Name: 단백 분해 효소의 활동을 확인하는 프로 테아제 형광 검출 키트의 사용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-04T16:40:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: 배우세요 프로테아제 형광 검출 키트를 사용하여 FITC-카세인 기질로 단백 분해 효소 활성을 정량 분석하는 방법을. 이 기법은 생물학적 샘플의 미량 프로테아제 오염 검출에 활용됩니다.

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준비 지침 부화 버퍼, 버퍼 분석 및 0.6 N TCA 솔루션은 즉시 사용 솔루션으로 제공합니다. FITC - 카제인 기판은 - 그것은 반복 동결 - 해동주기를 피하기 위해 도착시 작은 볼륨으로 나누어지는 FITC - 카제인 기판을하는 것이 좋습니다. FITC - 카제인 기판이 반복 동결 - 해동주기를 받게되면, 백그라운드에서 약간 증가 감도를 낮추함으로써, 발생합니다. aliquots는 -20 ° C에 보관하고 빛으로부터 보호되어야합니다. 각 예제는, 공백, 또는 제어 반응은 FITC - 카제인 기판 20 μl가 필요합니다. 해동뿐만 아니라 활발한 혼합 또는 흔들림하면 FITC는 읽기와 더 적은 기판은 프로 테아제의 절단에 사용할 수로 인해 높은 배경에 발생하는 카제인에서 분리가 발생할 수 있습니다 / 프리즈. 플루오레신 isothiocyanate (FITC) 제어 솔루션 FITC 컨트롤을 적절한 농도로 분석 버퍼에 재구성 수 있습니다. 이 솔루션은 신선했고 빛으로부터 보호되어야합니다. 최종 트립신 제어 솔루션 - 트립신, 프로 테아제 제어 (제품 코드 T 6567)의 약병 1 MM HCL 100 μl를 추가합니다. 트립신이 해소되도록 간략하게 섞는다. 부화 버퍼 900 μl를 추가하고 잘 섞는다. 분석을 위해 필요한 경우 또는, 다른 버퍼를 사용할 수 있습니다. 트립신의 마지막 작업 농도는 20 μg / μl입니다. 때 트립신 제어 솔루션을 준비하는 준비 부화 버퍼 (9 부품 버퍼 1 부분 산성의 트립신)의 정확한 금액과 산성 트립신 솔루션의 나누어지는을 결합. 산성 조건 하에서 트립신을 저장하면 트립신의 안정성을 증가시킵니다. 트립신 제어 솔루션은 온도에 민감한하고 낮은 농도에서 안정되지 않습니다. 스토리지 및 이러한 준비 솔루션의 안정성을위한 키트의 기술 게시판을 참조하시기 바랍니다. 절차 <ol><li> 한 번에 모든 컨트롤, 공백, 그리고 샘플을 준비하는 가장 쉬운 그것을 것입니다. 각 테스트 샘플의 경우, microcentrifuge 관을 배양 버퍼 20 μl, FITC - 카제인 기판 20 μl 및 테스트 샘플의 10 μl를 추가합니다. 높은 단백 ​​분해 효소 활동과 테스트 샘플, 샘플 희석이 필요할 수 있습니다. </li><li> microcentrifuge 관을 배양 버퍼, FITC - 카제인 기판 20 μl 및 제어 샘플 10 μl 20 μl를 추가하여 적절한 컨트롤 샘플 (컨트롤 샘플을 참조) 준비합니다. </li><li> microcentrifuge 관을 배양 버퍼, FITC - 카제인 기판 20 μl, 그리고 ultrapure 물 10 μl 20 μl를 추가하여 빈 샘플을 준비합니다. </li><li> 부드럽게 37 60 분 어둠 속에 ° C에서 각각의 튜브와 부화를 섞는다. 과도한 난류가 높은 형광 배경을 일으킬 수 있으므로, 너무 적극적으로 믹스 및 분석의 감도를 감소하지 않도록주의하십시오. 참고 : 배양 시간이 감도를 높이기 위해 최대 24 시간까지 연장할 수 있습니다. 높은 형광 배경에 이르는, FITC - 카제인이 저하될 시작 수 있으므로 24 시간 초과하지 않도록주의하십시오. </li><li> 부화 후 각 microcentrifuge 관에 0.6 N Trichloroacetic 산성 솔루션 150 μl를 추가합니다. TCA는 매우 부식성이고 적절한 보호 장비를 착용하는 동안 처리한다. </li><li> 부드럽게 37 믹스와 부화 ° 30 분 동안 어둠 속에 C. </li><li> 10,000 X G. 10 분 동안 튜브를 원심 분리기 뜨는은 염산 가용성, FITC 레이블 조각을 포함하고 형광 측정을 위해 사용됩니다. </li></ol> 형광 측정 이 방법은 최대 크기를 조절하거나 아래로 사용할 수있는 장비의 요구 사항에 따라 수 있습니다. 해당 컨트롤 샘플 준비 표준 곡선을 비교, 각 테스트 샘플의 값 (FLUtest)에서 빈 샘플 (FLUblank)의 형광 읽는 뺍니다. Cuvettes <ol><li> 피펫 10 뜨는 (7 단계)와 적당한 쿠베트로 분석 완충액 1 ML의 μl 부드럽게 섞는다. 참고 : 최대 24 시간이 형광을 측정하기 전에를위한 뜨는 및 어세이 버퍼의 솔루션은 2-8 ° C에서 어둠에 저장되어있을 수 있습니다. </li><li> 485 NM에서 여기로 형광 강도를 기록하고 535 nm의의 방출 파장을 모니터링. </li></ol> Multiwell 플레이트 <ol><li> 뜨는 (7 단계)와 적합한 튜브 또는 유리병에 분석 완충액 1 ML 부드럽게 혼합 참고 피펫 10 μl : 뜨는 및 어세이 버퍼의 솔루션은 최대 2-8 ° C에서 어둠에 저장되어있을 수 있습니다 형광을 측정하기 전에 24 시간. </li><li> 블랙 96 잘 접시의 잘 200 μl를 전송합니다. 485 NM에서 여기로 형광 강도를 기록하고 535 nm의의 방출 파장을 모니터링. 또는 </li></ol><ol><li> 피펫 뜨는 2 μl (7 단계) 및 분석 B 200 μl블랙 96 잘 접시의 우물에 uffer. 참고 : 최대 24 시간이 형광을 측정하기 전에를위한 뜨는 및 어세이 버퍼의 솔루션은 2-8 ° C에서 어둠에 저장되어있을 수 있습니다. </li><li> 485 NM에서 여기로 형광 강도를 기록하고 535 nm의의 방출 파장을 모니터링. </li></ol> 컨트롤 샘플 트립신 제어 솔루션은 분석은 검출 한계를 결정하거나, 일반적인 표준 곡선을 만들려면 제대로 실적을 확인하는 데 사용할 수 있습니다. 다른 특정 프로 테아제의 분석을 위해, 그것은 적절한 배양 버퍼에 특정 프로 테아제를 포함하는 제어 솔루션을 준비하는 것이 좋습니다. 분석의 검출 한계는 빈 샘플과 획득의 가치 위에 상당한 형광 독서를 생산 테아제의 금액입니다. 검색의 제한은 장비의 감도에 따라 달라집니다. 트립신 제어 솔루션의 직렬 dilutions는 컨트롤 솔루션을 생성하는 데 사용할 수 있습니다. 빈 샘플 얻은 값을 120 %로 읽는 동일가 중요한 것으로 간주됩니다. 일상적으로, 트립신 5 NG의 감지 한계는이 절차를 얻은 것입니다. 이것은 하나 이상의 다섯 NG 트립신 컨트롤이 각각의 분석으로 실행하는 것이 좋습니다. 0.5 μg / ML의 농도와 트립신 제어 솔루션은 분석에서 트립신의 원하는 5 NG가 발생할 것입니다. 트립신 제어 솔루션 (20 μg / ML) 0.5 μg / ML 제어 솔루션, 인큐베이션 버퍼 39 부분 트립신 제어 솔루션 즉, 한 부분의 결과를 40 배 희석. <img src="/files/ftp_upload/1514/figure1.jpg" alt="그림 1"> 그림 1 (트립신 활동의 표준 곡선) : 트립신 제어 솔루션 (20 μg / ML)도 (그림 1 참조) 시리얼 dilutions함으로써 표준 곡선을 생성하는 데 사용할 수 있습니다. 각 컨트롤 샘플의 형광 읽기는 각 컨트롤 샘플 (FLUcontrol)의 가치에서 빈 샘플의 형광 읽기 (FLUblank)를 빼서에 의해 수정되었습니다. 이 키트 및 0.15 μg / ML (1.5 NG)에서 2.5 μg / ML (25 NG)에 이르기까지 컨트롤 샘플을 사용하여 트립신 (제품 번호 T 6567)에 대한 전형적인 표준 곡선. 이 곡선은 4 단계 30 분 배양 시간, 설명 절차에 따라 생성되었습니다. 형광 측정은 multiwell 접시에서 만들어졌다. 플루오레신 isothiocyanate가 가능한 계측기 교정에 대한 제어 (해당 제조 업체의 지침을 참조) 또는 FITC 신호의 선형성 범위의 결정으로 제공됩니다.

<ol><li>Twining, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescein+Isothiocyanate-Labeled+Casein+Assay+for+Proteolytic+Enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Fluorescein Isothiocyanate-Labeled Casein Assay for Proteolytic Enzymes.</a> Anal. Biochem. 143, 30-34 (1984).</li>
</ol>

저자는이 문서에서 사용하는 시약 및 도구를 만들어 시그마 알드리치의 직원입니다.

우리는 단지 생물 학적 샘플의 단백 분해 효소의 활동을 감지하는 프로 테아제 형광 탐지 키트를 사용하여 예제 분석을 보여주었다. 이 키트는 생리 애플 리케이션에서 발견 프로 테아제의 다양한 범위를 감지하기 위해 최적화되었습니다. 그것은 세린, 시스테인, 금속 및 aspartic 프로 테아제의 검출에 적합하지만, 수정은 일부 특정 프로 테아제를 감지해야 할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>&lt;a href=&quot;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=en&amp;amp;N4=PF0100%7CSIGMA&amp;amp;N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&amp;amp;F=SPEC&amp;amp;cm_sp=affiliate-_-Jove-_-12346">프로테아제 형광 검출 키트&lt;/a&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PF0100</td><td></td></tr><tr><td>&lt;a href=&quot;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=en&amp;amp;N4=H1758%7CSIGMA&amp;amp;N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&amp;amp;F=SPEC&amp;amp;cm_sp=affiliate-_-Jove-_-12347">염산&lt;/a&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr></tbody></table>

단백 분해 효소의 활동을 확인하는 프로 테아제 형광 검출 키트의 사용

Use of the Protease Fluorescent Detection Kit to Determine Protease Activity

단백 분해 효소 형광 탐지 키트를 제공 즉시 사용 테아제 활동의 존재를 검출 시약합니다. 단백 분해 효소의 활동을 감지하는이 간단한 분석은 카제인 기판으로 플루오레신 isothiocyanate (FITC)로 표시합니다. 단백 분해 효소 활동 산성 조건 하에서 침전하지 작은 조각,로 FITC - 카제인 표시 기판의 절단을 초래합니다. 단백 분해 효소 샘플 및 기판의 부화 후, 반응은 trichloroacetic 산 (TCA)의 추가와 함께 산성이다. 혼합물은 다음 펠렛 및 솔루션에 남아있는 작은, 산성 수용성 조각을 형성 소화되지 않은 기판과 centrifuged 있습니다. 뜨는은 해소되고 FITC - 라벨 조각의 형광이 측정됩니다. 설명 키트 절차는 약 0.5 μg / ML (트립신의 5 NG 분석 추가)의 농도에 트립신 프로 테아제 컨트롤을 검색합니다. 이 감도는 최대 24 시간, 긴 배양 시간 증가 수 있습니다. 분석은 microcentrifuge 튜브에서 수행하고 절차 cuvettes 또는 multiwell 판을 사용하여 형광 검출을 위해 제공됩니다.

단백 분해 효소 형광 탐지 키트는 fluorometry를 사용하는 프로 테아제 활동의 측정을 위해 설계되었습니다. 그것은 또한 프로 테아제 오염 성분의 검출에 적합합니다. 방법은 FITC - 카제인 표시 기판의 독자적인 배합의 proteolytic hydroysis을 기반으로합니다.

Protease 형광 검출 키트는 프로테아제 활성의 존재를 검출하기 위한 즉시 사용 가능한 시약을 제공합니다. ...을 검출하기 위한 이 간단한 분석법은...

본 프로토콜은 마이크로 원심분리 튜브에 배양 버퍼, FXI 카제인 용액 및 표적 프로테아제가 포함된 샘플을 첨가하는 것으로 시작하며, 이후 부드럽게 혼합하고 암실에서 37 °C로 60분 동안 배양합니다. 배양 기간이 끝난 후 단백질 분해 반응을 중단시키기 위해, TCA 용액을 첨가하고 부드럽게 혼합한 뒤 다시 암실에서 37 °C로 30분 동안 배양합니다. 이 단계에서 반응하지 않은 기질이 침전됩니다.샘플을 10,000 Gs에서 10분 동안 원심분리합니다. 산 가용성 FXI 표지 단편들이 포함된 상층액을 제거합니다. 상층액을 튜브 또는 다중 웰 플레이트에 옮기고 분석 버퍼로 희석한 후, 형광 측정기로 샘플을 측정합니다.안녕하세요, 저는 미주리주 세인트루이스에 위치한 Sigma Aldridge DeKalb 시설의 과학자 Carrie Cup Vineyard입니다. 오늘은 형광 측정법을 이용한 프로테아제 활성 측정 절차를 보여드리겠습니다. 저희 품질 관리 실험실에서는 낮은 프로테아제 활성을 측정하기 위해 이 절차를 사용합니다.그럼 시작해 보겠습니다. 본 실험 절차를 위해 배양 버퍼, 분석 버퍼, 그리고 0.6 N trichloroacetic acid(TCA) 용액이 즉시 사용 가능한 상태의 용액으로 제공됩니다. Cain이라고 표시된 fite 용액을 소량씩 분주하여 -20 °C에서 보관하십시오. 이때 갈색 바이알을 사용하거나 투명 튜브를 알루미늄 호일로 감싸 빛으로부터 보호해야 합니다.Phycoerythrin-conjugated streptavidin 기질을 분주하면 반복적인 동결-해동 주기의 필요성을 최소화할 수 있으며, 반복적인 동결-해동 주기나 격렬한 흔들림 또는 혼합은 streptavidin에서 Phycoerythrin이 분리되어 배경 신호가 높아지는 결과를 초래할 수 있습니다. 형광 광도계를 교정하거나 Phycoerythrin 신호의 선형 범위를 결정하는 경우, Phycoerythrin 대조 용액을 준비하십시오. 이 용액은 분석 버퍼를 사용하여 적절한 농도로 재구성하여 신선하게 제조하십시오.준비가 완료되면 용액을 빛으로부터 차단하십시오. 마지막으로, 동결 건조된 trypsin 바이알에 1 mM 염산 100 µL를 첨가한 후, trypsin이 완전히 용해되도록 짧게 혼합하여 trypsin protease 대조군을 준비합니다. trypsin을 산성 조건에서 보관하면 안정성이 높아집니다.Tripsin 대조군 용액은 온도에 민감하며 저농도에서 안정하지 않으므로 주의하십시오. 다음으로, 분석 전반에 걸쳐 사용할 테스트 시료, 대조군 및 공시료를 포함한 모든 분석 시료의 준비를 시작합니다. 각 테스트 시료는 빛으로부터 보호하여 보관하십시오.마이크로 원심분리 튜브에 배양 버퍼 20 µL, fit c kian 기질 20 µL 및 테스트 샘플 10 µL를 혼합합니다. 샘플을 암소에서 배양하는 경우 투명한 마이크로 원심분리 튜브를 사용할 수 있습니다. 또한, 프로테아제 활성이 높은 테스트 샘플은 희석이 필요함에 유의하십시오.트립신 대조군 샘플은 분석이 적절하게 수행되고 있는지 확인하는 양성 대조군으로 사용되며, 검출 한계를 결정하거나 일반적인 표준 곡선을 작성하는 데 이용됩니다. 트립신 대조군을 준비하려면 산성화된 트립신 1분량과 배양 완충액 또는 테스트 샘플에 사용된 완충액 9분량을 혼합하고 잘 섞어줍니다. 트립신의 최종 작동 농도는 20 µg/mL입니다. 다른 특정 프로테아제를 사용하는 경우, 해당 특정 프로테아제와 적절한 완충액을 사용하여 대조군 용액을 준비하십시오.마이크로 원심분리 튜브에 배양 버퍼 20 microliters, fz cain 기질 20 microliters 및 trypsin 대조군 10 microliters를 혼합하여 대조군 샘플 준비를 계속합니다. 각 분석 시 최소 한 개의 5 nanograms trypsin 대조군 샘플을 실행하거나 연속 희석법을 사용할 것을 권장합니다. 마지막 샘플은 공시료(blank)로, 마이크로 원심분리 튜브에 배양 버퍼 20 microliters, Fitz Caine 기질 20 microliters 및 초순수 10 microliters를 혼합하여 준비합니다.세 가지 유형의 샘플이 준비되면, 각 튜브를 부드럽게 혼합하고 37 °C의 암소에서 60분 동안 배양합니다. 과도한 와류는 높은 형광 배경을 유발하여 분석의 감도를 낮출 수 있으므로 너무 격렬하게 혼합하지 않도록 주의하십시오. 감도를 높이기 위해 최대 24시간까지 배양할 수 있으나, FXI casein이 분해되기 시작할 수 있으므로 그 이상의 장시간 배양은 권장되지 않습니다.배양이 완료되었을 때 높은 형광 배경이 나타나는 경우, 적절한 보호 장비를 착용한 상태에서 각 마이크로 원심 분리 튜브에 TCA 용액 150 µL를 첨가하십시오. TCA와 함께 배양하면 튜브 내에 흰색 안개가 관찰되는데, 이는 침전된 소화되지 않은 불용성 casein입니다. 가볍게 섞은 후 37 °C의 암소에서 30분 동안 배양하십시오. TCA 용액 배양이 끝나면 상온에서 10,000 ×g로 10분 동안 튜브를 원심 분리하십시오.상층액에는 형광 측정이 사용될 산 가용성 fite 표지 Cain 단편이 포함되어 있습니다. 펠렛의 침전물이 피펫 팁으로 흡입되면 이후의 형광 검출 과정에서 위양성 결과가 나올 수 있으므로, 튜브 상단에서 조심스럽게 피펫팅하십시오. 형광계를 사용하여 프로테아제 활성을 측정하기 위해, TCA 상층액 10 µL와 분석 버퍼 1 mL를 튜브에 넣고 부드럽게 혼합합니다. 또한, FE 10 µL를 분석 버퍼 1 mL에 첨가하여 분석용 FE 표준물을 희석하십시오. FE 대조군과 Trypsin 표준물은 샘플이 초과해서는 안 되는 형광 수준을 나타냅니다. TCA 상층액과 분석 버퍼의 혼합액은 형광 측정 전까지 2~8 °C의 암소에서 최대 24시간 동안 보관할 수 있습니다.큐벳을 사용하여 측정하는 경우, 용액 1 mL를 적절한 큐벳으로 옮깁니다. 많은 수의 샘플을 분석해야 하는 경우에는 96-웰 플레이트와 형광 플레이트 리더기를 사용하여 형광 측정 데이터를 얻을 수 있습니다. 본 분석에서 fluorescein isothiocyanate는 기기 보정 가능성을 위한 대조군으로 제공됩니다. 여기에는 설명된 절차에 따른 FS e 신호의 대표적인 선형 범위가 표시되어 있습니다.첫 번째 배양 단계의 배양 시간을 30분으로 설정하여 이 키트를 사용하면, 1.5 nanograms에서 25 nanograms 범위의 trypsin 및 대조군 샘플에 대해 다음과 같은 전형적인 표준 곡선을 얻을 수 있습니다. 형광 측정은 멀티웰 플레이트에서 수행되었습니다. 이 분석법의 검출 한계는 공시료(blank sample)에서 얻은 값보다 유의미하게 높은 형광 수치를 생성하는 프로테아제의 양입니다.지금까지 Sigma Aldridge 프로테아제 측정 키트를 사용하여 생물학적 시료 내의 형광 프로테아제 활성을 검출하는 방법을 살펴보았습니다. 본 키트는 사용 최적화되어 있으나, 분석하고자 하는 특정 프로테아제에 따라 약간의 조건 수정이 필요할 수 있다는 점을 유의하시기 바랍니다. 이상으로 모든 과정을 마치겠습니다.시청해 주셔서 감사합니다. 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오에서는 생물학적 샘플 내의 단백질 분해 활성을 분석하기 위해 전기영동 기술인 자이모그래피를 수행합니다.

형광 펩타이드 자이모그래피: 자이모그램 겔에서 형광 기질을 사용하여 프로테아제 활성을 검출하는 수정된 기술

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프로테아제의 단백질 분해 활성을 스크리닝하기 위한 형광 펩타이드 절단 분석

이 비디오는 가래 샘플에서 호중구 세린 프로테아제 활성을 정량화하기 위한 체외 분석을 보여줍니다. 분비된 프로테아제를 함유한 샘플은 인식 모티프를 지닌 형광 리포터와 함께 배양됩니다. 프로테아제에 의한 모티프의 절단은 리포터의 공여체 및 수용체 형광단에 의한 개별 형광 방출을 가능하게 하며, 이는 샘플에서 프로테아제 활성을 나타냅니다.

형광 리포터를 사용하여 호중구 세린 프로테아제 활성을 측정하기 위한 In vitro Assay

이 비디오는 형량 펩타이드 분석을 사용하여 공포에 질린 쥐의 뇌와 대조군의 뇌에서 측면 편도체의 다양한 세포 내 구획에서 프로테아솜 활성을 측정하는 방법을 보여줍니다. 프로테아좀은 형광 펩타이드 기질을 절단하여 형광 분자를 방출하며, 이 분자는 핵 및 시냅스 단백질 분획에서 프로테아솜 활성을 평가하기 위해 플레이트 리더를 사용하여 정량화됩니다. 핵 활동이 증가하면 유전자 발현의 변화가 일어나고, 시냅스 활동이 감소하면 장기 기억 유지에 필요한 단백질 안정화를 나타냅니다.

쥐 뇌의 다양한 세포 내 구획에서 프로테아솜 활동 측정

여기에서는 살아있는 세포에서 일체형 막 단백질의 방향과 토폴로지를 결정하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 간단한 프로토콜은 관심 단백질과 GFP 사이의 키메라의 선택적 단백질 분해 효소 민감도에 의존합니다.

형광 단백질 분해 효소 보호를 사용하여 막 단백질 토폴로지를 결정 (FP​​P)

프로 테아 제는 기본적인 생물학 과정 및 암과 같은 복잡 한 질병의 dysregulated 프로 테아 제 활동 드라이브 진행에 관련 된 단단히 규제 효소. 이 방법의이 목표 호스트 소변에서 감지 하 고 질병을 차별 분열 신호를 생산 하 여 효소 활동에서 vivo에서 측정 하는 nanosensors를 만드는 것입니다.

Nanosensors 프로 테아 제 활동에 감지 비보에 비 침 투 적인 진단에 대 한

여기, 우리 N 터미널 hexahistidine/맥 아당 의무적인 단백질 및 형광 단백질 융합 재조합 기판 니켈 nitrilotriacetic의 표면에 부착 된 최근에 개발한 효소 분석 플랫폼의 상세한 절차를 제시 산 자기 agarose 구슬입니다. 나트륨 라우릴 황산 polyacrylamide 젤 전기 이동 법으로 분리 분석 결과 샘플의 후속에 젤 분석 또한 제공 됩니다.

형광 효소 분석 결과 플랫폼에 그들의에서 젤 Renaturation 재조합 융합 단백질의 사용

우리는 바이러스 성 퓨전 펩 티 드의 분열 사이트를 대표 하는 펩 티 드에 프로 테아의 분해 활동의 신속한 심사를 허용 하는 fluorogenic 펩 티 드 분열 분석 결과 제시. 이 방법은 효소 활동에 대 한 테스트 하려면 단백질 시퀀스 내에서 다른 아미노산 주제에 사용할 수 있습니다.

분해 활동에 대 한 화면에 Fluorogenic 펩 티 드 분열 분석 결과: 코로나 바이러스에 대 한 응용 프로그램 스파이크 단백질 활성화

여기, 형광 펩 티 드 대신 네이티브 단백질 분해성 기판으로 사용 되는 수정 된 zymographic 기법에 대 한 자세한 프로토콜 선물이. 전기 이동 법 형광 펩 티 드 zymograms에 생물 학적 샘플의 이전 zymographic 기법 보다는 프로 테아의 광범위의 검색 수 있습니다.

형광 성 펩 티 드 Zymography에 의해 프로 테아 제 활동의 탐지

본 프로토콜은 유동 세포분석 또는 분광형광계를 사용하여 형광 기질을 통해 카스파아제 활성을 측정하는 두 가지 방법을 설명합니다.

형광 분석 또는 유세포분석을 사용한 카스파제 활성 측정

배우세요 프로테아제 형광 검출 키트를 사용하여 FITC-카세인 기질로 단백 분해 효소 활성을 정량 분석하는 방법을. 이 기법은 생물학적 샘플의 미량 프로테아제 오염 검출에 활용됩니다.

단백 분해 효소의 활동을 확인하는 프로 테아제 형광 검출 키트의 사용

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