Name: 의 삼투 회피 Caenorhabditis 엘레간스 : 두 유전자의 시냅틱 기능, 인간의 Orthologues NRXN1과 NLGN1로 후보 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-12-11T16:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 20 s
Description: 학습하세요 Caenorhabditis elegans를 이용한 삼투 회피 행동 분석 방법을 통해 신경접합 단백질의 기능을 연구하는 기법입니다. 이 방법은 자폐증 관련 유전자 NRXN1과 NLGN1의 역할을 탐구하는 데 활용됩니다.

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우리는 그의 가치가 도와 주셔서 감사합니다 드르 안토니오 미란다 - Vizuete 싶습니다. 우리는 또한 가치있는 기술 지원을 살마 Boulayoune와 이사벨 카발 레로 우리의 감사를 표현하는 것을 좋아합니다. 이 작품은 준타 데 안다 루시아 (BIO - 272)에서 부여로 재정되었다. 이 연구는 유럽에서 유전자 실험을 규제하는 현행 법률에 계약에서 실시되었습니다.

1 : 삼투 회피 분석. <ol><li> 약 16~24시간 분석하기 전에, OP50 E.를 포함하는 새로운 NGM 접시 각 유전자형의 L4 애벌레 무대 동물을 선택 대장균은 20 ° C.에 그것을 andincubate 다음 날 젊은 성인과 함께 실험을 시작합니다. </li><li> 이것은 분석 "맹목적"을 수행하는 것이 좋습니다. assayed하는 각각의 응력과 접시는 실험이 완료되면 가면 될 relabelled 접시를 사용하여 분석을 수행하는 두 번째 실험자에 의해 relabelled해야합니다. </li><li> 분석의 일, 1 % 콩고 레드 솔루션 Fructose와의 4M 재고 솔루션을 준비하고 실온에서 완전히 디졸브. 염색 시간과 침전 수 있으므로 우리는 각 분석하기 전에 해결책을 확인하는 것이 좋습니다. </li><li> NGM 플레이트에 대한 환상 링 (1cm 직경)은 붉은 4M의 Fructose와 솔루션을 15 μl와 고체 배지의 중앙에 설명되어 있습니다. Fructose와 솔루션 한천에 흠뻑 젖어 보자, 이것은 보통 2 5 분 사이에 걸립니다. </li><li> 반지 내의 각 변형의 개별 젊은 성인 동물을 플레이스와 삼투 장벽에 대한 응답을 결정하기 위해 다음 10 분 이상하십시오. 연속으로 여섯 번 이상의 반지를 피하 동물은 정상으로 분류되며 미만보다 여섯 시도에 반지를 종료들은 삼투 감도에 결함이있는 것으로 간주됩니다. 참고 : 제어 변형 각 분석에 사용해야합니다. 그들이 결정적으로 반지의 장벽을 피하기로 N2 젊은 성인 동물 긍정적인 컨트롤로 사용됩니다. 이전 굶주린 Dauer 애벌레 통과하거나 너무 건조 접시에서오고있다 동물을 사용해서는 안됩니다. 처음에는, 컨트롤 동물은 분석 접시와 솔루션이 올바른지 확인하기 위해 중복으로 평가해야합니다. </li></ol> 2 : RNAi 먹이로 최저의 벌레의 생성. <ol><li> RNAi 번호판 : NGM RNAi의 먹이 접시는 리터 당 포함 17g의 한천은 2,5 g 펩톤, 3.0 g NaCl, 5 MG ML -1 콜레스테롤 1 ML는, H 2 O 및 압력솥과 1리터로 술병을 입력합니다. 한천은 약 65 ° C 냉각 후, 1 M KPO 4, 산도 6.0, 1 M CaCl 2, 1M MgSO 4, 0,5 ML carbenicillin (50 MG ML -1)과 1 개 중 1 개의 ML 1 ML 25 ML을 추가 ML 1M의 IPTG. 당신이 준비한 탄탄한 NGM 시작하는 경우, microwaving에 의해 고체 매체를 녹으 후 시원한로 누른 다음 다른 이름으로 이전에 표시 KPO 4, 산도 6.0, CaCl 2, MgSO 4, carbenicillin과 IPTG을 추가하기 위해 벤치에 액체 NGM를 놓으십시오. 각 60mm 페트리 접시에 NGM 10 ML을 추가합니다. 냉각을 허용하고 사용하기 전에 밤새 RT에서 그들을 유지하는 번호판을 반전. 플레이트는 약 4-5 일 동안 4 ° C에서 비닐 봉지에 저장할 수 있습니다. </li><li> 박테리아 준비와 유도 : Luria - Bertani (LB) 한천 플레이트 (17g의 한천, 10g tryptone, 5g에, 대상 유전자에 해당하는 조각을 포함하는 L4440 벡터로 변형 E.coli HT115 (DE3) 변형의 식민지를 분리 효모 추출물, 그리고 리터 당 10g NaCl) 암피실린 (50 μg / ML)과 tetracyclin (15 μg / ML)를 포함. 박테리아의 식민지 선택 50 μg / ML 암피실린와 LB에 접종하고, 37 잡고 6 8 H에 대한 성장 ° C; 준비 NGM 판에 씨앗이 문화의 한 방울과 야간 잠복기되기 전에 철저하게 접시를 건조 ( 상온 12 24 H)은 박테리아가 성장하도록하고 유도를 시작하십시오. 테트라 사이클린은 민감한 빛이며 접시 사이에 RNAi의 assays의 다양성에 영향을 미칠 수 있기 때문에 부화가 어둠 속에서되었습니다. 그것은 긍정적이고 RNAi 먹이 실험에 대한 부정적인 컨트롤을 사용하는 것이 필요합니다. 긍정적인 컨트롤은 UNC - 22 유전자 시퀀스를 포함하는 벡터로 변환 L4440 E.coli 세포 HT115입니다. UNC - 22 유전자의 분해는 "꿈틀 표현형"를 생산하고 있습니다. 대조군은 빈 L4440 벡터로 변형 E.coli 세포 HT115입니다. </li><li> 웜 처리 및 채점 : 20 박테리아와 부화하지 않고 NGM 접시에 OP50와 씨앗 NGM 플레이트에서 첫 날, 장소 L4 무대 웜 ° 12 시간 C (금식). 다음날, 특정 타겟 유전자 RNAi을 표현 박테리아와 seedded 접시에 젊은 금식 성인 나온것을 전송할 수 있습니다. 20 40~48시간를 남겨 ° C는 F1 자손을 생성합니다. 그런 다음 같은 박테리아와 씨앗을 다른 접시에 몇 F1 어른 벌레를 놓습니다. 24-48시간 후, 선택하고 F2 자손, 젊은 성인 (몇 계란과 완벽하게 형성 튀어나온 산문)과 phenotypes에 대한 점수에서 분리. 참고 :. 뉴런의 RNAi 유도 때문에 RNAi에 C 엘레간스 신경 계통의 내화물 속성 중 일부 제한이 있습니다. 신경이 비효율의 문제를 극복하기 위해 그것은 rrf - 3 변형, 뉴런 10 RNAi의 효과에 과민 배경을 사용하는 것이 좋습니다. 실험없이 differenc에서에스이 유전자에 대한 브리스톨 N2 및 rrf - 3 변종 사이의 발견과 표현형 분석을했다. </li></ol> 3 계통 사용됩니다. C. 이 작품에 사용된 엘레간스의 종자는 표 1에 표시됩니다. 돌연변이 변종은 밖으로 넘어 N2에 대한 야생 했어요 - 입력 돌연변이 유발 프로토콜 중에 생성된 것일 수도 원치 않는 임의의 변이를 제거하려면 적어도 네 번. .. OP50 E 대장균의 변종은 플라스미드 nrx - 1을 들고 pL4440 (JA : C29A12.5)로 Caenorhabditis 유전자 센터, 미네소타 대학, 미국 E.coli HT115 (DE3)에 의해 suppliied되었으며 nlg - 1 (JA : C40C9.5 ) 유전자 조각은 박사 피터 Askjaer, 센트 Andaluz 호텔 드 Biología 델 Desarrollo (CABD), CSIC 대학교 파블로 Olavide, 세비야, 스페인에 의해 제공되었다. 4 : 대표 결과. 설명의 결과는 그림 1과 2에 표시됩니다. 열 각 변형의 동물과 세 복제 실험 최소가 진행되었다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/1616/1616Fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 삼투 회피 동작의 실험. 제어 변종과 nrx - 1 V 결함 mutantworms들이 삼투 장벽 (4M Fructose와)을 발생하는 경우 거꾸로 반대로 대응 (ok1649 및 tm1961). nlg - 1 (ok259 및 tm474) X 돌연변이 장벽을 감지하기 위해 실패합니다. VX 및 CRR23 (tm1961, ok259); nlg - 1 nrx - 1, 종자 CRR21 (ok259 ok1649)에 결함 더블 돌연변 VX는 야생 타입 표현형를 발견 했어요. *는 t - 학생 시험에 의해 브리스톨 N2 야생 형 각 변형의 반응에 T - 학생 검사로 큰 차이 (P ≤ 0.001)를 나타냅니다 <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/1616/1616Fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. RNAi 먹이로 최저의 벌레와 실험. E.coli HT115 (DE3)는 빈 pL4440 벡터로 변환하거나 nrx이 - 1 또는 nlg - 1 먹이를 다른 웜 변종에 사용했던 대상 유전자에 해당하는 조각을 포함하는. *이 비어 pL4440 벡터와 공급 N2 스트레인과 비교 nlg - 1 유전자를 대상으로 조각으로 pL4440 벡터를 옮기는 박테리아와 공급 N2 변형의 반응에 T - 학생 검사로 큰 차이 (P ≤ 0.001)를 나타냅니다 .

<ol><li>Sudhof, T. C. Nature. 455 (7215), 903-903 (2008).</li>
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Neurexins 및 neuroligins는 시냅스 전송 11 시냅스 연결 12 분화에 필수적인 역할을 수행합니다. 두 분자가 자폐증 13,14에 대한 후보 유전자로 확인되었습니다. 이 비디오에서 우리는 우리가 C로 삼투 회피 반응에 영향을 미치는 유전자의 효과를 연구 수있는 간단한 방법을 보여 엘레간스. Neuroligin 결함 돌연변이 삼투 강도를 감지에 결함이되며하지만 neurexin에 결함 돌연변이 4M Fructose와 솔루션을 피하기 위해, 야생 유형 변형과 비슷한 응답을 보여줍니다. 그러나 Fructose와 솔루션을 감지할 수 없습니다 neuroligin 돌연변이, neurexin 유전자도 결함 때, 그들은 삼투 강도에 반응 야생 유형 표현형을 복구합니다. 이 관측은 RNAi의 먹이 최저 접근 방식을 사용하...

표 1. C. 엘레간스의 변종. <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td> 변형 </td><td> 유전자 </td><td> Allele </td><td> 출처 </td></tr><tr><td> 브리스톨 N2 </td><td> - </td><td> - </td><td> aCGC </td></tr><tr><td> VC228 </td><td> nlg - 1 </td><td> ok259 </td><td> CGC </td></tr><tr><td> FX00474 </td><td> nlg - 1 </td><td> tm474 </td><td> bNBP - 일본 </td></tr><tr><td> VC1416 </td><td> nrx - 1 </td><td> ok1649 </td><td> CGC </td></tr><tr><td> FX1961 </td><td> nrx - 1 </td><td> tm1961 </td><td> NBP - 일본 </td></tr><tr><td> NL2099 </td><td> rrf - 3 </td><td> pk1436 </td><td> CGC </td></tr><tr><td> CRR21 </td><td> nrx - 1, nlg - 1 </td><td> ok1649; ok259 </td><td> 이 작품은 </td></tr><tr><td> CRR22 </td><td> nrx - 1, nlg - 1 </td><td> tm1961, ok259 </td><td> 이 작품은 </td></tr></tbody></table> A. Caenorhabditis 유전자 센터, 미네소타 대학, 미국. B. 실험 동물 &quot;선충류 C. 엘레간스&quot;에 대한 국립 Bioresource 프로젝트. 도쿄 여자 의과 대학, 일본.

의 삼투 회피 caenorhabditis 엘레간스 : 두 유전자의 시냅틱 기능, 인간의 orthologues nrxn1과 nlgn1</em자폐증을위한>로 후보

Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism

Neurexins 및 neuroligins은 세포 접착 분자는 흥분성의 억제와 시냅스에 존재하고, 그들이 올바른 신경망 기능 1 필수입니다. 이러한 단백질은 presynaptic 및 postsynaptic 세포막 2 볼 수 있습니다. 생쥐의 연구 neurexins과 neurologins가 시냅스 전달 1 필수 역할을 나타냅니다. 최근 보고서는 인간의 신경 시스템의 개발 기간 동안 변경의 연결을 연결 자폐증 스펙트럼 장애 3 가지 경우 많은 병인의 기초를 구성 수있는 것으로 나타났습니다. Caenorhabditis의 엘레간스 때문에 실험실 실험에 대한 단순, 시냅스 구성 요소의 기능 연구를 촉진하기위한 실험 도구로 사용하며, 신경 시스템과 신경 배선이 완전히 특징되었음을 주어진 수 있습니다. C에서. 엘레간스 nrx - 1 nlg - 1 유전자는 각각 알파 - neurexin - 1 neuroligin - 1 단백질, 인코딩 인간 NRXN1 및 NLGN1 유전자에 orthologous 있습니다. 인간과 nematodes에서 neurexins 및 neuroligins의 조직 기능 도메인에 대한 존중과 유사합니다. 선충류의 머리 amphid, 삼투 강도를 포함한 다양한 자극에 반응을 mediates 선충류의 감각 기관이 포함되어 있습니다. amphid은 솜털이있는 dendrites 한 presynaptic 터미널 축삭 4 12 감각 뉴런의 바이폴라 이루어집니다. ASHR 및 ASHL라는 이러한 뉴런의 두 높은 삼투 강도 5 수용성 repellents를 감지, 삼투 감각 기능에 특히 중요합니다. 이 두 뉴런의 dendrites는 입 끝에으로 길이 그들이 행동 반응 6 결정 다른 뉴런과 시냅스 연결을 어디에 axons은 신경 링을 확장할 수 있습니다. 높은 삼투 강도 회피에 neurexin 및 neuroligin의 의미를 평가하기 위해, 우리는 4M Fructose와 반지 7 기반 방법을 사용, nrx - 1 nlg - 1 유전자에 결함이 C. 엘레간스 돌연변이의 다른 응답을 보여줍니다. 행동 phenotypes는 특정 RNAi의 클론 8을 사용하여 확인되었다. C로 엘레간스는 RNAi를 실행하는 데 필요한 dsRNA는 9 먹이에서 관리하실 수 있습니다. 음식을 통해 dsRNA의 납품 따라서 유전자 구성 요소와 네트워크 경로의 신분을 허용 관심있는 유전자의 RNAi 간섭을 유도.

Neurexins 및 neuroligins는 시냅스 차별화 및 전송에 필수적인 역할을 수행하는 막 - 신경 세포의 접착 단백질입니다. 의 Neuroligin 부족한 돌연변이<em&gt; C. 엘레간스</em&gt;는 삼투 강도를 감지에 결함이 있지만, 그들은 또한 neurexin 코딩 유전자에 돌연변이 포함된 경우, 그들은 야생 유형 표현형을 복구합니다.

의 삼투 회피 Caenorhabditis 엘레간스 : 두 유전자의 시냅틱 기능, 인간의 Orthologues NRXN1과 NLGN1</em자폐증을위한>로 후보

뉴렉신(Neurexins)과 뉴롤리긴(neuroligins)은 흥분성 및 억제성 시냅스에 존재하는 세포 접착 분자로, 올바른 신경망 기능에 필수적입니다. 이 단백질들은 시냅스 전 막과 시냅스 후 막에서 발견됩니다. 마우스 연구에 따르면 뉴렉신과 뉴롤리긴은 시냅스 전달에서 핵심적인 역할을 합니다. 최근 보고에 따르면 인간 신경계 발달 과정 중의 신경 연결 변화가 수많은 자폐 스펙트럼 장애 사례의 병인 근거가 될 수 있음이 밝혀졌습니다. Caenorhabditis elegans(예쁜꼬마선충)는 실험실 실험의 간편함과 더불어 신경계 및 시냅스 배선이 완전히 규명되어 있어, 시냅스 구성 요소의 기능을 연구하는 데 유용한 실험 도구로 활용될 수 있습니다. C. elegans의 nrx-1 및 nlg-1 유전자는 각각 알파-뉴렉신-1과 뉴롤리긴-1 단백질을 인코딩하는 인간의 NRXN1 및 NLGN1 유전자와 상동 관계에 있습니다. 인간과 선충에서 뉴렉신과 뉴롤리긴의 구조는 기능적 도메인 측면에서 유사합니다. 선충의 머리에는 삼투압 강도를 포함한 다양한 자극에 대한 반응을 매개하는 감각 기관인 앰피드(amphid)가 있습니다. 앰피드는 섬모 돌기가 있는 수지상 돌기와 하나의 시냅스 전 말단 축삭을 가진 12개의 감각 이극 뉴런으로 구성됩니다. 이 뉴런들 중 ASHR과 ASHL로 명명된 두 뉴런은 높은 삼투압 강도를 가진 수용성 기피 물질을 감지하여 삼투 감각 기능에서 특히 중요한 역할을 합니다. 이 두 뉴런의 수지상 돌기는 입 끝까지 뻗어 있으며, 축삭은 신경 고리까지 연장되어 다른 뉴런들과 시냅스 연결을 형성함으로써 행동 반응을 결정합니다. 고삼투압 회피 반응에서 뉴렉신과 뉴롤리긴의 영향을 평가하기 위해, 4M 과당 링(fructose ring) 기반의 방법을 사용하여 nrx-1 및 nlg-1 유전자에 결함이 있는 C. elegans 돌연변이체의 서로 다른 반응을 보여줍니다. 행동 표현형은 특정 RNAi 클론을 사용하여 확인되었습니다. C. elegans에서 RNAi를 유도하는 데 필요한 dsRNA는 먹이 급여를 통해 투여할 수 있습니다. 먹이를 통한 dsRNA 전달은 표적 유전자의 RNAi 간섭을 유도하여 유전적 구성 요소와 네트워크 경로의 식별을 가능하게 합니다.

안녕하세요, 저는 스페인 코르도바 대학교 유전학과의 Manuel Ruiz Rubio입니다. 저희는 완전히 규명된 C. elegans의 신경계를 활용하여, 자폐증 연구를 위한 실험 도구로 이 선충을 사용하고 있습니다. 저희는 신경 시냅스에 관여하며 자폐증과 연관된 것으로 알려진 유전자에 결함이 있는 선충 돌연변이체를 연구하고 있습니다.Neurexins과 neuroligins는 시냅스에 존재하는 막 접착 분자입니다. C. elegans의 머리에는 삼투압을 포함한 다양한 자극에 대한 반응을 매개하는 선충의 감각 기관인 amphid가 있습니다. Amphid는 섬모 수지상 돌기와 하나의 시냅스 전 말단 축삭을 가진 12개의 감각 양극 뉴런으로 구성됩니다.이러한 뉴런 중 ASHR 및 ASHL이라 불리는 두 뉴런은 삼투압 감각 기능에서 특히 중요하며, 높은 삼투압을 가진 수용성 기피 물질을 감지합니다. 본 영상에서는 4M 과당 링 방법을 사용하여 시냅스 결함 돌연변이체의 삼투압 회피 반응을 측정하는 방법을 소개합니다.neurexin과 neuroligin이 고삼투압 회피 반응에 미치는 영향을 평가하기 위해, 4 M fructose 용액 기반의 방법을 사용하여 nrx-1 및 nlg-1 유전자에 결함이 있는 C. elegans 돌연변이체의 서로 다른 반응을 보고하였습니다. 실험 당일에 1% Congo red가 포함된 4 M fructose 표준 용액을 조제하여 실온에서 완전히 용해시킵니다. NGM 플레이트의 고체 배지 중앙에 지름 1 cm의 원형 링을 형성합니다.15 µL의 4M 과당 적색 용액을 사용합니다. 과당이 한천(agar)에 약 5분 동안 스며들게 합니다. 실험은 블라인드 방식으로 수행되어야 합니다. 분석 대상인 각 균주가 담긴 플레이트는 보조 실험자가 라벨을 부착해야 합니다.SA는 표시되지 않은 이러한 표식들을 사용하여 수행합니다. 실험이 종료되기 약 24시간 전에 판매가 이루어지기 전, 각 유전형의 L4 유충을 선택하여 e coli 박테리아가 포함된 AFL NGM 플레이트로 옮기고 다음 날까지 20 °C에서 유지해야 합니다. 실험은 어린 성체(young adults)로 시작해야 합니다.각 균주의 벌레를 개별적으로 휴식 원 내에 넣고, 각 개체가 tic 장벽에 반응하는 시간을 측정하며 관찰하십시오. 결론적인 결과를 얻기 위해 각 균주당 10마리의 개체와 최소 3회의 반복 실험을 수행해야 합니다. 빨간색 링을 6회 연속으로 회피하는 개체는 정상으로 분류합니다.6회 미만의 시도 내에 링을 벗어나는 개체는 삼투압 민감성에 결함이 있는 것으로 간주하며, 각 SA Bristol 실험군마다 대조군을 사용해야 합니다. 또한 링 장벽을 피하는 두 마리의 동물을 양성 대조군으로 사용합니다. 대조군 균주는 4M fructose로 구성된 삼투압 장벽을 발견했을 때 후진하는 반응을 보입니다. 신경 결핍 돌연변이체는 고농도 삼투압에 대해 이와 유사한 행동을 보입니다.그러나 NEUR 결핍 돌연변이체는 이러한 삼투압 장벽을 감지하지 못했습니다. 서로 다른 활성 neur 및 nout 대립유전자를 가진 이중 돌연변이체는 삼투압에 반응하는 야생형 표현형을 회복했습니다. RNA 간섭 공급을 통해 웜을 획득하기 위해, 표적 유전자에 해당하는 단편을 포함하는 L 44 40 벡터로 형질전환된 e coli HD 11 five 균주의 단일 콜로니를 분리합니다. 박테리아는 LBA 또는 carbonic 플레이트에 분리하여 다음 날까지 배양합니다.박테리아 콜로니를 선택하여 LV 액체 배지에 접종합니다. 37°C에서 흔들어주며 약 7시간 동안 배양합니다. 이 배양액을 탄산염 층과 IPTG가 포함된 NGM 플레이트에 점적하고 상온에서 하룻밤 동안 방치하여 박테리아를 성장시키고 표적 유전자 단편의 발현 유도를 시작합니다.RNA 간섭을 위해서는 양성 대조군과 비음성 대조군을 사용하는 것이 필요합니다. 급이 실험에서 음성 대조군은 동일합니다.TL 44 40 벡터로 형질전환된 HT 11 5 균주입니다. 양성 대조군은 22 유전자 서열을 포함하는 L 44 40 벡터로 형질전환된 ELI HT 11 5 세포입니다. 이 유전자의 넉다운으로 인해 발생하는 shaking 표현형은 입체 현미경 하에서 쉽게 구별할 수 있습니다.첫째 날. 박테리아가 포함된 NGM 플레이트에서 L4 단계의 벌레들을 박테리아와 Kuwait가 포함된 플레이트로 옮겨 20 °C에서 12시간 동안 둡니다. 이는 단식 기간입니다.다음 날, 특정 RNA 간섭 표적 유전자를 발현하는 박테리아가 도말된 플레이트로 성장 빠른 청년기 성체(fast young adult)를 옮깁니다. F1 자손을 얻기 위해 20 °C에서 약 48시간 동안 배양합니다. 그 후, 다음 이틀 동안 동일한 박테리아가 도말된 다른 플레이트로 F1 성체 몇 마리를 옮깁니다.F2 세대 자손 중에서 성체 초기 개체를 선택하여 분리합니다. Bristol N2 야생형 균주가 박테리아와 함께 배양된 상태에서 표현형을 평가합니다. L 44 40 벡터가 삼투압 장벽에서 뒤로 이동할 때 확인합니다.C. elegans의 nrx-1 유전자 조각을 발현하는 박테리아를 공급받은 Bristol 및 true white 야생형 균주는 4M 농도의 용액을 감지하지 못했습니다. 반면, 삼투압 장벽을 감지하지 못하는 nrx-1 결핍 돌연변이체는 C. elegans의 nrx-1 유전자 조각을 발현하는 박테리아를 공급받았을 때 이 능력을 회복했습니다. 본 영상에서는 C. elegans의 삼투압 회피 반응에 영향을 미치는 유전자의 효과를 연구할 수 있는 간단한 방법을 소개합니다.Congo Red과 함께 4M 과당 링을 사용하여 삼투압에 대한 반응을 분석합니다. neuroligin 결핍 변이체는 이러한 반응에 결함이 있는 반면, nrx-1 변이체는 삼투압 스트레스를 감지하는 능력이 손상되지 않아 야생형 균주와 유사한 반응을 보입니다. 이 영상에서는 nrx-1 및 nlg-1 유전자의 서로 다른 knockout 대립유전자를 가진 이중 변이체 균주가 삼투압에 반응하는 야생형 표현형을 회복하는 것을 보여줍니다.이러한 관찰 결과는 RNA 간섭의 feeding lockdown 방식을 통해 확인되었습니다. 이러한 방식으로, 야생형 균주에 ING 유전자의 해당 서열을 발현하는 박테리아를 먹였을 때 삼투압 장벽을 인식하는 능력이 저하되었습니다. 반면, 4M fructose 용액을 감지하지 못하는 neur 결핍 돌연변이체는 NNU 유전자의 해당 서열을 발현하는 박테리아를 먹였을 때 이 행동이 회복되었습니다.본 실험에서 나타난 결과는 nrx-1과 nlg-1이 선충의 감각 뉴런의 시냅스 연결에 관여할 수 있으며, 또한 시냅스 기능에 영향을 미치는 방식으로 서로 상호작용한다는 것을 나타냅니다. 이것으로 마치겠습니다. 여러분의 실험에 행운이 깃들길 바랍니다.

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이 동영상은 선충류, C. 엘레간스의 신경 기능을 연구 보완 방법의 두 신경 자극, aldicarb 및 pentylenetetrazole (PTZ)을 고용하는 방법을 보여줍니다. 이 상호 보완적인 접근 방법은 또한 modulating의 연결 synchrony에 대한 evolutionarily 보존 메커니즘에 대해 설명해 주실 사용 간질과 발작에 대한 의미를 가지고있을 수 있습니다.

C. 엘레간스 시냅틱 전송 돌연변이의 약리 특성에 대한 패러다임

Microarray 분석은 유전자 표현의 프로필을 결정하기 위해...

의 유전자 표현 프로필 결정 C. 엘레간스 Microarray 및 실시간 PCR을 사용하여

이 비디오는 형질전환 웜 모델에서 화학 회피 거동을 조사하기 위한 삼투압 회피 분석에 대해 설명합니다. 회피 행동은 고삼투압 장벽과 화학유인물질이 있는 플레이트에서 테스트됩니다. 뉴런의 기능적 상실을 가진 기생충은 화학유인물질에 끌려, 고삼투압 장벽을 넘어, 마취액 때문에 트랩 영역에서 마비된다.

삼투압 회피 분석을 사용한 형질전환 벌레의 화학회피 거동 조사

dsRNA에는 C.에 공급하면서 엘레 대규모 공급 화면 현재 프로토콜이 변수 최저 효율 결과 유전자 기능을 평가하는 강력한 도구입니다. 우리는 유전자 발현의 높은 효능 및 재현성 넉다운 결과 대규모의 RNAi 수유 화면을 수행하기위한 개선 된 프로토콜을 설명한다.

대규모 유전자 넉다운에<em&gt; C. 엘레</em&gt; 강력한 기능 상실 표현형을 생성하는 dsRNA를 먹이는 라이브러리 사용

여기에서는 스트레스를 받는 개인의 회피를 정량화하는 프로토콜을 제시합니다. 이 패러다임은 강력하면서도 사용자 친화적이며 Drosophila melanogaster의 한 종류의 사회적 상호 작용에 대한 유전자와 환경의 영향을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

사회 회피의 정량화에 대한 간단한 분석 초파리

여기에서 우리는 구리 혐오 행동의 변화와 일반적인 음식 공급원을 찾아내는 능력을 평가하기 위해 고안된 Caenorhabditis elegans 특이 적 검정법을 제시합니다. 유기체가 잘 먹는 것에서 굶주린 영양 상태로 진행되기 때문입니다.

에이<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; 영양 상태 기반 구리 혐오 검정

우리는 이전에 Caenorhabditis elegans 가 각각 대량 및 간격 훈련을 통해 단기 및 장기 연관 기억을 형성하는 프로토콜을 개발했습니다. 여기에서는 1- 프로판올과 염산을 각각 조건 자극과 무조건 자극으로 짝을 지어 혐오 연관 기억을 형성함으로써 C. elegans 의 컨디셔닝에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다.

Caenorhabditis elegans에서 두 가지 화학 물질을 짝을 지어 혐오스러운 연관 학습 및 기억 형성

자폐 스펙트럼 장애(ASD)는 사회적 및 의사소통 행동의 장애 및 반복적 행동의 출현과 관련이 있습니다. 초파리 모델에서 ASD 유전자와 행동 결핍 사이의 상관 관계를 연구하기 위해 이 논문에서는 사회적 간격, 공격성, 구애, 그루밍 및 습관화 행동을 분석하기 위한 5가지 행동 패러다임을 설명합니다.

자폐 스펙트럼 장애의 초파리 모델에서 행동 평가를 위한 패러다임

설치류 모델은 자폐 스펙트럼 장애(ASD)와 관련된 핵심 행동을 연구하는 데 유용한 도구입니다. 이 기사에서는 생쥐에서 ASD의 핵심 기능을 모델링하기 위한 두 가지 행동 테스트, 즉 반복적인 행동을 평가하는 셀프 그루밍(self-grooming)과 사회적 장애를 문서화하는 3개의 챔버 사회적 상호 작용 테스트(three-chamber social interaction test)에 대해 설명합니다.

생쥐의 자폐증과 유사한 행동을 평가하기 위한 전략

동적 클램프 전기생리학은 신경 발화 결함과 이온 채널 기능 장애 사이의 인과 관계를 확립할 수 있습니다. 우리는 마우스 소뇌 푸르킨제 뉴런의 동적 클램프 방법 및 프로토콜을 설명하고 유용한 리소스와 기술적 고려 사항을 언급합니다. 대표적인 연구에서 우리는 반복적인 발화를 구출하기 위해 Tsc1-/- Purkinje 뉴런에 모델링된 나트륨 전도도를 추가합니다.

자폐증과 관련된 손상된 신경 흥분성을 조사하기 위한 동적 클램프 방법

이 프로토콜은 유전적으로 인코딩된 도구를 사용하여 Drosophila melanogaster 유충의 중추신경계에서 정의된 신경 파트너 간의 기능적 시냅스 활동을 생체 내에서 평가합니다. CsChrimson 매개 광유전학적 자극은 시냅스 전 감각 신경세포 cIVda 신경세포를 유발하여 시냅스 후 분지 4 중간뉴런에서 CaMPARI의 칼슘 의존적 광변환을 유도합니다.

CaMPARI를 이용한 초파리 유충 중추신경계에서 개별 시냅스 전후 파트너의 기능적 특성 분석

학습하세요 Caenorhabditis elegans를 이용한 삼투 회피 행동 분석 방법을 통해 신경접합 단백질의 기능을 연구하는 기법입니다. 이 방법은 자폐증 관련 유전자 NRXN1과 NLGN1의 역할을 탐구하는 데 활용됩니다.

의 삼투 회피 Caenorhabditis 엘레간스 : 두 유전자의 시냅틱 기능, 인간의 Orthologues NRXN1과 NLGN1로 후보

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