Name: Drosophila에서 Wolbachia 세균 감염 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: 배우세요 Drosophila에서 Wolbachia를 분리하고 비감염 개체에 주입하는 방법을. 필터 장치와 70% 에탄올 세척을 활용한 이 프로토콜은 곤충 감염 메커니즘 연구에 필수적입니다.

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drosophila에서 wolbachia 세균 감염

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Drosophila에서 Wolbachia 세균 감염

제 이름은 Voia Friedman이며, 프린스턴 대학교의 부연구원입니다. 오늘은 제가 개발한 몇 가지 프로토콜에 대해 말씀드리겠습니다. 이 프로토콜들은 감염된 파리에서 hemolymph를 분리하고, 나중에 이를 감염되지 않은 파리에 주입하는 과정에 관한 것입니다.기본적으로, 이는 기초적인 수준에서 hemocyte만을 분리하기 위한 매우 간단한 프로토콜입니다. Mepo의 이 장치는 E-tube 상단에 장착되는 필터를 포함하고 있습니다. 기본적으로 약 100마리의 초파리로 시작합니다. 초파리를 마취시킨 후 필터 장치에 넣는데, 깔때기를 사용하면 이 장치에 초파리를 매우 쉽게 옮길 수 있으며, 그 후 70% ethanol로 세척합니다.먼저 에탄올을 제거합니다. 에탄올을 버린 후, 마지막 세 번째 세척은 멸균수를 사용하여 수행하는데, 이는 박테리아에 에탄올 흔적이 남아 있는 것을 원하지 않기 때문입니다. 그런 다음 새로운 원심분리관으로 옮겨 마이크로 원심분리기로 2분 동안 원심분리합니다. 이후 이를 주입할 수 있으며, 영향을 받지 않은 파리들에게만 먹이를 제공합니다.기본적으로 양면테이프를 준비하십시오. 보통 이러한 양면테이프는 두 면이 있으며, 한쪽 면에 이면지가 붙어 있습니다. 파리를 그 위에 붙여야 하므로 이면지가 있는 쪽을 위로 향하게 두십시오. 기본적으로 가스 장치 상단에 이 슬라이드가 있으면 가스 흐름이 차단되며, 슬라이드 위에 있는 파리들이 깨어나게 됩니다.따라서 테이프를 사용하여 작은 후드나 챔버를 만들어 흐름을 직접 조절할 수 있습니다. 그런 다음 가스가 초파리 위로 흐르도록 유도합니다. 이렇게 테이프로 이 조명을 고정하면, 초파리가 준비된 상태가 됩니다.초파리들을 테이프 상단에 모두 동일한 방향으로 고정시키며, 바늘이 들어올 방향으로 머리를 향하게 합니다. 그렇게 하면 날개를 피해 바늘을 찌를 수 있으며, 초파리가 시술 중에 깨어나더라도 도망가지 않도록 확실히 고정할 수 있습니다.따라서 초파리 꼬리 부분의 날개 쪽에 약간의 팁과 압력을 가해주십시오. 날개가 손상되어도 괜찮습니다. 주입 후 초파리를 들어 올릴 때 어차피 날개가 소실될 가능성이 높으며, 그럼에도 불구하고 초파리는 생존할 것입니다.이는 파리를 잃지 않게 해주므로 유용할 수 있습니다. 따라서 그는 마이크로미터의 바늘 뒷부분에 미네랄 오일을 바른 다음, 바늘 주입기를 연결하고, 압력을 조절하여 물질을 바늘 끝까지 올립니다. 저는 10~15 nL 사이의 양을 주입했는데, 일관성 있게 주입하는 것이 중요합니다. 여기서 한 가지 중요한 세부 사항은 주입 시 바늘이 복부 상단부의 가능한 깊숙한 곳까지 들어가야 한다는 점입니다.기본적으로 여기서 바늘이 관통할 때 상하로 움직일 수 있는 공간이 더 넓기 때문입니다. 그리고 큐티클에 더 가깝게 위치시키면, 수술 과정에서 주요 장기를 관통할 가능성이 낮아집니다. 예를 들어, 수술 중인 플라이의 장에 구멍을 낼 가능성이 매우 낮아지며, 이는 플라이를 죽게 만들 수 있기 때문입니다.제 이름은 Voia Friedman입니다. 저는 Princeton University의 Eric Hels 연구실 소속 부연구원입니다. 오늘은 방금 시연으로 보신 이 프로토콜에 대해 설명드리고자 합니다.본 프로토콜은 UBA가 조직을 통과할 수 있음을 증명하기 위해 수행되었습니다. UBA는 지구상에서 가장 성공적인 세포 내 기생충 중 하나로, 곤충과 많은 절지동물의 20%에서 70%까지 감염시킵니다.또한, 이들은 온코세르카리아시스(강변 실명증)나 림프사상충증과 같은 질병을 전파하는 선충을 감염시키기 때문에 인간 질병 측면에서도 매우 중요합니다. 그리고 CCA는 이러한 벌레들의 필수적인 내공생균입니다. 따라서 모기에 의해 전파되는 기생충 질환을 조절하는 수단으로 CCA를 활용하는 것에 대해 매우 큰 관심이 있으며, 여기에는 말라리아나 뎅기열과 같은 모기 전파 질환이 포함됩니다.따라서 이 프로토콜은 CCA가 초파리의 복강 내에 존재할 때, 조직을 가로질러 생식세포에 도달할 수 있음을 보여주기 위해 개발되었습니다. 기본적으로 여기서 보시는 것은 초파리 난소의 형태이며, CCA가 혈림프 내에 존재하면 난소를 둘러싸고 있는 분홍색 복막초를 통과할 수 있습니다.그런 다음 근육층을 가로질러 이동합니다. 실제로 이들이 난소 내부로 들어가는 첫 번째 장소 중 하나가 바로 체세포 줄기세포 영역입니다. 그 후 이들은 생식세포 계열에 도달할 수 있습니다.또한 이 박테리아는 미토콘드리아와 동일한 방식으로, 즉 난자에 존재하는 모체 세포질을 통해 전해집니다. 따라서 당연히 이들이 생식세포계열에 존재해야 합니다. 이것이 바로 이 프로토콜이 개발된 이유입니다.이 프로토콜은 매우 유용할 수 있습니다. 기본적으로 전통적인 방식에서는 wbaaa를 전염시키기 위해 wbaaa를 취해 새로운 곤충 종에 도입하려 했을 것입니다. 이는 배아에 미세 주입을 수행함으로써 이루어지지만, 해당 방법은 훨씬 더 복잡합니다.기본적으로 우리는 여기서 바이러스의 생물학적 특성을 이용하고 있습니다. 바이러스는 조직을 가로질러 이동할 수 있으며, 줄기세포 조직으로 이동하여 생식세포열까지 전달될 수 있기 때문입니다. 따라서 감염된 특정 곤충 종으로부터 UBA를 추출하는 것이 더 수월하며, 이를 감염되지 않은 종으로 전염시킬 수 있습니다. 아마도 주입 과정 그 자체가 원인이라고 생각합니다.기본적으로 파리를 최대한 잘 고정하는 것이 중요합니다. 저희는 양면 테이프를 사용하고 있으며, 바늘을 파리와 최대한 가깝고 평행하게 찔러 넣어 너무 깊게 들어가지 않도록 해야 합니다. 그렇게 해야 수술 후 파리가 죽을 가능성이 낮아집니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Parasitoid (기생) 말벌을 포함한 여러 곤충들의 천적의 주요 클래스를...

의 기생충 말벌에 대한 소개<em&gt; Drosophila</em&gt; 그리고 Antiparasite 면역 반응

출처: 시바-조시, J. A. 외 Drosophila melanogaster의 구강 세균 감염 및 탈출. J . Vis. Exp. (2018)영상은 병원성 박테리아에 의한 초파리 멜라노가스터 의 구강 감염을 보여줍니다. 감염 바이알 준비와 굶주린 파리를 옮겨 박테리아 섭취를 가능하게 하는 과정이 포함됩니다. 이 절차는 장내 정착을 포착한 후 파리의 표면 멸균과 균질화를 진행합니다. 마지막으로, 연속 희석과 집단 수를 통해 내부 박테리아 부하를 정량화하는 과정을 보여줍니다.

병원성 박테리아에 의한 초파리 멜라노가스터 의 구강 감염

출처: Hiroyasu, A., D 외, 미생물 감염을 위한 초파리 흑가스터 유충에서 혈구 추출 및 분석. J. Vis. 경험 (2018)이 영상은 초파리 유충을 박테리아 방울에 넣고 텅스텐 바늘로 찌르는 과정을 시연합니다. 유충은 홈이 있는 영양분이 풍부한 한천 플레이트 위에서 배양되어 숙주-병원체 상호작용을 연구합니다.

초파리 유충에서 세균 감염 확립

Drosophila melanogaster는 선천성 면역 체계와 감염 및 질병의 생리학적 결과를 연구하기 위한 뛰어난 모델 유기체입니다. 이 프로토콜은 강력하고 정량적으로 반복 가능한 박테리아 감염을 D. melanogaster에 전달하는 방법과 이후에 감염 중증도를 측정하고 숙주 면역 반응을 정량화하는 방법을 설명합니다.

전신 세균 감염 및 면역 방어 표현형에<em&gt; 초파리 melanogaster의</em

무균 및 무균 조건에서 초파리 melanogaster의를 양육하는 방법이 제공된다. 플라이 배아는, 차아 염소산 나트륨에 dechorionated 멸균 다이어트에 무균 적으로 전송하고, 밀폐 용기에 양육된다. 박테리아와식이 요법과 배아를 접종은 무균 협회에 이르게하고, 세균의 존재는 전신 초파리 균질 도금에 의해 확인된다.

과일 비행을 양육<em&gt; 노랑 초파리</em&gt; 무균 및 무균 조건에서

Aedes aegypti 모기 Wolbachia 감염 arboviruses의 전송을 억제 하는 자연적인 인구에 발표 되는. 우리 실험실 적응 및 선택 최소화 하기 위해 예방 조치를 복용 실험 및 필드 릴리스, 후면 Ae aegypti Wolbachia 감염 실험실에서 하는 방법을 설명 합니다.

Aedes aegypti 모기 감염 Wolbachia 유지

이 프로토콜에는 구두 노출 및 감염 세균성 병원 체, 과일 파리 초파리 melanogaster 하 고 전염 성 박테리아 헛간 창 자 감염을 다음의 수를 측정 하는 방법을 설명 합니다. 우리는 더 비행 생존 다음 구강 세균 감염에 면역 돌연변이의 효과 설명 합니다.

세균성 감염 및 Shedding 초파리 melanogaster 에

이 프로토콜에는 vivo에서 바이러스 감염 초파리 melanogaster 나노 주입 방법 기본적인 기법을 사용 하 여 바이러스-호스트 상호 작용을 분석 하에 설정 하는 방법을 설명 합니다.

바이러스 성 감염 및 초파리 Melanogaster 상호 작용 호스트-바이러스의 분석의 설립

초파리 멜라노가스터 성인 파리는 숙주 항미생물 선천적 면역 반응 및 미생물 감염 전략의 기초가 되는 분자 메커니즘을 조사하기 위한 모델 유기체로서 광범위하게 활용되고 있다. D. melanogaster 유충 단계를 추가 또는 대안 모델 시스템으로서 촉진하기 위해, 애벌레 주입 기술이 기술된다.

초파리 멜라노가스터 유충 주입 프로토콜

네 가지 방법이 세포 내 Wolbachia를 검출하기 위해 사용되었는데, 이는 서로를 보완하고 항생제를 사용하여 네이티브 울바키아 감염의 Aa23 및 Aa23-T가 완치된 Aedes albopictus 유래 Aa23 및 Aa23-T의 Wolbachia 감염의 검출 정확도를 향상시켰다.

Aedes albopictus 세포주에서 Wolbachia 균주 wAlbB 검출

세포주는 숙주 세포 외부에서 배양할 수 없는 세포 내 유기체에 대한 연구에 유용합니다. Wolbachia에 감염된 계통은 많은 발견을 가능하게 했지만 이러한 계통 내의 이질성으로 인해 다양한 실험 결과가 나올 수 있습니다. Wolbachia에 감염된 JW18 세포에서 단일 세포 클론 및 연속 배양을 생성하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

Wolbachia에 감염된 Drosophila melanogaster JW18 세포주에서 단클론 배양 생성

배우세요 Drosophila에서 Wolbachia를 분리하고 비감염 개체에 주입하는 방법을. 필터 장치와 70% 에탄올 세척을 활용한 이 프로토콜은 곤충 감염 메커니즘 연구에 필수적입니다.

Drosophila에서 Wolbachia 세균 감염

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