Name: 써모 과학 솔라리스 qPCR 어세를 사용하여 정량 실시간 PCR (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-17T17:04:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: 학습하세요 Solaris qPCR 어세이를 사용한 정량 실시간 PCR 방법으로 유전자 발현을 정밀하게 분석하는 기술입니다. 이 프로토콜은 모든 알려진 스플라이스 변이체를 검출하여 연구의 신뢰성을 높입니다.

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1. 써모 과학 솔라리스 qPCR 분석 설계 알고리즘 <ol><li> 솔라리스 qPCR 프로브 / 프라이머 쌍 설계에 사용되는 알고리즘은이를 보편적인 사이클링 조건을 사용 각 구성 요소의 TM을 조정합니다. MGB의 결합, 또는 사소한 홈 바인딩, 탐사선의 잔기가 TM을 증가하고 큰 분석 유연성과 성능을 위해 설계되고 짧은 프로브를 허용합니다. 그들의 이름에서 알 수 있듯이, MGBs는 DNA의 나선형의 작은 홈에 끼워 넣을 수 항생제의 수업입니다. MGBs는 DNA 프로브의 3 또는 5 끝에 붙어 있습니다. 솔루션에서 프로브의 식구들 기자의 형광은 이클립스 다크 끄는로 침묵이다. 탐사선이 대상 시퀀스에 바인딩하면 프로브의 3 - D 형태의 결과 변화는 강한 형광 신호를 수 있습니다. 대상 순서로 DNA 프로브의 바인딩은 PCR에 적합한 용융 온도를 유지하는 동시에 매우 구체적이고 짧은 프로브의 사용을 허용하는 MGB에 의해 안정화됩니다. 따라서, 신호 감지 대상 증폭의 어닐링 단계에서 발생합니다. 확장 단계 동안, MGB 프로브 disassociates 및 형광 다시 침묵합니다. 탐사선이 disassociates 때문에 PCR의 효율에 영향을주지 않습니다. </li><li> 솔라리스 알고리즘의 또 다른 특징은 Superbases를 사용하는 것입니다. Superbases는 채권 AT의 안정성을 개선하고 GG 구아닌 풍부한 시퀀스에서 자체 연결을 제거하는 바인딩 능력을 강화해야 기지를 수정하고 있습니다. 또한, 그들은 5 종착역에 연결된 인접 fluorophores를 끄지 마십시오. 이러한 기반은 선택 대상 시퀀스의 가용성을 확장하는 알고리즘에 따라 배치됩니다. 이렇게하면 별도 primers와 프로브를 설계 피해야 될 같은 GC 풍부한 지역으로 시퀀스를 사용 수 있습니다. </li><li> 가능하면 솔라리스 알고리즘은 대상 사이트의 엑손 접합부까지의 영역을 포함합니다. 이것은 오염 물질의 게놈 DNA의 증폭을 피하고하여 특이성을 증가시킵니다. </li><li> 중요한 알고리즘은 또한이 단일 프로브 / 프라이머 세트에 포함되는 등 알려진 모든 변종 스플 라이스에 대한 합의 순서를 식별합니다. 그래서, 하나의 분석은 관심의 특정 유전자를 위해 필요합니다. </li><li> 마지막으로, 솔라리스 qPCR 분석 설계 알고리즘은 GC 콘텐츠, 길이, TM, 그리고 동질적인 세포핵의 펼쳐진 포함하여 중요한 설계 고려 사항에 대해 매우 엄격한 매개 변수를 사용합니다. 게놈, 성적 증명서, 그리고 pseudogene : 결과 시퀀스는 3 개의 데이터베이스를 사용하는 특이성에 대한 분석 BLAST 있습니다. </li></ol> 2. 솔라리스 시약 구하기 <ol><li> 해당 솔라리스 시약을 얻으려면 다음 사이트를 방문 <a href="http://dharmacon.com">www.thermo.com / 솔라리스</a> </li><li> 일단 웹사이트에서 "GENEius 제품 검색"을 클릭합니다. GENEius 제품 검색로 바로 이동하려면 이동 <a href="http://www.dharmacon.com/catalogsearch/consolidatedsearch.aspx">www.thermo.com / SolarisSearch</a> </li><li> 검색 메세지 상자를 클릭하고 해당 대상 생물을 선택합니다. </li><li> GENEius 제품 검색은 다양한 유전자 식별자를 처리할 수 있습니다. 여기, 심판 Seq 가입, 유전자 ID, 진 심볼, 유전자 설명, 생거 ID 또는 가입 번호 또는 카탈로그 번호 등 관심의 유전자를 찾기 위해 제안된 검색어 중 하나를 입력합니다. 그런 다음, "검색"을 클릭하십시오. </li><li> 관심있는 유전자를 확인하고 왼쪽에있는 '선택'을 클릭하십시오. 이것은 관심의 유전자에 사용할 수있는 다양한 써모 과학 제품을 보여주는 창이 열립니다. "제품"아래에있는 "qPCR 감지"탭을 선택합니다. </li><li> 제목은 "솔라리스 유전자 발현 분석"에서, 당신은 하나가 최적 솔라리스 프로브 / 프라이머 분석 설계 볼 수 있습니다. 이 분석은 유전자 타겟의 모든 알려진 스플 라이스 변종을 커버합니다. 원하는 수량을 선택합니다. 그들은 100, 200, 400에서 사용할 수 있으며, 1,000 X 25 μl 반응 (분석이 만들어 주문으로 확인된 경우, 100 팩 크기는 사용할 수 없습니다.) "장바구니에 추가 '를 클릭하십시오. </li><li> 다음 사용될 것입니다 열 자전거 타는 사람에 해당하는 마스터 믹스를 선택합니다. 마스터 믹스가 사용할 수있는 기계와 최고의 작품할지 결정하려면 클릭하십시오 '마스터 믹스가 PCR의 자전거 타는 사람과 가장 적합한 알아보십시오! " </li><li> 사용하는 혼합 결정하기 위해 메뉴에서 사용됩니다 qPCR의 자전거 타는 사람을 찾습니다. </li><li> GENEius 제품 검색 창으로 돌아가기하고, 적절한 마스터 믹스를 선택합니다. 마스터 믹스 100, 200, 400, 1000 반응 사이즈된다. "장바구니에 추가"를 클릭하세요. </li><li> 제안 참조 유전자와 뒷면 cDNA 합성 키트는 또한 완전한 qRT - PCR 분석을 위해 주문하실 수 있습니다. </li><li> 솔라리스 qPCR의 시약이 도착하면, 사용할 준비가 때까지 -20 ° C에 그들을 저장할 수 있습니다. 다음 시약이 접수되어야합니다 : 800 200 NM NM, sequ에서 제공 각각 하나의 유전자 특정 프로브에서 제공이 primers을 포함 20X 솔루션을프로브 및 primers, 그리고 배 농도에서 솔라리스 qPCR의 유전자 발현 마스터 믹스 모두에 대한 정보를 줬어. 솔라리스 qPCR 진 표현 Assays은 12 개월의 최소 안정됩니다. 반복 동결은 해동하지 마십시오. </li></ol> 3. qPCR 설정 <ol><li> cDNA와 qPCR 프로토콜을 시작합니다. 총 RNA는 스핀 열 방법을 사용하여 추출해야합니다. 써모 과학 뒷면 cDNA 합성 키트 cDNA를 생성하기 위해 역방향 전송을 권장합니다. </li><li> primers, 프로브, 그리고 얼음 마스터 믹스를 해동하여 qPCR 준비. 또한 손으로에서 PCR 등급 물과 실시간 PCR의 감도를 향상시킬 수 있습니다 불투명 흰색 qPCR 접시를합니다. </li><li> 1) 온습 시작의 DNA 중합 효소, DNA Thermoprime 효소의 핫 시작 버전 : 마스터 혼합을 포함한 실시간 PCR에 대한 모든 구성 요소가 포함되어 있습니다. 효소의이 유형은 최대 반응 설정된 기간 동안 불특정 증폭을 방지하기 위해 사용하고 95에서 활성화 단계 ° C 15 분 필요합니다. 2) 솔라리스 마스터 믹스의 dNTPs는 dTTP는 솔라리스 입문서 / 프로브 assays와 함께 작동하도록 최적화된 독점적 반응 버퍼 증폭 효율 3), 최대화하기 위해 dUTP 대체합니다. 이 반응 버퍼 시약 및 플라스틱 사이의 대비를 증가 파란색 염료가 포함되어 있습니다. 4) ROX하여 qPCR 기기가 필요한 경우 ROX. </li><li> 솔루션 해동 후에는 튜브를 (와동하지 않음) flicking하여 섞는다. 시약의 손실을 방지하기 위해 그들을 스핀. </li><li> 다음 샘플의 숫자에 따라 스케일링을 관심의 유전자, 플러스 참조 유전자 하나에 대한 반응 믹스를 설정하는 15 ML 살균 팰컨 튜브를 준비합니다. 세 표준 곡선 방법은 분석에 사용되는 경우 템플릿 컨트롤 (NTC)와 표준 곡선 샘플도를 포함하지, 각 샘플을 준비할 수 복제 등 충분히 준비합니다. </li><li> 96 잘 접시에 실행하는 각 샘플은 다음을 혼합 : 2X 솔라리스 qPCR 마스터 믹스 5 μL, 솔라리스 프리머 / 프로브 세트 (20X)의 0.5 μl, 그리고 PCR 학년 물을 같은 것을 최종 반응 부피 한번 cDNA 25 μL 것입 추가됩니다. 384 잘 접시에 실행하는 각 샘플에 대해 다음을 혼합 : 2X 솔라리스 qPCR 마스터 믹스의 12.5 μL, 솔라리스 프리머 / 프로브 세트 (20X)의 1.25 μl, 그리고 PCR 학년 물을 최종 반응 부피, 한 번 cDNA 것을 추가은 10 μL 것입니다. </li><li> 멀티 채널 pipettor 사용하여 접시의 적절한 우물에 마스터 믹스를 전송할 수 있습니다. 마스터 믹스에 포함된 파란색 염료가 하얀 접시에 추적 pipetting 진행에 도움이됩니다. 그런 다음, 1-5 μL cDNA 템플릿 (96 잘 플레이트의 경우) 또는 cDNA 템플릿 1-2 μL를 (384 자 접시) 추가합니다. 믹스로 최대 피펫합니다. 원심 분리기에 접시를 놓고 이들은 형광 신호 방해하므로 모든 거품을 제거하는 스핀 다운. </li><li> 프로그램 열 자전거 타는 사람 : 효소가 함께 활성화되어 있어야합니다 95 ° C 15 분 (1 사이클). 그렇다면 95의 40주기 ° C, 15 초 동안 변성 및 소둔 및 60 ° C 확장 60 초 동안. </li><li> qPCR 장비에서 접시를 놓습니다. 프로그램을 시작합니다. </li></ol> 솔라리스를 사용하는 대표 qPCR 결과 <img src="/files/ftp_upload/1700/1700fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. PCR 효율과 R2의 값을 기준으로 판단으로 솔라리스 assays, 심지어 매우 낮은 입력 농도에서 안정적인 검색을 제공합니다. 합성 RNA의 amplicon 시퀀스 또는 DNA의 amplicon 시퀀스에서 합성된 cDNA의 열 10 배 dilutions는 각각 F2RL1 또는 CDC20에 대한 솔라리스 qPCR의 유전자 발현 분석을 사용하여 ABI 7900HT 악기에서 증폭되었다. 로그 스케일 증폭 곡선 및 표준 곡선은 효율성, R2 값, 10 log10 dilutions 밖으로 동적 범위 및 검출의 하한선을 포함하여 각 분석의 성능과 함께 표시됩니다. <img src="/files/ftp_upload/1700/1700fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 솔라리스 Assays도 다른 연구자 및 연구소 간의 일관성있는 결과를 제공합니다. ALDOA 및 PPIB뿐만​​ 아니라 비 타겟팅 제어 (NTC)를 대상으로 s​​iRNAs는, 100, 10, 1, 0.1 nm의 최종 농도에서 헬라 세포로 transfected했다. 세포 수확 및 총 RNA는 48 시간 후 치료를 격리했다. cDNA는 써모 과학 뒷면 cDNA 합성 키트를 사용하여 합성되었다. cDNA의 나누어지는은 로체 LightCycler 480 (384 자) 플랫폼에서 ALDOA, PPIB, 그리고 GAPDH의 검출을위한 솔라리스 qPCR 진 표현 Assays를 사용하여 두 지리적으로 분리된 실험실에서 증폭되었다. 최저는 ΔΔCq 방법 (GAPDH 참조 유전자와 NTC - 처리 세포 정상화)를 사용하여 계산되었다. 최저의 동일한 수준이 두 사이트에서 두 연구자 사이의 유전자 목표를 모두 증명되었다.

이 문서의 저자는 써모 과학의 직원입니다.

써모 과학 솔라리스 qPCR의 Assays는 qPCR 분석을 수행하기위한 간단하고 향상된 방법을 제공합니다. MGB 기술과 Superbases을 도입, 높은 엄중 알고리즘을 사용하여 이러한 프라이머 및 프로브 세트 qPCR 실험의 충실도 및 견고성이 극대화할 수 있습니다. 하나 프라이머 및 프로브 집합은 주어진 유전자의 모든 알려진 스플 라이스 변종을 인식합니다. 대상 사이트는 가능한 그 게놈 DNA가 증폭되지 않도록하기 위해 엑슨 걸치는 지역을 포함합니다. 이러한 기능은 가능한 크게 복잡한 실험을 수행하기 위해 필요한 시간을 줄이는 동시에 여러 샘플을 실행합니다. 마스터 혼합은 파란색 때문에 pipetting 추적을 잃지 않고, qPCR의 감도를 향상 백색 불투명 접시를 사용할 수 있습니다. 모두 합쳐 놓으면, 솔라리스 qPCR 분석의 설계 기능이 소설 qPCR 분석 구체적이고 강력한 모두있는 고성능 아직 단순하고 분석합니다.

써모 과학 솔라리스 qpcr 어세를 사용하여 정량 실시간 pcr

Quantitative Real-Time PCR using the Thermo Scientific Solaris qPCR Assay

솔라리스 qPCR의 유전자 발현 분석은 분석의 감도와 정확성을 유지하면서 qPCR 프로세스를 단순화하도록 설계된 프라이머 / 프로브 집합의 소설 형식입니다. 이러한 프라이머 / 프로브 세트는 이전에 다음 ID로 사용 가능한 기술에서 인간과 마우스 genomes과 기능 크게 향상&gt; 98% 사전 설계되었습니다. 이러한 개선은 써모 과학 생물 정보학 전문가에 의해 개발된 새로운 설계 알고리즘의 미덕으로 가능하게되었다. 몇 가지 편리한 기능이 양적 실시간 PCR을 수행하는 과정을 간소화하기 위해 솔라리스 qPCR 분석에 통합되었습니다. 첫째, 프로토콜은 일반적으로 고용 대안과 유사하므로 qPCR하는 동안 사용되는 방법은 알고 있어야 할 것 같다. 둘째, 마스터 믹스 트랙에 qPCR 반응을 쉽게 설정하게하는 파란색입니다. 셋째, 열 사이클링 조건은 가능한 한 번에 많은 샘플을 실행 만들고 오류의 가능성을 감소 (유전자) 모든 assays에 대해 동일합니다. 마지막으로, 프로브 및 프라이머 서열 정보는 출판 프로세스를 단순화 제공됩니다. 여기, 우리는 주문 웹 사이트 (www.thermo.com / 솔라리스)와 어떻게 표준 곡선 방법을 사용하여 qPCR을 수행하기위한 솔라리스 시약을 사용하여 발견 GENEius 제품 검색 기능을 사용하여 적절한 솔라리스 시약을 얻는 방법을 보여줍니다.

솔라리스 qPCR 진 표현 Assays은 분석의 특이성과 견고을 희생하지 않고 qPCR 프로세스를 단순화하기위한 새로운 사전 설계 qPCR 뇌관 / 프로브 조합입니다.

써모 과학 솔라리스 qPCR 어세를 사용하여 정량 실시간 PCR

Solaris qPCR 유전자 발현 분석 키트는 qPCR 과정을 단순화하는 동시에 민감도와 ...를 유지하도록 설계된 새로운 유형의 프라이머/프로브 세트입니다.

본 비디오 논문에서는 Solaris QPCR 분석법을 이용한 실시간 PCR(real time PCR)을 시연합니다. Solaris QPCR 분석법은 특정 유전자의 모든 알려진 스플라이스 변이체(splice variants)를 검출하도록 설계된 유전자 특이적 프로브 및 프라이머 쌍입니다. 보편적인 열 순환 조건 하에서, Solaris 프로브는 5' 말단에 마이너 그루브 바인더(minor groove binder) 작용기와 FA 리포터가 있으며, 3' 말단에는 이클립스 다크 퀀처(eclipsed dark quencher)가 결합되어 있습니다.실시간 PCR의 변성 단계에서 프로브는 용액 상태로 유지되며 FAM 리포터 형광은 소광됩니다. 어닐링 및 신장 단계 동안 프라이머와 프로브가 표적 서열에 결합하면서 소광제가 FAM으로부터 분리됩니다. 이후 프로브가 해리될 때 FAM이 강한 형광 신호를 내며, 형광은 다시 소광됩니다.이 효율적인 분석법의 민감도, 특이도 및 재현성을 입증하는 실시간 PCR 결과가 도출되었습니다. 안녕하세요, 저는 콜로라도주 라파예트에 위치한 Thermo Fisher Scientific 연구개발팀의 James Covino입니다. 오늘은 Lars QPCR 유전자 발현 시약을 사용하여 표준 QPCR 반응을 설정하는 절차를 보여드리겠습니다.저희 실험실에서는 RNA 간섭 기술을 이용하여 표적 유전자의 넉다운을 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다. 그럼 시작하겠습니다. Solaris QPCR assay STEM은 MGB 및 super base 기술을 활용하는 고유한 알고리즘으로 정의되며, 이를 통해 인간 및 마우스 주석 유전자의 98%에 대해 단일하며 편리한 분석법을 제공합니다.일반적으로 DNA 프로브와 프라이머 설계는 염기의 수와 종류에 의해 결정되는 프로브의 해리 온도(melting temperature)에 의해 제한됩니다. 서열이 길수록, 그리고 GC 함량이 높을수록 해리 온도가 더 높아집니다. Solaris 프로브에 사용되는 마이너 그루브 결합 부위(minor groove binding moiety)는 DNA 이중나선의 마이너 그루브에 결합하여 프로브와 표적 서열 간의 상호작용을 안정화합니다.이는 멜팅 온도를 높여 더 짧은 프로브를 사용할 수 있게 합니다. 또한 Solaris 알고리즘은 AT 결합의 안정성을 높이고 guanine이 풍부한 서열에서 GG 자기 결합을 제거하기 위해 슈퍼 베이스(super bases)라고 불리는 변형 뉴클레오타이드를 선택적으로 통합합니다. 이를 통해 평소라면 피했을 표적 서열도 사용할 수 있게 됩니다.이러한 기술의 사용으로 부여된 향상된 서열 유연성을 통해 단일 유전자의 모든 알려진 스플라이스 변이체(splice variants)를 인식하는 프라이머 프로브 세트를 설계할 수 있습니다. 오염된 게놈 DNA의 증폭을 방지하여 특이성을 높이기 위해 가능한 경우마다 표적 부위에 엑손 접합부 걸침 영역(exon junction spanning regions)을 포함시켰으며, 결과적으로 생성된 프라이머 프로브 세트는 특이성 확보를 위해 게놈, 전사체, 가성유전자(pseudogene)의 세 가지 서로 다른 데이터베이스를 사용하여 blast 분석을 수행하였습니다. 또한, Solaris 프라이머 프로브 세트는 모든 QPCR 분석의 사이클링 조건이 동일하도록 완전히 최적화되어, 단일 PCR 런에서 다양한 전사체의 발현을 평가할 수 있습니다.qPCR R 실험 계획을 시작하려면 thermo.com/solaris에서 제공하는 genius 제품 검색을 사용하여 관심 유전자의 qPCR 수행에 필요한 시약을 확인하십시오. 검색 문의 상자를 클릭하고 적절한 표적 생물체를 선택하십시오. genius 제품 검색은 다양한 유전자 식별자를 처리할 수 있습니다.관심 유전자에 대해 제안된 검색어 중 하나를 입력한 다음 검색을 클릭하고, 관심 유전자를 확인한 후 왼쪽에 있는 선택을 클릭하십시오. 그러면 해당 관심 유전자에 대해 사용 가능한 다양한 시약이 표시되는 창이 열립니다. Solaris 유전자 발현 분석 하단의 qPCR 검출 탭을 클릭하십시오.최적으로 설계된 Solaris 프로브 프라이머 어세이 하나가 표시됩니다. 이 하나의 어세이로 관심 유전자의 모든 알려진 스플라이싱 변이체를 검출할 수 있습니다. 적절한 프라이머 제제가 확인되면, 메뉴에서 사용할 qPCR 사이클러를 찾아 호환되는 마스터 믹스를 식별하십시오. 이때 별도의 ROX 수동 참조 염료 바이알이 포함된 마스터 믹스, ROX 믹스 또는 Low ROX 믹스 중에서 선택하십시오.본 실험에서는 Roche light cycler 480을 사용하므로, master mix plus rock vial이 사용됩니다. 또한, 연구에 적절한 참조 유전자가 포함되었는지 확인하는 것이 중요합니다. 모든 Solaris QP CR 시약이 준비되면 B2M이 사용될 예정입니다.사용 전까지 -20 °C에서 보관해야 합니다. 시약은 최소 12개월 동안 안정적입니다. 반복적인 냉동-해동은 피해야 합니다.샘플 RNA에 대해 역전사 반응을 수행하여 qPCR용 cDNA를 준비합니다. cDNA가 준비되면 Solaris 분석 시약과 마스터 믹스를 얼음 위에서 해동합니다. 마스터 믹스에는 유전자 특이적 분석 시약과 템플릿 성분을 제외한 정량적 PCR에 필요한 모든 구성 요소인 thermostat, DNA polymerase dn, TPS rocks가 포함되어 있습니다.QPCR 장비에 락(rocks)과 내부 청색 염료가 포함된 전용 반응 버퍼가 필요한 경우, PCR 등급의 물과 QPCR 플레이트도 준비하십시오. 용액이 해동되면 가볍게 튕겨 섞어준 다음, 시약 손실을 방지하기 위해 용액을 짧게 원심 분리합니다. 다음으로, 15 mL 튜브에 1x Solaris QPCR assay 및 마스터 믹스를 준비합니다.384-웰 플레이트에서 실행할 원하는 샘플 수에 맞춰 2x 마스터 믹스 5 µL, 20X Solaris assay 0.5 µL, 그리고 PCR 등급의 물을 조합하여 각 웰의 최종 부피가 10 µL가 되도록 합니다. cDNA를 추가한 후, 시약 오염이나 게놈 DNA 오염 여부를 각각 확인하기 위한 무템플릿 대조군(NTC) 및 무역전사효소 대조군(no RT)을 포함하여 각 샘플당 3회 반복 실험을 위한 충분한 양을 준비하십시오. 그 다음, 혼합물을 멸균 리저버로 옮깁니다.그 다음, 멀티채널 피펫을 사용하여 1x 마스터 믹스의 적절한 부피를 PCR 플레이트의 해당 웰에 분주합니다. 흰색 플레이트를 사용하는 경우, 마스터 믹스에 포함된 내부 청색 염료가 피펫팅 진행 상황을 확인하는 데 도움이 됩니다. 모든 사이클 조건이 동일하므로 동일한 플레이트에서 여러 cDNA 라이브러리와 참조 유전자를 분석할 수 있습니다.1x 마스터 믹스를 해당 웰에 넣은 후, 희석된 CD NA 템플릿을 각 웰에 추가하여 최종 부피가 10 microliters가 되도록 하고 피펫으로 상하 혼합합니다. 여기에서 보는 것과 같이 점착성 씰 또는 열 밀봉 씰로 플레이트를 밀봉합니다.플레이트를 원심분리기에 넣고 회전시켜 시약을 웰 바닥으로 가라앉히고 형광 판독 프로그램에 방해가 될 수 있는 기포를 제거합니다. 서모사이클러에서 Solaris QPCR 마스터 믹스에 포함된 핫 스타트 폴리머레이스는 95 °C에서 15분 동안 1회 활성화한 후, 95 °C에서 15초 동안 변성시키고 60 °C에서 60초 동안 어닐링 및 신장 단계를 거치는 과정을 40회 반복합니다. 이 프로토콜은 증폭되는 유전자와 관계없이 모든 Soliris QPCR 분석에 동일하게 적용됩니다.마지막으로, 플레이트를 QPCR 기기에 넣고 프로그램을 시작합니다. 이 그림은 Solaris 분석법의 높은 성능을 보여주며, 여기서는 CDC 20 및 F two RL one에 대한 Solaris QPCR 유전자 발현 분석법을 사용하여 합성 DNA 또는 cDNA의 10배 단계 희석액 10개를 증폭하였습니다. log 스케일의 증폭 곡선과 10. Log 10 희석액에 대한 표준 곡선은 낮은 입력 농도에서도 분석법의 높은 성능을 입증합니다.각 분석의 성능은 10점 만점의 효율성 제곱값, 동적 범위, log 10 희석 배수 및 검출 한계로 측정됩니다. 여기에 제시된 데이터는 Solaris 분석의 재현성을 입증합니다. 본 실험에서는 Solaris QPCR 유전자 발현 분석 및 마스터 믹스를 사용하여 지리적으로 분리된 두 곳의 실험실에서 CD NA 분주액을 증폭하였습니다.두 실험실 모두에서 두 가지 표적 유전자에 대해 동일한 발현 수준을 계산하였습니다. 지금까지 Solaris QPCR 유전자 발현 시약을 사용하여 표준 QPCR 반응을 설정하는 방법을 살펴보았습니다. 이 실험을 수행할 때는 시약의 최종 농도가 정확하도록 마스터 믹스를 설정하고, 적절한 생물학적 및/또는 기술적 반복 실험을 포함하는 것이 중요합니다.또한, Solaris에 적합한 열 순환 조건으로 QPCR 기기를 설정하는 것이 매우 중요합니다. 이것으로 모든 설명을 마치겠습니다. 시청해 주셔서 감사하며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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연구

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Biology

생물학

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