Name: 개별적으로 흩어져 셀의 우위와 세포학 표본에서 셀 블록 준비 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: 학습하세요 흩어진 세포의 셀 블록 제조법을 AV 마커와 HistoGel을 이용해 중심화하고 파라핀 매립하는 방법을 통해. 이 기법은 면역 프로파일링과 특수 염색 평가의 정확성을 향상시킵니다.

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저자는 유명 마커와 셀 블록의 절단 부분을 보여주는위한 크리스 차트, HT (ASCP)를 주셔서 감사합니다.

소개 : 이것은 HistoGelTM (써모 과학) (HG)를 사용하여 액체 기반 세포학 (LBC) 표본에서 셀 블록 준비 Shidham의 방법을 설명하는 동영상입니다. 다른 임의의 접근법에 비해 다음은이 프로토콜의 두 가지 중요한 기능은 단독으로 흩어져 느슨한 세포 (1-5)과 상대적으로 hypocellular 표본에서 셀 블록을 준비하고 있습니다. <ol><li> 이 프로토콜은 셀 블록의 절단 표면에 평행하게 비행기 따라 세포를 집중하는 단계를 포함한다. </li><li> 또한 다음과 같은 목적으로 두 가지를 제공 AV - 마커 (그림 1B)의 등대 같은 어두운 포함을 포함 : <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> 세포가 집중되는의 수준을 시각화합니다. 어두운 색 신호를 절단하는 동안 노출되었을 때 관심의 세포와 세포 블록의 면적은 현재 histotechnologist에 의해 시각 수 있습니다. 모니터 이러한 능력은 세포의 대부분 수준으로 절단하거나, 샘플 세포의 높은 농도와 수준에 너무 피상적인 절단하지에서 하나를 방지합니다. </li><li> 다른 슬라이드에 직렬 셀 블록 섹션에 위치 참조 지점 역할을합니다. 이 기준점은 스키피오 접근 (6,7)와 좌표 immunoreactivity 패턴의 평가를위한 세포의 특정 세포 또는 그룹을 찾을 수 있도록 신호기 역할을합니다. </li></ol></li></ol> 프로토콜 (그림 2) 샘플 준비. <ol><li> 평평한 바닥 유리관 (15mm 직경 X 45mm) (2.4를 통해 그림 2.1)에 잔여 LBC 자궁 경부의 세포학 표본을 전송합니다. 큰 플라스틱 캐리어 튜브 (28 X 85mm)과 원심 분리기에 유리 튜브를 놓습니다. 캐리어 튜브에서 유리 바닥 튜브를 제거하고 표면에 뜨는를 부어. </li><li> 유리관은 다음 뒤덮힌 (다음 단계에서 가열 물을 spillage을 방지하기 위해)와 큰 평면 바닥 캐리어 플라스틱 튜브 안으로 배치됩니다 </li><li> 유리 튜브를 포함하는 캐리어 플라스틱 튜브 그러면, 덮인 원심 분리기에 배치 (세포가 유리관의 평평한 바닥에 수직으로 떨어질 수 있도록 선회 컵 아닌 고정 각도 컵을 함께), 그리고 1805에서 G (3000 RPM으로 늘인입니다 로터 반경 - 17cm) 오분 (그림 2.5)에 대한. </li><li> 튜브는 다음 원심에서 수직으로 제거하고 작은 유리관은 세포와 sedimented 펠렛을 방해하지 않고 더 큰 캐리어 플라스틱 튜브에서 집게로 제거됩니다. </li><li> 표본있는 유리관이 uncapped되고 뜨는은 하단에있는 침전물 세포의 평면 계층 (그림 2.6) 방해하지 않도록 돌봐 해제 붓고있다. </li></ol> 참조 좌표 AV - 마커의 포함과 더불어 젤 <ol><li> 어두운 신호를 AV - 마커 (약 2mm X 2mm 크기, 평면은 어두운 색, sectionable 소재 조각, 표면) (그림 3)은 유리관에 푯말 (그림 2.7)로 추가됩니다. </li><li> 중간 전력 10 초 동안 전자 레인지에 용해하여 HG의 나누어지는을 녹일. </li><li> 빨리 퇴적물과 튜브, 믹스로 용융 HG 0.5 ML를 추가하고 (HG는 응고 시작 수 있도록하지 않고 신속하게 다음 단계로 진행) (그림 2.8)을 해드리겠습니다. </li><li> 의 약 2.5 ML를 추가 따뜻한 (45 ° C) 캐리어 플라스틱 튜브에 물 (그림 2.9). </li><li> 작은 덮인 유리 튜브는 따뜻한 물로 플라스틱 튜브 안에 저장됩니다. (이 단계는 다음 단계 동안 응고의 HG를 유지하는 데 필요한 것입니다) (그림 2.9). </li><li> 캐리어 플라스틱 튜브 (세포가 유리관의 평평한 바닥에 수직으로 떨어질 수 있도록 선회 컵 아닌 고정 각도 컵 포함) 원심 분리기에 배치하고, 다섯을위한 1805에서 G를 (3000 RPM으로, 로터 반경 - 17cm) 늘인입니다 분. 이 원심 분리 단계의 목적은 AV - 마커를 밀고하고 가까이 최종 파라핀 임베디드 셀 블록 (그림 1D)의 절단 표면에 레이어로 세포를 집중하는 것입니다. </li><li> 튜브 그런 다음 하단에있는 샘플 세포와 sedimented 얇은 레이어를 방해하지 않도록 돌봐 원심에서 부드럽게 수직으로 제거됩니다. </li><li> 큰 플라스틱 튜브 uncapped되고 작은 유리관은 표본 세포의 퇴적물 층을 교란하지 않고 포셉에 의해 수직으로 제거됩니다. </li><li> 작은 유리관은 근사하고 HG (그림 2.11)을 응고 15 분 동안 수직 위치에 냉장 있습니다. </li></ol> 최종 처리를위한 시료로 젤의 버튼으로 셀 블록 제거 <ol><li> 바닥에 침전물 / 집중 시편의 레이어로 확정 H​​G 디스크는 주사기 (그림 2.12)와 23 게이지 바늘을 통해 포르말린 10 % squirting하여 평면 바닥 유리관에서 dislodged 수 있습니다. </li><li> 바늘은 표본 (그림 2.12)와 확정 H​​G 디스크의 주변에있는 튜브의 측면을 따라 삽입됩니다. </li><li> needl포르말린은 천천히 주사기를 통해 밀려있는 동안 전자는 튜브의 측면을 따라 회전합니다. 어두운 색 신호를 AV - 마커와 유리관의 평평한 바닥 (그림 2.12)에서에 집중 표본과 함께 HG 버튼의 분리에서 발생합니다. </li><li> 셀 블록 (표본 세포로 겔 버튼) 다음 표시 카세트에 위치하고 파라핀 임베디드 셀 블록 (그림 2.13)를 준비하는 조직 처리를위한 제출합니다. </li></ol> 포함하고 시편의 절단 <ol><li> 디스크 표면 가공으로 다운 어두운 비콘 마커 사이드 (그림 1)과 파라핀에 모두 담겨있다. </li><li> 신호를 노출하고 명확하게 볼 수 있습니다와 같은 블록은 어두운 색깔 마커까지 AV - sectioned입니다. </li><li> 서너 마이크론 섹션은 표본에서 단독으로 흩어져있는 세포의 대부분을 포함한다이 수준에서 절단됩니다. </li><li> 섹션이 추가로 얼룩, immunohistochemical 얼룩, 또는 표시 다른 시험은 유리 슬라이드에 저장됩니다. 섹션을 장착에 사용할 슬라이드의 유형을 포함하여이 테스트를위한 프로토콜이 다를 수 있습니다. 일반적으로 immunostaining위한 코팅 슬라이드는 immunostaining 단계 중에 부유하고 슬라이드에서 섹션의 손실을 방지하는 데 사용됩니다. </li></ol> (알파벳 순서) 사용 약어 : CISH, 원위치 하이브리드화 시험 chromogenic, 생선, 형광등 원위치 하이브리드화 시험, FFPE, 포르말린 - 고정 파라핀 - 임베디드, FNA, 괜찮 바늘 흡인, HG, HistoGel ™ (써모 과학); LBC, 액체 기반 세포학, PCR 효소의 연쇄 반응; <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 셀 블록의 구조는 Shidham의 프로토콜에 의해 준비. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. Shidham의 프로토콜에 의해 LBC 표본에서 셀 블록을 준비 서로 다른 단계의 요약. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. 바나나 껍질에서 AV - 마커의 작성. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig4.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4.와 AV - 마커없이 셀 블록 및 섹션의 비교. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig5.jpg" alt="그림 5" /> 그림 5. AV - 마커과 않고 셀 블록 섹션의 cellularity 비교.

<ol><li>Shidham, V. B., Epple, J. Chapter 14, Appendix I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShidham%2C+VB+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. Forthcoming.</li>
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</ol>

셀 블록은 다양한 세포학의 표본 (1) 평가를위한 유용한 도구입니다. 가장 중요한 표본의 구조물 세부 정보 이외에, 셀 블록은 immunocytochemistry과 같은 부수적인 연구, chromogenic / 형광등 원위치 하이브리드화 시험 (물고기 / CISH) 및 - 현장 PCR의 평가를 위해 수 있습니다. 셀 블록의 준비를위한 다양한 방법이 설명되어 있습니다. 그러나 이러한 대부분은 상대적으로 많은 세포를 포함하고 조직 FNA aspirates에서 같은 microfragments와 같은 effusions (1,3,4,5) 같은 묽은 유체와 비 gynecologic 세포학의 표본에 적합합니다. 셀 블록 주로 immunocytochemical 평가를위한 기회를 제공하기 때문에, 그들의 처리되도록이면 포르말린 고정 파라핀 - - 임베디드 (FFPE) 조직의와 유사해야합니다. 결국 셀 블록 섹션의 immunocytochemical 평가 후 얻은 결과는 FFPE 조직 섹션에서 주로 수행 출판 문학 가진 사람에 비해입니다. 프로토콜의 모든 변경은 잠재적으로 손상시키고 다른 fixatives 및 일상 FFPE에 사용되는 이외의 시약 시퀀스를 통해 처리 세포 블록에서 얻어진 결과의 유효성을 파기할. 일부 상업적인 기술은 다른 정착액 - 시약에 노출 노출의 프로토콜을 통해 처리 단점을 가지고 있습니다. 셀 블록 준비 다양한 방법 침전물 및 조직 조각의 상당 수량 표본 사용할 수 있습니다. 주로, 집중 퇴적물은 어떤 젤 또는 응고 원리에 의해 지원됩니다. 기동성 버튼은 다음 수술 병리 표본 / biopsies 같은 처리 후 파라핀에 모두 담겨있다. 사용하는 젤은 젤라틴, 한천, 피브리노겐 / 플라즈마 - 트롬빈과 같은 HG 같은 다른 상업 젤이 포함되어 있습니다. 집중의 방법은 원심 분리하여 침전물의 단순한 pelleting에서 세포막을 따라 다양한 종류의 세포의 농도에 따라 다릅니다. 예는 다음과 같습니다 Milipore, collodin (Celloidin) 가방이나 유리 슬라이드 (1)에 세포학 얼룩으로부터 세포를 근근이 살아가고 있습니다. 또한 한천과 젤라틴의 다른 조합을 시도하여 젤 다양한 평가했다. 조합 중 누구 한 조각의 시편에서 포함된 세포로 확정 젤의 쉽게 기동성 디스크를 얻기 위해 회사 충분한 일관성을 달성하지 않습니다. HG 적절한 일관성을 보여주 우리의 경험 HG 셀 블록 섹션에 immunostaining 결과는 우수했다. 상기와 같은 cervicovaginal 세포학에 대한 액체 기반 세포학 (LBC) 표본이 아닌 gynecologic 표본보다 일반적으로 더 적은 세포 수 있습니다. 또한, gynecologic LBC의 표본이 주로 cervicovaginal 점막에서 각각 흩어져있는 피부 박피 피상적인 세포가 포함되어 있습니다. 이것 때문에, 셀 블록 섹션 내에서 해당 cellularity는 특별한 방법없이는 달성되지 않을 수 있습니다. 이들은 단독으로 블록의 세포 구성 요소를 분산과 같은 섹션 절단 동안 histotechnologist에서 볼 수없는, 세포 부분에 나타나는 시작되는 수준은 중 대부분의 세포와 수준 과거 절단이나하지, 평가 수 없으며, 놓칠 수 있습니다 샘플 세포의 높은 농도 (그림 4)와 수준에 깊은만큼 절단. Shidham의 프로토콜은 매체 및 일반 실험실 장비 (2) (그림 2)를 포함으로 HG를 사용하여 이러한 문제를 모두 해결할 수 있습니다. 이 프로토콜은 두 가지 주요 기능 (그림 1) 다음 포함 : <ol><li> 농도와 인접하고 셀 블록 (그림 5)의 절단 표면에 평행하게 좁은 비행기에서 단독으로 흩어져있는 세포의 정렬. </li><li> 푯말로 등대처럼 어둠 AV - 마커의 포함. 이것은 다음과 같은 기능 달성을위한 중요 : <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> 식별 및 세포가 세포 블록에 집중되어있는의 수준을 모니터링. 어두운 색깔 정작의 노출은 셀 블록에 단독으로 흩어져있는 세포의 대부분은 (그림 4)에 위치한 것으로 예상되는의 수준을 강조 표시합니다.이 방지 overcutting (대부분의 세포와 레벨 지난 커팅) 또는 (샘플 세포의 높은 농도와 수준에 깊은만큼 절단되지 않음) undercutting 셀 블록에서 높은 농도로 해당 셀 블록 수준에서 섹션의 선택을 허용 세포. </li><li> 섹션에있는 어두운 색 푯말도 다른 슬라이드에있는 셀 블록 (그림 4)의 다양한 시리얼 섹션에 똑같은 세포를 조사하고 식별하는 참조 지점 역할을합니다. 통역과 스키피오 방식으로 특정 세포의 이러한 immunoprofile 다른 섹션 (6,7)에서 동일한 세포를 따라 좌표 속성을 평가하면서이 중요합니다. </li></ol></li></ol> 하지만 OUR 프로토콜 표준화 및 액체 기반의 자궁 경부 세포학의 표본에 대한보고, 그것도 또한 같은 유출 유체, FNA, brushings, 낭종 컨텐츠 등 다른 많은 비 gynecologic 표본의 진단 수율을 향상시키는 데 사용할 수있는 AV 마커 향상 촉진 것입니다 이러한 표본의 셀 블록 섹션의 immunohistochemical 평가하는 동안 스키피오 방식의 응용 프로그램을 만듭니다. 퍼가기 매체는 관련 절차에 적절한 수정을 다른 시약에 의해 바뀔 수 있습니다. HG는 실온 (1)에서 트롬빈에 의해 gelled 수 플라즈마 (피브리노겐)에 의해 대체될 수 있습니다.

개별적으로 흩어져 셀의 우위와 세포학 표본에서 셀 블록 준비

Cell Block Preparation from Cytology Specimen with Predominance of Individually Scattered Cells

이 동영상은 개별적으로 흩어져 세포와 작은 세포 그룹을 포함하는 액체 기반 cervicovaginal 세포학의 표본에서 셀 블록의 준비 Shidham의 방법을 보여줍니다. 이 기술은 기존의 실험실 장비 HistoGel (써모 과학)를 사용합니다. 셀 블록 섹션의 사용이 아닌 gynecologic 세포학 평가를위한 가치있는 부수적인 도구입니다. 그들은 병변의 아키텍처를 포함한 추가 morphologic 표본 세부 공부를 cytopathologist을 가능하게합니다. 가장 중요한 것은, 그들은 원위치 하이브리드화 시험 (물고기 / CISH) 및 원위치 중합 효소의 연쇄 반응 (PCR)은 같은 immunocytochemistry 같은 부수적인 연구의 평가를 위해 수 있습니다. 전통적인 셀 블록 준비 기술은 대부분 일반적으로 신체 유체 effusions 및 미세 바늘 흡인의 biopsies위한 비 gynecologic 세포학의 표본에 적용되었습니다. 액체 기반 cervicovaginal 표본은 많은 개인 흩어져 세포와의 비 gynecologic 대응보다 상대적으로 적은 세포 수 있습니다. 이 때문에, 셀 블록 섹션 내에 적절한 cellularity는 달성하기 어렵습니다. 또한, 블록을 sectioning histotechnologist은 세포가 가장 높은 농도에있는의 수준을 시각화 수 없습니다. 따라서 섹션이 테스트를 위해 유리 슬라이드로 전송하기 위해 선택할 수있는의 적절한 수준을 모니터링하기가 어렵습니다. 그 결과, 관심의 세포와 세포 블록의 지역 중 과거의 절단이나 깊이만큼 절단하지 않음으로써, 놓칠 수 있습니다. Shidham의 방법 현재 프로토콜은 이러한 문제를 해결합니다. 이 프로토콜은 표준화와 gynecologic 액체 기반 세포학의 표본에 대해보고 있지만, 그것은 이러한 세포 블록 섹션에 진단 자료의 품질 향상을위한 유출의 체액, FNA, brushings, 낭종 내용 등 비 gynecologic 표본에도 적용할 수 있습니다.

개별적으로 흩어져 세포와 작은 세포 그룹을 포함하는 세포학의 표본에서 AV - 마커와 셀 블록의 준비 Shidham의 방법.

이 영상은 개별적으로 ...이 포함된 액상 기반 자궁경부-질 세포학 검체로부터 세포 블록을 제작하는 Shidham의 방법을 보여줍니다.

세포 블록 제작은 농축된 검체 세포를 더 큰 튜브 안에 고정된 평평한 바닥의 유리 튜브로 옮기는 것으로 시작합니다. 그다음 원심분리를 통해 세포를 바닥에 층으로 쌓은 후, AV 마커와 용융된 HistoGel을 첨가합니다. 캐리어 유리 튜브에 따뜻한 물을 추가하면 HistoGel이 액체 상태로 유지됩니다.이후 원심분리를 통해 AV 마커를 겔 너머로 밀어내어 세포들을 세포 블록의 절단면과 가까운 층으로 농축시킵니다. 겔 버튼이 응고되면, 이를 제거하여 파라핀 매립 공정을 진행할 수 있습니다. 안녕하세요, 저는 위스콘신주 밀워키에 위치한 위스콘신 의과대학 병리학과 세포학 섹션의 George Varszegi 박사입니다.저는 위스콘신 의과대학(Medical College of Wisconsin Milwaukee) 병리과 세포병리 섹션의 Vsam 박사입니다. 오늘은 개별적으로 흩어져 있는 세포가 우세한 세포진단 준비물로부터 세포 블록(cell block)을 제작하는 절차를 보여드리고자 합니다. 저희는 이 절차를 통해 세포 블록 절편 내의 개별적으로 흩어진 세포들의 면역 프로파일을 연구하고, 해당 절편의 특수 염색 결과를 평가합니다.이제 시작하겠습니다. 이 절차를 시작하려면, 가급적 농축된 시료 약 0.5 milliliters를 직경 15 millimeter, 길이 45 millimeters의 평평한 바닥 유리관으로 옮깁니다. 다음으로, 해당 유리관을 바닥이 평평한 대형 플라스틱 캐리어 튜브에 넣고 상온에서 1800 Gs로 5분 동안 원심분리합니다.원심분리 후, 플라스틱 캐리어 튜브에서 평평한 바닥의 유리 튜브를 꺼내고 상층액을 따라 버립니다. 이때 바닥에 형성된 세포 침전물 층이 흐트러지지 않도록 주의하십시오. 표식으로서 세포에 Dark beacon on Johnny Vena 또는 AV marker를 추가합니다.세포를 포매한 후, AV 마커를 사용하여 파라핀 블록 내에서 세포가 집중된 높이를 식별합니다. 특수 피펫을 사용하여 미리 준비된 평평한 표면의 AV 마커 큐브를 튜브 내의 세포에 추가합니다. 이제 겔을 추가하는 과정을 시작합니다. Histo gel 또는 HG의 분취량을 전자레인지의 중간 출력에서 10초 동안 가열하여 녹이거나 제조사의 지침을 따릅니다.침전된 세포가 들어 있는 튜브에 용해된 HG 0.5 milliliters를 첨가합니다. 빠르게 혼합한 후 튜브 캡을 닫습니다. 즉시 캐리어 플라스틱 튜브에 45 degrees Celsius의 따뜻한 물 약 2.5 milliliters를 첨가합니다.그 다음 세포, AV 마커 및 HistoGel이 포함된 CAPAs 튜브를 삽입합니다. 이후 단계에서 겔이 응고되는 것을 방지하기 위해 따뜻한 물을 사용하여 빠르게 작업하십시오. 다음으로 원심분리하여 AV 마커를 겔 통과시키고 세포를 농축하여, 최종 파라핀 매몰 세포 블록의 절단면과 더 가까운 층에 위치하도록 합니다.세포가 유리 튜브의 평평한 바닥에 수직으로 농축될 수 있도록 고정각 컵이 아닌 스윙 버킷 컵을 사용하여 실온에서 1800 Gs로 5분 동안 원심분리합니다. 원심분리가 완료되면, 바닥에 형성된 얇은 세포 침전층이 흐트러지지 않도록 주의하며 튜브를 원심분리기에서 조심스럽게 수직으로 꺼냅니다. 핀셋을 사용하여 시료 세포의 침전층을 건드리지 않고 작은 유리 튜브를 수직으로 제거합니다.마지막으로, 겔을 냉각하고 응고시키기 위해 작은 유리 튜브를 수직 상태로 15분 동안 냉장 보관합니다. 15분이 지나면, 바닥 부분에 농축된 검체 층과 어두운 색의 AV 마커가 포함된 응고된 HG 디스크를 분리하기 위해 세포가 포함된 겔을 유리 튜브에서 제거합니다. 이때 10% formalin이 채워진 주사기에 장착된 23 gauge 바늘을 사용하십시오.굳어진 HG 디스크의 주변부인 튜브 측면을 따라 바늘을 삽입하는 것으로 시작합니다. 이어서 바늘을 튜브 측면을 따라 회전시키면서 동시에 주사기를 통해 Formin 용액을 천천히 주입합니다. HG 버튼이 유리 튜브의 평평한 바닥에서 분리되는 것을 관찰하십시오.어두운 색의 beacon AV 마커와 농축된 검체가 포함된 분리된 겔 버튼을 라벨이 부착된 카세트에 넣어 셀 블록(cell block)으로 완성한 후, 이를 조직 처리 과정에 제출하여 파라핀 매립 셀 블록을 준비합니다. 셀 블록 매립이 완료되면 검체 절단을 진행하여 파라핀에 매립된 셀 블록의 디스크를 절단하기 시작합니다. 파라핀 매립 셀 블록을 마이크로톰에 장착하고, 파라핀 블록의 표면을 평탄하게 맞추고 어두운 색의 AV 마커가 노출되어 명확하게 보일 때까지 셀 블록의 디스크가 드러나도록 거친 절단(course cutting)을 수행합니다. 어두운 색의 AV 마커가 노출되면, 3~4 µm 두께로 절편을 제작합니다.이 섹션들은 원래 표본에서 추출된 농축된 세포들을 포함하고 있습니다. 추가 염색 및 현미경 관찰을 위해 각 섹션을 유리 슬라이드에 수집하십시오. 여기에서 저배율로 관찰하면, 표본에 AV 잉크 처리된 바나나 껍질 마커를 포함시킨 것이 H&amp;E 염색 섹션의 세포 밀도에 미치는 영향을 확인할 수 있습니다.왼쪽 이미지에서 볼 수 있듯이, 이 마커를 통해 절편 절단 깊이를 모니터링하여 세포 밀도가 좋은 수준을 확보할 수 있습니다. 또한 AV 마커는 서로 다른 세포의 방향을 설정할 수 있게 하며, 특히 마커가 표시된 다른 유리 슬라이드 상의 서로 다른 연속 절편에서 추적해야 할 절편들을 식별할 수 있게 합니다. 마커가 없다면 절단 깊이를 모니터링할 수 없습니다.세포 밀도가 낮은 절단면에서 조직 샘플을 수집하였습니다. 샘플에 존재하는 세포 밀도 정도는 고배율에서 더욱 분명하게 나타나며, AV 마커가 있으면 절단 깊이를 쉽게 모니터링할 수 있어 세포 밀도가 낮은 샘플을 얻는 것을 쉽게 피할 수 있습니다. 저희는 파편과 세포가 느슨하게 흩어져 있는 검체로부터 세포 블록을 준비하는 방법을 보여드렸습니다.세포 블록 처리 과정에서 추가한 어두운 AV 마커는 세포 농도가 가장 높은 절편을 선택하는 데 도움을 줍니다. 또한, 이 마커를 통해 유리 슬라이드 위에서 절편의 방향을 올바르게 잡을 수 있습니다. 절단면인 flood pla 바닥 유리 튜브를 따라 세포가 배열되는 동안 HistoGel이 용융 상태를 유지하는 것이 중요합니다.하지만 이 절차는 관련 수정을 통해 트롬빈, 피브리노겐과 같은 냉각법을 포함한 다른 방법들로 변경될 수 있습니다. 이것으로 모든 설명을 마치겠습니다. 시청해 주셔서 감사드리며, 실험 과정에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.감사합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 프로토콜은 비소세포폐암(NSCLC)의 조직 및 세포학 샘플을 보존하는 데 사용되는 포르말린 고정 파라핀 포매 종양 샘플의 준비를 설명합니다.

포르말린 고정 파라핀 포매 종양 샘플의 준비: 비소세포폐암(NSCLC)의 조직 및 세포학 샘플을 보존하기 위한 프로토콜

이 비디오는 백혈병 세포에서 세포 및 핵 분획을 생성하는 방법인 백혈병 세포에서 세포 내 분획을 준비하는 방법을 설명합니다. 핵 및 세포질 분획은 추가 다운스트림 분석에 사용할 수 있습니다.

백혈병 세포에서 Subcellular Fractions의 준비: 백혈병 세포에서 세포 및 핵 분획을 생성하는 방법

염색체는 림프구 나 피부 섬유 아 세포 등 살아있는 세포에서 분리하고, 인간이나 쥐 등의 유기체에서 할 수있다. 이러한 염색체의 준비는 더 일상 G 밴딩과 같은 현장 하이브리드 화 (물고기)의 형광, 비교 게놈 교잡 (CGH) 및 스펙트럼 핵형 분석 (SKY) 등의 분자 세포 유전 학적 과정에 활용 될 수있다.

배양 세포에서 염색체 준비

자궁경부에서 림프구와 단핵구를 채취하기 위해 사이토브러시 샘플링을 사용하는 것은 여성 생식기 면역 분석을 위한 샘플을 제공하는 최소 침습 기술입니다. 이 프로토콜에서는 유세포 분석 분석을 위한 cytobrush 샘플 수집 및 면역 세포 분리에 대해 설명합니다.

컬렉션, 격리, 인간 자궁 경부 샘플의 유세포 분석

종양 재발과 치료에 대한 내성에서 암 줄기 세포의 역할을 이해하는 것은 지난 10년 동안 큰 관심사가 되었습니다. 이 논문은 두경부 편평 암종 세포주(HNSCC)에서 암 줄기 유사 세포의 하위 집단의 분리 및 특성화에 대해 설명합니다.

머리와 목 편평​​ 상피 세포 암의 모집단 갖는 줄기 세포 특성의 분리 및 특성

여기에서는 투과전자현미경(TEM) 분석을 위해 세포 수가 적은 샘플을 준비하는 프로토콜을 제시합니다.

TEM 분석을위한 낮은 셀 번호와 샘플 준비를위한 다른 방법

이 프로토콜의 다른 세포 주기 단계에 기본 급성 림프 구성 백혈병 세포를 분리 하는 원심 elutriation 사용을 설명 합니다.

원심 Elutriation에 의해 다른 세포 주기 단계에서 기본 급성 림프 구성 백혈병 세포의 준비

현재, 고정된 셀에 immunofluorescent 얼룩 때 단백질 식 레벨의 결정에 대 한 선택의 방법 형태학 정보도 필요 하다. 여기에 소개이 프로토콜 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 immunocytochemistry의 다른 방법을 제공 합니다.

Immunocytochemistry 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 의해 경작된 한 세포에 단백질 표정 수준 결정

여기서, 우리는 순환 종양 세포 (CTCs)를 특성화 하는 표현 형 및 분자 특징을 식별 하는 통합 워크플로우를 제시 합니다. 당사는 단일 및 클러스터형 CTCs의 살아있는 면역 염색 및 로봇 미세 조작을 단일 세포 기반 기술로 결합 하 여 전이 시드 능력의 다운스트림 분석과 평가를 제공 합니다.

하류 분자 분석 및 전이성 전위 평가를 위한 순환 종양 세포의 미세 조작

이 분획 프로토콜을 통해 연구자들은 포유류 세포에서 세포질, 핵, 미토콘드리아 및 막 단백질을 분리 할 수 있습니다. 후자의 2 개의 세포 내 분획은 isopycnic 밀도 구배를 통해 추가로 정제됩니다.

아이소피크닉 밀도 구배 정제에 의한 U937 세포의 세포 분획

이 프로토콜은 조직 해리 조건, 단일 세포 현탁액의 동결 보존 및 분리된 핵 평가에 대한 권장 사항을 포함하여 10x Genomics 플랫폼을 사용하여 다중 종양 시퀀싱을 위해 고형 종양 검체에서 핵을 분리하는 데 신뢰할 수 있고 최적화된 접근 방식을 제공합니다.

Multiome Sequencing을 위한 신선 및 냉동 고형 종양 검체에서 최적화된 핵 분리

학습하세요 흩어진 세포의 셀 블록 제조법을 AV 마커와 HistoGel을 이용해 중심화하고 파라핀 매립하는 방법을 통해. 이 기법은 면역 프로파일링과 특수 염색 평가의 정확성을 향상시킵니다.

개별적으로 흩어져 셀의 우위와 세포학 표본에서 셀 블록 준비

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