부, Homarus Americanus</em

RAS V12 및 남겼, 종양 세포는 또한 침략적인 행동을 표시 초파리에있는 종양의 성장 결과와 같은 세포 극성 유전자의 돌연변이와 같은 활성화 된 발암 유전자 간의 협력. 여기에 양성 및 침입 종양의 유도 및 관찰을위한 간단한 프로토콜을 제시한다.

의 두부 컴플렉스 유전 유도하고 양성 및 침윤성 종양의 시각화를위한 프로토콜<em&gt; 초파리</em

칠성 장어는 완전 척수 손상 후 운동을 복구 할 수 있습니다. 그러나 일부 척추 - 투사 뉴런 좋은 재생기하고 다른 사람은 없습니다. 이 문서는 완전한 척수 transections 생산 및 현장 하이브리드에 대한 wholemount 뇌와 척수를 준비, 주택 바다 칠성 장어 유생 (최근 변화 성인)에 대한 기술을 보여줍니다.

이후 Wholemount을위한 완벽한 척수 손상 및 뇌 해부 프로토콜<em&gt; 제자리에서</em&gt; 애벌레 바다 장어의 하이브리드

여기에서는 가재의 복부 신경삭 해부에 대해 설명합니다. 우리는 또한 수영 운동 뉴런의 가상 운동을 기록하는 전기 생리학 기술을 보여줍니다.

왕새우의 Swimmeret 시스템 : 신경 코드 및 모터 패턴의 세포 외 녹음의 해부를위한 실무 가이드

이 비디오 기사는 췌관 선암에서 등쪽 뿌리 신경절(DRG)/암 세포 모델의 사용을 보여줍니다.

등쪽 뿌리 신경절 모델 : 암성 신경 침략의 생체 외 모델링에서

신경주위 침습(PNI)은 두경부 편평세포암(HNSCC)의 흔한 특징으로, 생존율이 낮습니다. 그 메커니즘은 잘 이해되지 않고 있습니다. 반고체 기질에 국한된 쥐 등쪽 뿌리 신경절에서 생성된 신경돌기를 활용하여 HNSCC 세포주의 PNI와 관련된 경로를 조사할 수 있습니다.

머리와 목 편평 ​​세포 암에서 신경초 침략을위한 모델

여기에서 우리는 수유 행동 도중 이 근육의 역할을 이해하기 위하여 해양 연체 동물 Aplysia californica의 공급 장치에 내재된 근육의 최소침습 외과 병변을 위한 프로토콜을 제시합니다.

Aplysia 칼리포르니카의 오돈토포어에 내재된 근육에 대한 최소 침습 병변 기술

이 프로토콜은 흡광도 전압에 민감한 염료 및 포토다이오드 어레이를 사용하여 비 형이상무척추동물 종의 단일 세포 분해와 신경 인구 활성을 이미징하는 방법을 제시한다. 이 접근 방식을 통해 하루 동안 이미징 및 분석을 추구할 수 있는 빠른 워크플로우가 가능합니다.

비 트랜스제닉 무척추 동물의 단일 신경 해상도를 가진 네트워크 역학을 기록하기위한 포토다이오드 기반 광학 이미징

본 프로토콜은 상부 경추 신경절을 식별하고 절제함으로써 아드레날린성 신경 분포를 절제하는 마우스 모델을 설명합니다.

쥐 모델에서 우수한 자궁경부 신경절 절제술을 위한 수술 기법

배우세요 Cancer borealis의 위신경계(STNS) 해부법으로 전기생리학 기록을 위한 신경회로 준비 방법을 익히세요. 이 기법은 중추 패턴 생성기와 신경조절 연구에 필수적입니다.

암 보레알리스 Stomatogastric 신경계의 해부

더 많은 동영상 탐색