Name: 내유 상피 이식 절차 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-10T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: 학습하세요 유방 상피 채취, 지방 패드 제거, 이식 기법을 통해 생쥐의 유선 발달을 연구하는 방법을. 이 실험은 유방 종양 발생 메커니즘 규명에 활용됩니다.

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1. 이식 상피의 준비 신선 또는 냉동 기증자 상피 조직은 해제 지방 패드로 이식하지만, 냉동 기증자 상피의 사전 준비 이식 효율에 최소한의 감소 (&gt; 85 % 효율)가 더 편리합니다 수 있습니다. 다음과 같이 냉동 기증 상피의 준비를 위해 프로토콜은 다음과 같습니다 : 기증자 이식 상피를 준비하기 전에, cryovials에 1ml에 대한 상피와 나누어지는에 대한 동결 미디어를 준비합니다. 필요한 때까지 이것은 최대 6 개월까지 4 ° C에 저장할 수 있습니다. 고정 미디어 HEPES 및 NaHCO 3 10 % 태아 소 혈청 (FBS)와 10 %의 디메틸 sulphoxide (DMSO)와 버퍼 DMEM/F12 미디어를 포함하고 있습니다. 최근 euthanized 여성 마우스 내유 상피를 수확. <ol><li> 70 % EtOH로 마우스를 씻으십시오. </li><li> 복부 뱃속의 장액의 세포막을 관통하지 않고 치골에서 흉골에 걸쳐 신체의 벽을 통해 중간 화살 절단하십시오. 각 뒷다리 다리 (그림 1) 방향으로 치골의 초기 절개에서 경사 절단하십시오. </li><li> 거리에 시체 벽 아래쪽에있는 근막에 첨부된 5 일 사타구니 유선을 노출하는 장액의 세포막에서 몸을 벽 껍질. 이것을 달성하는 가장 좋은 방법은 아니 피어스 배면의 뱃속에주의하고, 곡선 포셉의 쌍 곡선 부분과 함께주의 깊게 장액의 세포막을 쥐고 것입니다. 동시에, 직선 톱니 모양의 집게와 외피의 절단 가장자리를 파악하고 거리에 장액의 세포막에서 몸을 벽을 가져옵니다. </li><li> 유선 내에 림프 노드를 식별합니다. 림프절은 유선 세 저명한 혈관의 교차로에 위치하고 있으며 지방 패드 (그림 2) 내에서 고밀도 결절로 느낄 수 있습니다. 눈 가위, 노드를 둘러싼 따다 지방 조직의 쌍 끝으로. 피부의 표피쪽에 포어 손가락으로, 지방 패드의 노드 밖 인상과 곡선 포셉 한 쌍의로를 공략 압력을 적용합니다. 림프 노드를 폐기하십시오. </li><li> 피부의 여백을 누른 상태, 곡선 포셉의 쌍 곡선 가장자리와 점점 거리 신체 벽에서 지방 패드 껍질 내유 지방 패드를 파악. 한 조각의 전체 유선을 제거로 마우스 등의 표면을 향해 지방 패드의 방향을 따르십시오. </li><li> 멸균 플라스틱 절단 블록에 유선 놔. 이 촉촉한 유지하는 선 (腺)의 표면에, 200 μl에 대한 미디어의 작은 금액을 추가합니다. 신선한 면도날로 1mm의 조각에 선 (腺)을 말하다. 네 부분으로 다진 선을 나누어 집게로 고정 매체 네 가지 cryovials 사이에 배포할 수 있습니다. 외부 구획에 이소 프로필 알코올의 250ml 가진 Nalgene '미스터 프로 스티 셀 냉동실에 cryovials 넣어. 24 시간 동안 -70 ° C의 냉동고에 Nalgene 냉장고 놔. 필요한 때까지 액체 질소에 내유 조각 냉동 튜브를 저장 이식은. 각 cryovial은 4-8 호스트 마우스의 해제 지방 패드에 이식하기에 충분한 유선 조각이 포함됩니다. </li></ol> 2. 이식 세포의 준비 우리 연구실은 불후의 내유 상피 세포 라인, 내유 종양 세포 라인 또는 마우스에 기본 내유 세포 지방 패드를 해제 포함한 다양한 셀 유형을 이식했다. 다음과 같이 이식을위한 쉼표 - D 세포의 준비를 위해 프로토콜은 다음과 같습니다 : <ol><li> 쉼표 - D 세포는 DMEM을 포함하는 일반 MECL 미디어 양식입니다 F12는 2퍼센트 성인 소 혈청 (ABS), mEGF, 인슐린, Antimycotic / 항생제 (AB / AM)과 보완. </li><li> 하베스트 쉼표 - D 세포 세포 85 % -90 %의 합류 때. </li><li> 펠렛 세포 5 분 동안 1200rpm에서 세포 현탁액을 원심 분리기. 신선한 MECL 미디어 세포를 Resuspend 5 × 10 6 / ML에 세포 농도를 조정합니다. </li></ol> 기본 내유 세포의 이식은 기본 내유 상피 세포는 마우스 5 일 내유 땀샘에서 기계 및 효소 분해를 통해 고립됩니다. F12 미디어를하여 원하는 농도 조정, 보통 5 × 10 6 / ML : 세포 DMEM에 resuspended 있습니다. 3. 마우스 내유 지방 패드를 비우는 방법에 대한 표준 절차 <ol><li> 삼주 이전 호스트 마우스를 마취. 내유 ductal 성장이 시작되지 않았음을 보장하기 위해 &lt;12g 아르 생쥐를 선택합니다. 우리는 2,2,2 - tribromoethanol의 체중 200mg/kg 사용합니다. </li><li> 마우스 anesthetized 후 복부가 조롱이다 있도록 단단히 수술 무대에 뻗은 팔다리와 복부 쪽 마우스를 구속. 이전 수술로 진통제를 관리, bupivacaine (&lt;1mg/kg) 또는 buprenorphine (0.05mg/kg) 중 하나는 subcutaneously. </li><li> 몇 mm 골반 위 포셉로 피부를 파악하고 복부에서 올려 . 니프는 가위로 피부와 치골에서 흉골에 걸쳐 신체의 벽을 통해 중간 화살 몫을 할 수 있습니다. 복부 뱃속의 피어스 장액의 세포막은하지 마십시오. 상처 클립은 소변을 마우스의 능력에 방해가되지 않도록하여 초기 절개도 요도에 가까이하지 마십시오. </li><li> 초기 절개에서 각 뒷다리 다리를 향해 골반에 걸쳐 중반 선에서 피부를 통해서도 경사 인하합니다. </li><li> 부드럽게 장액의 세포막을 파악하기 위해 곡선 포셉의 곡선 영역을 사용합니다. 피부의 상처 여백을 파악하고 거리에 장액의 세포막에서 몸을 벽을 끌어와 본문 벽 아래쪽에있는 근막에있는 5 일 사타구니 유선을 폭로하기 위해 조직 집게를 사용하십시오. </li><li> 젖꼭지, 노드와 노드 (그림 2)로 이어지는이 동맥을 부식 </li><li> 네 번째와 다섯째 분비를 분리합니다. 6 회 선의 안쪽으로의 성장을 방지하기 위해 다섯 번째 선 (腺)의 여백을 부식. </li><li> 노드의 (유두쪽으로 쪽) 그냥 가위로 복부 지방 패드를 통해 절단에 의해 네 번째 유선의 지방 패드를 나누십시오. 단단히 지방 패드의 복부 부분을 파악하고 한 조각의 몸 벽에서 멀리 잡아 곡선 집게를 사용하십시오. 두 슬라이드 사이에 지방 패드의 복부 부분을 누르면 Carnoy의 정착액을 포함하는 유리의 조직​​학 얼룩 요리에 넣어. 이 조직은 고정 및 해제 마진 (그림 3)를 확인하기 위해 카르민 명반 솔루션 나중에 물들일 것이다. 곡선 포셉과 유선의 모든 흔적을 제거하는 지방 패드의 제거 부분의 지역 주변의 근막를 청소합니다. </li></ol> 4. 지방 패드를 비우는 방법에 대한 대체 "아끼며 사용하는 방법 하나는 마우스 내유 지방 패드를 비우는 방법에 대한 표준 절차와 능력이 될 후에, 그들은 브릴 외. (2008) 2 개발한 적은 침입 살려주는 절차를 시도하는 것이 좋습니다. <ol><li> 표준 절차로 마우스를 준비합니다. </li><li> 네번째 사타구니 유선의 젖꼭지를 잡고 가위 끝에있는 유두 주변 3-5mm의 둘레 서클 컷. </li><li> 피부의 상처 부분을 분리하고 구멍을 통해 네 번째 사타구니 유선을 그려 멀리 떨어진 신체의 젖꼭지를 당겨. </li><li> 노드를 식별합니다. 구멍을 통해 노드와 6 일 유선을 부식하는 소작을 사용합니다. </li><li> 그냥 노드 앞에 5 일 유선의 가장 피상적인 부분을 잘라 분리. 피부 및 내유 지방 패드가 포함된 상피 부분의 젖꼭지, 원형 지역은 한 조각으로 제거됩니다. </li></ol> 5. 조직 / 세포 이식 <ol><li> 이식 상피 조각 들어, 서리를 없애다 상피의 cryovial와 DMSO를 희석하기 위해 새로운 미디어를 포함하는 페트리 접시에 상피 조각을 전송합니다. 새로운 상피에 대한 가위 팁으로 지워 지방 패드의 작은 구멍이나 주머니를 확인하십시오. 바늘 집게와 포켓에 기증 상피의 1mm의 조각을 넣어. 조직이 자리에 남아 있도록 바늘 집게를 철회 등 조직 포셉과 닫힌 주머니를 잡아. </li><li> 이식 세포의 경우, 22s 게이지 바늘로 50μl 해밀턴 주사기를 사용하여 각 지방 패드로 미디어 10 μl의 세포를 주입 50000. </li></ol> 6. 휴관일 / 마우스의 리바이벌 <ol><li> 폐쇄 피부를 정렬. 피부의 여백을 반대 이해, 포셉 그들을 함께 보유하고있는 복부 뱃속의 장액의 세포막에서 멀리 리프트와 상처에 클립 닫습니다. 일반적으로, 그것은 중간 화살 절개 및 표준 절차에 대한 각각의 경사 절개 하나의 클립을 닫습니다 두 클립을 사용해야합니다. 요도를 방해하지 마십시오. 그것은 치료와 함께 중간 화살과 경사 incisions의 교차로에서 피부에 격차를 가까이 할 수 있습니다. 살려주 절차는 각 측면에 대해 하나 상처 클립이 필요합니다. </li><li> . 그녀의 새장에 마우스를 놓고 마우스가 부활 때까지 가열 램프 아래에있는 새장을 유지. </li><li> 상처 클립 2 주 후에 제거되어야합니다. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 절개 패턴의 데모. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 림프절, 혈관, 유두 및 내생 상피의 위치. 위치에 표시를 부식. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 전체 마운트는 내생 상피는 동그라미 내의 지역 제한 때문에 마진이 ' "분명합니다 보여줍니다. 7. 대표 결과 _r.jpg "고도 ="그림 4 "/&gt; 그림 4. 지워집 여백을 보여주는 삼주 이전 마우스에서 제거 지방 패드의 전체 탑재합니다. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig2_r.jpg" alt="그림 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 5"> 그림 5. 내생 내유 상피에서 벗어날 지방 패드를 보여주는 10주 된 마우스에서 전체 탑재합니다. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig3_r.jpg" alt="그림 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 6"> 그림 6. Hematoxylin 및 10주 된 마우스에서 지워집 지방 패드의 eosin 스테인드 섹션을 참조하십시오. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig4_r.jpg" alt="그림 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 7"> 그림 7. 이식 상피에서 개발된 일반 내유 ductal 나무를 보여주는 10주 된 마우스에서 전체 탑재합니다. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig5_r.jpg" alt="그림 8" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 8"> 그림 8. Hematoxylin 및 이식 상피에서 개발 내유 관의 eosin 스테인드 섹션을 참조하십시오. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig6_r.jpg" alt="그림 9" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 9"> 이식 상피에서 개발한 내유 종양의 그림 9. Hematoxylin 및 eosin 스테인드 섹션을 참조하십시오.

<ol><li>DeOme, K. B., Faulkin, L. J. Jr, Bern, H. A., Blair, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+mammary+tumors+from+hyperplastic+alveolar+nodules+transplanted+into+gland-free+mammary+fat+pads+of+female+C3H+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Development of mammary tumors from hyperplastic alveolar nodules transplanted into gland-free mammary fat pads of female C3H mice.</a> Cancer Res. 19, 515-520 (1959).</li>
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</ol>

이 보고서에서는, 우리는 내유 상피 이식을위한 준비에서 마우스 내유 지방 패드를 청소 두 가지 다른 방법을 제시한다. 표준 절차는 DeOme 외 의해 1959 년 개발 이후 사용되었습니다. 1보다 침략 동안 유선의 구조와 방향을 쉽게 볼되기 때문에, 표준 방법은 초보자 훈련에 대한 선호하는 방법입니다. 그러나, 살려주는 프로 시저가 있기 때문에 몇 가지 장점 2의 경험 많은 외과 의사에 의해 선호 수 있습니다. 가장 중요한 살려주는 절차가 덜 침략적이며, 적은 시간이 필요하며 흡입 마취의 간단한 기간을 사용하여 수행할 수 있습니다. 이것은 마우스에 대한 복구 기간을 줄일 수 있습니다. 살려주 절차는 상피의 성공적인 허가를 보장하는 젊은 생쥐 (&lt;21일)에서 수행할 수 있습니다. 또한, 실험 전이에 대한 마우스의 지속적인 장기 관찰을 허용 아직 기본 종양을 제거하는 반복 수술이 필요한 경우 유리한 수 있습니다 수술 후 조직 유착의 감소가 있습니다. <p clas...

내유 상피 이식 절차

Mammary Epithelial Transplant Procedure

이 문서에서는 설명하고 DeOme 킬로바이트 외 개발한 지방 패드 통관 절차를 비교합니다. 1 브릴 B 외 개발한 살려주는 절차를. 2, 내유 상피 이식 절차가옵니다. 그것은 내유 상피의 중요한 개발 사춘기 전까지는 발생하지 않는다는 사실을 활용하기 때문에 내유 이식 절차는 널리 내유 생물학 자에 의해 사용됩니다. 연령 3 주가, 내유 상피 나무의 성장은 유두 부근에 갇혀 있으며, 지방 패드 내유 상피의 대부분 찾아볼 수 있지만, 나이 7주하여 상피 ductal 나무가 전체 지방 패드에 걸쳐 확장됩니다. 따라서 상피를 포함하는 지방 패드의이 작은 부분, 유두 및 림프 노드 사이의 지역은, 시대의 삼주에서 제거하면, 내생 상피는 내유 지방 패드를 삽입하지 않습니다 그리고 지방 패드는 &quot;해제로 설명되어 있습니다 &quot;. 이때, 다른 소스에서 내유 상피는 그것이 지방 패드 밖으로 내유 ductal 나무를 확장할 수있는 가능성이 해제 지방 패드에 이식 수 있습니다. 이 절차는 결정, 4,5 제한 희석에 세포를 이식하여 내유 줄기 세포의 식별에, 전체 동물 3 유전자형의 혼란함을 주죠 효과없이 유전자 변형 내유 상피 조직의 종양 표현형의 심사 등 많은 실험 모델로 이용되어 hyperplastic nodules는 내유 종양 6을 진행하고, 내유 상피 7,8의 행동에 대한 사전 호르몬 노출의 효과를 평가한다면. 3 주 된 호스트 마우스, anesthetized 아르 청소하고 수술 무대에서 구속. 중간 화살 절개는 피부를 통해서도했지만, 치골에서 흉골을 연장하지 복막. 것입니다 경사 인하는 각 다리 방향으로 골반에 걸쳐 중반 화살 절개부터 피부를 통해서 만들어집니다. 피부는 4 사타구니 유선을 폭로하기 위해 멀리 복막에서 가져온 것입니다. 지방 패드가 림프절로 지방 패드 조직 앞쪽에를 제거하여 지워집니다. 상피 조각이나 상피 세포가 남아있는 해제 지방 패드로 이식되고 마우스가 닫힙니다.

이 문서 DeOme 킬로바이트 개발한 절차를 보여줍니다<em&gt; 외.</em&gt; (1959)와 브릴 B 개발한 아끼며 사용하는 절차<em&gt; 외.</em&gt; (2008) 내유 조각, 내유 상피 세포, 또는 내유 종양 세포 이식을위한 준비 사춘기 마우스 4 사타구니 내유 지방 패드를 청소하십시오.

본 논문은 DeOme KB 등이 개발한 지방 패드 제거 절차와 Brill B 등이 개발한 보존 절차를 설명하고 비교하며, ...

이 영상은 3주령 생쥐에서 유선 상피를 수확하고, 유선 지방 패드를 제거하며, 외인성 상피를 이식하여 유선 발달을 연구하는 절차를 보여줍니다. 이때 유선 상피 나무의 성장은 젖꼭지 주변으로 제한되며, 지방 패드에는 유선 상피가 거의 없습니다. 생쥐가 성장함에 따라 상피 나무는 지방 패드를 통해 성장합니다.생후 7주가 되면 상피 도관망이 지방 패드 전체로 확장됩니다. 생후 3주에 상피가 포함된 지방 패드의 일부분을 제거하면, 내인성 상피는 메모리 지방 패드에 다시 정착하지 못하며, 이 지방 패드는 '제거된(cleared)' 상태로 기술되고 성숙기까지 그 상태를 유지하게 됩니다. 그러나 이식된 공여자의 메모리 상피 또는 상피 세포는 제거된 수용체 전체에 메모리 도관망을 확장시킬 잠재력을 가지고 있습니다.지방 패드. 이후 조직학을 이용하여 형질전환 동물 또는 실험 동물로부터 이식된 조직 내 메모리 발달의 진행 과정을 모니터링할 수 있습니다. 안녕하세요, 저는 매사추세츠 대학교 수의 및 동물과학과의 조셉 제리입니다.안녕하세요, 제 이름은 Karen Dunphy입니다. 저는 Jerry Lab에서 근무하고 있습니다. 오늘은 유선 상피 이식을 진행해 보겠습니다.우리는 이 절차를 통해 유선 종양 발생의 분자 및 세포 기반과 유방암 모델을 연구합니다. 이제 시작해 보겠습니다. 이식 절차의 첫 번째 단계는 공여 마우스로부터 유선 상피 조직을 채취하는 것입니다.최근 안락사시킨 암컷 생쥐를 70% ethanol로 세척하되, 복강의 SRU 막을 찌르지 않도록 주의하며 시작합니다. 치골에서 흉골까지 이어지도록 피부를 따라 정중선 절개를 실시합니다. 그런 다음 치골의 초기 절개 부위에서 각 뒷다리 방향으로 사선 절개를 합니다.곡선 핀셋을 사용하여 SRU 막을 잡습니다. 그런 다음 직선 톱니 핀셋을 사용하여 피부의 절단된 가장자리를 잡고 체벽을 S cs 막에서 조심스럽게 벗겨냅니다.체벽 아래쪽에 부착된 네 번째 서혜부 메모리 샘(inguinal memory gland)을 노출시키려면, 메모리 샘 내의 림프절이 메모리 샘 내 세 개의 주요 혈관이 교차하는 지점에 위치하며 지방 패드 내에서 조밀한 결절로 느껴진다는 점을 이용합니다. 안과용 가위의 끝부분으로 림프절 주변의 지방 조직을 집어 떼어냅니다. 그런 다음 검지 손가락을 피부의 표피 쪽에 대고 압력을 가해 결절을 지방 패드 밖으로 들어 올린 후 집어내어 분리합니다.곡선 핀셋을 사용하여 림프절을 제거합니다. 이제 피부의 가장자리를 잡은 상태에서, 곡선 핀셋의 곡선 부위로 지방 패드(memory fat pad)를 잡고 체벽에서 지방 패드를 서서히 벗겨냅니다. 지방 패드가 마우스의 등쪽 표면으로 향하는 방향을 따라 유선(memory gland) 전체를 한 덩어리로 제거합니다.멸균된 플라스틱 절단 블록 위에 기억샘(memory gland)을 올리고, 샘 표면을 촉촉하게 유지하기 위해 약 200 µL의 소량의 배지를 가합니다. 그런 다음 새 면도날을 사용하여 기억샘을 1 mm 크기로 잘게 다집니다. 다진 기억샘을 네 부분으로 나눕니다.그 후 핀셋을 사용하여 동결 보존액이 담긴 4개의 크라이오 바이알(cryo vial)에 나누어 분배합니다. 외부 구획에 isopropyl alcohol 250 milliliters가 들어 있는 Nalgene 세포 냉동기에 크라이오 바이알을 넣습니다. 그런 다음 세포 냉동기를 -70 °C에서 24시간 동안 보관합니다.24시간 후, 냉동된 기억 파편 바이알을 이식에 필요할 때까지 액체 질소에 보관하십시오. 각 cryo 바이알에는 4~8마리의 수용 마우스 지방 패드 제거 부위에 이식할 수 있는 충분한 양의 기억 샘 파편이 들어 있습니다. 3주령 수용 마우스의 발가락 꼬집기(toe pinch)를 통해 마취 깊이를 확인한 후, 복부가 팽팽해지도록 수술대 위에서 마우스의 사지를 뻗게 하여 복부 쪽이 위로 향하게끔 단단히 고정하십시오.수술 전 진통제인 bupivacaine 또는 buprenorphine을 피하로 투여해야 합니다. 포셉을 사용하여 알코올과 요오드 기반 세정제로 수술 부위를 소독하십시오. 골반 위 몇 mm 지점의 피부를 잡고 복부에서 들어 올리십시오.피부를 조심스럽게 집어 올리되, 초기 절개 부위가 요도에 너무 가깝지 않게 주의하십시오. 요도 근처에 상처 폐쇄 클립을 배치하면 생쥐의 배뇨 능력에 방해가 될 수 있습니다. 그다음, SRU 막을 뚫지 않도록 주의하면서 치골에서 흉골까지 이어지는 피부의 정중면 절개를 수행합니다.이제 첫 절개 부위로부터 정중선에서 골반을 가로질러 각 뒷다리 방향으로 피부를 사선으로 절개합니다. 곡선 핀셋을 사용하여 복벽의 S ceros 막을 조심스럽게 잡습니다. 그런 다음 조직 핀셋으로 절개된 피부 가장자리를 잡고, ceros 막에서 복벽을 들어 올립니다.네 번째 서혜부 기억샘을 노출시키기 위해, 네 번째 기억샘을 확인합니다. 다섯 번째 기억샘을 확인하고, 유두 결절과 해당 결절로 이어지는 두 개의 동맥을 소작합니다. 네 번째와 다섯 번째 샘을 분리한 후, 다섯 번째 샘의 가장자리를 소작합니다.다음으로, 가위를 사용하여 림프절 바로 복측의 지방 패드를 가로질러 절단하여 네 번째 기억샘의 지방 패드를 분리합니다. 곡선 핀셋을 사용하여 지방 패드의 복측 부분을 단단히 잡고 체벽에서 떼어냅니다. 절제된 조직을 라벨이 부착된 두 개의 슬라이드 사이에 넣어 한 덩어리로 누른 뒤, 카노이즈(Carnoy's) 고정액에 고정하는 것이 좋습니다.이후 조직을 염색하고 마운팅하여 투명화된 마진(cleared margins)을 평가할 수 있습니다. 포셉을 사용하여 지방 패드의 제거된 부위 주변 영역에서 기억샘(memory gland)의 모든 흔적을 제거합니다. 이제 동물은 조직 또는 세포 이식 준비가 완료되었습니다.신선하거나 급속 냉동된 공여자 상피 조직을 제거된 지방 패드에 이식할 수 있습니다. 또는 불멸화된 기억 상피 세포주, 기억 종양 세포주 또는 일차 세포를 이식할 수 있습니다. 세포 준비에 대한 자세한 내용은 상피 조각 이식을 위해 제공되는 서면 프로토콜을 참조하십시오.이 영상은 상피세포가 담긴 cryo vial을 해동하고 파편들을 신선한 배지가 담긴 페트리 접시에 옮기는 것으로 시작합니다. 가위를 사용하여 수혜 마우스의 지방 패드 상피의 투명해진 부위에 포켓을 만들어 DMSO를 희석합니다. 그런 다음 니들 포셉을 사용하여 1 mm 크기의 공여 상피 조각을 해당 포켓에 배치합니다.필요한 경우, 조직 포셉으로 포켓을 닫은 채 유지하고 니들 포셉을 제거하여 조직이 제자리에 머물게 합니다. 피부의 대립하는 가장자리를 잡습니다. 포셉을 사용하여 이들을 함께 고정합니다.복측 체강의 장막에서 이를 들어 올린 후 상처 클립으로 폐쇄합니다. 정중시상 절개 부위는 클립 2개로, 각 사선 절개 부위는 클립 1개로 폐쇄합니다. 필요한 경우 요도가 폐쇄되지 않도록 주의하십시오.중앙 시상 절개선과 사선 절개선이 교차하는 지점의 피부 틈을 봉합사로 폐쇄합니다. 마우스를 케이지에 넣고 마우스가 회복될 때까지 가열 램프 아래에 둡니다. 상처 클립은 2주 후에 제거해야 합니다.다음 슬라이드들은 급이 패드 제거 및 상피 이식 후 숙주 기억샘에서 관찰될 수 있는 대표적인 이미지들을 보여주며, 이 이미지는 3주령 생쥐에서 제거된 내인성 기억 상피를 보여줍니다. 샘 제거 과정에서 절단면의 투명한 경계 부분을 확인하십시오. 절단된 경계를 평가하기 위해 각 절차 후에 이와 같은 홀 마운트 표본을 준비해야 합니다.이 이미지는 투명화 절차 7주 후 투명해진 마우스 지방 패드를 보여줍니다. 지방 패드 전체에 기억 상피, 헤마틴 및 아신이 없다는 점에 유의하십시오. 투명화 절차 7주 후 투명해진 지방 패드의 염색 결과 또한 샘에 기억 상피가 없음을 보여줍니다.10주령 생쥐의 공여체 기억 상피가 이식된 투명화 지방 패드의 대표적인 전체 마운트 이미지가 제시되어 있습니다. 이식된 상피가 정상적인 상피 도관 트리, 헤마틴 및 소엽을 형성했음에 유의하십시오. 투명화된 지방 패드와 기억 상피의 염색 결과입니다.동일 연령에서의 상피 이식 결과, 외성 상피로부터 상피관이 정상적으로 생성됨을 확인할 수 있습니다. 여기에서는 투명화된 지방패드를 hematoxylin 및 eosin으로 염색하여, 기억 종양으로 발전한 상피 이식편을 보여줍니다. 지금까지 유선 상피를 채취하고 유선 상피 이식을 수행하는 방법을 설명드렸습니다.이 절차를 수행할 때, 결절과 유두를 소작하기 위해 네 번째와 다섯 번째 유선 사이의 연결 부위를 절단하고, 내인성 상피 조직의 모든 흔적을 제거하는 것이 중요합니다. 제거된 지방 패드 내로 내인성 상피가 성장할 가능성이 없도록 해야 합니다. 또한, 절제 마진이 충분히 확보되었는지 확인하기 위해 제거된 유선 부위 전체를 수집하는 것이 권장됩니다.이상입니다. 시청해 주셔서 감사드리며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 보고서에서, 우리는 분리 시스템 및 마우스 유선에서 문화 기증자 세포를 증명하고, orthotopically stromal 분석받는 마우스에서 이러한 세포를 이식 : 내유 종양 개발하는 동안 상피 상호 작용합니다.

C57BL/6J 마우스의 Stromal 셀 및 암종 세포 이식 내유

시간 경과 영상은 특정 행동 매개 변수 독특한 유전 적 병변 사이에 상관 관계가 있는지 확인하기 위해 유방암 위험 유전자 변형 마우스 모델에서 파생 된 기본 preneoplastic 유방 상피 세포의 행동을 평가하는 데 사용됩니다.

기본 Preneoplastic 유방 상피 세포의 시간 경과 영상은 유방암의 유전자 변형 마우스 모델에서 파생

유방암 전이를 목표로하는 보조 요법을 평가하는 전임상 모델이 부족합니다. 이를 해결하기 위해, 우리는 de novo 폐 유방 선암 전이의 마우스 모델을 개발했는데, adjuvant setting (원발 종양의 수술 후 절제술)에서 투여 된 치료법은 이전에 파종 된 폐 전이에 영향을 미치는 효능을 평가할 수 있습니다.

전임상 마우스 모델에 대한 수술 절차 및 방법론 드 노보 유방암 전이

이 프로토콜은 non-adherent / mesenchymal 유방 상피 세포에서 세포 외 소포 (EVs) / 엑소 좀을 정화, 정량화 및 특성화하고 유선 형성능을 내유성 상피 세포로 전달하는 방법을 설명합니다. 줄기 모양의 유방 상피 세포로부터 유래 된 EVs / 엑소 좀은이 세포 특성을 EVs / 엑소 좀을 섭취하는 세포로 전달할 수있다.

extracellular vesicles / exosomes를 통한 유방 기초 상피 세포와 유방 Luminal 세포 사이 유선 형성 능력의 이전

이 연구는 현미경 관찰을위한 whole-mount tissue preparation에 이어 유방 지방 패드 이식을 통한 혈관 내피 줄기 세포 (VESCs)의 증식, 분화 및 혈관 형성 가능성을 평가하는 새로운 접근법을 보여줍니다. 생체 내에서 VESC의 행동을 조사하기위한 혈통 추적 전략도 제시된다.

혈관 내피 줄기 세포의 혈관 생성을 시각화하기위한 유방 팻 패드 이식 기술

이 프로토콜의 목표는 마우스 유방 땀샘으로 Cre 발현 아데노바이러스의 자궁 내 주입에 기초한 새로운 유방암 모델링 접근을 기술하는 것입니다. 이 접근은 세포 모형 및 기관 특정 조작을 시간적으로 통제한 방식으로 oncogenic 사건을 둘 다 허용합니다.

마우스 유방 동맥에 Cre 발현 아데노 바이러스의 경막 주사를 통해 유방암 모델링

본 문서는 수용자 동물의 중간 절단 된 흰색 지방 패드로 기증자 쥐 유방 상피 세포를 이식하는 이식 방법을 설명합니다. 이 방법은 유방 상피 발달에 호스트 및/또는 기증자 효력을 검토하기 위하여 이용될 수 있고 사전 정리를 위한 필요를 제거하여, 이 기술의 유용성을 확장합니다.

쥐 유방 상피 세포 이식에 갑피 흰 지방 패드

환자 유래 제노이식(PDX) 모델과 이식 가능한 유전자 조작 마우스 모델은 인체 질환을 충실히 재구성하고 기본 및 번역 형 유방암 연구를 위한 선호 모델입니다. 여기서, 종양 생물학을 연구하고 약물 반응을 평가하기 위해 유방 지방 패드로 유방 종양 단편을 정형전으로 이식하는 방법이 설명된다.

유방암을 위한 전임상 모형으로 유방 종양의 정형소 이식

여기에 설명된 생체내 영상화 방법은 대사 보조인자 NAD(P)H로부터의 콜라겐 초고조파 생성 및 내인성 형광을 이용하여 표지되지 않은 종양 미세환경을 종양, 기질 및 혈관 구획으로 비침습적으로 분절하여 4D 생체내 영상의 심층 분석을 한다.

유방 종양 미세환경의 생체 내 이미징을 위한 라벨 없는 세분화 접근법

여기에서는 단일 겨드랑이 절개를 통한 내시경적 양측 유두 보존 유방 절제술과 즉각적인 가슴 보형물 기반 유방 재건술을 위한 자세한 수술 절차를 제시합니다. 이 시술은 유방암 환자에게 안전하고 실행 가능한 방법입니다.

즉각적인 Pre-pectoral 임플란트 기반 유방 재건을 통한 단일 겨드랑이 절개를 통한 내시경적 양측 유두 보존 유방 절제술

본 연구는 소량의 유방 조직에서 주요 인간 유방 상피 세포(HMEC)를 효율적으로 분리하고 성장시키기 위한 더 쉽고 시간을 절약하며 경제적인 프로토콜을 보고합니다. 이 프로토콜은 실험실 및 임상 응용 분야 모두를 위한 1차 HMEC를 신속하게 생산하는 데 적합합니다.

Isolation and Culture of primary human mammary epithelial cells(원발성 인간 유방 상피세포의 분리 및 배양)

학습하세요 유방 상피 채취, 지방 패드 제거, 이식 기법을 통해 생쥐의 유선 발달을 연구하는 방법을. 이 실험은 유방 종양 발생 메커니즘 규명에 활용됩니다.

내유 상피 이식 절차

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