볼륨 압력 녹음, 꼬리 즉석 방법을 사용하여 마우스의 측정 혈압

coda라는 단어는 이탈리아어로 꼬리를 뜻합니다. Coda 비침습적 혈압 측정 시스템은 동물의 꼬리에 배치했을 때 꼬리 혈액량의 변화를 측정하는 특수 체적압 기록 센서를 통해 설치류의 혈압 측정을 가능하게 합니다. 이 영상에서는 시스템 설정 방법, 동물 준비 과정, 그리고 8마리 동물의 혈압을 동시에 측정하는 방법을 시연합니다.

안녕하세요, 저는 켄터키 대학교 렉싱턴 캠퍼스 심혈관 연구 센터의 Alan Dougherty 연구실에서 근무하는 Anju Bala Krishnan입니다. 오늘은 체적 압력 기록 꼬리 커프법(volume pressure recording a tail cuff method)을 이용해 생쥐의 혈압을 측정하는 절차를 보여드리겠습니다. 저희 연구실에서는 심혈관계를 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다.

이제 시작하겠습니다. CODA 시스템을 설치하려면 실험실 내에서 실온이 20°C 이상으로 일정하게 유지되는 구역을 선택하십시오. 에어컨 통풍구 근처는 피하시고, 동물이 큰 소음이나 냄새에 노출되어 자극을 받거나 스트레스를 받지 않도록 하십시오.

동물 냄새에는 착용하고 계신 강한 향수 등이 포함될 수 있습니다. Coda 컨트롤러와 레벨 3으로 설정된 가온 플랫폼의 전원을 켭니다. 실내 온도가 25 °C 이상인 경우, 레벨 1 또는 2부터 시작하십시오.

먼저 컨트롤러 진단 테스트를 수행하십시오. Coda 소프트웨어를 엽니다. Coda 장치를 클릭하여 선택합니다. 선택한 장치 테스트를 클릭하십시오.

테스트할 커프와 채널을 선택하고 테스트를 클릭하십시오. 컨트롤러 진단 테스트가 완료되면 장치 테스트 창을 닫으십시오. 사용할 컨트롤러의 코드를 선택한 다음 클릭하십시오.

이 장치들을 사용하여 소프트웨어를 설정하십시오. 도구 관리 인원을 선택하십시오. 다음으로, 연구원 1을 클릭하십시오.

이름을 변경하려면 다음 행을 클릭하여 연구원을 추가하십시오. 그런 다음 데이터 저장(save data)을 클릭하십시오. 기술자를 수정하거나 추가하려면 기술자(technicians) 탭을 클릭하십시오.

그 후, specimen 탭을 클릭하여 동물들의 이름을 입력해 쉽게 식별할 수 있도록 하고 동물 유형을 선택하십시오. 그런 다음 데이터 저장(save data)을 클릭하십시오. 마지막으로, animals 탭을 클릭하십시오.

동물 종류와 민감도를 변경하려면 데이터 저장(save data)을 클릭한 후 닫으십시오. 새로운 실험을 시작하려면 파일(file)에서 새 실험(New experiment)을 선택하십시오. 실험 이름을 입력하고, 책임 연구원을 선택한 다음 시작 날짜를 선택하십시오.

다음(next)을 클릭하십시오. 다음 단계는 기본적인 세션 정보를 입력하는 것입니다. 세션 이름을 입력하는 것부터 시작하십시오. 순응 사이클을 포함하고 싶다면 5로 설정하고, 포함하고 싶지 않다면 0으로 설정하십시오.

세트 수를 1회로 설정하고, 여러 세트를 진행하는 경우 세트 간 간격을 30초로 설정하십시오. 세트당 사이클 수는 20사이클로, 사이클 간 간격은 5초로 설정하십시오. 그런 다음 다음(next)을 클릭하십시오.

검체 선택을 시작하려면 검체 풀에서 검체를 선택하여 사용 가능한 첫 번째 채널에 할당하십시오. 그런 다음 다음을 클릭하여 세션 매개변수를 설정하십시오. 최대 폐쇄 압력을 250 millimeters로 설정하십시오.

수은 디플레이션 시간을 20 seconds로 설정하십시오. 마우스의 경우, 최소 부피를 15 µL로 설정하고 표시 스타일을 그래프당 하나의 채널로 설정하십시오. 또한 추가 연구원 및 기술자를 등록할 수 있습니다.

그런 다음 '다음'을 클릭하십시오. 세션 스크립트를 검토하고 '다음'을 클릭하십시오. 다음에 설명될 동물 준비 섹션을 완료할 때까지 '마침'을 선택하지 마십시오.

이제 동물을 회수하여 coda 혈압 측정 시스템 옆에 배치하십시오. 동물을 홀더에 넣기 전에, 선택한 홀더의 크기와 각 동물의 크기를 비교하여 확인하십시오. 동물이 홀더에 자유롭게 들어갈 수 있어야 합니다.

동물의 꼬리를 잡아 홀더의 뒤쪽(노즈콘의 개방된 끝부분을 향하는 쪽)에 부드럽게 놓아 각 동물을 홀더에 배치합니다. 뒤쪽 해치의 나사를 돌려 해치를 홀더에 조심스럽게 고정합니다. 이때 뒤쪽 해치를 고정하는 동안 꼬리나 다른 신체 부위가 끼이지 않도록 주의하십시오.

다음 슬라이드입니다. 노즈 콘을 후방 해치 방향으로 향하게 하여 동물의 움직임을 제한합니다.

노즈 콘은 동물이 몸을 돌리지 못하도록 제한하는 위치에 있어야 합니다. 홀더에 넣은 상태로 홀더를 가온 플랫폼 위에 올리십시오. 지정된 위치에서 동물이 홀더에 적응할 수 있도록 최소 5분간 대기하십시오.

동물을 만지거나 취급하지 마십시오. 홀더 내부에 있을 때 접촉이 증가하면 동물이 자극을 받을 수 있으므로, 동물을 홀더에 둔 채로 자리를 비우지 마십시오. 폐쇄 꼬리 커프를 적절하게 배치하려면, 꼬리를 폐쇄 커프에 통과시킨 후 무리한 힘을 가하지 않고 꼬리 기저부에 최대한 가깝게 커프를 위치시키십시오.

그 후, 꼬리를 VPR 센서 커프에 통과시켜 폐쇄 커프에서 2mm 이내에 위치시킵니다. 튜브를 홀더 상단 후면의 홈에 고정합니다. 꼬리로 가는 혈류를 차단하기 위해 폐쇄 꼬리 커프를 팽창시킵니다.

폐쇄 커프를 천천히 팽창 해제하면, 특수 설계된 센서가 포함된 VPR 꼬리 커프가 꼬리로 다시 흐르는 혈류의 생리학적 특성을 측정합니다. VPR 센서 커프는 혈류로 인한 동맥 박동의 결과로 나타나는 꼬리의 부종을 측정합니다. 꼬리 부종이 처음 나타나는 시점에 수축기 혈압이 자동으로 측정됩니다.

꼬리의 팽창률 증가가 멈추면 이완기 혈압이 자동으로 계산됩니다. 모든 동물을 홀더에 배치하고 꼬리에 커프를 착용한 후, 최소 5분 동안 체온 조절 시간을 줍니다. 동물의 체온을 기록하십시오.

적외선 온도계를 사용하여 동물의 온도가 32에서 35 °C 사이인지 수시로 확인해야 합니다. 이제 동물의 준비가 되었으므로 실험을 시작할 수 있습니다. 완료를 클릭하여 실험을 시작하십시오.

빨간색 선은 폐쇄 커프와 VPR 센서 커프의 감압을 나타냅니다. 파란색 선은 꼬리의 혈액량 변화를 나타냅니다. 파란색 선의 첫 번째 변곡점인 변화율의 최솟값이 수축기 혈압을 나타냅니다.

청색 선의 두 번째 변곡점인 최대 변화율은 실험이 종료되었을 때의 이완기 혈압을 나타냅니다. 동물들을 커프와 홀더에서 즉시 분리하십시오. 간단한 세션 요약 보고서가 표시됩니다.

실험에서 수집된 데이터는 Excel 파일로 저장됩니다. Excel 파일 내에서 데이터를 처리하는 방법은 여러 가지가 있습니다. 일반적인 방법으로는 평균과 표준편차를 구하고, 이상치 측정값을 삭제하는 것이 있습니다.

표준 편차가 30보다 큰 경우입니다. 또한, 거부된 사이클을 확인할 수 있으며 전체 데이터베이스를 엑셀로 쉽게 내보낼 수 있습니다. 서면 프로토콜과 사용자 매뉴얼을 참조하십시오.

추가 정보로, 지금까지 볼륨 압력 기록법을 사용하여 마우스의 혈압을 비침습적으로 측정하는 방법을 보여드렸습니다. 정확하고 일관된 측정값을 얻기 위해서는 이 절차를 준수하여 동물의 스트레스를 줄이는 것이 가장 중요합니다. 이것으로 모든 설명을 마치겠습니다.

시청해주셔서 감사하며, 실험에서 좋은 결과 얻으시길 바랍니다.