Name: 조립, 조정 및 단백질 이미징을위한 Apertureless 니어 필드 적외선 분광 현미경의 사용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-25T03:33:00.000+00:00
Duration: 12 min 27 s
Description: 배우세요 근접장 적외선 현미경 조립 및 정렬 방법을 사용하여 단백질 응집체를 관찰하는 기법입니다. 가시광 레이저를 활용한 정렬 과정으로 신경과학 및 생물물리학 연구에 활용됩니다.

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<ol><li>Mueller, K., Yang, X., Paulite, M., Fakhraai, Z., Gunari, N., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+imaging+of+the+surface+of+self-assembled+polystyrene-b-poly%28methyl+methacrylate%29+diblock+copolymer+films+using+apertureless+near-field+IR+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Chemical imaging of the surface of self-assembled polystyrene-b-poly(methyl methacrylate) diblock copolymer films using apertureless near-field IR microscopy.</a> Langmuir. 24, 6946-6951 (2008).</li>
<li>Lahrech, A., Bachelot, R., Gleyzes, P., Boccara, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infrared-reflection-mode+near-field+microscopy+using+an+apertureless+probe+with+a+resolution+of+lambda%2F600%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Lett%22%5BJournal%5D)">Infrared-reflection-mode near-field microscopy using an apertureless probe with a resolution of lambda/600.</a> Opt. Lett. 21, 1315-1317 (1996).</li>
<li>Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+visible+and+mid-infrared+scattering-type+near-field+optical+microscopes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microsc%22%5BJournal%5D)">Performance of visible and mid-infrared scattering-type near-field optical microscopes.</a> J. Microsc. 210, 311-314 (2003).</li>
<li>Kim, Z. H., Leone, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization-selective+mapping+of+near-field+intensity+and+phase+around+gold+nanoparticles+using+apertureless+near-field+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Polarization-selective mapping of near-field intensity and phase around gold nanoparticles using apertureless near-field microscopy.</a> Optics Express. 16, 1733-1741 (2008).</li>
<li>Bridger, P. M., McGill, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observation+of+nanometer-scale+optical+property+discrimination+by+use+of+a+near-field+scanning+apertureless+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Lett%22%5BJournal%5D)">Observation of nanometer-scale optical property discrimination by use of a near-field scanning apertureless microscope.</a> Opt. Lett. 24, 1005-1007 (1999).</li>
<li>Stebounova, L., Akhremitchev, B. B., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+the+weak+scattered+signal+in+apertureless+near-field+scanning+infrared+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Sci.+Instrum%22%5BJournal%5D)">Enhancement of the weak scattered signal in apertureless near-field scanning infrared microscopy.</a> Rev. Sci. Instrum. 74, 3670-3674 (2003).</li>
<li>Akhremitchev, B. B., Pollack, S., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apertureless+Scanning+Near-Field+Infrared+Microscopy+of+a+Rough+Polymeric+Surface%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Apertureless Scanning Near-Field Infrared Microscopy of a Rough Polymeric Surface.</a> Langmuir. 17, 2774-2781 (2001).</li>
<li>Hecht, B., Bielefeldt, H., Inouye, Y., Pohl, D. W., Novotny, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facts+and+Artifacts+in+Scanning+Near-Field+Optical+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phys%22%5BJournal%5D)">Facts and Artifacts in Scanning Near-Field Optical Microscopy.</a> J. Appl. Phys. 81, 2492-2498 (1997).</li>
<li>Labardi, M., Patane, S., Allegrini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artifact-free+near-field+optical+imaging+by+apertureless+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Phys.+Lett%22%5BJournal%5D)">Artifact-free near-field optical imaging by apertureless microscopy.</a> Appl. Phys. Lett. 77, 621-623 (2000).</li>
<li>Palanker, D. V., Simanovskii, D. M., Huie, P., Smith, T. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+Contrast+Parameters+and+Topographic+Artifacts+in+Near-Field+Infrared+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phys%22%5BJournal%5D)">On Contrast Parameters and Topographic Artifacts in Near-Field Infrared Microscopy.</a> J. Appl. Phys. 88, 6808-6814 (2000).</li>
<li>Akhremitchev, B. B., Sun, Y., Stebounova, L., Walker, G. C. Monolayer-Sensitive Infrared Imaging of DNA Stripes Using Apertureless Near-Field Microscopy.Langmuir. 18, 5325-5328 (2002).</li>
<li>Brehm, M., Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infrared+Spectroscopic+Mapping+of+Single+Nanoparticles+and+Viruses+at+Nanoscale+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Infrared Spectroscopic Mapping of Single Nanoparticles and Viruses at Nanoscale Resolution.</a> Nano Lett. 7, 1307-1310 (2006).</li>
<li>Dazzi, A., Prazeres, R., Glotin, F., Ortega, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+nano-chemical+mapping+performed+by+an+AFM-based+%28%22AFMIR%22%29+acousto-optic+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Ultramicroscopy%22%5BJournal%5D)">Analysis of nano-chemical mapping performed by an AFM-based ("AFMIR") acousto-optic technique.</a> Ultramicroscopy. 107, 1194-1200 (2007).</li>
<li>Yang, D. S., Yip, C. M., Huang, T. H. J., Chakrabartty, A., Fraser, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manipulating+the+Amyloid-%CE%B2+Aggregation+Pathway+with+Chemical+Chaperones%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Manipulating the Amyloid-β Aggregation Pathway with Chemical Chaperones.</a> J. Biol. Chem. 274, 32970-32974 (1999).</li>
<li>Meadows, P. Y., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+Microscopy+Studies+of+Fibronectin+Adsorption+and+Subsequent+Cellular+Adhesion+to+Substrates+with+Well-Defined+Surface+Chemistries%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Force Microscopy Studies of Fibronectin Adsorption and Subsequent Cellular Adhesion to Substrates with Well-Defined Surface Chemistries.</a> Langmuir. 21, 4096-4107 (2005).</li>
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조립, 조정 및 단백질 이미징을위한 apertureless 니어 필드 적외선 분광 현미경의 사용

Assembly, Tuning and Use of an Apertureless Near Field Infrared Microscope for Protein Imaging

본 논문은 회절 한계 이상의 이미징을위한 적외선 니어 필드 현미경의 조립 및 운영에 독자를 지시하는 것을 목표로하고있다. apertureless 니어 필드 현미경 써카 20 nm의 해상도에서 적외선 스펙트럼을 제공하는 광 산란 형태의 악기이다. 구성 요소와 사용하기 위해 단계별로 프로토콜의 전체 목록이 제공됩니다. 조립 및 악기 튜닝에 일반 오류가 설명합니다. 아밀로이드 근모의 차 구조를 보여주는 대표적인 데이터 집합이 제공됩니다.

이미징 단백질 집계에 nearfield 적외선 현미경의 어셈블리가 설명되어 있습니다.

조립, 조정 및 단백질 이미징을위한 Apertureless 니어 필드 적외선 분광 현미경의 사용

본 논문은 회절 한계를 넘어서는 이미징을 위한 적외선 근접장 현미경의 조립 및 작동 방법을 독자에게 안내하는 것을 목적으로 합니다. ...

다중 모드 AFM 및 광학 현미경을 설치함으로써 광학 설정의 초기 조립을 완료합니다. 보이지 않는 적외선 빔의 정렬은 먼저 가시광선 적색 헬륨 네온 레이저를 이용해 정렬함으로써 더 쉽게 수행할 수 있습니다. 적외선 빔을 겹치게 하기 위해 실선을 사용하며, 점선을 통해 레이저 광이 캔틸레버 팁 정점과 적외선 검출기에 닿는 것을 관찰하는 것이 목적입니다.원하는 근접장 신호가 얻어졌을 때 적절한 형태의 1F 신호를 얻기 위해 광학 현미경의 위치와 거울을 조정하여 적외선 빔의 최종 정렬을 수행합니다. 동시에 NanoScope 소프트웨어를 사용하여 AM 지형도와 근접장 이미지를 수집합니다. 안녕하세요, 토론토 대학교 화학과의 Gilbert Walker 교수입니다.안녕하세요, 저는 Gilbert Walker 연구실의 Melissa Paulite입니다. 오늘은 aperture list 근접장 적외선 주사 현미경의 초기 조립 및 정렬 절차를 보여드리겠습니다. 저희 연구실에서는 단백질 응집체를 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다.그럼 시작하겠습니다. 이미징 시스템의 조립 및 조정을 설명하기에 앞서, 전체 시스템의 간략한 개요를 살펴보겠습니다. 이 영상에서 설명할 이미징 시스템의 구성 요소에는 광학 테이블, 멀티모드 원자힘 현미경(AFM)의 베이스, 멀티모드 AFM의 스캐너, 높낮이 조절이 가능한 광학 브레드보드, 가이드 미러, 아이리스와 센터가 포함된 광학 튜브가 포함됩니다.아연 셀레나이드 부분 반사경으로 광학 큐브를 차단하고, 승강 플랫폼에 설정을 고정하는 데 사용되는 광학 튜브를 설치합니다. 적외선 대물렌즈와 후방 산란광 수집을 위한 광학 튜브를 배치합니다. 축외 포물면 거울이 포함된 큐브와 게르마늄 플레이트를 45도로 유지하는 큐브를 설치합니다.현미경 접안렌즈, XY 스테이지에 장착된 핀홀, 그리고 수은 카드뮴 텔루라이드(MCT) 적외선 검출기를 준비합니다. 적외선 검출기 프리앰프, 빔 위치를 이동시키기 위한 XY 스테이지, 빔 초점을 맞추기 위한 승강 테이블, 적외선 검출기의 위치를 조절하기 위한 Z 스테이지 및 X 스테이지를 준비합니다. 광학 장치 조립을 시작하려면, 튜닝 미러를 사용하여 헬륨 네온 빔이 광학 테이블과 평행하도록 위치시킵니다.다음으로 큐브 내에 빔 스플리터가 없는 상태에서 큐브의 반대편 끝에 연장 광학 튜브를 배치하고, 헬륨 네온 빔이 튜브 양 끝에 부착된 아이리스를 통과하도록 조정합니다. 이제 스캐너를 제거하고 적외선 대물렌즈 대신 연장 광학 튜브를 장착합니다. 빔이 시료 쪽으로 향하도록 셀레늄화 아연 부분 반사경을 삽입합니다.헬륨-네온 빔이 광학 큐브의 기하학적 중심에 있는 반사경의 전면을 타격하도록 장착해야 합니다. 부분 반사경을 회전시켜 빔이 닫힌 출력단으로 향하게 하십시오. 부분 반사경의 마운트가 정확히 수직으로 고정되지 않으므로, 빔의 수직 이동을 가능하게 하기 위해 자체 제작한 두 개의 조절 나사를 사용합니다.다음으로, 나사를 조여 러버 O-링을 이용해 paraloid mirror를 장착합니다. O-링이 압착되면서 거울 조절이 가능해집니다. 추가 거울을 사용하여 헬륨 네온 빔을 반대 방향으로 유도하고, 이전에 사용한 아이리스를 통과하도록 조정합니다.이 빔은 파라볼로이드 거울을 조정하는 데 사용됩니다. 광학 큐브 안에 배치된 파라볼로이드 거울은 핀홀 뒤에 위치할 검출기 방향으로 빛을 반사합니다. 조정 나사를 통해 큐브 출력단에 배치된 핀홀로 빔이 향하도록 조절할 수 있습니다.빔이 핀홀을 통해 조정되면 MCT 검출기를 핀홀 가까이에 배치하십시오. 헬륨 네온 빔이 검출기의 감지 소자에 위치하도록 적외선 검출기의 위치를 조정하십시오. 검출기를 약 2 mm 아래로 이동시키십시오.이제 게르마늄 윈도우가 장착된 마운트를 핀홀 앞에 위치한 광학 큐브에 삽입하십시오. 반사 방지 코팅된 게르마늄 윈도우는 적외선 필터 역할을 하여 캔틸레버와 샘플의 시각적 관찰을 가능하게 합니다. 다음으로, 접안렌즈를 장착하십시오.큐브의 각도를 틀어 게르마늄 윈도우의 마운트를 회전시킴으로써 접안렌즈를 원하는 방향으로 향하게 할 수 있습니다. 헬륨 네온 빔이 접안렌즈의 중앙을 통과하도록 유도하십시오. 적외선 대물렌즈와 FM 스캐너를 연결하고 빔 스톱을 부착하십시오.스캐너 위에 시료를 배치하고 입력 광학 튜브를 통해 헬륨-네온 빔을 투사합니다. 빔이 빔 영역 밖으로 충분히 넘칠 만큼 넓은지 확인하십시오. 접안렌즈의 나사를 조절하여 정지시킵니다.시료에 초점이 맞춰진 빔의 선명한 이미지를 얻으십시오. 다음으로, FM 헤드를 장착하고 프로브를 시료에 접촉시키십시오. 헬륨-네온 빔의 초점을 이미징 캔틸레버의 끝단에 맞추십시오.만약 빔이 입력 광학 튜브의 중앙에서 벗어난다면, 빔이 중앙에 위치할 때까지 튜닝 단계를 반복하십시오. 포물면 거울의 최종 조정을 시작하려면, 출력 핀홀을 포물면 거울의 초점 위치에 있는 아이리스로 교체하고 게르마늄 윈도우와 적외선 검출기를 제거하십시오.적외선 검출기의 위치를 표시하십시오. 조리개 뒤쪽, 렌즈의 대략적인 초점 거리 지점에 추가 렌즈를 부착합니다. 이제 렌즈를 통해 결합된 캔틸레버가 보여야 합니다.폐쇄된 아이리스를 통해 팁의 끝부분에 중앙이 맞도록 포물면 거울의 위치를 조정하십시오. 헬륨 네온 빔이 팁에 정확하게 초점이 맞춰지면, 팁과 시료 표면에 반사된 팁 사이에 밝은 반짝임이 나타납니다. 게르마늄 윈도우를 다시 부착하고 캔틸레버를 편리하게 시각적으로 관찰할 수 있도록 조정하십시오.조리개를 핀홀로 교체하십시오. 적외선 검출에 사용되는 핀홀은 게르마늄 윈도우에 의한 적외선 빔의 편위로 인해 중심에서 벗어나게 배치해야 함을 기억하십시오. 적외선 검출기를 이전에 표시한 위치에 배치하고, 적외선 빔이 튜닝에 사용된 가시광선 빔과 함께 진행되도록 유도하십시오.이제 일상적인 조정 절차를 살펴보겠습니다. 가시광선인 헬륨 네온 빔을 이용하는 것이 보이지 않는 적외선 빔을 이용하는 것보다 정렬하기가 더 쉽습니다. 헬륨 네온 빔의 경로와 적외선 빔의 경로는 틸팅 미러에서 하나로 합쳐집니다.이 거울을 아래쪽으로 기울이면 헬륨 네온 레이저가 통과할 수 있습니다. 거울이 제자리에 있으면 적외선이 근접장에로 향합니다. 빔 중 하나를 정렬하기 위한 설정입니다.다른 경로와 공통되지 않는 두 개의 거울을 사용하십시오. 호모다인 암(homo dyne arm)의 빔을 관찰하면 코로나 형태의 빔 프로파일이 보여야 합니다. 이제 FM이 포스 피드백(force feedback)과 결합되어 근접장 스테이지(near field stage)와 정밀하게 정렬됩니다.반사 현미경 대물렌즈를 이동시켜 빛이 산란되는 팁 부분에 초점을 맞춥니다. 게르마늄 윈도우를 광학 큐브에 배치합니다. 파라볼라 거울을 거친 빔은 다시 파라볼라 거울에 의해 이 지점에 초점이 맞춰집니다.게르마늄 창을 통해 팁과 샘플 표면에 반사된 팁의 모습이 선명하게 보일 때까지 스테이지를 앞뒤로 이동하십시오. 이제 헬륨 네온 빔 없이 캔틸레버와 팁이 보이는 망원경을 통해 관찰하십시오. 여전히 일부 적색광이 보일 수 있으나, 이는 AFM 거리 제어 장치에서 나오는 내부 조명입니다.팁 끝에 밝은 빨간색 반점이 나타날 때까지 스테이지를 오른쪽, 왼쪽, 그리고 위아래 방향으로 이동하십시오. 호모다인(homodyne) 필드를 산란광과 겹치게 하려면 먼저 호모다인 암(arm)을 여십시오. 그런 다음 접안렌즈를 통해 관찰하십시오.강도가 점차 감소하는 세 개 이상의 스폿이 일직선으로 보일 것입니다. 호모다인 암(homo dyne arm)에 있는 거울을 이동시켜, 두 번째 스폿이 팁과 그 반사상이 서로 만나는 지점의 팁 이미지와 겹치도록 하십시오. 검출기를 배치하려면 추가 거울을 제거하십시오.이제 헬륨-네온 빔이 튜브 뒤쪽의 검출기 방향으로 진행하게 됩니다. 최소 두 개의 고리 모양의 점이 보일 것입니다. 오른쪽에서 두 번째 점이 검출기 앞의 열 보호 호일(heat protection foil)에 있는 구멍을 통과하여 감지 소자에 닿아야 합니다.일상적인 조정이 완료되면, 구멍의 중앙에서 가장 높은 강도의 스폿이 보여야 합니다. 다음으로 적외선 빔의 정렬을 살펴보겠습니다. 적외선 빔을 정렬하려면 최소 100 milliwatts 강도의 일산화탄소 레이저 라인을 사용하십시오.이렇게 하면 정렬이 더 쉬워집니다. 우선 검출기에 액체 질소를 채우십시오. 키네마틱 플립 마운트에 장착된 거울을 위로 올려 적외선 빔이 현미경을 향하도록 하십시오.첫 번째 조리개 뒤에 파워 미터를 배치하고, 키네마틱 플립 마운트에 장착된 거울 앞에 위치한 거울을 조정합니다. 최대 출력을 얻으려면, 근접장 스테이지와 가장 가까운 조리개 뒤에 파워 미터를 잡고 최대 출력이 나올 때까지 틸팅 가능한 거울을 이동시킵니다. 정렬 과정 중에는 1F 신호를 관찰하면서 이 단계들을 여러 번 반복하게 됩니다.One F 신호를 확인하려면, 증폭기의 락(lock) 참조를 one f equals a FM 발진 주파수로 전환하고 force plot 모드에서 3미터 Zs 스캔 크기로 이동하십시오. 정렬이 제대로 되지 않은 경우, 3미터 스케일에서 넓은 범프(bump)가 나타납니다. 이를 해결하려면 정렬이 개선될 때까지 이전 단계들을 지속적으로 반복해야 합니다.정렬 상태가 중간 정도라면, 첫 번째 범프의 곡률은 약간 오목하게 보이지만 두 번째 범프가 첫 번째보다 더 크게 나타날 것입니다. 이때 하나 또는 두 정렬 거울을 조정하여 정렬 상태를 수정할 수 있습니다. 정렬이 잘 되었다면 두 개의 범프만 보이며, 첫 번째 범프가 두 번째보다 더 높게 나타납니다.첫 번째 험프의 오른쪽 곡률은 음수가 될 것입니다. 정렬이 잘 되었다면, 미러를 이동시켜 첫 번째 험프의 최댓값을 높일 수 있습니다. 1F 신호는 5V에서 12V 사이의 값이어야 하지만, 첫 번째 험프의 형태가 더 중요합니다.마지막으로, two F로 전환하여 신호를 조금 더 개선해 봅니다. 거울을 약간 회전시켜 위상을 변경함으로써, two F 신호가 0.6 V와 2 V 사이의 값에 위치하도록 해야 합니다. 실험적 지형도 및 근접장.21~31개의 펩타이드 섬유 이미지가 제시되어 있습니다. 상단 스케일은 나노미터 단위의 높이를 나타내며, 하단 스케일은 락인 전압(lock-in voltage)으로 표시된 근접장 대비(nearfield contrast)를 나타냅니다. 여기에 제시된 이미지는 1,631 inverse centimeters 방사선을 사용하여 획득한 근접장 이미지와 동시에 수집된 지형 이미지입니다. 1,691 inverse centimeters를 사용하여 획득한 근접장 이미지와 동시에 수집된 지형 이미지입니다.방사선이 표시되어 있습니다. 레이블은 특정 fis를 나타내며, 각 FI가 가진 2차 확인 유형을 강조하는 데 사용됩니다. 지금까지 라인을 조립하고 조리개 리스트 근접장 주사 적외선 현미경을 사용하는 방법을 설명해 드렸습니다.정렬이 잘못되었을 때 단계를 되짚어 볼 수 있도록 정렬 과정에서 수행한 단계들을 기억하시고, 무엇보다 인내심을 가지십시오. 이것으로 모두 마쳤습니다. 시청해주셔서 감사합니다.실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

assembly-tuning-use-an-apertureless-near-field-infrared-microscope

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

기판 상에 세포 접착의 토폴로지는 가변 앵글 총 내부 반사 형광 현미경 (VA-TIRFM)에 의해 나노 미터의 정밀도로 측정됩니다.

가변 각도 총 내부 반사 형광 현미경 (VA-TIRFM)시 세포 접착의 Nanotopology

단백질 기능의 주요 단계, 특히 골격 구조 변화와 양성자 전달 반응은 종종 마이크로초에서 밀리초 사이의 시간 척도에서 발생합니다. 이러한 역학 과정은 시간 분해 단계 스캔 푸리에 변환 적외선 분광법으로 연구할 수 있으며, 특히 빛에 의해 기능이 트리거되는 단백질의 경우 연구할 수 있습니다.

에 의해 감광성​​ 단백질의 양성자 이동과 단백질 입체 구조 역학 시간 분해 적외선 분광학에게 푸리에 변환 단계 - 스캔

선물이 단일 레이블이 없는 단백질의 실시간 광학 탐지에 대 한 프로토콜으로 그들은 살아있는 세포에서 분 비 됩니다. 이 간섭 산란 (iSCAT) 현미경 검사 법, 다양 한 다른 생물 학적 시스템 및 구성에 적용 될 수 있는 기반으로 합니다.

레이블 무료 이미징의 단일 단백질 분 비 iSCAT 현미경 검사 법을 통해 살아있는 세포에서

이 프로토콜은 시험관 내 표면 분석법을 사용하여 미세 소관의 무, 고대비, 고속 이미징을 위한 표준 형광 현미경에 간섭 반사 현미경 을 구현하기 위한 가이드입니다.

마이크로소관의 라벨이 없는 고속 이미징을 위한 간섭 반사 현미경 검사법 구현

여기서, 우리는 뇌 영역에서 단백질을 분석 하기 위해 면역 조직 화학 및 고해상도 스캔과 함께 근 적외선 염료를 사용 하는 프로토콜을 제시 합니다.

근 적외선 형광 및 고 분해능 주사를 사용 하 여 설치류 뇌의 단백질 발현 측정

우리는 개시 및 발달과 밀접하게 연관되는 올리고머 응집체 및 아밀로이드 섬유로 단백질 자기 조립의 과정을 구상하기 위하여 적외선 나노 스펙트로스카 및 고해상도 원자력 현미경 검사법의 응용을 기술합니다 인간의 신경 퇴행성 질환의 넓은 범위의.

적외선 나노 스펙트로펙트 및 원자력 현미경으로 개별 단백질 응집체 특성화

우리는 살아있는 세포의 혈장 막에서 리간드 결합에 의해 유도된 mEGFP 태그-수용체 올리고머의 평균 올리고머 상태의 측정을 위한 이미징 접근법을 기술한다. 이 프로토콜은 총 내부 반사 형광(TIRF) 현미경 검사법과 숫자 및 밝기(N&amp;B) 분석을 기반으로 합니다.

총 내부 반사 형광 현미경 검사법에 의해 살아있는 세포에 있는 세포 표면 수용체의 올리고머화 역학 은 수 및 밝기 분석과 결합됩니다

이 프로토콜은 세포 환경에서 실시간으로 수용체에 대한 아데닌 뉴클레오티드 결합을 측정하는 방법을 제시합니다. 결합은 트리니트로페닐 뉴클레오티드 유도체와 비표준 형광 아미노산으로 표지된 단백질 사이의 Förster 공명 에너지 전달(FRET)로 측정됩니다.

온전한 기능성 막 단백질에 대한 뉴클레오티드 결합을 실시간으로 측정

원자력 현미경-적외선 분광법(AFM-IR)은 세균 연구를 위한 강력한 플랫폼을 제공하여 나노 스케일 해상도를 달성할 수 있습니다. 둘 다, 세포 외 변화의 매핑 (예를 들어, 세포 분열시) 뿐만 아니라 화학 조성의 비교 연구 (예를 들어, 약물 내성에서 발생) 박테리아의 단일 세포 수준에서 수행 될 수있다.

원자력 현미경 검사법은 단일 박테리아 화학을 조사하는 도구로 적외선 분광법과 결합

우리는 동적 미세 소관 및 형광 표지 된 미세 소관 관련 단백질의 동시 이미징을 위해 간섭 반사 현미경 검사 및 전체-내부-반사-형광 현미경을 구현하기위한 프로토콜을 제시합니다.

동시 간섭 반사 및 전체 내부 반사 형광 현미경 검사 이미징 동적 미세 소관 및 관련 단백질

이 글은 고체 지지 지질 이중층에서 단일 단백질 추적용 샘플을 만드는 방법에 대해 상세히 설명합니다. 또한 단일 분자 감도와 빠른 프레임 속도를 가진 단순한 형광 현미경을 설명해 줍니다. 마지막으로, 단일 단백질 궤적을 추출하는 절차를 개괄합니다.

형광현미경을 이용한 지질 이중층 내 단일 단백질 추적

배우세요 근접장 적외선 현미경 조립 및 정렬 방법을 사용하여 단백질 응집체를 관찰하는 기법입니다. 가시광 레이저를 활용한 정렬 과정으로 신경과학 및 생물물리학 연구에 활용됩니다.

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