Name: 에 잔 심장을 떠올리 Drosophila /em (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-09-28T21:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: 학습하세요 Drosophila 성충 및 유충 심장 시각화 기법을 통해 생리학적 차이를 관찰하는 방법을. 이 프로토콜은 발달 생물학 연구에 필수적인 심장 박동 분석을 가능하게 합니다.

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KO는 미국 심장 협회에서 교부금에 의해 지원됩니다.

당신이 시작하기 전에 성인 심장 <ol><li> 갓 인공 hemolymph (AH) 108mM 나를 포함하는 솔루션 +, 5mM K +, 2mM 칼슘 2 +, 필름 MgCl 2, 1mM 아니 2 PO 4, 4mm짜리 NaHCO 3, 10mM 자당, 5mM trehalose, 5mM HEPES (산도 7.1의 모든 시약의 준비 시그마 화학). 자당과 trehalose는 세균 오염을 방지하기 위해 사용하는 직전 냉장 주식 솔루션에서 AH에 추가되어 있어야합니다. </li><li> 상온 및 최소한 15 분 공기 버블링에 의해 산소 솔루션 AH 가져와. </li><li> 지방 제거에 필요한 몇 가지 좋은 모세 혈관 (예 : 유리 모세 혈관, 100ul, VWR) 당겨라. </li></ol> 애벌레의 마음 <ol><li> Sylgard - 코팅 coverslips : 22x22mm coverslip에 Sylgard 솔루션의 50 70μl에 대한 이쑤시개, 전송을 사용합니다. ° C 밤이여 65 Sylgard 강화하자. </li><li> Broadie 및 베이트의 버퍼를 (., 산도 7.15 Broadie와 베이트, 1993을 참조하십시오 135mM NaCl, 5mM KCl, 4mm짜리 MgCl 2, 2mM CaCl 2, 5mM TES, 36mM 자당) 준비합니다. </li><li> histoacryl 접착제를 적용하는 데 필요한 도구를 준비합니다. 첫째, 몇 가지 좋은 모세 혈관 (예 : 과학 제품 GB100T8P) 당기십시오. 튜브에 작은 끝부분을 삽입하여 작은 플라스틱 튜브 (Tygon, 1 / 32 &quot;)와 1.5ml 피펫 팁을 연결합니다. 상대방하기 위해 광범위한 개방과 모세를 삽입합니다. 플라스틱 끝에 접착제 부드러운 흡입의 드롭으로 모세관을 찍기로 Histoacryl 접착제와 모세관을로드합니다. 접착제로 작업할 때 하나는 모세 접착제의 일각에서 과도한 접착제를 제거하기 위해 손을 모세관 두 번째 잔을 있어야합니다. 그것은 몇 초 내에됩니다하든 버퍼 호수와 접촉에 와서까지 접착제는 액체이다. 그러나, 그것은 일반적으로 표본에 적용하면서 접착제 모세관 끝부분에서 또는 제거하기 위해 충분히 플라스틱 남아 있습니다. </li></ol> 성인 플라이에서 세미 그대로 Drosophila 헛 <ol><li> 성인 Drosophila의 파리 2~5분에 대한 플라이 냅 (캐롤라이나 생물학 공급 주식 회사)와 anesthetized 있습니다. 관리는 더 이상 노출에 대한 플라이 냅에 파리를 떠날하지 않도록해야합니다. 추위에 단기 노출도 파리를 마취하는 데 사용할 수 있지만 더 이상 심장 박동과 rhythmicity에 대한 지속적인 효과를 가지고 같은 CO 2는 권장하지 않습니다. </li><li> Anesthetized 파리는 바셀린의 얇은 레이어 코팅 페트리 접시에, 지느러미 쪽 아래, 배치됩니다. 날개와 본문에 소수성 표피는 reversibly 젤리에 &quot;스틱&quot;하지만 필요한 경우 비행은 재지정 수 있습니다. 이것은 이후의 조작 중에 특히 중요 해지고 있습니다. </li><li> 초기 컷은 봄 가위 곡선 쌍 (Roboz # 5611)를 사용하여 이루어집니다. 가위 블레이드는 다리 아래에 위치하며 목 근처 흉부의 등의 표면을 향해 아래로 직각입니다. 머리, 복부 신경 코드, 그리고 다리가 싱글 컷과 함께 제거됩니다. 준비 그러면 산소, 인공 hemolymph (AH) 솔루션에 빠져들 수 있습니다. </li><li> 스프링 가위를 사용하여 복부 (복부 세그먼트 7 8 구성된)의 뒷부분 끝은 하나의 절단과 함께 제거됩니다. 이것은 복부의 양쪽 가장자리를 따라 수평 상처를 만들기위한 액세스를 제공하고 사후 창자와 복부 표피 사이의 연결을 끊을 수로 제공하고 있습니다. 복부 복부 표피의 해제 플랩을 뺍니다. </li><li> 복부 장기 이제에만 tracheols의 장소에서 개최하므로 3 단계와 4 단계에서 창자의 앞쪽에 및 사후 연결이 절단됩니다. 직감과 다른 복부 장기는 보통 보석의 포셉 (Roboz, # 55)와 울리는 부드러운을 사용하여 하나의 덩어리로 제거할 수 있습니다. 내장을 제거하면 여전히 지방 기관에 의해 둘러싸인 등의 표피에 부착된 박동 심장 튜브를 보여줍니다. </li><li> 지방 시체는 결과적으로 그것이 명확하게 심장 튜브를 참조하기 위해이 지방의 일부를 제거하는 것이 필요 빛을 현미경에 매우 불투명하고 있습니다. 이것은 잘게 그려진 유리 모세관을 사용하여 지방 흡입 기술에 의해 수행됩니다. 모세 혈관은 표준 피펫 풀러 (예 : 서터 P - 97 피펫 풀러)을 사용하여 만든 다음 진공 소스에 부착된 플라스틱 튜브 (Tygon, 1 / 16 &quot;)에 삽입됩니다. 이 시스템은 심장 관 주위의 여분의 지방에서 흡입하는 데 사용됩니다. 직경 40 마이크론보다 큰 팁을 pipettes를 사용하지 않아야하므로 흡입 힘이 팁 직경에 비례합니다. 심장의 후부 일부 지역은 모두 피해야한다 매우 불안정하기 때문에 익스 트림 치료는 심장 자체를 감동 피하고로 이동해야합니다. </li><li> 성인 Drosophila의 심장 관은 현재 노출되고 치고해야합니다. 필요한 경우 표피와 연결되어 마음이 부드럽게 석유 젤리 밖으로 표피를 리프팅 조심스럽게 다시 내려 다림 다시 심장 조직과의 접촉을 피함으로써 재설정하실 수 있습니다. t에서그의 요점은 준비를 목욕 솔루션은 신선한 AHL로 대체해야합니다. 이 준비는 사전에 어떤 조작으로 산소와 20-30분에 대한 평형 수 있어야합니다. 준비 60 분 이상 지속되는 경우 그것은 신선한 AHL과 perfused해야합니다. </li></ol> 광학 녹음에 대한 Immobilizing Drosophila의 애벌레 <ol><li> Sylgard의 coverslips의 각 모서리에 가까운 Histoacryl 접착제 한 방울을 넣으십시오. 접착제 방울에 B &amp; B 버퍼의 50μl를 추가하는 강화가 즉시됩니다. 접착제는 슬라이드에있는 버퍼를 유지합니다 - B &amp; B와 함께 붙어 장소 사이의 공간을 채우십시오. </li><li> 방랑의 L3 유충을 가지고 2 분 얼음 서부 유럽 표준시 조직 종이에 놓으십시오. 이것은 움직임을 느리게합니다. 그런 다음 버퍼와 방향 등의 측면 접속 (이것은 작은이 벨트 부족 유충의 측면이다)로에 유충을 전송하기만하면됩니다. 신속하게 머리를 지역 및 Sylgard 사이 접착제를 적용합니다. 접착제가 경화는 매우 신속하고 이동에서 유충의 머리를 방지합니다. </li><li> 포셉를 사용하면 조심스럽게 후부 spiracles하여 동물을 잡고 부드럽게 스트레칭. 뒷부분 이분의 일에 유충의 양쪽을 따라 접착제를 적용하여이 위치에 유충을 수정. 동물의 측면에 더 많은 접착제를 추가, 본문 벽의 근육에 의해 표피의 추가 움직임을 줄이기 위해. 유충은 지금이 자리에서 해결되었습니다. coverslip는 AHL 또는 PBS 가득한 작은 페트리 접시에 배치될 수 있습니다. 심장 박동은 지금 몸 벽 움직임의 간섭없이 기록될 수 있습니다. </li></ol> 대표 결과 : 신선한 산소 AH 유지하면 세미 그대로 성인 Drosophila의 마음 (보충 자료를 참조 Ocorr, 외., 2007) 해부 다음 시간 리드미컬 이길 겁니다. 대표 예제는 영화 1 표시됩니다. 제 3 instar의 유충과 젊은 파리 (1 - 3 주 게시 eclosion)에서 마음 - 3 Hz에서 일반적으로 1 사이의 속도로 일반적인 심장 박동을 나타냅니다. 그럼에도 불구하고, 이러한 마음은 여전히​​ 산소 AHL의 시간 동안 자발적으로 이길 수있는, 삼주가 일반적으로 더 arrhythmic보다 나이가 난다. 해부 프로 시저의 결과로 손상 파리 성충의 마음은 일반적으로 휴식을 취할 수없는 극단적인 수축의 지역화된 영역을 보여줍니다. 따라서 이러한 준비가 손상 것으로 간주되어 버립니다, 1 Hz에서보다 느린 심장 박동 률은 거의 나이 삼주 미만 파리에서 관찰되지 않습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1425/MOVIE1.avi">. 영화 1 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오</a> 노출된 복부 심장 관을 보여주는 일주 옛 성인 wildtype을 날게 (W 1,118 연구실 변형) (왼쪽 앞쪽에) -. 정규, 리듬 수축을합니다. 오른쪽 상단에 불투명 지역 나머지 복부 지방 기관되며 심장의 양쪽에 둥근 세포 pericardial 세포 수 있습니다.

<ol><li>Ocorr, K., Reeves, N., Wessells, R. J., Fink, M., Chen, H. -S. V., Akasaka, T., Yasuda, S., Metzger, J., Giles, W., Posakony, J. W., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KCNQ+potassium+channel+mutations+cause+cardiac+arrhythmias+in+Drosophila+that+mimic+the+effects+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">KCNQ potassium channel mutations cause cardiac arrhythmias in Drosophila that mimic the effects of aging.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 3943-3948 (2007).</li>
<li>Broadie, K. S., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+embryonic+neuromuscular+synapse+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Development of the embryonic neuromuscular synapse of Drosophila melanogaster.</a> J Neurosci. 13, 144-166 (1993).</li>
</ol>

Drosophila 모델 embryological 개발에서 학습 및 메모리에 이르기까지 과학 질문 다양한 주소로 사용되었습니다 강력한 유전자 도구로 입증되었습니다. 최근이 다양한 모델 생물이 비행의 심장 기능의 유전자를 조사하는 데 사용되었습니다. 성인 Drosophila의 심장 생리를 정할 시도의 숫자가 복부 표피를 통해 그대로 파리에서 만들어진 관측에 의존합니다. 이러한 방식의 대부분은 하나의 매개 변수, 심장 박동수를 정할 수있는 복부를 통해 빛의 강도 송신기에서 영상 감시하거나 변경 기록에 의존합니다. 어떤 관찰되는 것은 심장의 수축에 보조 지방 단체의 움직임이며, 일반적으로은 심장의 앞쪽에 끝을 관찰 될 수 있으며, 심장에 신경 입력 그대로 :이 방법은 몇 가지 제한이 있습니다. 성인 세미 그대로 준비는 심장 박동 이외에 매개 변수의 개수의 기능 중심 허락 부량의 큰 부분의 자세한보기를 제공합니다. 그것은 기록 절차 (조브 문서를 참조, 1435) electrophysiological 또는 광 사용할 수 있습니다. 또...

<table><tbody><tr><td>미세 해부용 스프링 가위 (곡형)</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5611</td><td>거친 절단에 적합 (단계 3)</td></tr><tr><td>미세 해부용 스프링 가위 (직형)</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5620</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #55 포셉</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 포셉</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-10</td><td></td></tr><tr><td>유리 모세관, 100ul</td><td>VWR international</td><td>53432-921</td><td></td></tr><tr><td>유리 모세관, 미세형</td><td>Science Products</td><td>GB100T8P</td><td></td></tr><tr><td>피펫 풀러</td><td>Sutter Equipment</td><td>P-97</td><td>수평 및 수직 피펫 풀러 모두 사용 가능</td></tr><tr><td>플라스틱 튜브</td><td>Tygon</td><td>1/16&amp;#8221; 내경</td><td>100&amp;#x03BC;l 모세관용</td></tr><tr><td>플라스틱 튜브</td><td>Tygon</td><td>1/32&amp;#8221; 내경</td><td>소형 모세관용</td></tr><tr><td>Histoacryl&amp;#174; 조직 접착제</td><td>B. Braun Medical</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

에 잔 심장을 떠올리 drosophila</em

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

<em&gt; Drosophila</em&gt; 심장이 최근 myogenic 마음에 기​​능을 기본, 유전 세포 및 분자 메커니즘을 조사에 대한 좋은 모델 시스템으로 등장하고 있습니다. 파리의 심장 기능을 검사에서 중요한 단계는 여전히 뛰는 심장 장기 관찰하고 기록할 수 있도록하면서 그 myogenic 기능을 보존하는 방식으로 마음을 액세스하는 방법을 찾는 것입니다. 유충과 성인 모두에서 뛰는 심장을 관찰하고 레코딩을위한 두 가지 방법<em&gt; Drosophila</em&gt; 여기에 설명되어 있습니다. 성인 파리를 사용하여 우리 반 그대로 준비는 색소 상피의 간섭과 지방의 시체를 overlying없이 복부 마음의 명확 시각화 수 있습니다. 애벌레 마음을 녹음하기 위해서는이를 심근 수축과 관련되지 않은 마음의 움직임을 줄여 신체 벽의 움직임을 최소화 유충을 고정하기 위해 필요 없잖아. 우리의 방법은 안정 성인과 1-3 Hz의 속도로 시간 동안 이길 수 애벌레 심장 준비를 생산하고 있습니다.

기술은 애벌레와 어른의 뛰는 심장을 시각화에 필요한<em&gt; Drosophila</em&gt; 제공됩니다. 각 생활 단계는 다른 방법론이 필요합니다.

에 잔 심장을 떠올리 Drosophila</em

초파리(Drosophila) 심장은 최근 ...의 기능 기저에 있는 유전적, 세포적 및 분자적 기전을 조사하기 위한 훌륭한 모델 시스템으로 부상하였습니다.

여기서는 성체 심장 해부를 위해 Drosophila의 박동하는 심장을 시각화하는 두 가지 기술을 제시하겠습니다. 먼저, 표시된 선을 따라 한 번의 절개로 머리와 흉부를 제거합니다. 다음으로, 생식기를 제거하고 핀셋을 사용하여 복부 체강을 개방하며, 장과 암컷 초파리의 경우 난소를 제거합니다.유충 심장의 고정을 위해, 복부 제3 및 제4 마디의 복부 지방체를 조심스럽게 흡입하여 성체 심장을 노출시킵니다. 완충 용액에 놓인 단일 유충의 머리 영역 주변에 먼저 histo acral glue를 도포하여 고정합니다. 유충을 부드럽게 늘린 후, 후단과 유충 체벽의 측면에 접착제를 추가로 도포합니다.안녕하세요, GI Fler입니다. 안녕하세요, Karen er입니다. 저희는 둘 다 Burnham 의학 연구소의 발달 및 노화 프로그램의 구성원입니다.오늘은 Laval 유충 및 성체 초파리의 박동하는 심장을 시각화하기 위해 저희가 개발한 절차를 보여드리겠습니다. 저희는 이 두 가지 준비 과정을 통해 초파리의 심박수 파라미터를 시각화, 조사 및 정량화합니다. 시작하기에 앞서, 먼저 인공 혈림프 용액을 준비합니다.이 용액은 sucrose entry, helo를 포함하고 있으며, 사용 직전에 냉장 보관된 스톡 용액으로부터 인공 혈림프에 첨가해야 합니다. 박테리아 오염을 방지하기 위해 인공 혈림프를 상온으로 맞추고, 최소 15분 동안 공기 버블링을 통해 용액에 산소를 공급하십시오. 다음으로, 표준 피펫 풀러를 사용하여 미세 모세관 여러 개를 제작하며, 이는 초파리의 지방체 제거에 사용됩니다.모든 준비가 완료되면 성체 초파리를 마취시켜야 합니다. 이는 fly nap에 2~5분 동안 짧게 노출시켜 수행할 수 있으나, 초파리를 fly nap에 5분 이상 방치하지 않도록 주의하십시오. 초파리를 마취시키기 위해 단기간의 냉각 노출을 사용할 수도 있지만, 이산화탄소는 심박수와 활동성에 더 오래 지속되는 영향을 미치므로 권장되지 않습니다.다음으로, 마취된 초파리를 석유 젤리가 얇게 도포된 페트리 접시에 등 면이 아래로 향하도록 놓습니다. 날개와 몸통의 소수성 큐티클이 젤리에 가역적으로 부착되지만, 필요한 경우 초파리의 위치를 다시 조정할 수 있습니다. 곡선형 스프링 가위를 사용하여 1차 절개를 수행합니다.가위 날을 초파리의 다리 아래에 두고 목 근처의 등쪽 표면을 향해 아래로 각도를 조절하여 배치함으로써 이 작업을 수행합니다. 한 번의 절단으로 머

visualizing-the-beating-heart-in-drosophila

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

여기 우리는 유충과 성인에서 심장 튜브의 다양한 요소의 형광 라벨을위한 기본 프로토콜을...

의 형광 라벨링 Drosophila 심장 구조

우리는에서 고속 광학 녹음을 분석을위한 세미 자동 광학 도면 해석 방법 (하)를...

작은 하트의 세미 - 자동 광학 도면 분석

우리의 유충에서 심장 기능을 모니터링하는 여러 가지 방법을...

애벌레의 모니터링 심장​​ 기능 Drosophila melanogaster 생리 연구

우리는 sectioning, 고정, 삽입을위한 과정을 설명하고, 늦은 단계의...

의 전자 현미경을위한 배아의 준비 Drosophila 태아의 심장 관

Drosophila의 hemocytes은 개발 배아의 전체를 통해 분산. 이 프로토콜은 찬란 표시된 hemocytes와 배아를 사용하여 이러한 마이 그 레이션을 마운트 및 이미지하는 방법을 보여줍니다.

라이브 영상 Drosophila melanogaster 배아 Hemocyte 마이 그 레이션

이 비디오는 파리의 성인 심장 또는 초파리 등쪽 혈관이라고 불리는 것을 설명합니다. 주요 프로토콜은 살아있는 심장 준비를 위한 해부 절차를 보여줍니다.

Preparation of Drosophila Heart: A Technique to Study Heart Physiology in the Adult Fly(초파리 심장의 준비: 성충 파리의 심장 생리학을 연구하는 기술)

이 프로토콜은 그대로 애벌레 뇌의 맥락에서 라이브 세포 이미징을 수행하는 데 사용하는 효율적인 방법을 자세히 설명합니다. 라이브 세포 이미징 방식은 지속적으로 이전에 간과 된 메커니즘을 밝혀, 비대칭 신경 줄기 세포 분열의 연구뿐만 아니라 다른 신경 인성과 발달 과정에 대한 귀중한 있습니다.

의 라이브 영상<em&gt; 초파리</em&gt; 애벌레 Neuroblasts

여기에서는 다양한 발달 단계에서 초파리를 준비하고 맞춤형 광학 간섭 현미경(OCM) 시스템을 사용하여 초파리 심장 박동의 종단 광학 이미징을 수행하기 위한 실험 프로토콜에 대해 설명합니다. 심장의 형태학적 및 역학적 변화는 OCM 이미지에서 심장의 구조적 및 기능적 매개변수를 분석하여 정량적으로 특성화할 수 있습니다.

초파리 준비 및 빛 간섭 현미경을 사용하여 생체 내에서 심장 기능의 세로 이미징 (OCM)

우리는 빛 시트 형광 현미경 검사법과 생체 내 제브라피시 심장을 연구하는 최적화 된 도구를 설명합니다. 특히, 우리는 밝은 심장 형질 전환선을 제안하고 발달과 심장 결함을 피하는 새로운 부드러운 임베드 및 고정 기술을 제시합니다. 심장 이미징에 적응된 가능한 데이터 수집 및 분석 파이프라인도 제공됩니다.

얼룩말 물고기 배아에서 빠른 심장 역학의 빛 시트 현미경 검사

본 프로토콜은 OCT 영상화 및 광유전학적 심장 페이싱을 위해 심장에서 eNpHR2.0 또는 ReaChR 옵신을 발현하는 초파리 멜라노가스터의 생성을 기술한다. 초파리 OCT 영상 및 심장 박동 조절에 대한 자세한 지침, 다른 발달 단계에서 살아있는 동물에서 회복 가능한 심장 마비, 서맥 및 빈맥의 시뮬레이션을 포함하여보고됩니다.

심장 기능의 영상 및 광유전학적 제어를 위한 초파리 멜라노가스터 모델 개발

초파리 심장 절편 및 형광 이미징 프로토콜은 심장 구조 및 병리학 연구를 단순화합니다. 이 접근 방식에는 간단한 절편, 염색 및 이미징이 포함되며, 기존 박리에 필요한 기술적 전문 지식을 우회합니다. 접근성을 향상시켜 Drosophila를 더 넓은 과학 커뮤니티 내에서 심장 관련 연구에 더 널리 사용할 수 있는 모델로 만듭니다.

Drosophila Heart Fluorescence Staining with Cryosectioning을 위한 새롭고 효율적인 방법

학습하세요 Drosophila 성충 및 유충 심장 시각화 기법을 통해 생리학적 차이를 관찰하는 방법을. 이 프로토콜은 발달 생물학 연구에 필수적인 심장 박동 분석을 가능하게 합니다.

에 잔 심장을 떠올리 Drosophila

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