Name: 인간 CD40 - 활성화된 B 세포의 생성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-16T23:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 27 s
Description: 배우세요 인간 CD40-활성화 B 세포를 말초혈액 단핵세포에서 배양하는 방법을. CD40 리간드와 인터루킨-4로 자극하여 항원제시능력을 향상시키는 면역학 기술입니다.

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PBMC에서 인간 CD40 - 활성 B 세포의 생성에 대한 프로토콜은 두 부분으로 나뉘어져 있습니다 : 제 플레이트 - 바운드 피더 세포로 사용됩니다 NIH/3T3 세포를 표현 CD40 리간드의 준비를 보여줍니다. 파트 B는 실제 CD40 - B 문화를 설명합니다. 피더 세포의 A. 준비 (tCD40L NIH/3T3) tCD40L NIH/3T3 완전히 합류가해서는 안 자기편 murine fibroblast 세포 라인입니다. 세포 따라서 주당 두번 splitted 수 있습니다. 6 개 이상 주 동안 Culturing하지 않는 것이 좋습니다. <ol><li> 멸균 피펫으로 기본 문화 올드 미디어를 제거하고 1X PBS의 10 ML과 세포를 씻으십시오. 세척 후 PBS를 대기음. </li><li> 37 5-10분에 75cm 2 플라스크 4 ML 트립신 / EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)을 추가 ° C. 세포를 분리하기 위해 부드러운 도청을 사용합니다. </li><li> 야생 유형 매체 10 ML을 추가하고 부드럽게 회전. </li><li> 멸균 피펫과 50 ML 튜브에 세포 현탁액을 전송 5 분 225 XG에서 세포를 스핀 다운. </li><li> 뜨는을 제거하고 야생 유형 매체 10 ML에서 펠렛을 resuspend. 세포 현탁액의 나누어지는의 휴대폰 번호를 카운트하고 세포의 적절한 수의 세 50 ML 튜브를 준비 : <ol><li> subculturing에 대한 1.5 X 10 6 세포 </li><li> 0.2 X 10 6 세포 / 잘 CD40 - B 세포 배양에 사용되는 방사선에 대한 </li><li> 프리즈에 나머지 (필요한 경우). </li></ol></li><li> 5 분 225 XG에서 세포를 스핀 다운. </li><li> 뜨는을 제거합니다. <ol><li> subculturing 들면 : resuspend 1.5 75cm 2 세포 배양 플라스크 10 ML 야생 유형 매체 (세포 밀도가 1.5 X 10 5 셀 / ML)에서 X 10 6 세포, G - 418을 추가 [0.7 MG / ML]와에있는 세포를 품어 5% CO 2와 37 ° C. 두 당 주 세포를 분리. </li><li> CD40 - B 세포 배양의 경우 : 한 6 자 접시 1.2 X 10 6 세포가 필요합니다. 0.1 X 10 6 세포 / ML의 밀도에 야생 유형의 매체에있는 세포를 Resuspend하고 78 쥐에서 그들을 비추다. 물론 각 37에서 그들을 품어 ° C와 5 % CO 2에 세포 현탁액의 플레이트 2 ML. tCD40L NIH/3T3 세포가 자기편 때 B - 세포 자극이 준비한 접시를 사용합니다 (최소한 4 시간 : 현미경으로 준수를 확인, B - 세포 자극을 시작하는 이상 24 H를 기다리지 않는다). (B. 계속) </li></ol></li></ol> B. CD 40의 B 세포 배양 CD40 - 자극 (일 공)에 대한 PBMCs의 I. 준비 : 주의 : 당신이 피더 세포가 자기편 것을 확인할 계속하기 전에. 항상 인터루킨 - 4 및 시클 로스 포린의 성장 매체 바로 사용하기 전에 새로운 솔루션을 추가합니다. <ol><li> 신선한 또는 적절하게 해동 중 하나를 PBMCs 가져가라. Resuspend 그들을 씻고 7 분 및 기타 세포를 제거 7 분 190 XG에서 두 번째 시간에 265 XG에 처음 스핀 다운을 1X PBS의 50mL 두 번 PBMCs. 뜨는을 취소하고 PBS 20 ML에있는 세포를 resuspend. 세포 현탁액의 나누어지는의 휴대폰 번호를 확인합니다. </li><li> 5 분 225 XG에서 세포의 필요한 양을 스핀 다운. 6 잘 플레이트 4 X 10 6 세포 / 잘 따라서 판 당 24 X 10 6 셀 필요합니다. </li><li> 뜨는를 제거하고 성장 요인 및 0.63 μg / ML 시클 로스 포린과 같은 A는 T - 세포의 파생물을 방지하기 위해 갓 50 U / 인터루킨 - 4의 ML과 보충 CD40 - B 문화 매체 1 X 10 6 세포 / ML에서 PBMC를 resuspend (감안할 때 농도가 한 ML 문화 매체를 참조!). </li><li> 에서 뜨는을 제거 6 잘 플레이트 사전 incubated tCD40L NIH/3T3 세포와 함께. </li><li> 2 ML PBS마다 잘 첫번째와 CD40 - B 세척 매체 2 ML과 함께 두 번째 단계에서 자기편 tCD40L NIH/3T3 세포를 씻으십시오. </li><li> 부드럽게 6 잘 플레이트의 각 잘하는 PBMC 정지 4 ML (1 X 10 6 세포 / ML)를 추가합니다. </li><li> 37 세포를 품어 ° C와 5 % CO 2. </li><li> 일 7.2에서 세포 (3.2 계속.) reculture. </li></ol> II. CD40 - B 세포 (일 7 다음 모든 3~4일)의 Recultivati​​on : <ol><li> 50 ML 튜브에 10 ML의 피펫과 수영장 그들과 함께 resuspending하여 6 - 잘 접시에서 CD40 - B 세포의 수확 클러스터. </li><li> 7분에 대한 225 XG에 스핀 다운 및 완전히 CD40 - B 세척 매체로 뜨는 교체하십시오. 나누어지는의 세포 금액을 계산하는 동안, 5 분 225 XG에서 세포를 스핀 다운. 1 X 10 6 세포 / ML의 농도에서 CD40 - B 문화 매체 Resuspend CD40 - B 세포. </li><li> 50 U / ML의 농도와 매체 0.63 μg / ML 시클 로스 포린의 인터루킨 - 4의 새로운 솔루션을 추가합니다. </li><li> 6 잘 플레이트 tCD40L NIH/3T3 세포 사전 incubated에서 뜨는을 제거합니다. </li><li> 2 ML PBS마다 잘 첫번째와 CD40 - B 세척 매체 2 ML과 함께 두 번째 단계에서 자기편 세포를 씻으십시오. </li><li&gt;을 부드럽게 6 잘 플레이트의 각 잘하는 CD40 - B 정학 4 ML (1 X 10 6 세포 / ML)를 추가합니다. </li><li> 37 접시를 품어 ° C 5 % CO 2. </li><li> Subculture 세포가 다시 모든 3-4일 14 일 총 후에 고도로 순수한 인간 CD40 - B 세포 활성화와 최종 수 있습니다. </li></ol> C.의 문제 해결 - 뭐 CD40 - B 세포 성장하지 않으면? <ol><li> 당신은 피더 세포의 CD40 리간드 발현에 대한 검사 있습니까? </li><li> 판 - 바운드 자극에 사용되는 피더 세포는 24 시간 이상은 안하나요? </li><li> mycoplasma 수있는 오염인가? </li><li> 보완을 위해 사용되는 인터루킨 - 4 솔루션은 갓 해동하고 적절한 생물 학적 활동을했다나요? </li><li> 시클 로스 포린 A는 정확한 농도에 추가습니까? </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1373/1373fig1tmb.jpg" border="0" alt="그림 1" /> 그림 1. 주시기 바랍니다 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1373/1373fig1.jpg">여기를 클릭하세요</a> 그림 1의 더 큰 버전을 위해. <img src="/files/ftp_upload/1373/1373fig2tmb.jpg" border="0" alt="그림 2" /> 그림 2.하세요 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1373/1373fig2.jpg">여기를 클릭</a> 그림 2의 더 큰 버전을 위해.

<ol><li>Schultze, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40-activated+human+B+cells%3A+an+alternative+source+of+highly+efficient+antigen+presenting+cells+to+generate+autologous+antigen-specific+T+cells+for+adoptive+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">CD40-activated human B cells: an alternative source of highly efficient antigen presenting cells to generate autologous antigen-specific T cells for adoptive immunotherapy.</a> J Clin Invest. 100, 2757-2765 (1997).</li>
<li>Schultze, J. L., Grabbe, S., vonBergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DCs+and+CD40-activated+B+cells%3A+current+and+future+avenues+to+cellular+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">DCs and CD40-activated B cells: current and future avenues to cellular cancer immunotherapy.</a> Trends Immunol. 25, 659-664 (2004).</li>
<li>Bergwelt-Baildon, M. von <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40-activated+B+cells+express+full+lymph+node+homing+triad+and+induce+T-cell+chemotaxis%3A+potential+as+cellular+adjuvants%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">CD40-activated B cells express full lymph node homing triad and induce T-cell chemotaxis: potential as cellular adjuvants.</a> Blood. 107, 2786-2789 (2006).</li>
<li>Wiesner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+immortalization+of+human+B+cells+by+CD40+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Conditional immortalization of human B cells by CD40 ligation.</a> PLoS ONE. 3, 1464-14 (2008).</li>
<li>Urashima, M., Chauhan, D., Uchiyama, H., Freeman, G. J., Anderson, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40+ligand+triggered+interleukin-6+secretion+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">CD40 ligand triggered interleukin-6 secretion in multiple myeloma.</a> Blood. 85, 1903-1912 (1995).</li>
<li>Lapointe, R., Bellemare-Pelletier, A., Housseau, F., Thibodeau, J., Hwu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40-stimulated+B+lymphocytes+pulsed+with+tumor+antigens+are+effective+antigen-presenting+cells+that+can+generate+specific+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">CD40-stimulated B lymphocytes pulsed with tumor antigens are effective antigen-presenting cells that can generate specific T cells.</a> Cancer Res. 63, 2836-2843 (2003).</li>
<li>von Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+primary+and+memory+cytotoxic+T+lymphocyte+responses+are+efficiently+induced+by+means+of+CD40-activated+B+cells+as+antigen-presenting+cells%3A+potential+for+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human primary and memory cytotoxic T lymphocyte responses are efficiently induced by means of CD40-activated B cells as antigen-presenting cells: potential for clinical application.</a> Blood. 99, 3319-3325 (2002).</li>
<li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40-activated+B+cells+can+be+generated+in+high+number+and+purity+in+cancer+patients%3A+analysis+of+immunogenicity+and+homing+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">CD40-activated B cells can be generated in high number and purity in cancer patients: analysis of immunogenicity and homing potential.</a> Clin Exp Immunol. 155, 249-256 (2009).</li>
<li>Mason, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA-loaded+CD40-activated+B+cells+stimulate+antigen-specific+T-cell+responses+in+dogs+with+spontaneous+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">RNA-loaded CD40-activated B cells stimulate antigen-specific T-cell responses in dogs with spontaneous lymphoma.</a> Gene Ther. 15, 955-965 (2008).</li>
</ol>

미디어 A. 준비 : <table border="1"cellspacing="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 피더 세포 야생 유형 매체 </td><td colspan="2"> 피더 셀 선택 매체 </td></tr><tr><td> 시약 </td><td> 집중 </td><td> 시약 </td><td> 집중 </td></tr><tr><td> DMEM - 햄의 / F12 </td><td></td><td> DMEM - 햄의 / F12 </td><td></td></tr><tr><td> L - 글루타민 </td><td> 365 μg / ML </td><td> L - 글루타민 </td><td> 365 μg / ML </td></tr><tr><td> FBS </td><td> 10% </td><td> FBS </td><td> 10% </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 MM </td><td> HEPES </td><td> 10 MM </td></tr><tr><td> Gentamycin </td><td> 15 μg / ML </td><td> Gentamycin </td><td> 15 μg / ML </td></tr><tr><td></td><td></td><td> G - 418 </td><td> 0.7 MG / ML </td></tr></table><table cellspacing="0" border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> CD40 - B 세척 매체 </td><td colspan="2"> CD40 - B 문화 매체 </td></tr><tr><td> 시약 </td><td> 집중 </td><td> 시약 </td><td> 집중 </td></tr><tr></tr></tbody><tbody><tr><td> IMDM </td><td> </td><td> IMDM </td><td> </td></tr></tbody><tbody><tr><td> L - 글루타민 </td><td> 584 μg / ML </td><td> L - 글루타민 </td><td> 584 μg / ML </td></tr></tbody><tbody><tr><td> HEPES </td><td> 25 MM </td><td> HEPES </td><td> 25 MM </td></tr></tbody><tbody><tr><td> Gentamycin </td><td> 15 μg / ML </td><td> Gentamycin </td><td> 15 μg / ML </td></tr></tbody><tbody><tr><td> </td><td> </td><td> RH 트랜스페린 </td><td> 50 μg / ML </td></tr></tbody><tbody><tr><td> </td><td> </td><td> RH 인슐린 </td><td> 5 μg / ML </td></tr></tbody><tbody><tr><td> </td><td> </td><td> AB - Humanserum </td><td> 10% </td></tr></tbody></table> B. 기타 시약 : <table cellspacing="0" border="1"><tbody><tr><td> 시약 </td><td> 회사 </td><td> 아니오를 주문하지 </td></tr><tr></tr><tr><td> DMEM / 햄의 F12 </td><td> PAA </td><td> 고양이 번호 : E15 - 813 </td></tr><tr><td> IMDM </td><td> Invitrogen Gibco ® </td><td> REF 21980-032 </td></tr><tr><td> Dulbecco의 PBS (10X) </td><td> PAA </td><td> 고양이도없는 H15 - 011 </td></tr><tr><td> AB - 인간 혈청 </td><td> Invitrogen </td><td> 고양이도없는 34,005,100 </td></tr><tr><td> 홀로그램 트랜스페린 인간 </td><td> 시그마 </td><td> 고양이도없는 T0665 </td></tr><tr><td> 인슐린 인간 </td><td> 시그마 </td><td> 고양이도없는 I2643 </td></tr><tr><td> Gencin ® </td><td> 델타 선택 </td><td> 예술 없음 7,395,800 </td></tr><tr><td> 재조합 인간 인터루킨 - 4 </td><td> Immunotools </td><td> 고양이도없는 11,130,045 </td></tr><tr><td> 시클 로스 포린 </td><td> 노바티스 </td><td> 고양이도없는 NDC 0078-0109-01 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> LONZA </td><td> 고양이도없는 DE14 - 802C </td></tr><tr><td> HEPES 버퍼 </td><td> PAA </td><td> 고양이도없는 S11 - 001 </td></tr><tr><td> G - 418 황산염 </td><td> PAA </td><td> 고양이도없는 P02 - 012 </td></tr><tr><td> 트립신 / EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) (10X) </td><td> Invitrogen Gibco ® </td><td> REF 15400-054 </td></tr></tbody></table> C. 기타 용품 : <table cellspacing="0" border="1"><tbody><tr><td> 시약 </td><td> 회사 </td><td> 아니오를 주문하지 </td></tr><tr></tr><tr><td> 멸균 피펫 팁 </td><td> Sarstedt </td><td></td></tr><tr><td> 6 - 웰 플레이트 </td><td> NUNC </td><td> 고양이도 140,675 </td></tr><tr><td> 50mL 원뿔 관 </td><td> BD 팰컨 ™ </td><td> 고양이도 352,070 </td></tr><tr><td> 조직 문화 플라스크 </td><td> SARSTEDT </td><td> 고양이도없는 83.1813.002 </td></tr></tbody></table>

인간 cd40 - 활성화된 b 세포의 생성

Generation of Human CD40-activated B cells

CD40 - 활성화된 B 세포는 (CD40 - B 세포) 단백질 stimulatory 항원 제시 암 immunotherapy에 대한 세포 (APC하는) 1-3의 대체 소스로 확인되었습니다. CD40 - B 세포가 여러 가지 서로 다른 생물 학적 및 기술적 특성을 가지고 돌기 세포 (DCS), 최고의 특징 APC, 비교. DC가 마찬가지로, B 세포는 MHC와 공동 stimulatory 분자 (Fig.1b)의 증가 표현을 표시, 인터루킨 - 4 및 CD40 리간드 (CD40L)와 자극 후 강력한 철새 용량과 효율적인 T 세포에 존재 항원 프레 젠 테이션을 나타냅니다. 그러나, 미숙 또는 성숙 DC가와는 대조적으로, CD40 - B 세포는 CD62L, CCR7/CXCR4 이루어진 전체 림프절 유도 깡패을 표현하고, 보조 림프 기관으로 유도하기 위해 필요한 백혈구 기능 항원 - 1 (LFA1, CD11a/CD18) (Fig.1a) 3. CD40 - B 세포는 더욱 높은 순수 CD40 - B 세포를 건강한 기증자로부터 (&gt; 10 9 환자 당 세포)뿐만 아니라 암 매우 다량으로 체외로 확장시킬 수 말초혈 매우 소량의 어려움없이 생성할 수 있습니다 환자 (Fig.1c, D) 1,4. 이 프로토콜에서 우리는 인간의 PBMC에서 완벽하게 작동 CD40 - B 세포를 얻는 방법을 보여줍니다. 세포 배양을위한 주요 분자는 CD40 리간드, 인터루킨 -4 (IL - 4) 및 시클 로스 포린 A (CSA), 3~4일 문화주기에 보충함하는. 아르 실험 목적 CD40 - 자극은 재조합 인간 CD40 리간드 (tCD40L NIH/3T3) 5을 표현 NIH/3T3 세포에 의해 제공됩니다. 비 transfected 세포와 오염을 방지하려면 transfectants에있는 인간 CD40 리간드 표현 (Fig.2) 정기적으로 확인되어야한다. 십사일 후 CD40 - B 세포 배양 이상 순도 95 프로지 B 세포 65 일 동안 CD40 - B 세포의 확장 기능을 1, 4의 손실없이 자주이 가능합니다 구성되어 있습니다. CD40 - B 세포가 효율적으로 프로세스를 차지하고 T 세포에 항원 제시 6. 그들은 소수 naϊve 모르지만, 또한 메모리 T 세포에게 7,8를 확장합니다. CD40 - 활성화된 B 세포는 B - 세포 활성화, 차별과 기능을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 또한, 그들은 종양에 대한 치료 또는 구 예방 접종을위한 유망한 도구를 나타냅니다.

이 비디오에서는 소개<em&gt; 예 생체내</emCD40 리간드와 인터루킨 - 4 자극에 의​​해 말초 혈액 mononuclear 세포 (PBMC)에서 인간 CD40 - 활성 B 세포의&gt; 생성 및 확장 (CD40 - B).

인간 CD40 - 활성화된 B 세포의 생성

CD40 활성화 B 세포(CD40-B 세포)는 암 치료를 위한 면역 자극 항원 제시 세포(APC)의 대안적 공급원으로 확인되었습니다...

안녕하세요, 제 이름은 Alexander Shiku Van Hagen입니다. 저는 쾰른 대학 병원의 면역학 및 이식 면역학 연구소 소속입니다. 이 영상에서는 말초혈액 단핵구로부터 인간 CD40 활성 B 세포를 생성하는 방법을 보여드리겠습니다.우리 실험실의 주요 관심 분야 중 하나는 B 세포의 항체 독립적 기능에 관한 연구입니다. B 세포는 항체 생성자로서의 역할 외에도, 생리적 조건과 자가면역 질환 모두에서 항원 제시 세포로서 중요한 역할을 합니다. B 세포는 활성화된 후, 특히 CD 40을 통해 활성화될 때 강력한 항원 제시 및 면역 자극 능력을 획득할 수 있습니다.CD 40. 활성화된 B 세포는 수지상 세포와 비교했을 때 몇 가지 장점이 있습니다. 암 환자를 포함하여 소량의 말초혈액으로부터 상대적으로 낮은 비용으로 쉽게 증식시킬 수 있습니다.이제 박사 과정생인 Tanya Leic와 기술원 LER가 말초혈액에서 인간 CD 40 활성화 B 세포를 생성하는 방법에 대해 단계별로 소개해 드리겠습니다. 안녕하세요, 제 이름은 Tanya Livi입니다. 저는 박사 과정생이며, 인간 CD 40 활성화 B 세포를 생성하는 방법을 시연하고자 합니다.이 절차는 본 연구실에서 최적화되었습니다. 주요 단계는 우선 피더 세포(feeder cells)를 준비하는 것입니다. 이를 위해 human CD 40 ligand가 형질전환된 N IH 33 세포를 사용하며, 해당 세포에 78 gray의 방사선을 조사한 후 6-well 플레이트에 도말합니다.둘째로, 정제된 PBMC로부터 인간 CD 40 활성 B세포 배양을 시작하며, 이 세포들에 인간 interleukin 4와 cyclosporine A를 처리한 후 6-well 플레이트의 feta 세포 위에 플레이팅합니다. 이 과정은 7일 차에 반복하며, 이후 세포 배양 14일 차까지 3~4일마다 반복합니다. 고순도의 인간 CD 40 활성 B세포를 얻기 위해, 갓 정제했거나 적절히 해동한 인간 PBMC를 사용하여 CD 40 활성 B세포 생성을 시작합니다.먼저 PBMC를 두 번 세척하며, 이를 위해 세포를 50 milliliter의 PBS에 재현탁합니다. PBMC를 1300 RPM(260 5G에 해당)에서 7분 동안 원심 분리합니다. 상층액을 버리고, 세포를 다시 50 milliliter의 PBS에 현탁한 후 1100 RPM(190 G에 해당)에서 7분 동안 다시 원심 분리합니다. 상층액을 다시 버린

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오에서는, 우리는 CD40 - 활성화 및 면역의 유도를 연구하는 모델 항원 제시 세포 (APC)로 사용할 수 있습니다 C57BL / 6 마​​우스 splenocytes에서 murine B 세포의 확장 프로 시저를 보여줍니다.

B 세포의 CD40 - 정품 인증 Murine 모델

에서 유전자의 구조와 기능 분석의 효율적인...

B 세포의 재조합 생산 및 Retroviral 감염

이 동영상은 일반적인 림프구 전구 세포(CLP)에서 형질세포(plasmacytoid dendritic cell, pDC)를 생성하는 체외 분석을 보여줍니다. Fms-like tyrosine kinase-3 ligand(FL)가 있는 상태에서 γ조사된 공급 세포와 함께 정제된 CLP를 공동 배양하면 CLP는 비부착성 pDC로 분화되며, 유세포 분석을 사용하여 그 존재를 확인합니다.

In vitro Generation of Plasmacytoid Dendritic Cells from Common Lymphoid Progenitors(일반 림프구 전구 세포에서 Plasmacytoid 수지상 세포의 체외 생성)

이 동영상은 종양 항원 특이적 유도만능줄기세포(iPSC) 유래 CD8αβ+ T 세포를 생성하는 분석을 보여줍니다. 종양 항원 특이적 iPSC는 기질 세포 단층에서 성장하며 조혈전구세포(HPC)로 분화됩니다. HPC는 분화 배지를 사용하여 CD4+, CD8+, 이중 양성 T 세포로 분화됩니다. 그런 다음 이러한 세포를 자극하여 CD8을 발현하는 단일 양성 T 세포를 생성합니다.

유도 만능 줄기 세포에서 단일 양성 CD8 T 세포 생성

이 논문은 정의된 동종항원에 특이적으로 반응하는 인간 T 세포 클론의 생성 및 증식 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 다양한 펩타이드-MHC 리간드에 특이적인 인간 T 세포를 클로닝하는 데 적용할 수 있습니다.

말초 혈액에서 인간 Alloantigen 특정 T 세포의 생성

여기서 우리는, 기존 TCR의 TCRα 또는 TCRβ 페어링 말초 T 세포 수용체 레퍼토리 상보 hemichain으로 관심 항원 특이성을 보유하여 항원 특이 적 T 세포 수용체 (TCR도)을 생성하는 신규 한 방법을 설명한다. 드 노보 생성 TCR도 선호도 변화와 항원 특이성을 유지한다.

생성<em&gt; 드 노보</em&gt; 중심 Hemichain의 레트로 바이러스 형질 도입에 의해 항원 특이 적 인간 T 세포 수용체

여기에서는 인간 항응고 혈액의 밀도 구배 원심분리 후 말초 혈액 단핵 세포에서 자기 비드 분리에 의해 단핵구를 분리하는 방법을 보여줍니다. 5일 동안 배양한 후 인간 단핵구는 미성숙 수지상 세포로 분화되고 비임상 환경에서 실험 절차를 수행할 준비가 됩니다.

전혈로부터 인간 단핵구 유래 수지상 세포의 생성

인간의 혈액에서 회람 하는 드문 B 세포에서 시작 인간 항 체의 항 원에 대 한 특정의 생산 하는 방법을 설명 합니다. 이러한 자연 항 체의 생성은 효율적이 고 신속한, 그리고 얻은 항 체 매우 관련된 항 원 사이 차별 수 있습니다.

희귀 한 항 원 특정 B 세포 혈액 순환에서 구별 인간 단일 클론 항 체의 생성

생체 외에서 B 세포 플라즈마 세포 차별화 모델을 보고 다단계 문화 시스템을 사용 하 여, 우리.

수명이 긴 플라즈마 세포에 인간의 정상적인 메모리 B 세포의 체 외 분화 모델

이 프로토콜은 인간 키메라 항원 수용체 조절 T 세포(CAR Tregs)를 생성하고 테스트하기 위한 간소화된 워크플로우를 제공합니다.

인간 키메라 항원 수용체 조절 T 세포의 생성

배우세요 인간 CD40-활성화 B 세포를 말초혈액 단핵세포에서 배양하는 방법을. CD40 리간드와 인터루킨-4로 자극하여 항원제시능력을 향상시키는 면역학 기술입니다.

인간 CD40 - 활성화된 B 세포의 생성

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