엘라스타제와 Murine 실험 복부 대동맥 동맥류의 생성

복부 대동맥류를 생성하는 데 사용되는 이 외과적 시술은 복부 정중선 절개로 시작합니다. 복강 내 장기들을 옆으로 밀어내고 대동맥의 모든 분지들을 결찰합니다. 대동맥의 근위부와 원위부를 묶어 결찰합니다.

바늘로 심장을 천자하고 열수축 처리된 폴리에틸렌 튜브를 통해 엘라스타제(elastase)를 다량 주입합니다. 주입이 완료되면 대동맥(AOR) 절단 부위를 폐쇄합니다. 결찰사를 제거하면 대동맥에 혈액이 채워지며, 이후 복강을 폐쇄합니다.

그 후 마우스가 회복되도록 하며, 14일 후에 동맥류가 완전히 확장됩니다. 안녕하세요, 저는 스탠퍼드 대학교 심혈관 의학과의 태아 세포 연구실 소속 Julian Asma입니다. 오늘은 엘라스타제(elastase)를 이용한 새로운 실험적 복부 대동맥류 유도 주입 절차를 보여드리겠습니다.

우리는 실험실에서 복부 동맥의 PE를 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다. 그럼 시작해 보겠습니다. 실험을 시작하려면 C 57 black six 마우스와 같이 관심 있는 마우스를 선택하고, 마우스가 의식을 잃을 때까지 흡입성 iso fluorine으로 마취하십시오. 마우스 계통에 따라 동맥류 성장 속도가 다를 수 있음을 유의하시기 바랍니다.

마취된 마우스를 충분한 조명이 갖춰진 준비대로 옮깁니다. 늑골 끝부터 다리 뿌리까지 복부의 털을 깎습니다. 제모 크림을 사용하여 잔털을 제거합니다.

제모된 부위에서 모든 털이 제거될 때까지 70% alcohol로 맨살을 닦아냅니다. 그 다음, Betadine으로 피부를 최소 3회 닦아내며, 각 횟수 사이에 alcohol 스왑으로 닦아줍니다. 이제 마우스가 의식 없는 상태를 유지하도록 수술대 위에 마우스를 배측으로 눕힙니다.

수술 중에 비강에 튜브를 삽입하여 마취 유도 시와 동일한 유량으로 iso fluorine을 투여합니다. elastase는 얼음 위에 보관하며 시린지로 추출합니다. 그 다음 시린지를 고정하여 수술 부위 옆에 두고 카테터를 연결합니다.

카테터의 팁을 멸균 바이알에 넣어 멸균 상태를 유지하는 것이 중요합니다. 마우스를 절개하기 전에 멸균 기법이 사용될 수 있도록 준비하십시오. 먼저 멸균 장갑을 착용하는 것으로 시작합니다.

수술 도구, 가위, 니들 홀더 및 포셉은 수술 전에 반드시 살균해야 합니다. 준비 과정을 세심하게 점검하고 수술 중 발생할 수 있는 다른 잠재적 오염원을 찾아 해결하십시오. 시술 중 무균 상태가 깨진 경우, 핫비드 멸균기를 사용하여 도구를 다시 멸균하십시오.

모든 준비가 완료되면, 복강 내에서 복부 정중선을 따라 길게 절개하여 수술을 시작합니다. 복강 내 장기들을 복강 내 빈 공간으로 밀어내거나 멸균 거즈를 사용하여 복부 밖으로 견인함으로써 복부 대동맥을 노출시킵니다. 이제 포셉을 사용하여 왼쪽 신정맥 높이부터 분지점까지의 복부 대동맥을 조심스럽게 분리합니다.

제시된 사례의 경우, 대동맥을 결찰하는 부위보다 상단에 단일 분지가 있으므로 이를 묶을 필요는 없습니다. 만약 원위부 및 근위부 대동맥 결찰 부위 사이에 대동맥 분지가 있다면, 분기점에서 1cm 이내의 분지들을 10 aut 봉합사로 결찰하십시오. 대동맥의 근위부와 원위부에는 혈류를 차단하기 위해 6.0 silk 결찰사를 임시로 사용합니다.

이제 분기점에서 자절술을 수행합니다. 30 gauge 바늘로 분기점을 찌르는 것으로 시작하십시오. 가열하여 끝을 가늘게 만든 폴리에틸렌 튜브를 AOR 자절 부위를 통해 삽입하고 매듭으로 고정할 수 있습니다.

포셉을 사용하여 튜브를 대동맥에 조심스럽고 부드럽게 삽입하십시오. 100 milliliters의 압력을 사용하여 내피층이 박리되지 않도록 주의하십시오. 136 centimeters 높이에 걸린 식염수 백으로부터 엘라스타제(elastase)를 사용하여 대동맥을 관류하였습니다.

튜브 내에 공기가 없는지 확인하십시오. 공기가 있으면 압력이 정확하지 않을 수 있습니다. 식염수에는 밀리리터당 4.5 unit의 type one porcine pancreatic elastase가 포함되어 있으며, 대동맥을 채우는 데 5~15분이 소요되어야 합니다.

관류 중에 대동맥은 일반적으로 원래 직경의 약 140%까지 확장됩니다. 관류가 완료되면 관류 장치를 제거하고, 협착을 방지하기 위해 10 aught 봉합사로 대동맥 절개 부위를 폐쇄합니다. 절개 부위를 폐쇄한 후에는 원위부 결찰사 또한 제거해야 합니다.

수복된 절개부에서 출혈이 거의 없거나 전혀 없다면, 근위부 결찰사를 제거합니다. 출혈이 있는 경우, 대동맥의 근위부와 원위부에 6.0 soak 결찰사를 이용해 일시적으로 추가 결찰을 실시하고, 대동맥 절개부를 완전히 폐쇄하기 위해 봉합사를 하나 더 추가합니다. 근위부 결찰사를 제거하면 확장된 대동맥에 즉시 혈액이 채워집니다.

대동맥에 대한 처치가 완료되면, 장을 복강 내로 되돌려 놓습니다. 장을 견인한 상태였다면 장이 하나의 큰 덩어리로 미끄러지듯 들어가므로, 장의 기하학적 배치에 대해 걱정할 필요는 없습니다. 모든 장기가 제자리에 위치하면, 6-0 nylon 및 polypropylene 봉합사를 사용하여 외부 상처를 두 층으로 봉합하여 닫을 수 있습니다.

이제 절개 부위 1cm당 0.25% ICAN 한 방울과 같이 국소 마취제를 마우스에 투여합니다. 또한 항염증제인 Carin을 kg당 5mg의 용량으로 피하 주사합니다. 이제 수술이 완료되었으며, 마우스를 따뜻한 곳에 두어 의식을 회복하도록 합니다.

회복은 보통 15분 이내에 이루어집니다. 마우스가 의식을 회복하면 개별 케이지로 옮기고 회복될 때까지 주기적으로 관찰합니다. 시술 후 대동맥은 일반적으로 원래 직경의 약 140~160%까지 확장됩니다.

이러한 초기 확장은 7일까지 안정화되는 양상을 보입니다. 7일에서 14일 사이에 급격한 2차 확장이 일어납니다. 14일째에 신장하 대동맥에서 동맥류를 관찰할 수 있습니다.

지금까지 생쥐의 복부 대동맥류를 elastase로 유도하는 방법을 보여드렸습니다. 이 절차를 수행할 때는 ata 내부에 혈전이 형성되지 않도록 주의하는 것이 중요합니다. 이것으로 모든 과정을 마치겠습니다.

시청해 주셔서 감사하며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.