의 삼투 회피 Caenorhabditis 엘레간스 : 두 유전자의 시냅틱 기능, 인간의 Orthologues NRXN1과 NLGN1로 후보

안녕하세요, 제 이름은 스페인 코르도바 대학교 유전학과의 마누엘 루이즈 루비오입니다. 우리는 우아함을 실험 도구로 사용하고 있습니다 자폐증 연구에서, 세 가지 우아함의 신경계를 특징으로하는 세계를 활용합니다. 우리는 신경 시냅스에 관여하는 유전자에 효과적이며 자폐증과 관련이 있는 선충의 돌연변이를 연구

Rein Regans는 시냅스에 존재하는 막 접착 분자입니다. C elegance의 머리는 삼투압을 포함한 다양한 자극에 대한 매개 반응을 가진 선충의 감각 기관인 amfi를 포함합니다. Amfi는 높이와 관련된 12개의 감각 bipo 뉴런과 1개의 INAP 터미널 동작으로 구성됩니다.

이 뉴런 중 두 개의 뉴런 이름 A SH 오른쪽과 왼쪽은 삼투압 감각 기능에 특히 중요합니다. 높은 삼투압 강도로 수용성 재균형을 감지합니다. 안녕하세요, 시냅스 결함 돌연변이에서 삼투압 회피를 측정하는 하늘 방법을 가진 Nan River 와인.

신경 및 신경의 높은 삼투압 회피의 의미를 평가하기 위해 4개의 몰 과당 용액을 기반으로 한 방법을 사용하여 신경 신경 유전자에 결함이 있는 돌연변이에 대한 C의 다른 반응을 보고했습니다. 말의 날을 울리고, 1%의 콩고 빨간색이 함유된 과당의 4대구치 용액을 준비하고 실온에서 완전히 용해시킵니다. NGM 플레이트에서 직경 1cm의 환형 고리는 고체 매체의 중심에 있는 하위 라인입니다.

15 마이크로 리터의 적색 4 몰 과당 용액을 사용합니다. 과당을 에이커에 약 5분 정도 담그면 실험을 맹목적으로 수행해야 합니다. 각 변형률이 S 8인 플레이트는 두 번째 실험자에 의해 라벨링되어야 합니다.

SA는 요청되지 않은 이러한 마크를 사용하여 수행됩니다. 판매가 이루어지기 약 24시간 전에 실험이 종료되면 각 유전자형의 L 4마리의 유충을 선택하여 대장균이 포함된 AFL NGM 플레이트로 옮기고 다음날 섭씨 20도로 유지해야 합니다. 이 실험은 젊은 성인부터 시작해야 한다.

각 균주의 개별 웜을 나머지 원 안에 넣고 틱 장벽에 대한 반응 타이밍까지 각 동물을 따라갑니다.결정적인 결과를 얻기 위해 각 균주에 대해 10 마리의 동물과 최소 3 개의 반복 실험을 수행해야합니다. 6회 연속으로 빨간 고리를 피하는 것은 정상으로 분류됩니다.

6 회 미만의 시도로 링을 빠져 나가는 사람들은 삼투 감도 제어에 결함이있는 것으로 간주되며, 각 SA Bristol에서 변형을 사용해야하며 두 마리의 동물은 링 장벽을 피하기 때문에 긍정적 인 대조군으로 사용됩니다. 제어 균주: 4개의 어금니 과당으로 구성된 삼투압 장벽을 발견하면 뒤로 반응합니다. 신경 결핍 돌연변이 폭탄은 한 가지 유형의 강도와 관련하여 이와 유사한 행동을 가지고 있습니다.

그러나 NEUR 결핍 돌연변이는 이 삼투압 장벽을 감지하지 못했습니다. 이중 돌연변이 강도 자동차는 다른 ative neur 및 nout 대립 유전자에서 표적 유전자에 해당하는 단편을 포함하는 L 44 40 벡터로 형질전환 된 e coli HD 11 5 균주의 분리 식민지를 공급하는 RNA 간섭에 의한 삼투압 강도에 응답하여 야생형 표현형을 회복했습니다. 박테리아는 다음날 LBA 또는 탄산 플레이트에 분리됩니다.

박테리아 군체를 선택하고 LV 액체 배지를 접종합니다. 37도의 흔들림으로 약 7시간 동안 계속 성장합니다. 이 배양액이 탄산 천장과 IPTG가 있는 NGM 플레이트에 떨어뜨리는 것을 보고 실온에서 밤새 wai를 사용하여 박테리아가 성장하고 표적 유전자 단편의 발현 유도를 시작할 수 있습니다.

RNA 간섭에 대해 positive 및 non-negative control을 사용해야 합니다. 먹이주기 실험. 음수 제어는 동일합니다.

I HT 11 TL 44 40 벡터로 변형된 5 변형률. 양성 대조군 ELI HT 11 5 세포는 22 유전자 서열을 포함하는 L 44 40 벡터로 형질전환 되었습니다. 이 유전자 기원의 봉쇄는 멸균 현미경 하에서 쉽게 구별되는 흔들리는 표현형입니다.

첫째 날. L 박테리아가 있는 NGM PLA의 4단은 12시간 동안 섭씨 20도에서 박테리아와 쿠웨이트와 함께 플레이트로 옮겨집니다. 이것은 금식 기간입니다.

다음 날, 빠른 젊은 성인을 특정 RNA 간섭 표적 유전자를 발현하는 박테리아가 접종된 플레이트로 이동합니다. F1 자손을 얻기 위해 섭씨 20도에서 약 48시간을 남겨 두십시오. 그런 다음 다음 이틀 동안 동일한 박테리아를 접종한 다른 접시에 F1 성인 폭탄 몇 개를 선택합니다.

F 두 자손에서 젊은 성인을 선택하고 격리 표현형에 대한 점수 매기기 Bristol N 두 가지 야생형 균주 지방과 박테리아 발생 공감. L 44 40 벡터는 괜찮을 때 뒤로 가고 있었습니다. 삼투압 장벽.

브리스톨 (Bristol)은 우아함에서 신경 유전자 단편을 발현하는 박테리아를 공급받은 트루 화이트 타입 스트레인이 발가락을 검출하지 못했습니다. 그러나, 삼투압 장벽을 감지할 수 없는 신경 결핍 돌연변이체는 바다 우아함에서 나네 유전자 조각을 발현하는 박테리아를 먹였을 때 이 능력을 회복했다. 이 비디오에서는 바다의 우아함에서 삼투압 회피 반응에 영향을 미치는 유전자의 영향을 연구할 수 있는 간단한 방법을 보여줍니다.

콩고 레드 (Congo Red)와 과당 공식 타이트의 링은 삼투 강도에 대한 폭탄의 반응을 분석하는 데 사용됩니다. 결핍된 돌연변이의 신경학은 이 반응에 결함이 있지만, NU 돌연변이는 야생형 변형과 유사한 반응을 보이는 토모 스트레스를 감지하는 데 장애가 없습니다. 이 비디오는 ing과 방출 유전자에서 서로 다른 tive knockout 대립유전자를 가진 이중 돌연변이 균주가 삼투압 강도에 반응하는 야생형 표현형을 회복했음을 보여줍니다.

이러한 관찰은 RNA 간섭, 섭식 잠금 접근 방식을 사용하여 확인되었습니다. 이와 같이, 야생형 균주는 ING 유전자의 서열에 따라 발현하는 박테리아를 공급받았을 때 삼투압 장벽을 인식하는 데 장애가 있었다. 반면에, 4개의 과당 용액을 더 검출할 수 없는 신경 결함 돌연변이(neur defective mutant)는 NNU 유전자의 서열에 따라 발현하는 박테리아를 먹였을 때 이러한 행동을 회복했다.

이 실험에서 나타난 결과는 n seeing과 neur가 선충의 센서 뉴런의 시냅스 연결에 관여할 수 있으며 시냅스 기능에 영향을 미치는 방식으로 서로 상호 작용한다는 것을 나타냅니다. 좋아요, 작별 인사를 하고 실험에 행운을 빕니다.