Name: Photobleaching 후 두 광자 형광 복구를 통해 확산 계수 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-26T16:45:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: 학습하세요 두 광자 형광 복구 기법을 이용한 확산 계수 측정 방법을. 형광 분자의 동역학을 정량적으로 분석하여 생물학적 시스템에서 분자 상호작용을 이해하는 데 활용할 수 있습니다.

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이 작품은 호프 학술 상 국방 시대의학과 (제 W81XWH - 05-0396)과 에드워드 B. 브라운 III에 의생명 과학 수상의 퓨 학술 의해 투자되었다.

1. 광학을 맞춥니다. MP - FRAP 실험을위한 주요 장비는 다음과 같습니다 모드 잠금 레이저 소스, Pockels 셀 (빔 변조에 대한), 펄스 발생기, 이색성, 객관적인 렌즈, 형광 방출 필터, 게이 티드 photomultiplier 튜브 및 데이터 기록 시스템 (광자 카운터 그리고 멀티채널 스케일러). 2. 안전 모니터 권한을 확인합니다. <ol><li> 샘플 내에서 형광 창출을위한 낮은지만, 합리적인, 전원에 레이저를 감쇠. </li><li> 샘플 내에 중점을두고 있습니다. </li><li> 더 이상 기대 형광 복구보다 시간 척도를 통해 통합하는 광자 카운터를 설정합니다. 초점 볼륨 (우리 현미경 소프트웨어이이 지점 검사에 의해 이루어집니다) 샘플 내에 정지 개최와 함께, 광자 개수 데이터의 합리적인 숫자를 기록합니다. </li><li> 힘을 증가하고 광자 카운트 데이터의 또 다른 시리즈를 가져가라. 광자 카운트의 증가는 전력 증가와 관련하여 현저하게 감소로 나타날 때까지 반복합니다. </li><li> 로그 (전원)의 함수로 플롯 로그 (광자 카운트). 두 아이의 기울기로부터 편차는 모니터 기간 동안 표백 나타냅니다. 모니터의 전원 아래에 상처를 해제하는 전원을 선택하지만, 노이즈 비율 합리적인 신호를 허용하는. </li></ol> 3. 펄스 발생기와 다중 스케일러의 입력 매개 변수를 확인합니다. <ol><li> 확인 다시 - 오브 - 더 - 봉투 문학 및 / 또는 스톡 - 아인슈타인 방정식과 확산 방정식에 따라 확산 계수 및 복구 시간을 추정하고 있습니다. </li><li> 펄스 발생기 및 스케일러에 필요한 매개 변수 값을 설정합니다. <ol class="lalpha"><li> 펄스 발생기에서 사전 표백제 및 표백 시간을 설정합니다. 엄지의 규칙의 좋은 세트는 미리 표백제는 기대 반 복구 시간보다 1-2 배 큰되어야하고, 표백제 시간은 예상 하프 복구 시간 한 열번째해야합니다. </li><li> 스케일러에서 약 절반 표백제 기간에 빈의 너비를 설정하고 기록 당 방식의 숫자를 설정 선택한 빈 폭 및 레코드 당 방식의 제품보다 크거나 예상 완전히 회복 플러스 미리 약 같다 그러한 - 표백과 표백 시간. </li><li> 펄스 발생기로 돌아가 빈 너비 시간 당 기록 방식의 수를 제품의 반전보다 단지 작은 값을 동일 pre-bleach/bleach/monitor 순서의 빈도를 설정합니다. * </li><li> 마지막 레코드의 수를 설정 / 선택한 모니터의 전원에서 신호 강도에 따라 스케일러를 검사합니다. * 그것은 펄스 발생기에 설정된 완벽한 pre-bleach/bleach/monitor 순서 (1/frequency)의 시간이 스케일러에 설정된 데이터 수집 시간 (빈 폭 X 방식 / 기록)보다 큰 것이 매우 중요합니다. 이 기준이 충족되지 않을 경우, 여러 표백제 트리거는 스케일러에서 단일 레코드 내에 나타날 수 있습니다. </li></ol></li><li> 이전에 결정 수용 수준으로 모니터의 전원을 설정합니다. 모니터 표백 테스트 중에 결정 표백 컷오프 위 200 MW 정도로 표백제 전원을 설정합니다. 이러한 파워는 PC의 결정에 걸쳐 서로 다른 전압으로 설정 둘 수 있습니다. </li><li> , 불을 끄기 PMT 켜고, 현미경 소프트웨어에 지점 검사를 시작 현미경을 봉쇄, 다음 펄스 발생기 및 스케일러를 시작합니다. </li><li> 1) 사전 표백제 형광, 2) 형광 즉시 포스트 표백제 및 데이터 세트의 끝에 3) 형광 : 곡선을 세우고있는 세 가지 중요한 사항을 표시하여 결과 복구 곡선 분석. 형광 값 사전 즉시 더 반 복구 시간을 추정 후 표백제.를 사용하여 </li><li> 하프 복구 시간이 예상과 함께, 사전 표백제, 표백에 대한 새로운 가치를 결정하기 이전에 설명한 엄지 손가락의 규칙, 그리고 빈 폭 기간이를 사용합니다. 또한,보다 완전한 회복을 달성하는 데 필요한 시간을 추정하기 위해 설정 데이터의 끝에 사전 표백제 형광 및 형광을 사용합니다. 엄지의 규칙으로, 데이터는 데이터의 후반에 대해보고해야하는 전체 복구를 위해 허용하는 기간 동안 수집해야합니다. </li><li> 귀하의 곡선은 강력한 표백 및 원활한 복구를 전시 때까지 펄스 발생기 및 스케일러에 매개 변수를 조정 매개 변수를 새로운 곡선을 그리고 조정을 계속합니다. 가능하다면, 표백제 기간 수는 점을 명심하고, 엄지의 규칙 아래에 감소한다. 너무 약하거나 너무 깊이 표백제를 얻을 경우 표백 파워도 조정할 수 있습니다. </li></ol> 4. 여기 채도에 대한 테스트합니다. <ol><li> 이전에 결정 적절한 모니터 및 표백 능력을 사용하여 MP - FRAP 곡선 일련의 가져가라. 적절한 수학적 형식과 비선형 최소 제곱 피팅 알고리즘을 (아래의 "데이터 분석"참조)를 사용하여, 사전 표백제 형광으로 표준화된 각각의 복구를 분석할 수 있습니다. 표백제 깊이 매개 변수의 장착 가치를 기록합니다.</li><li> 표백 파워의 가치를 증가에서 MP - FRAP 곡선의​​ 연속 시리즈 복용 분석 진행합니다. </li><li> 로그 (전원)의 함수로 플롯 로그 (표백 깊이 매개 변수). 두 아이의 기울기로부터 편차는 여기 채도를 나타냅니다. 강한 표백제를 산출 표백 전원을 선택하지만, 채도를 발생하지 않습니다. </li></ol> 5. MP - FRAP 곡선을 복용 계속합니다. <ol><li> 위와 같이 모든 매개 변수가 제대로 설정됩니다 곡선을 복용 계속합니다. </li></ol> 6. 데이터 분석. <ol><li> 형광 데이터에서 미리 표백제 및 표백 데이터를 같은 시간 데이터를 설정 및 조정을 제거하는 것이 바로 사후 표백제 형광 값 t = 0에 해당합니다. </li><li> 평균 미리 표백제 형광와 관련하여 발생하는 형광 복구를 정상화. </li><li> 적절한 수학적 모델과 같은 MATLAB에서 lsqcurvefit 함수로 비선형 최소 제곱 피팅 알고리즘을 사용하여 표준 곡선 맞추기. 여기에 제시 모델 확산 및 대류 흐름 모두에 의해 영향을 형광 recoveries 계정에 대한 : <img src="/files/ftp_upload/1636/1636eq.jpg" alt="방정식" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="방정식"> F O가 미리 표백제 평균 형광 어디에, β는 표백 깊이 매개 변수이며, τ D의 특성 잘 퍼지는 복구 시간, R은의 요골 (W R) 넓이로 축의 제곱의 비율 (W Z)입니다 두 광자 초점 볼륨, τ VX가 = W R / V X, τ VY = W R / V Y는 τ VZ = w Z / V Z와 V 2 = V는 x 2 + V Y 2 + V Z 2입니다 대류 흐름의 속도. 이미징 비행기에 갇혀 흐름의 경우, τ VZ → ∞ 및 1 / τ VX + 1 / τ VY 1 / τ VR로 교체할 수 있습니다. 대류 흐름의 부재에서 분자 두 exponentials 1로 이동하여 표현은 크게 두 피팅 파라미터 β와 τ D로 줄어 듭니다. 확산 계수는 쉽게 D = W R 2 / 8τ D로 계산됩니다. </li></ol> 7. 대표 결과. <img src="/files/ftp_upload/1636/1636fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 대표 표백제와 FITC - BSA에 대한 복구 곡선. 좋은 복구 곡선은 데이터의 후반에 대해보고하는 전체 복구에서 형광과 함께 강력한 표백 및 원활한 복구를 전시하고 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/1636/1636fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. FITC - BSA를위한 표준화 복구 곡선 (적색)와 관련된 최소 제곱 적합 (블랙). 이 적합 문헌과 일치 52.9 um2 / s의 확산 계수를 산출.

<ol><li>Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Biophys J. 60, 73-76 (1990).</li>
<li>Brown, E. B., Wu, E. S., Zipfel, W., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+molecular+diffusion+in+solution+by+multiphoton+fluorescence+photobleaching+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Measurement of molecular diffusion in solution by multiphoton fluorescence photobleaching recovery.</a> Biophys J. 77, 2837-2849 (1999).</li>
<li>Sullivan, K. D., Sipprell, W. H. B. rown, Jr, E. B., Brown, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+model+of+fluorescence+recovery+expands+the+application+of+multiphoton+fluorescence+recover+after+photobleaching+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Improved model of fluorescence recovery expands the application of multiphoton fluorescence recover after photobleaching in vivo.</a> Biophys J. 96, 5082-5094 (2009).</li>
</ol>

photobleaching 후 다중 광자 형광 회복의 능력은 3D 해상도 두꺼운 샘플을 탐사하는 기능에있다. 1990 년대에 개발 이후, MP - FRAP은 세포 기관, 전직 생체내 두꺼운 조직 슬라이스하고, 생체내 조직과 interstitium에의 확산 계수 (또는 유사한 전송 매개 변수)를 결정하는 데 사용되었습니다. 이 문서에서는, 우리는 실험 매개 변수를 설정 데이터를 복용하고, 복구 곡선을 분석, MP - FRAP 실험뿐만 아니라 빔 경로를 정렬을위한 적절한 절차를 실행하는 데 필요한 장비를 제시했습니다. 적절한 여기 파장과 방출 필터의 선택은 두 광자 교차 섹션 및 방출 스펙트럼에 의해 유도해야합니다. 이 정보는 자주 각종 염료에 대한 기술 자료에 포함되어 있습니다. 또한, 레이저 빔을 정렬에, 그것은 목표의 뒤에 렌즈의 적절한 overfilling을 달성하는 것이 중요합니다. 이것은 종종 광학 시스템에 빔 확장기를 ...

<table><tbody><tr><td>Ti:sapphire 레이저</td><td>Newport Corp.</td><td>Mai Tai</td><td></td></tr><tr><td>포켈스 셀</td><td>Conoptics</td><td>350-80</td><td></td></tr><tr><td>레이저 주사 현미경</td><td>Olympus Corporation</td><td>Fluoview</td><td></td></tr><tr><td>단파장 통과 다이크로익 미러</td><td>Chroma Technology Corp.</td><td>670 DCSX-2P</td><td></td></tr><tr><td>광전증배관</td><td>Hamamatsu Corp.</td><td>HC125-02</td><td></td></tr><tr><td>광자 계수기</td><td>Stanford Research Systems</td><td>SR 400</td><td></td></tr><tr><td>다채널 스케일러/평균기</td><td>Stanford Research Systems</td><td>SR 430</td><td></td></tr><tr><td>펄스 발생기</td><td>Stanford Research Systems</td><td>DG 535</td><td></td></tr><tr><td>FITC-BSA</td><td>Invitrogen</td><td>--</td><td></td></tr></tbody></table>

photobleaching 후 두 광자 형광 복구를 통해 확산 계수 측정

Measuring Diffusion Coefficients via Two-photon Fluorescence Recovery After Photobleaching

photobleaching 후 다중 형광 복구 macromolecules의 확산 계수 (또는 유사한 전송 매개 변수)을 측정하는 데 사용되는 현미경 기술이며, 모두에 적용할 수있는<em&gt; 체외에서</em&gt;과<em&gt; 생체내에</em&gt; 생물 학적 시스템. photobleaching 후 다중 형광 복구 후 빔을 attenuating하고 photobleached 분자를 교체에 관심 확산의 영역 밖에서 아직도 형광 분자로 형광을 모니터링, 강렬한 레이저 플래시를 사용하여 형광 샘플 내에서 관심 영역을 photobleaching에 의해 수행됩니다 . 우리는 Pockels 전지 (레이저 변조기)를 통해 및 샘플에 레이저 스캔 상자와 객관적인 렌즈를 통해 광학 경로를 따라 레이저 빔을 정렬하여 데모를 시작합니다. 단순화하기 위해, 우리는 수성 형광 염료의 샘플을 사용합니다. 그런 다음 적절한 실험을 포함하여 샘플에 대한 매개 변수를 모니터와 표백 능력, 표백 기간, 빈 너비 (광자 집계) 및 형광 복구 시간을 결정합니다. 다음, 우리는 복구 곡선, 크게 향상된 처리량을위한 LabVIEW (내쇼날 인 스트 루먼트, 오스틴, TX)를 통해 자동으로 사용할 수있는 프로세스를 주셔서 절차를 설명합니다. 마지막으로, 확산 계수는 같은 MATLAB (Mathworks, 내틱, MA)와 같은 소프트웨어를 사용하여 쉽게 프로그래밍 최소 제곱 피팅 알고리즘을 사용하여 적절한 수학적 모델 복구 데이터를 피팅에 의해 결정됩니다.

이 문서에서 우리는 photobleaching 후 다중 광자 형광 복구를 사용하여 확산 계수를 측정하기위한 절차를 설명합니다. 우리는 샘플에 대한 광학 경로를 따라 레이저를 정렬하고 적절한 실험 매개 변수를 결정함으로써 시작되며, 다음 발생을 계속하고 마지막으로 피팅 형광 복구 곡선.

Photobleaching 후 두 광자 형광 복구를 통해 확산 계수 측정

다중 형광 광퇴색 후 회복(Multi-fluorescence recovery after photobleaching)은 확산 계수(또는 유사한 수송 매개변수)를 측정하는 데 사용되는 현미경 기술로...

다광자 형광 광퇴색 후 회복(multi photon fluorescence recovery after photobleaching) 절차는 자유롭게 확산되는 형광 염료 분자 시료를 통해 쉽게 입증할 수 있습니다. 먼저, 저강도 레이저 빔을 시료에 조사하여 레이저의 초점 부피 내에 있는 D 분자로부터 기준 형광 수준을 생성합니다.다음으로, 짧고 강한 고강도 레이저 플래시를 조사하여 초점 부피 내 염료 분자의 일부를 광퇴색시킵니다. 마지막으로, 레이저 빔을 이전의 저강도 수준으로 감쇄시키고, 광퇴색된 분자들이 외부로 확산되고 초점 부피 외부의 여전히 형광을 띠는 분자들이 그 자리를 대체함에 따라 형광 변화를 모니터링합니다. 이렇게 얻은 시간 함수에 따른 형광 곡선을 분석하여 확산 계수를 산출합니다.안녕하세요, 저는 로체스터 대학교 생명공학과 Edward Brown 교수님 연구실의 Kelly Sullivan입니다. 오늘은 다광자 형광 광퇴색 후 회복(multi photon fluorescence recovery after photobleaching) 실험 방법을 보여드리겠습니다. 저희 연구실에서는 이 기술을 사용하여 인비트로(in vitro) 및 인비보(in vivo) 생물학적 시스템에서의 확산을 연구하고 있습니다.그럼 시작해 보겠습니다. 우선 원하는 레이저 파장을 설정하고 광전증배관 또는 PMT 앞에 적절한 필터를 삽입하십시오. 다음으로, pcal 셀의 손상을 방지하기 위해 레이저 출력을 200 milliwatts 이하로 조정하십시오.pcal 셀 상류에 숫자 4 모양으로 배치된 두 개의 거울이 있습니다. 이 거울들은 레이저 빔을 pcal 셀에 맞추는 데 필수적이며 충분합니다. pcal 셀 바이어스 컨트롤러의 전압 오프셋을 0으로 설정하고, 레이저가 전면 및 후면 창의 중심에 오도록 pcal 셀을 통과하는 레이저 경로를 조정하십시오.그림 4의 상류 측 거울을 사용하여 빔을 전면 창의 중앙에 맞추고, 그림 4의 하류 측 거울을 사용하여 빔을 후면 창의 중앙에 맞추십시오. 이제 pcal 셀 결정에 인가하는 전압을 최대값으로 설정하십시오. 적절한 값은 파장에 따라 다르며 pcal 셀 사용 설명서에서 확인할 수 있습니다.pcal 셀 상류의 그림 4에 표시된 거울들을 조정하여 pcal 셀의 출력 전력이 최대가 되도록 합니다. 이제 결정에 인가되는 전압을 0으로 전환하고, 바이어스 컨트롤러의 전압 오프셋을 조정하여 pcal 셀의 출력 전력을 최소화하십시오. pcal 셀에 입사되는 레이저 전력을 실험에 필요한 값으로 되돌립니다.이제 현미경으로 이동하여, 표준화된 형광 시료의 초점을 정확하게 맞춥니다. 여기서는 고정된 형광 꽃가루 입자를 사용합니다. 초점이 맞춰지면 현미경을 밀봉하고, pcal 셀 결정의 전압을 변경하여 시료 이미징에 적절한 수준으로 레이저 출력을 조정하십시오.마지막으로, 조명을 끄고 PMT를 켭니다. 표준 시료의 반복 이미지 스캔을 시작하고, 시료의 선명한 이미지가 얻어질 때까지 pcal 셀 하류의 미러를 조정합니다. 이제 시료 내 초점에서의 안전한 모니터 전력을 결정하는 방법을 살펴보겠습니다.본 영상에서는 유리 슬라이드의 오목한 부분에 담겨 커버 슬립으로 덮인 수성 염료 샘플을 사용하겠습니다. 샘플 내에서 형광이 생성될 수 있도록 레이저 출력을 낮으면서도 적절한 수준으로 조절하십시오. 현미경을 밀폐하고, PMT의 출력을 광자 계수기로 전환하십시오.조명을 끄고 PMT를 켠 다음, 현미경 소프트웨어에서 포인트 스캔을 시작하십시오. 광자 계수기가 예상 형광 회복 시간보다 훨씬 긴 시간 범위에서 적분하도록 설정하고 적절한 수의 데이터 포인트를 기록하십시오. 출력을 높여 광자 계수 데이터 시리즈를 추가로 측정하십시오.광자 수의 증가가 상당히 감소하는 것처럼 보일 때까지 계속해서 출력을 높이십시오. 출력 증가 그래프에서 광자 수의 로그값을 출력의 로그값에 대한 함수로 나타냅니다. 기울기가 2에서 벗어나는 모든 편차는 광퇴색(bleaching)을 나타냅니다.모니터링 중에 이 컷오프 값보다 낮은 적절한 모니터 전력을 선택하십시오. 이제 다채널 스케일러와 펄스 발생기에 입력할 파라미터를 결정하겠습니다. 펄스 발생기에서 설정합니다.스케일러에서 사전 조사(pre-teach) 시간을 예상 반 회복 시간의 1~2배로 설정하고, 표백(bleach) 시간은 예상 반 회복 시간의 1/10로 설정하십시오. 빈 너비(bin width)는 표백 지속 시간의 약 절반으로 설정하고, 레코드당 빈 수를 설정하여 선택한 빈 너비와 레코드당 빈 수의 곱이 예상 전체 회복 시간보다 크게 하십시오. 사전 조사 및 표백 시간을 더한 후 펄스 발생기로 돌아가, 사전 조사 및 표백 시퀀스의 주파수를 빈 너비와 레코드당 빈 수의 곱의 역수보다 약간 작은 값으로 설정하십시오.마지막으로, 선택한 모니터 출력에서의 신호 강도에 따라 스케일러의 스캔당 레코드 수를 설정하십시오. 이제 모니터 출력을 안전한 수준으로 설정하고, 표백 출력은 모니터 표백 테스트 중에 결정된 표백 컷오프보다 약 200 milliwatts 높게 설정하십시오. 이 출력들은 모두 al 셀 결정 씰에 가해지는 서로 다른 전압으로 설정되며, 현미경 조명은 끈 상태여야 합니다.PMT를 켭니다. 이미지 소프트웨어에서 포인트 스캔을 시작하십시오. 그런 다음 펄스 발생기와 스케일러를 작동시킵니다.결과로 얻어진 회복 곡선을 분석하기 위해 세 가지 중요한 지점을 표시하십시오. 표백 전 형광, 표백 직후의 형광, 그리고 데이터 세트 끝의 형광입니다. 표백 전과 직후의 형광 값을 사용하여 반감기 회복 시간을 더 정확하게 추정하십시오.이제 이전 단계에서 설명한 규칙을 사용하여 preble bleach 및 begin width 지속 시간 값을 업데이트하십시오. 새로운 곡선을 생성하고 결과 곡선에서 강한 bleach와 매끄러운 recovery가 나타날 때까지 파라미터를 계속 조정하십시오. power의 로그 값에 따른 bleach depth 파라미터의 로그 값을 플롯하여 여기 포화(excitation saturation) 여부를 확인하십시오.기울기가 2에서 벗어나는 모든 경우는 여기 포화(excitation saturation)를 나타냅니다. 강한 표백을 유도하되 포화를 일으키지 않는 표백 강도를 선택하십시오. 마지막으로, 적절한 파라미터가 결정되면 관심 시료의 다광자 형광 회복 분석(multi photon fluorescence recovery after photobleaching 또는 MP FRAP) 곡선 측정을 계속하십시오.이제 원시 MP FRAP 데이터와 이에 맞게 피팅된 정규화된 MP F wrapp 곡선의 대표적인 결과들을 보여드리겠습니다. 확산 계수를 확인하기 위해, 원시 MP F FRAP 데이터는 강한 광퇴색과 매끄러운 회복 양상을 보입니다. 데이터 피팅을 위해 데이터의 후반부에서 전체 회복이 보고되었습니다. 먼저 회복도를 광퇴색 전 평균 형광 값으로 정규화한 다음, 비선형 최소제곱법 피팅을 수행합니다.적절한 모델에 대하여, 두 데이터 세트 모두 수성 플루오레세인(fluorescein)에서 측정되었으며 확산 계수를 산출하였습니다. 문헌 내용과 일치하며, 지금까지 다광자 형광 광퇴색 후 회복 실험을 수행하는 방법을 보여드렸습니다.이 절차를 수행할 때는 주의를 기울여 실험 파라미터를 설정하는 것이 중요하며, 특히 표백 시간과 표백 및 모니터링 강도를 프로토콜에 정의된 안전 범위 내로 설정해야 합니다. 시청해 주셔서 감사하며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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연구

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생물학

이 동영상은 형광 변동 분광법(fluorescence fluctuation spectroscopy)을 사용하여 세포 간 접촉에서 세포 표면 단백질 간의 상호 작용을 감지하는 방법을 보여줍니다. 형광 단백질로 표지된 관심 대상인 막관통 접착 수용체를 발현하고 스펙트럼으로 분리된 두 개의 형광 표지를 가진 두 개의 서로 다른 세포 집단을 혼합함으로써, 서로 다른 색의 형광을 가진 두 인접 세포의 수용체 간의 trans-interaction은 형광 강도 변동의 교차 상관관계를 통해 평가됩니다.

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여기, 선물이 포스터 공명의 동시 사용에 대 한 프로토콜 에너지 전송 기반 긴장 센서 측정 단백질 역학 힘 민감한 측정을 사용 하는 photobleaching 후 단백질 부하 및 형광 복구를 측정 하 살아있는 세포 내 단백질 역학입니다.

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이 문서는 와이드필드 형광 현미경 검사를 사용하여 모바일, 단일 분자 Förster 공명 에너지 전송 (smFRET) 기반 프로브의 현면 분석을위한 방법을 제시한다. 새로 개발된 소프트웨어 툴킷을 사용하면 정확한 FRET 효율과 분자 위치를 포함한 움직이는 프로브의 smFRET 시간 추적을 시간의 함수로 판단할 수 있습니다.

모바일 단일 분자 FRET 프로브의 자동화된 2차원 스파티오 측량 분석

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Photobleaching 후 두 광자 형광 복구를 통해 확산 계수 측정

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