Name: 마우스에 레쉴리 III 메이즈를 사용하여 낮은 스트레스 루트 학습 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-22T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: 학습하세요 마우스에서 레쉴리 III 메이즈를 이용한 저스트레스 경로 학습 방법을. 이 기법은 노화된 마우스의 학습과 기억을 평가하는 데 유용하며, 시각적 단서 없이 인지 기능을 연구할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이러한 실험에 사용되는 레쉴리 III의 미로는 팀 Bowmaster, 폴 코먼, 배리 Dutrow, 라이언 Jabco, 그리고 펜실베니아 주립 대학 물리 부서 머신 샵에서 팀 Treaster에 의해 지어졌습니다. 저자는 그림 2-4 제시 실험을 수행 도움을 부인 Shoba Belegundu, 미스 타라 Chrzanowski, 부인과 알렉 산드라 루이스에게 감사를 표합니다. 미스터 월터 잭슨은이 프로토콜의 준비에 소중한 피드백을 제공했습니다. 이 작품은 정신 건강의 국립 연구소 (MH064756와 AMA에 MH077978)에서 기금에 의해 지원되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 정신 건강이나 국립 보건원의 국립 연구소의 공식 견해를 대변하지 않습니다.

1. 준비 : <ol><li> 레쉴리 III의 미로는 플렉시의 건설이며, 그림 1에 표시됩니다. 시작 상자 미로의 팔, 그리고 목표 상자가 미로의 청소 및 modifiability 수 있도록 모듈입니다. 시작 상자 미로의 팔, 그리고 목표 상자의 벽은 외부와 미로 내부 영상 신호를 제거하기 위해 블랙 플렉시의 건설입니다. 메이즈 팔, 긴 7cm 높이 45cm이며, 5cm 폭. 미로의 연속 무기로 이어지는 문은 X 4cm 4cm이며 미로의 외벽에서 11cm에 위치하고 있습니다. 목표 상자 X 높이 7cm X 5cm 폭 19.5 cm 길이입니다. 시작 상자 8cm X 9.5 cm X 7cm입니다. 별도의 명확한 플렉시 조각은 탈출 생쥐를 방지하면서 그것이 미로를 통해 진행 각 마우스의 시각화 수 있도록 시작 상자, 미로, 그리고 목표 상자의 상단에 표시됩니다. 미로는 미로 플러스 동물의 표준 홈 케이지와 같은 크기 의사 가정 케이지의 세 조각을 가질 정도로 큰 붉은 플렉시의 건축 기초에 달려있다. </li><li> 전에 첫 번째 미로 재판, 문 앞에 (2cm X 2cm) 측면에 상처가 발생 개별 케이지 바닥에 추가 동물 '홈 새장에서 사용되는 것과 같은 종류의 신선한 침대 자료 의사 가정 새장을 준비합니다. 플레이스 와이어 이러한 케이지 보틈스 개별적으로 숫자들을, 테스트 일대의 각 동물에 대해 하나에 기껏해야. 이 케이지는 시험 기간의 기간 동안 각 동물에 대한 개별 의사 가정 버팀대 역할을합니다. 우리가 스트레스의 역할 및 / 또는 학습과 기억의 행동 불안 관련을 조사하고 있기 때문에, 우리는 개별적으로 자신의 홈 새장에 주택 마우스를 피하기 위해 가짜 가정 새장을 사용합니다. 그러나 이러한 요소가 주요 관심사되지 않은 경우, 동물은 단독으로 성공 미로 탐색을위한 홈 연습장으로 사용할 수있는 문 앞에 이러한 케이지와 함께 수정된 홈 새장에서 지내게 될 수 있습니다. </li></ol> 2. 시험 : <ol><li> 그들이 테스트 환경에 적응하도록 테스트하기 전에 매일은 동물 행동 테스트 룸 1 시간 최소 이동됩니다. </li><li> 시험 시작 시간, 음식과 물을 전에 삼십 분은 모든 홈 케이지에서 제거됩니다. 생쥐의 도달의 동작 테스트 룸지만, 밖에서 음식과 물을 보관하십시오. 음식과 물은 일반적으로 피크 먹이가 발생한 후, 어둠의 단계로 빛의 단계에서 변경 후 30 분 제거됩니다. 이것은 동물이 대부분 유지됩니다 식량과 물 만족을 했소 이전 테스트에 있지만,이 기간 동안 테스트하는 작업이 완료되면 더 명백한 음식이나 물이 보상이없는 경우에도 미로를 탐색하는 소정의 추가 동기 력을 제공합니다. </li><li> 30 분 pretest 기간이 경과 후 70 % 에탄올로 미로를 청소하십시오. 무기가 닫힌 미로에 시작 상자에서 이어지는 문을를 남겨주세요. 목표 상자의 양쪽에있는 문은 열려 남아 있습니다. </li><li> 목표 상자의 끝에 최초의 동물에 해당하는 의사 가정 케이지를 놓습니다. </li><li> 손에 그것을 컵, 미로 가장 먼저 마우스를 운반. 시작 상자에 마우스를 넣고 뚜껑을 교체하십시오. </li><li> 방해없이 미로를 관찰하는 위치에서 시작 상자 문을 열고 즉시 세 스톱워치를 시작하면. </li><li> 마우스의 모든 푸르 포스가 시작 상자를 떠난 경우, 시작 상자 문을 닫고 첫번째 타이머를 중지합니다. </li><li> 손으로 그것이 미로를 탐색으로 마우스가 여행 경로를 기록합니다. 마우스는 모든 푸르 포스가 (그림을 참조하십시오. 1) 그 지역에 건너가 미로의 새로운 영역이나 팔을 들어갑니다. </li><li> 모든 푸르 포스가 목표 상자를 입력하면, 미로와 목표 상자 사이에 최고의 문을 닫고 두 번째 스톱워치를 중지합니다. </li><li> 마우스 완전히 의사 가정 케이지를 입력했을 때, 목표 상자와 새장 사이에 문을 닫습니다. 세 번째 스톱워치를 중지합니다. </li><li> 세 스톱워치의 시간을 기록합니다. 마우스가 만들었 오류의 개수를 계산합니다. (. 예를 들어, 암 L에서 영역 K려고, 그림 1) 오류는 막다른 궁지 영역에 항목으로 정의하거나 (예에서가는 미로의 이미 여행을 팔로 다시 여행 암 C로 암 F, 그림 1).. 그것이 발생으로 우리가 마우스 성능을 점수 있지만, 그것은 눈 또는 자동 소프트웨어 중 후속 점수 있도록 녹화하는 것이 가능하거나 기록 미로의 재판이다. 실험자의 판단은 적절한 방법을 선택하는 데 사용해야합니다. </li><li> 자사 홈 케이지에 반환하기 전에 1 분에 대한 의사 가정 케이지에있는 동물을 둡니다. </li><li> 테스트 일대의 모든 마우스에 대해 2.12 단계 2.3를 반복합니다. </li><li> 일대의 마지막 마우스의 홈 케이지에 반환되면, 30 분 타이머를 시작합니다. 이 30 분 기간의 끝에, 일대의 모든 마우스에 음식과 물을을 반환하고 그들의 식민지 룸으로 동물을 반환합니다. </li><li> 일대의 모든 마우스가 정의된 학습 기준에 도달하거나 미리 정해진 N 때까지 때까지, 동물 테스트를 하루에 한 재판과 박이 절차를 반복테스트 실험의 엄버가 발생했습니다. 마우스가 연속 2 시련에 0 또는 1 오류 (들)과 함께 작업을 수행할 수있을 때 미로를 배운 데로 분류됩니다. 생쥐는 연속 실험에서 같은 순서로 테스트합니다. </li></ol> 3. 대표 결과 : (기준에 도달) 배우 일을 분석하고 특정 연구에서 다른 그룹 (Figs. 2A와 3A) 사이 비교할 수 있습니다. 또한, 미로 수집을 특징 학습 색인 (비율을 학습), 테스트 기간 (Figs. 2B와 3B)의 처음 4 일 동안 평가할 수 있습니다. 학습 지수는 올바른 경로 세그먼트의 개수의 비율은 각 재판을 위해 여행 경로 세그먼트의 총 숫자로 여행을합니다. 평균 학습 지수는 생쥐가 먼저 미로에 노출 기회가 탐색 아르 재판 1, 약 0.5하여야한다. 표시 시련이와 4 사이의 학습 인덱스 증가 및 접근 방법 1 학습이 발생합니다. 그림 2, 젊은 (2 MO)과 노화 (24 MO)에서 남성 C57Bl/6NCr 마우스는 최대 15 실험을위한 레쉴리의 미로에서 훈련했다. 젊은 쥐들이 (± 1.5) 7.2에서 디 미로를 배웠습니다 반대로, 노화 동물 11.7했다 (± 2.1) D 기준에 도달합니다. 한 꼬리 T - 테스트, 사전 가설을 배울 수 일 노령화에 오래되어 있으며, 미로를 ([t (23) = 1.59, P = 0.056] 배우 걸릴 노화 C57Bl/6NCr 마우스에 대한 강력한 추세가 발생했습니다 쥐). 학습 인덱스 계산하면, 두 연령 그룹 4 (P는 &lt;0.001 시간의 중요한 주요 효과)를 통해 실험 2에서 학습 인덱스에서 꾸준한 증가를 보여줍니다. 그러나, 젊은 C57 마우스 및 오래된 C57 생쥐 (연령 P = 0.58의 주요 효과) 사이의 학습 인덱스에 통계적으로 의미있는 차이가 없었다. 그림 3은 동작을 학습에 대한 배경 변형율의 영향을 조사 연구의 대표입니다. 젊은 남성 C57Bl/6NCr에서 데이터 그림에 표시됩니다. 2 이제 젊은 CRL의 데이터에 비해 다음과 같습니다 CD - 1 (ICR) BR 마우스 [CD - 1, 4-5 MO]. CD - 1 마우스 (± 1.4) 4.5에서 레쉴리 III의 미로를 배운 D 있지만, (배우 일 변종 사이에 상당한 차이가없는 그림 3A, [T (18) = 1.328, P = 0.20], 2 꼬리 T - 테스트). 모든 동물들이 우연히 최초의 재판에 미로를 탐색하는 동안, CD - 1 마우스가 (변형 P &lt;0.001의 주요 효과) 더 빨리 작업을 배운, 학습 인덱스 쇼의 대비 시험으로. 이 C57Bl/6NCr 마우스에 비해 CD - 1 마우스에서 4 시련 2 학습 색인에 통계적으로 의미있는 증가에 의해 그림입니다. 흥미롭게도, CD - 1 마우스가 기준에 도달되는 지점을 넘을 미로에서 훈련을 계속한다면, 그들은 아래에보다 자세히 설명하고있는 (그림 4) overtraining 나타내는 동작을 나타냅니다. <img src="/files/ftp_upload/1786/1786fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1 :. 레쉴리 III의 미로 미로의 막다른 궁지 영역은 설명의 목적으로만이 다이어그램에서 붉은 색입니다. 기본과 실제 미로의 무기 고체 색상 (삽입된 페이지)입니다. 미로는 (텍스트 크기) 규모로 그린 것입니다. <img src="/files/ftp_upload/1786/1786fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2 : 2 및 24 개월 된 남자 C57Bl/6NCr 마우스의 레쉴리 III의 미로 성능 레쉴리 III의 미로가 경로 젊은 (2 MO)과 노화 (24 MO) 남성 C57Bl/6NCr 마우스에서 학습 평가하는 데 사용되었다.. 측정 매개 변수 기준, 0 오류 또는 1 오류가 연속 2 일간 미로를 실행하는 마우스에 필요한 일수에 (A) 일했다, 및 (b) 학습 지수, 올바른 안경 포 팔 항목의 수를 레쉴리 III의 미로 테스트 일 1-4에 만​​들어 팔 항목의 총 수를 비교했다. 그룹당 동물의 숫자가 N되었습니다 24개월 된 생쥐에 대한 개월 2와 N = 15 = 10. <img src="/files/ftp_upload/1786/1786fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3 : 젊은 남성 C57Bl/6NCr 및 CD - 1 마우스에서 레쉴리 III의 미로 성능 레쉴리 III의 미로는 2 개월 C57Bl/6NCr 및 4-5개월 된 CD - 1 마우스의 학습 경로를 평가하는 데 사용되었다.. 측정 매개 변수 기준, 0 오류 또는 1 오류가 연속 2 일간 미로를 실행하는 마우스에 필요한 일수에 (A) 일했다, 및 (b) 학습 지수, 올바른 안경 포 팔 항목의 수를 레쉴리 III의 미로 테스트 일 1-4에 만​​들어 팔 항목의 총 수를 비교했다. 그룹당 동물의 숫자는 CD - 1 마우스에 대한 C57Bl/6NCr와 N = 10 N = 10했다. 통계 significances : * P &lt;0.05, ** P &lt;0.01 대 C57Bl/6NCr 쥐. <img src="/files/ftp_upload/1786/1786fig4.jpg" alt="그림 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4"> 그림 4 : 4-5개월 된 남성 CD - 1 마우스에서 레쉴리 III의 미로 성능 레쉴리 III의 미로.경로가 15 일 연속에 만불 4-5개월 된 남성 CD - 1 마우스에서 학습 평가하는 데 사용되었다. 측정 매개 변수 4 - 포 막다른 궁지 영역에 항목이나 미로의 이미 여행 팔을 여행으로 정의 오류로, 하루에 만들어진 오류 (A) 숫자했다, 및 (b) 시간은 하루 미로에서 보냈습니다. 기준에 도달했습니다되는 일은 빨간색 화살표로 표시됩니다.

<ol><li>Blizard, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Return+to+home+cage%27+as+a+reward+for+maze+learning+in+young+and+old+genetically+heterogeneous+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Med%22%5BJournal%5D)">Return to home cage' as a reward for maze learning in young and old genetically heterogeneous mice.</a> Comparative Med. 56, 196-201 (2006).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrawley%2C+JN+%22What%27s+wrong+with+my+mouse%3F%3A+Behavioral+phenotyping+of+transgenic+and+knockout+mice%22">What's wrong with my mouse?: Behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice</a>. , 2nd ed, John Wiley & Sons, Inc. Hoboken. (2007).</li>
<li>Blizard, D. A., Klein, L. C., Cohen, R., McClearn, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse-friendly+cognitive+task+suitable+for+use+in+aging+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Genet%22%5BJournal%5D)">A novel mouse-friendly cognitive task suitable for use in aging studies.</a> Behav. Genet. 33, 181-189 (2003).</li>
<li>Warren, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Appetitive+learning+by+old+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Aging+Res%22%5BJournal%5D)">Appetitive learning by old mice.</a> Exp. Aging Res. 12, 99-105 (1986).</li>
<li>Lashley, K. Brain mechanisms and intelligence: A quantitative study of injuries to the brain. , University of Chicago Press. Chicago. (1929).</li>
<li>Barnes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+deficits+associated+with+senescence%3A+A+neurophysiological+and+behavioral+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+Psych%22%5BJournal%5D)">Memory deficits associated with senescence: A neurophysiological and behavioral study in the rat.</a> J. Comp. Physiol. Psych. 93, 74-104 (1979).</li>
<li>Matzel, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Individual+differences+in+the+expression+of+a+general+learning+ability+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Individual differences in the expression of a general learning ability in mice.</a> J. Neurosci. 23, 6423-6433 (2003).</li>
<li>Brandeis, R., Brandys, Y., Yehuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+the+Morris+water+maze+in+the+study+of+memory+and+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The use of the Morris water maze in the study of memory and learning.</a> Int. J. Neurosci. 48, 29-69 (1989).</li>
<li>Hepler, D. J., Wenk, G. L., Cribbs, B. L., Olton, D. S., Coyle, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+impairments+following+basal+forebrain+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Memory impairments following basal forebrain lesions.</a> Brain Res. 346, 8-14 (1985).</li>
<li>Sci, B. ehavB. rain 2, 313-313 (1979).</li>
</ol>

모든 행동 프로토콜은 펜실베니아 주립 대학 기관 애니멀 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 보고서에는 재정 공개가 없습니다.

학습과 기억을 평가하기 위해 가장 일반적으로 사용되는 설치류 행동 테스트 모리스 물 미로와 공포 컨디셔닝 2 변종입니다. 이러한 테스트 작업 3 완료 동물 동기를 부여하기 위해 학습과 aversive의 자극 (예, 물, footshock)에 대한 시각 또는 청각 신호에 의존하고 있습니다. 노화 설치류 동물에서 노화 인간과 같이 감각 modalities 시간이 지남에 거절합니다. 마우스의 몇 가지 배경 변종들은 청력을 잃게하거나 나이 백내장을 개발하고, 물 부족의 23.5 H들은 4 나이 마우스의 증가 표시되었습니다 사망률 속도 후. 따라서,이보다 널리 사용되는 검사의 성능 변화는 노화 설치류에서 해석하기 어려울 수 있습니다. 레쉴리 III의 미로 처음 1929 5 칼 레쉴리에 의해 설명되었다. 레쉴리 대뇌 피질의 lesioning 기법을 사용하여 피질에서 메모리 engram 검색이 패러다임을 사용합...

<table><tbody><tr><td>Lashley III 미로</td><td>PSU 물리학 기계 작업장</td><td>해당 없음</td><td>미로는 기성품으로 구매할 수 없으며 맞춤 제작해야 함</td></tr></tbody></table>

마우스에 레쉴리 iii 메이즈를 사용하여 낮은 스트레스 루트 학습

Low-stress Route Learning Using the Lashley III Maze in Mice

학습과 설치류에서 메모리를 평가하기위한 많은 동작 시험, 특히 마우스는 작업 취득 동기를 부여하기 위해 시각적 단서, 음식 및 / 또는 물 부족, 또는 다른 aversive 자극에 의​​존하고 있습니다. 동물 나이, 감각 modalities가 저하. 예를 들어, 마우스의 여러 변종이 결손이나 백내장을 듣고 개발할 수 있습니다. 작업 취득하는 동안 마우스를 안내하는 데 필요한 감각 시스템의 변화는 노화 동물의 학습 변화를 해석의 가능성을 제시 confounds. 스트레스 차동 감성과 쥐를 비교하면 또한 작업을 배울 동물 동기를 부여하기 위해 aversive의 자극의 사용 가능성이 혼란함을 주죠입니다. 혼란함을 주죠 효과 이러한 종류를 최소화하기 위해, 우리는 레쉴리 III의 미로의 수정된 버전을 구현합니다. 이 미로는 쥐가 그들이 0으로 의사 가정 케이지로 시작하는 위치에서 경로를 탐색하거나 때까지 낮은 스트레스 조건, 예를 들어 어두운 단계, 식량 / 물 부족, 아래의 반복 노출을 통해 미로를 탐색 배울 의하여 경로 학습에 의존 연속 2 실험 1 오류 (들). 그것은 작업의 미로와 교육의 탐구를 장려하는 aversive의 자극에 의​​존하지 않기 때문에 우리는 낮은 스트레스 행동 테스트로 분류. 장치는 모듈 시작 상자 4 암 미로 기관 및 목표 상자로 구성되어 있습니다. 목표 상자의 하단에있는 동물의 홈 케이지에서 발견 미로 테스트 기간 동안 각 동물에 따라 다릅니다 비슷한 침구를 포함하는 의사 가정 케이지입니다. 그것이 의사 가정 케이지가 미로를 탐색하는 법을 배워야 마우스 동기를 부여하기에 충분한 보상을 제공 이전에 입증되었습니다<sup&gt; 1</sup&gt;. 여기, 우리는 쥐를 두 가지 배경 종자의 학습 행동의 비교와 함께 학습과 생쥐의 메모리에 나이와 관련된 차이를 평가의 맥락에서 레쉴리 III 메이즈 절차의 시각화를 제시한다. 우리는 노화 또는 마우스에 스트레스 취약점의 영향을 평가에 관심을 다른 수사관이 미로 더 많은 스트레스를 학습 과제 및 / 또는 시각적인 단서를 포함 행동 검사에 대한 매력적인 대안을 고려할 수 있기를 바랍니다.

레쉴리 III의 미로가 자극 aversive 또는 Visual 단서에 의존하지 않는 경로 학습 작업입니다. 그것은 따라서 특히 노화 생쥐의하거나 어디에 스트레스가 고려, 학습 및 메모리를 평가하기위한 매우 매력적인 옵션입니다.

마우스에 레쉴리 III 메이즈를 사용하여 낮은 스트레스 루트 학습

특히 생쥐를 포함한 설치류의 학습 및 기억 능력을 평가하기 위해 설계된 많은 행동 테스트들은 시각적 단서, 음식 및/또는 물 박탈, 또는 기타...

Lash 3-방향 미로에서 마우스는 일련의 통로를 지나 가상 홈 케이지 환경에 도달하는 방법을 학습했습니다. 반복 시행 시, 시행 시작 단계에서 마우스를 미로와 문으로 분리된 스타트 박스(Starbucks)에 배치합니다. 문이 열리면 마우스는 미로 통로로 진입하여 자신이 지나가는 경로를 자유롭게 탐색하게 됩니다.막다른 길인 오류 구역으로 진입하는 것을 포함하여 미로 통과 과정이 기록됩니다. 골드 박스에 진입하면, 미로로 다시 들어가는 것을 방지하고 생쥐가 가상 홈 케이지로 들어가도록 유도하기 위해 다른 문이 닫힙니다. 미로 실험을 마친 후, 학습 및 기억에서의 역할을 평가하기 위해 연령 그룹 간 또는 계통 간의 미로 수행 능력을 비교합니다.안녕하세요, 저는 Amanda Bressler입니다. 저는 이곳 펜실베이니아 주립대학교의 Anne Andrews 연구실에서 근무하고 있습니다. 오늘은 Lashley 3-maze 사용 방법을 보여드리겠습니다.저희 실험실에서는 주로 유전자 변형 마우스의 노화를 연구하기 위해 이 미로를 사용합니다. 이제 시작하겠습니다. 먼저, Lashley 3-maze의 모습이 어떻게 생겼는지 살펴보겠습니다.시작 상자 미로, 팔(arm) 및 골드 박스는 세척과 미로 수정이 가능하도록 모듈식으로 구성되어 있습니다. 시작 상자, 미로, 팔 및 골드 박스의 벽면은 미로 외부와 내부의 시각적 단서를 제거하기 위해 모두 검은색 플렉시글라스로 제작되었습니다. 미로의 팔은 길이 45 centimeters, 높이 7 centimeters, 너비 5 centimeters입니다.메이스의 연속된 암(arm)으로 이어지는 문은 4 cm × 4 cm 크기이며 메이스의 외벽에서 11 cm 떨어진 곳에 위치해 있고, 골드 박스의 크기는 길이 19.5 cm, 높이 7 cm, 너비 5 cm입니다. 시작 박스는 8 cm × 9.5 cm × 7 cm 크기입니다. 스타벅스 미로와 골드 박스 상단에는 투명한 플렉시글라스 조각을 각각 배치하여 마우스가 미로를 통과하는 과정을 시각적으로 관찰할 수 있도록 합니다.마우스가 미로에서 탈출하는 것을 방지하기 위해, 미로의 세 가지 조각과 동물의 표준 홈 케이지와 동일한 크기의 가상 홈 케이지를 모두 수용할 수 있을 만큼 충분히 큰 적색 플렉시글라스로 제작된 베이스 위에 장치를 배치합니다. 첫 번째 MACE 시험 전 가상 홈 케이지를 준비하려면, 측면에 출입구가 절개된 개별 케이지 바닥에 신선한 베딩 재료를 채우고, 케이지 바닥 위에 와이어 상단을 덮은 후, 테스트 코호트 내의 각 동물에 맞게 개별적으로 번호를 매깁니다. 이 케이지들은 테스트 기간 동안 각 동물을 위한 개별 가상 홈 케이지로 사용됩니다.미로 준비가 완료되었으므로, 최소 1시간 동안 행동 테스트를 수행하는 방법을 알아보겠습니다. 테스트 전에 동물을 행동 테스트실로 옮겨 테스트 환경에 적응하도록 합니다. 테스트 시작 30분 전에 모든 홈 케이지에서 먹이와 물을 제거하십시오.먹이와 물은 행동 테스트실에 두되, 마우스가 닿지 않는 곳에 배치하십시오. 실험은 일반적으로 피딩 피크(peak feeding)가 발생하는 명기에서 암기로의 전환 30분 후에 먹이와 물을 제거하도록 시간을 맞춥니다. 이는 시연 목적으로 테스트 전에 동물이 충분히 먹이와 물을 섭취한 포만 상태가 되도록 하기 위함입니다.이 영상에서는 밝은 조명 아래에서 이 절차를 보여드리고 있습니다. 실제 테스트는 일반적으로 명암 주기의 암기(dark phase) 동안 수행됩니다. 30분간의 사전 테스트 기간이 경과하면, 70% ethanol로 미로를 세척하십시오.스타벅스에서 미로로 이어지는 문은 열어둡니다. 암(arm)은 닫습니다. 골드 박스 양끝의 문은 열어두어야 합니다.이제 첫 번째 동물에 해당하는 가상 홈 케이지를 배치하십시오. 골드 박스의 끝에서 첫 번째 마우스를 손으로 감싸 쥐어 미로로 옮깁니다.마우스를 스타트 박스(Starbucks)에 넣고 덮개를 닫습니다. 미로를 방해 없이 관찰할 수 있는 위치에 섰을 때, 시작 상자 문을 열고 즉시 스톱워치 3개를 동시에 작동시킵니다. 마우스의 네 발이 모두 시작 상자를 벗어나면, 시작 상자 문을 닫고 첫 번째 타이머를 수동으로 중지시킵니다.경로를 기록합니다. 마우스가 미로를 탐색하며 이동합니다. 마우스의 네 발이 모두 해당 구역으로 들어갔을 때, 기록지에 새로운 구역 또는 미로의 분기점으로 진입한 것으로 표시합니다.네 발이 모두 목표 상자에 들어가면, 미로와 목표 상자 사이의 문을 닫고 두 번째 스톱워치를 멈춥니다. 마우스가 가상 홈 케이지에 완전히 들어가면, 목표 상자와 케이지 사이의 문을 닫습니다. 세 번째 스톱워치를 멈춥니다.세 개의 스톱워치에서 시간을 기록하고 마우스가 범한 오류 횟수를 측정합니다. 오류는 막다른 골목 구역으로 진입하거나 이미 통과한 미로의 경로를 다시 되돌아가는 것으로 정의합니다. 동물을 홈 케이지로 옮기기 전, 1분 동안 가상 홈 케이지에 둡니다.코호트 내의 모든 마우스에 대한 테스트를 마친 후 30분 동안 기다렸다가 모든 마우스에게 먹이와 물을 다시 제공합니다. 마지막으로 동물을 사육실로 복귀시킵니다. 코호트 내의 모든 마우스가 정의된 학습 기준에 도달하거나 미리 정해진 테스트 횟수가 완료될 때까지, 매 테스트일마다 동물당 1회의 시험을 수행하며 이 절차를 매일 밤 반복합니다.마우스가 두 번의 연속적인 시도에서 오류를 0회에서 1회까지만 범하며 과제를 수행할 수 있을 때 미로 학습이 완료된 것으로 분류합니다. 마우스들은 연속적인 시도에서 동일한 순서로 테스트됩니다. 이제 대표적인 행동 결과의 몇 가지 사례를 보여드리겠습니다.여기에서는 최대 15회의 시행으로 Lashley 미로 훈련을 받은 2개월령의 젊은 수컷 및 24개월령의 노화된 C57BL/6 및 CR 마우스의 데이터를 확인할 수 있습니다. 그림 2A에서 젊은 마우스는 평균 7.6일 만에 미로를 학습했습니다. 반면, 노화된 동물은 기준치에 도달하는 데 11.7일이 걸렸습니다.노화된 C 57, black six NCR R 마우스가 미로를 학습하는 데 더 오랜 시간이 걸리는 강한 경향이 있었습니다. 학습 지수는 그림 2B에서 계산된 바와 같이, 단일 시행 시 전체 이동 경로 세그먼트 대비 정확한 암 입성의 비율입니다. 두 연령 그룹 모두 첫 번째 시행에서 약 0.50의 비율을 보였습니다. 젊은 마우스와 노화된 마우스 모두 두 번째부터 네 번째 시행까지 학습 지수가 꾸준히 증가하는 양상을 보였으나, 두 그룹 간에 유의미한 차이는 없었습니다.배경 계통이 학습 행동에 미치는 영향을 조사한 연구 데이터입니다. 4~5개월령의 어린 수컷 C 57, black six NCR 마우스와 대조군 CD one 마우스를 비교하였습니다. C 57 black six 마우스는 그림 2의 어린 코호트와 동일한 마우스입니다.그림 3에서 CD-1 마우스는 4.5일 만에 Lashley 3 미로를 학습했습니다. 기준 도달에 소요된 일수에서 계통 간의 유의미한 차이는 없었습니다. 반면, 그림 3B의 학습 지수를 살펴보면 모든 동물이 첫 번째 시도에서는 우연히 미로를 통과했지만, CD-1 마우스가 과제를 더 빠르게 학습했음을 알 수 있습니다.이는 C 57 BL six 및 CR 마우스와 비교했을 때, CD one 마우스의 두 번째부터 네 번째 시행까지의 학습 지수가 통계적으로 유의미하게 증가한 것으로 나타납니다. 흥미롭게도, CD one 마우스가 기준점에 도달한 이후에도 미로 훈련을 계속하면 과잉 훈련을 나타내는 행동을 보입니다. 그림 4 A에서 5일 이후에 발생한 오류 횟수가 증가하는 것을 볼 수 있습니다. 5일째는 CD one 마우스가 기준점에 도달한 날이었습니다.CD one 마우스 또한 과제를 습득한 후 MACE 내부에서 더 많은 시간을 보냈으며, 이는 그림 4B에서 확인할 수 있습니다. 지금까지 마우스의 학습 및 기억력을 측정하기 위해 Lashley three maze를 사용하는 방법을 살펴보았습니다. 본 실험을 연구실에 도입하실 때는 마우스 계통마다 MAs 습득 속도가 다르고 과잉 훈련될 가능성이 있으므로, 사전 예비 실험을 수행하는 것이 필요할 수 있습니다. 시청해주셔서 감사하며, 향후 실험에서 좋은 결과 있으시길 바랍니다.

low-stress-route-learning-using-the-lashley-iii-maze-in-mice

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 마우스로 Barnes Maze를 사용하는 방법을 보여줍니다. Barnes Maze 테스트 절차는 연구자들이 반복적인 실험을 통해 실험실 동물의 공간 학습 및 기억을 평가하는 데 사용합니다.

Barnes Maze : 실험실 동물의 공간 학습 및 기억을 평가하는 방법

마른 땅 반스 미로 널리 응답 약간 혐오 자극에 공간 탐색 능력을 측정하는 데 사용됩니다. 연속 일 동안 대조군의 성능 (탈출 케이지를 찾습니다 예를 들어 지연 시간) 일반 학습과 기억을 나타내는 향상. 쥐와 생쥐의 차이는 여기에 자세히 설명되어 있습니다 장치 및 방법의 변경을 필요로.

크고 작은 설치류 모델 바네스 미로 테스트 전략

이 프로토콜의 목표는 설치류의 공간 인지를 조사하는 것입니다. double-H water maze는 새로운 테스트로, 학습, 통합 및 기억의 다양한 구성 요소와 기억 시스템의 상호 작용을 설명하는 데 특히 유용합니다.

더블 H 미로 : 설치류의 강력한 행동 학습에 대한 테스트 및 메모리

오픈 필드 타워 미로 (OFTM)은 쥐 공간 학습 (예를 들어, 장소 - 또는 응답 학습)의 행동 및 신경 메커니즘을 연구하기 위해 만든 미로이다. 이 미로는 자신의 연구에서 공간 학습을 조사하기 위해 비 스트레스 미로 패러다임을 사용하려는 실험자에 특히 유용합니다.

오픈 필드 타워 미로를 취하게하고 응답 학습

이 프로토콜 분석 결과 행동, 반 즈 미로 테스트에 따라, 어떻게 본능적 인 방어 연구 작업 공간 환경 지식에 의해 수정 됩니다.

생쥐의 본능적 인 방어 하는 동안 공간 메모리의 역할을 조사에 대 한 행동 분석 결과

이 프로토콜은 공간 학습 및 반 즈 미로 사용 하 여 메모리를 측정 합니다. 새로운 계 집 아이-에서-조 난 패러다임 쥐에서 prosocial 동작과 운동 활동을 평가 하는 데 사용 됩니다.

공간 학습 및 반 즈 미로 계 집 아이-에서-조 난 패러다임을 사용 하 여 마우스 Prosocial 동작 분석

Y-미로 장벽 작업은 보상을 위한 노력을 소비하는 동기를 검사하는 행동 테스트입니다. 여기에서는 만성 코르티코스테론과 사회적 패배 스트레스를 비롯한 여러 가지 잘 검증된 만성 스트레스와 여성에게 효과적인 새로운 만성 비차별적 사회적 패배 스트레스(CNSDS)를 테스트하는 데 대해 논의합니다.

만성 스트레스는 마우스의 Y-미로 장벽 작업에서 노력과 관련된 선택 행동을 변화시합니다.

현재 프로토콜은 설치류의 공간 탐색 및 행동 표현형을 테스트하기 위한 고유한 시스템인 재구성 가능한 미로를 설명합니다. 이 미로 시스템의 적응성은 단일 물리적 환경에서 다양한 실험을 실행할 수 있습니다. 구조적 재배열의 용이성은 신뢰할 수 있고 재현 가능한 실험 결과를 생성합니다.

재구성 가능한 미로 시스템을 활용하여 설치류에서 공간 탐색 테스트의 재현성 향상

이 기사에서는 Erasmus Ladder라는 장치를 사용하여 소근육 운동 성능에 대한 비침습적이고 자동화된 평가와 도전에 대한 적응 및 연상 운동 학습을 허용하는 프로토콜을 제시합니다. 작업 난이도를 적정하여 주요 정도에서 미묘한 정도에 이르는 운동 장애를 감지할 수 있습니다.

Erasmus Ladder를 사용한 생쥐의 미세 및 연상 운동 학습 모니터링

설치류에 대한 대부분의 행동 실험은 원래 쥐를 위해 고안되었습니다. 쥐와 생쥐의 행동 차이로 인해 때때로 생쥐에 대한 수정이 필요합니다. 우리는 생쥐의 공간 작업 기억을 테스트하여 작업 기억 작업 중 스트레스를 최소화하는 방법을 제시합니다.

반자동 8팔 방사형 미로에서 마우스를 위한 식욕을 유발하는 공간 작업 기억 작업, 미로에서 두려운 기억 연관성 감소

학습하세요 마우스에서 레쉴리 III 메이즈를 이용한 저스트레스 경로 학습 방법을. 이 기법은 노화된 마우스의 학습과 기억을 평가하는 데 유용하며, 시각적 단서 없이 인지 기능을 연구할 수 있습니다.

마우스에 레쉴리 III 메이즈를 사용하여 낮은 스트레스 루트 학습

더 많은 동영상 탐색