Name: 수확 정자와 마우스의 인공 수정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: 배우세요 마우스 인공 수정 기술을 통해 정자 추출 및 수정 과정을 익히세요. 이 방법은 발달 연구와 형질전환 연구에서 정확한 번식 시점이 필요한 연구자들에게 필수적인 기술입니다.

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나는 쥐 복제에 Peromyscus 유전자 증권 그의 귀중한 통찰력 센터, 인내, 그리고 지식의 마이크 듀이 감사하고 싶습니다.

인공 수정 인공 수정은 모든 여성이 임신 될 것을 가능성을 증가하는 대신 자연 matings의하는 데 사용됩니다. 이 남성은 매일 한 superovulated 여성 또는 estrous 것으로 알려진 여성 사용되었다. 성숙한 수컷 생쥐에서 caudae epididymides은 9 % 우유 정지에 배치 18 게이지 바늘로 열려 슬라이스되었습니다. 정자는 몇 분 동안 자유롭게 수영을 허용했고 다음 epididymides는 혼합물에서 찍은. 정지는 운동성이있는 정자와 합류에 대한 현미경으로 평가했다. 무딘 22 게이지 1 ½ 인치 긴 바늘은 정자를 관리하기 위해 사용되었습니다. 120 ° 벤드는 바늘 아래 4분의 3 일하는 방법에 대한 배치했다. 0.05mls 주입 - 주사 바늘을 구부와 0.025로 질 속에 삽입되었다. 조수가 적절한 위치에 여성을 보유하는 데 사용되는 경우, anesthetics의 사용은 필요하지 않습니다. 준비 <ol><li> 6 여성 4 수컷을 사용 </li><li> 동식물 사육장에서 수컷를 안락사 </li><li> 분유에서 9 %의 우유 약 5 ML 준비 </li><li> 작은 페트리 접시에 넣고 1.5 ML </li><li> epididymus 및 중이야의 deferens을 잘라 </li><li> 9 % 우유 1.5ml에 넣어 </li><li> 이 18 게이지 바늘을 사용하고, 바늘과 긴 절삭 운동을 사용하여 정자를 공개 epididymus 및 중이야의 deferens를 열려 슬라이스 </li><li> 조직 남은 꺼내와 현미경으로 정자를 확인 </li></ol> 주사 <ol><li> 120 ° 각도로 무딘 바늘을 사용하여 </li><li> 손으로 마우스를 잡고 혼합물을 주입. 보관 및 주입 한 사람이 불편하면, 두 사람이 사용할 수 있습니다. 이 절차에 영향을 미칠 수 방법을 알고 하나로서 더 마취제가 사용되지 않을 것입니다. </li><li> 여성 당 정자 / 우유 믹스 0.05ml를 사용하여 </li></ol> 수신자 여성 <ol><li> 받는 여성에서 질 얼룩 (이 시간에받는 여성은 proestrus / estrus에있을 DO) </li><li> 주 5 estrus에 도달하지 않은 여자는 아마 사용하지 말아야 </li></ol>

<table><tbody><tr><td>페트리 접시</td><td>도구</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-30</td><td></td></tr><tr><td>18G 바늘</td><td>도구</td><td>BD Biosciences</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>분유</td><td>시약</td><td>임의의 공급업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL 주사기</td><td>도구</td><td>National Scientific Company</td><td>S7510-1</td><td></td></tr><tr><td>포셉</td><td>도구</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5060</td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>도구</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;인산완충식염수</td><td>시약</td><td>Life Technologies의 GIBCO</td><td>14200-075</td><td></td></tr><tr><td>22G 뭉툭한 바늘</td><td>도구</td><td>번역할 텍스트를 제공해 주시기 바랍니다.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

수확 정자와 마우스의 인공 수정

Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice

속의 Peromyscus (사슴 마우스)의 설치류는 가장 널리 북미 포유류입니다. Peromyscus 종은 독성학, 역학, 생태, 행동, 그리고 유전자 연구를 포함한 연구의 다양한 사용됩니다. 여기 그들은 인공 수정의 데모에 대한 유용한 모델을 제공합니다. 여기에 표시된 것과 유사한 방법은 이전에 여러 사슴 마우스 연구에 사용되고 있고, 아직 자세한 프로토콜은 공개되지 않았습니다. 우리가 인공 수정의 기본 방법을 보여줍니다. 이 방법은 epididymis와 중이야의 deferens에서 정자를 분리 후, 설치류에서 testes를 추출 알아볼 수 있습니다. 이제 우유 혼합물의 성숙한 정자는, 배란의 시간에 여성의 생식 요로에 배치됩니다. 수정은 배아 개발의 타이밍에 대한 당일 0으로 계산됩니다. 배아는 다음 원하는 시간 지점에서 검색과 조작하실 수 있습니다. 인공 수정은 정확한 배아시기 얻기 위해 중요하거나 어려운 쥐 종 다양한에서 사용할 수 있습니다. 이 기술은 즉시 및 / 또는 어디에 짝짓기가 평가하는 어려운 친구되지 않을 수도 있습니다 종 또는 변종 (대부분의 Peromyscus 포함)에 대한 매우 중요합니다. 또한, 인공 수정은 개발 진행 및 / 또는 유전자 변형 작업을 매핑에 중 배아 개발을위한 정확한 타이밍을 제공합니다. 수정이 보장되어 있기 때문에 동물의 감소 번호를 사용할 수 있습니다. 이 방법은 Peromyscus 시스템을 발전에 필수적인되었으며, 희망뿐만 아니라 다른 사람을 도움이 될 것입니다.

이 프로토콜은 남성의 testes에서 정자를 추출 후 여성 쥐를 inseminating하는 방법을 보여줍니다. 정확한 시간 발달 연구에서뿐만 아니라 유전자 변형 작업 필요한 경우이 절차는 유용합니다.

Peromyscus 속의 설치류(사슴쥐)는 북미 원산의 포유류 중 가장 널리 분포하는 종입니다. Peromyscus 종들은 광범위한 연구 분야에서 활용되고 있습니다...

안녕하세요, 저는 캘리포니아 대학교 어바인 캠퍼스의 Paul Verana 박사님 연구실 소속 Amanda Dli입니다. 오늘은 인공 수정 절차를 시연하겠습니다. 이 과정은 수컷으로부터 정자를 추출한 다음, 그 정자를 배란기에 있는 암컷에게 주입하는 단계로 이루어집니다.이 방법을 사용하는 이유는 수컷과 암컷이 원하는 시점에 교배하지 않거나 아예 교배하지 않을 수 있기 때문입니다. 또한, 특정 마우스 라인이 매우 중요한 경우 냉동 정자를 사용하여 이 방법을 적용할 수 있습니다. 많은 매뉴얼이나 학술지에서 마우스 핸들링의 적절한 절차를 보여주지 않으므로, 이 시연 과정을 확인하는 것이 매우 중요합니다.마우스는 암컷에게 마취제를 사용하지 않고도 한 사람이 직접 핸들링하여 주입할 수 있습니다. 이는 암컷이 어떤 방식으로도 부상을 입지 않게 하여 수정이 최적의 경로로 이루어질 수 있도록 합니다. 사용할 해부 도구는 날카로운 포셉 두 세트와 날카로운 가위 한 쌍입니다.이를 통해 고환과 지방 조직 전반에서 최적의 분리물을 분리하는 데 사용할 것입니다. 해당 작업이 완료되면 핀셋을 사용하여 부고환을 분리하겠습니다. 정자를 암컷에게 전달하기 위해 9% 우유를 사용합니다.이는 지역 식료품점에서 구입한 분유로 만든 1 XPBS로 구성됩니다. 정자가 국소 부위에 머물 수 있도록 이를 작은 페트리 접시에 분리하여 넣습니다. 18 gauge 바늘을 사용하여 부고환을 절개함으로써 정자가 페트리 접시의 9% 우유 용액으로 헤엄쳐 나올 수 있게 합니다.정자와 9% 우유 용액의 혼합물을 끝이 뭉툭한 22 gauge 바늘을 사용하여 120도 각도로 흡입합니다. 이를 1 mL 주사기에 연결한 후, 암컷 땅콩쥐(peanut mouse) 또는 설치류인 Polyus에게 0.025 mL를 주입합니다. Para cus는 사실 북미에서 가장 흔한 내생 포유류이며, Polyus는 미국 남동부 플로리다 지역에서 발견됩니다.보시는 바와 같이, *Mus musculus*보다 눈이 약간 더 큽니다. 또한, 털색이 더 밝은데, 이는 플로리다 지역의 모래 언덕과 조화를 이루는 데 도움이 됩니다.저는 이 생쥐의 정소 부위 전체를 분리할 예정입니다. 이 생쥐는 1살인데, 사육 상태에서는 최대 4살까지 번식하는 것으로 알려져 있습니다. 또한, 사육 환경에서는 최대 7년까지 생존한 사례가 있어 실제 수명은 정확히 알려져 있지 않습니다.가장 먼저 수행할 작업은 이 수컷의 하단 부

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

여기 마우스 정자 cryopreservation을 위해 새로 개발된 I • Cryo 키트를 보여줍니다. 냉동 - 해동 정자와 두 개의 세포 단계의 배아 개발이 키트의 사용 5 마우스 종자에 지속적으로 개선되었다. 1.5 년 동안, 49 유전자 변형 마우스 라인 전 • Cryo 키트와 정자 cryopreservation에 의해 보관했다 나중에 성공적으로 IVF로 회복되었습니다.

전 · Cryo 키트를 사용하여 마우스 정자 Cryopreservation 및 복구

마우스 oocytes의 microinjection는 일반적인 transgenesis ( 즉, transgenes의 무작위 통합) 및 CRISPR 매개 유전자 타겟팅 모두에 일반적으로 사용됩니다. 이 프로토콜은 품질 관리 및 유전자 타이핑 전략에 중점을두고 마이크로 인젝션의 최신 개발 상황을 검토합니다.

난 모세포의 미세 주입을 통한 유전자 조작 마우스의 생성

정액 액 화는 정액 젤에서 해방 될 정자에 대 한 필요 합니다. 이 연구는 여성 재생산 지역 포스트 성교에서 정액을 수집 하 고 정액 액 화 시간을 측정 하기 위한 절차를 제공 합니다.

후에 쥐에 있는 정액 액의 측정 및 여성 재생산 지역에서 정액 짝짓기의 컬렉션

여기, 선물이 수정된 oocyte의 perivitelline 공간에서 lentiviral 벡터의 간단한 주입에 의해 transgene 통합 및 높은 효능과 설립자 유전자 변형 생쥐의 생산을 촉진 하는 프로토콜.

유전자 변형 마우스 생산을 중재 하는 lentiviral: 창시자의 직접적인 연구를 위한 간단 하 고 매우 효율적인 방법

여기에서, 우리는 1 세포 배아의 동결 보존을 위한 수정된 방법 뿐만 아니라 유전자 변형 마우스의 효율적인 생성을 위한 동결 해동 된 배아 및 전기 천공의 사용을 결합하는 프로토콜을 제시한다.

유전자 변형 마우스의 고효율 생산을 위한 동결 해동 배아 사용

자궁내막증의 많은 설치류 모델은 기술적 복잡성, 재현성 및/또는 면역 손상된 동물 또는 특수 리포터 마우스에 대한 필요성에 의해 제한됩니다. 우리는 독립적으로 검증 가능하고 객관적인 점수 매기기 시스템을 갖춘 실험용 마우스를 사용하여 병변 유도의 단순화 된 시스템을 제시하며, 난소 절제술 이나 생존 수술에 대한 요구 사항이 없습니다.

자연적으로 사이클링 마우스를 사용하는 자궁내막증의 신제닉 뮤린 모델

여기에서는 CRISPR RNP 접합체 전기천공(CRISPR-EZ)이라고 하는 유전자 변형 마우스의 효율적인 생성을 위한 간단한 기술을 설명합니다. 이 방법은 100%에 가까운 효율로 배아에 전기천공을 통해 편집 시약을 전달합니다. 이 프로토콜은 포유류 배아의 점 돌연변이, 작은 게놈 삽입 및 결실에 효과적입니다.

접합체의 CRISPR 전기천공에 의한 마우스의 효율적인 게놈 편집

제시된 자궁 경부 조작 방법은 정관 수술을받은 수컷과 암컷을 번식시킬 필요없이 생쥐에서 가임신을 유도 할 수 있습니다. 비수술적 배아 이식과 비수술적 인공수정의 성공을 위해서는 가임신유도가 필요하며, 이 두 가지 모두 제시되어 있다.

비수술적 배아 이식 또는 인공 수정 전에 정관 수술을 받은 수컷 없이 암컷 마우스에서 가임신을 유도하는 행위

여기에서는 마우스에서 ROSI(round spermatid injection)를 수행하는 방법, 유망한 임상 응용 기술을 가진 기술이며 배아 발달의 기전을 조사하기 위한 유용성을 소개합니다.

마우스 라운드 Spermatid 주입

여기에서는 세포질 내 정자 주입(ICSI)-배아 이식(ET) 마우스 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시하여 ICSI에 기인할 수 있는 포도당 대사의 연령 관련 변화를 관찰하고 인간 발달에 대한 잠재적인 장기적 영향에 대한 통찰력을 제공합니다.

세포질 내 정자 주입 후 생쥐 자손의 혈당 모니터링

배우세요 마우스 인공 수정 기술을 통해 정자 추출 및 수정 과정을 익히세요. 이 방법은 발달 연구와 형질전환 연구에서 정확한 번식 시점이 필요한 연구자들에게 필수적인 기술입니다.

수확 정자와 마우스의 인공 수정

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