Name: 모델 생물체 유전자로 사용하기 위해 Medaka의 태아의 Microinjection (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-22T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 25 s
Description: 배우세요 메다카 태아의 미세주사 기법을 통해 유전자 단백질 기능을 분석하는 방법을. 1세포기 배아에 핵산과 추적자를 주사하여 생체내 유전자 기능을 연구할 수 있습니다.

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1. 교미하고 알을 수집 <ol><li> 여성과 남성 medaka 쉽게 항문과 등 지느러미 지느러미의 크기와 모양에 의해 구별 수 있습니다. 수컷의 항문 지느러미는 암컷의에 비해 크고 평행 사변형 모양입니다. 여성 항문 지느러미는 작고 삼각형 모양. 남성 지느러미 지느러미는 지난 두 광선 사이에 명확하게 보이는 깊은 노치 있습니다. </li><li> Medaka 매일 40 달걀을 쌓아 그들은 탱크에 식물에서 하차 제외됩니다 전에 medaka의 여자는 몇 시간 동안 부착 필라멘트에 의해 자신의 뱃속에서 클러스터된 계란을 수행합니다. </li><li> 여자는 그물에 잡힌 한 손으로 양쪽에서 부드럽게 안쪽 개최하실 수 있습니다. 달걀은 부드럽게 다른 손 검지로 배꼽에서 조롱 수 있습니다. 여성은 다음 탱크에 제공될 수 있습니다. 계란은 뭉툭한 포셉 또는 손가락으로 배아 미디어 가득한 6cm 페트리 접시로 전송해야합니다. </li><li> 그들이 작은 짝짓기 상자에 보관하는 경우 Medaka 쌍이 거의 싸움을하지 않습니다. 그들이 먹이와 계란이 몇 달 동안 매일 같은 쌍의에서 수집한 수 수 있도록 그러므로, 그들은 물의 흐름과 작은 탱크에 보관하실 수 있습니다. </li><li> 그것은 배란이 medaka 여성의 일상 발생 이후 여성의 물고기, 남성없이 보관하지 않아야하는 것이 중요합니다. 그렇지 않으면, 암컷이 알을를 제공하고 몸이 될 수 없습니다. </li></ol> 2. 청소 배아 <ol><li> 전송 9cm 페트리 접시의 뚜껑에 배치 사포로 유리 피펫 (p2000 그릿 크기, 방수)으로 달걀을 클러스터를 해제한. 초과 매체를 제거하지만 배아의 건조 방지하는 등 충분한 볼륨이 남아 있는지 확인합니다. </li><li> 부드럽게 최소한의 압력을 적용하여 chorion의 외부 표면 머리카락의 일부를 제거하는 주변 45-60초에 대한 모래 종이의 표면에 손가락 평행을 유지, 집게손가락을 사용하는 사포에 배아를 롤. 이주의가 서로 아래 배아를 분쇄의 위험을 최소화합니다 한번에 5-7 배아 이상 올리지 말아요. </li><li> 배아 매체의 신선한 요리로 청소 배아를 전송합니다. </li></ol> 3. microinjection 동안 배아를 개최 아가로 오스 플레이트 만들기 태아도 1.5 % 아가로 오스의 플렉시 글라스의 금형 (그림 1)로 만든 주사하는 동안 골짜기에서 개최됩니다. 아가로 오스의 농도는 정상적으로 배아를 개최하는 것이 중요합니다. <ol><li> 첫째, 아가로 오스의 프레임은 플렉시 글라스의 금형을 개최합니다. 9cm 페트리 접시에 0.5cm 깊이로 물에 1.5 % 아가로 오스를 붓고 그것이 완전히 굳은 때까지 기다리십시오. 금형의 크기보다 큰 단지 아가로 오스의 영역을 잘라 버릴거야. </li><li> 자른 영역을 기입도 거품이 갇혀없고 아가로 오스는 굳은 때까지 기다릴되도록 금형을 배치 1.5 % 아가로 오스 하거라. 이 아가로 오스 플레이트는 solidifaction 속도를 냉장고에 저장할 수 있습니다. </li><li> 계란을 가질 골짜기를 창조하는 곰팡이를 제거합니다. 필요한 ° C까지 4 금형, 표지 및 저장 젖어 정도로 배아 매체를 추가합니다. <img src="/files/ftp_upload/1937/1937fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. microinjection을 위해 아가로 오스 플레이트의 골짜기를 준비하는 데 사용되는 사용자 정의 만든 금형의 도식. </li></ol> 4. medaka의 배아의 Microinjection medaka에서 DNA, RNA, morpholino의 oligonucleotides 및 추적 염료는 64 세포 단계의 배아가 아닌 zebrafish에서와 노른자로 1의 세포질에 chorion 통해 microinjected 수 있습니다. 세포질은 rhodamine - dextran이 기술을 개발하는 것이 좋습니다 같은 염료를 주사하여 연습, 작고 medaka에 덜 볼 수 있기 때문에. 추적으로 페놀 레드의 추가도 주사의 확인을 허용하도록합니다. medaka의 배아를 둘러싼 chorion 힘든이므로, 짧은, 강하고 넓은 주입 바늘은 (그림 2)이 필요합니다. 필라멘트 함유 유리 모세관에서 강력한 넓은 주사 바늘을 준비합니다. <ol><li> 추적으로 페놀 레드 주입 솔루션을 준비하고 Eppendorf microloader와 다시에서 바늘에 그것을로드합니다. 공기 펌프 주입기에 바늘을 연결합니다. </li><li> 계란은 한 세포 단계에서 삽입하는 배입니다 가능한 한 빨리 수집하고 클러스터를 해제한해야합니다. 더 많은 배아는 세포 분열을 중지 얼음 (아니 30 분 이상)에 그들을 저장하여 주입 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/1937/1937fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. medaka 및 zebrafish 바늘의 비교. MF 니들의 끝 (상단) 짧고 medaka의 배아를 둘러싼 어려운 chorion를 펑쳐링에 대한 강력한 따라서 넓은됩니다. </li><li> 아가로 오스 접시에 달걀을 전송하고 포셉와 골짜기에서 그들을 맞춥니다. 그냥 주사하기 전에 한 세포 세포질의 세포막이 일 치인 수 있도록 다섯 계란은 회전한다수직 전자 바늘. 한 세포의 세포질은 densest 기름 방울로 계란의 측면에 반대 작은 기름 방울의 찾아볼 수없는 영역에 대한보고 찾을 수 있습니다. 확인된 지역은 측면에서 보면 세포질를 확인하실 수 있습니다. </li><li> 바늘 가까이 계란을 넣으십시오. 부드럽게 chorion에 바늘의 팁을 만지거나 microforceps (그림 3)을 사용하여 바늘의 끝부분을 엽니다. 주입 물질의 소량이 밖으로 흐름을 볼 수 있습니다. </li><li> chorion의 바늘 내부의 팁을 곳으로 chorion 통해 찔린. 도 역류가 힘든 chorion (분사 압력 개최 압력과 500 700hPA 80 - 100hPA의 설정)을 통해 주사시 높은 압력으로 인해 발생하지 않도록하기 위해 상대적으로 높은 것으로 인젝터의 개최 압력을 조정합니다. </li><li> 급격히 그 막 파고하여 세포질에 바늘의 끝부분을 삽입합니다. 난황에 바늘의 팁을 삽입하지 마십시오. zebrafish 달리, 노른자에 주입 물질이 세포질로 전송되지 않습니다. 때 세포질의 경계가 흐려 반면 (그림 4) 노른자에 주입하면 주입 액체는 뚜렷한 경계가있다. 때때로 바늘은 아가로 오스 / 파편에 의해 차단 될 수 있습니다. 집게는 터치 / rebreak 바늘의 끝 부분과 막힌를 제거하는 데 사용할 수 있습니다. 바늘은 주사하는 동안 어느 시점 나면, 버블링은 배아 매체를 보여줄 것입니다 당신이 주입하는 물질이 손실됩니다. 주사는 아가로 오스 채널을 따라 아래로 위로부터하고 금형에 걸쳐 왼쪽에서 오른쪽으로 체계적으로 진행되어야합니다. </li><li> 주입 배아가 배아 매체를 포함하는 깨끗한 접시에 전송하고 적절한 온도에서 개발해야합니다. <img src="/files/ftp_upload/1937/1937fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 전에 주사로 바늘 끝 속보. 1 : 가까운 배아의 chorion에 바늘의 끝을 이동, 2 : chorion를 터치하고 팁을 깨고 부드럽게 뒤로하고 앞으로 바늘을 이동, 3 주입 물질의 작은 크기는 바늘의 끝이 밖으로 흐름이 파손을 확인하면 팁니다. </li></ol> 5. 대표 결과 <img src="/files/ftp_upload/1937/1937fig4.jpg" alt="그림 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4"> 그림 4. 주입 medaka의 배아 대표 이미지. 패널 A는 한 세포 단계의 배아 medaka의 세포질에 rhodamine - dextran의 정확한 주입의 대표 이미지를 보여줍니다. 패널 B는 한 세포 단계의 배아 medaka의 난황에 rhodamine - dextran의 잘못 주입의 대표 이미지를 보여줍니다. 패널 C와 D는 약 30시간 후 분사에서 A와 B 각각 패널에서 배아를 보여줍니다. EM : 배아, 앞쪽에는 C와 D와보기가 지느러미는 패널에서 위쪽으로있다. 염료가 잘못 난황에 주입되면서 패널 D에있는 배 (胚)의 시신이 붉은되지 않습니다. B와 D의 화살표는 rhodamine - dextran가 뚜렷한 원형 경계를 참고 난황에 잘못 주입 나타냅니다. 에서 점선은 A와 B는 한 세포의 세포질의 개요를 나타냅니다, 볼 측면입니다.

<ol><li>Furutani-Seiki, M., Sasado, T., Morinaga, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+genome-wide+screen+for+mutations+affecting+organogenesis+in+Medaka%2C+Oryzias+latipes%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">A systematic genome-wide screen for mutations affecting organogenesis in Medaka, Oryzias latipes.</a> Mech Dev. 121, 647-658 (2004).</li>
<li>Furutani-Seiki, M., Wittbrodt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medaka+and+zebrafish%2C+an+evolutionary+twin+study%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Dev%22%5BJournal%5D)">Medaka and zebrafish, an evolutionary twin study.</a> Mech. Dev. 121, 629-6237 (2004).</li>
</ol>

이 비디오에서는, 우리는 한 세포 단계의 배아로 medaka 셀 추적, mRNA, DNA 또는 방지 감지 oligonucleotide 주입하는 방법을 보여줍니다. 이 기술은 우리가 실시간으로 인 - 생체내 다양한 발달 과정을 공부하고있었습니다. 그것이 내실수이 과정과 이후의 상세한 분석은 크게 척추 organogenesis 및 기본 세포 생물학 우리의 이해를 향상시킬 가능성이있다. 이러한 지식에 대한 중요한, 그리고 재생 의학의 치료 응용 프로그램을 얻을 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>4&quot; 미세망</td><td>도구</td><td>J K Aquatics Ltd.</td><td>MD001</td><td>난자 수집 중 물고기를 포획하는 데 사용됨.</td></tr><tr><td>배아 배지</td><td>시약</td><td>자체 제작</td><td></td><td>200ml 50X 스톡 솔루션, H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O/10 liter RO수 내 1ml 1% methylene blue (50X 스톡 솔루션: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 2H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O 2.4g, MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; 7H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O 4.0g/1 litre RO수).</td></tr><tr><td>미세 방수 샌드페이퍼 - p2000 grit 크기</td><td>도구</td><td>Hermes Abrasives Ltd.</td><td></td><td>난막이 있는 배아를 굴리거나 세척하기 위한 매우 고운 입자 크기.</td></tr><tr><td>붕규산 유리 모세관</td><td>도구</td><td>Harvard Apparatus</td><td>GC100-10F</td><td>미세주입 바늘 제작용.</td></tr><tr><td>마이크로피펫 풀러</td><td>장비</td><td>Narishige International</td><td>Model PP-830</td><td>미세주입 바늘 제작용.</td></tr><tr><td>Eppendorf 마이크로로더</td><td>도구</td><td>Eppendorf</td><td>5242956.003</td><td>미세주입 바늘에 시료를 채우는 용도.</td></tr><tr><td>미세주입 장치</td><td>장비</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>Model 5242.</td></tr><tr><td>마이크로매니퓰레이터</td><td>장비</td><td>Narishige International</td><td></td><td>Model MN151.</td></tr><tr><td>아가로스 주입 플레이트</td><td>도구</td><td>자체 제작</td><td></td><td>주입 중 배아를 고정하는 용도.</td></tr></tbody></table>

모델 생물체 유전자로 사용하기 위해 medaka의 태아의 microinjection

Microinjection of Medaka Embryos for use as a Model Genetic Organism

이 비디오에서는, 우리는 한 세포 단계의 배아로 medaka microinjection의 기법을 보여줍니다. Medaka는 유전자와 embryological 모두 분석이 가능하고 게놈 차원의 표현형 기반 돌연변이 화면이 zebrafish 및 마우스에서와 같이 1, 실시되었다하는 척추 모델 생물 중 하나입니다 작은 달걀 - 누워있는 민물고기이다. medaka와 zebrafish 사이의 관련 유전자의 기능 중복의 발산 따라서 단일 종 2 medaka 및 zebrafish는 척추 게놈 기능의 유전자 해부에 대한 보완으로 식별할 아르 소설 phenotypes의 신분을 수 있습니다. 배아 투명하고 외부 개발 medaka 생선을 활용하려면, microinjection은 만들기위한 지나친 표현하고 두드리는 다운 관심의 유전자와 DNAs에 대한 상표 세포, mRNAs 또는 방지 감지 oligonucleotides에 대한 휴대 추적기를 삽입하는 필수적인 기술이다 형질 라인.

Medaka 및 zebrafish는 척추 게놈 기능의 유전자 해부에 대한 보완하고 있습니다. 이 프로토콜은 medaka의 배아에 성공 microinjection, 실험실에서 medaka와 zebrafish를 사용하여 embryological 및 유전자 분석을위한 중요한 기술에 대한 핵심 포인트를 강조 표시합니다.

모델 생물체 유전자로 사용하기 위해 Medaka의 태아의 Microinjection

본 영상에서는 메다카 배아의 1세포기 단계에 미세주입을 수행하는 기술을 시연합니다. 메다카는 작은 알을 낳는 담수어로, ...

이 실험 절차의 전반적인 목표는 관심 유전자 또는 단백질의 정상적인 발현 패턴을 교란함으로써 유전자 단백질의 기능을 결정하는 것입니다. 이는 먼저 aros 몰드와 주입 바늘을 제작함으로써 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 1세포기 단계의 mid 배아를 수집하는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 주입을 위해 1세포기 배아를 정확한 위치로 정렬하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 1세포기 midar 배아에 세포 추적제, mRNA 또는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 주입하는 것입니다. 최종적으로, 주입된 물질의 영향을 받은 단백질과 관련된 형태학적, 생리학적 또는 분자적 변화를 보여주는 현미경 관찰을 통해 결과를 얻을 수 있습니다.안녕하세요, 저는 바스 대학교 생물학 및 생화학과의 Makoto Fuki 박사 연구실 소속 Sean Brazinski입니다. 저는 Seki 연구실 소속이기도 합니다. 오늘은 세포 추적자, mRNA 및 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 메다카 배아에 미세주입하는 절차를 보여드리겠습니다.본 실험실에서는 단일 세포 수준에서 관심 유전자의 생체 내(in vivo) 기능을 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다. 그럼 시작하겠습니다. 제브라피시와 달리, 마카(maka)는 이형성 지느러미를 통해 암수를 쉽게 구별할 수 있습니다.암컷의 지느러미는 가장자리가 매끄러운 둥근 모양입니다. 수컷의 항문 지느러미와 등지느러미는 모두 암컷보다 크며, 등지느러미의 마지막 두 가지 사이에 깊은 홈이 있습니다. 수류가 있거나 없는 교배 탱크에 meca 한 쌍을 넣어 둡니다.이 개체는 흐르는 물이 있는 수조에서 최대 두 달 동안 유지할 수 있습니다. 매일 주입하기 위해, 암컷은 매일 최대 40개의 알을 낳으며, 이 알들은 부착 필라멘트를 통해 배 쪽에 뭉쳐 있습니다. 뜰채를 사용하여 수조에서 암컷을 잡아내고, 한 손으로 물고기를 잡아 뜰채 안에 고정시킵니다. 검지 손가락으로 알을 조심스럽게 떼어내십시오.암컷을 수조로 돌려보냅니다. 핀셋이나 집게손가락을 사용하여 배아 배지가 채워진 6 cm 페트리 접시에 알을 옮깁니다. 해부 현미경 하에서 두 쌍의 핀셋을 사용하여 부착 필라멘트를 자르고 뭉쳐 있는 알들을 분리합니다.파스타 피펫을 사용하여 배아를 채취해 분변 및 조류로부터 분리하고, 최대 40개의 알을 신선한 배아 배지가 담긴 디쉬로 옮깁니다. 즉시 미세 주입을 수행할 경우 알을 얼음 위에 둡니다. 또는, 배양 온도를 조절하여 후기 단계로의 발달 속도를 제어할 수 있습니다.주입 과정 중 배아를 고정하기 위한 아가로스 플레이트를 제작하려면 플렉시글라스 몰드가 필요합니다. 자세한 내용은 본 프로토콜의 서면 부분을 참조하십시오. 9 cm 페트리 접시에 1.5% 아가로스 용액을 0.5 cm 두께로 붓습니다.aase가 응고되면, 몰드가 바닥으로 가라앉지 않도록 몰드보다 약간 작은 면적을 잘라냅니다. 잘라낸 부위를 1.5% aase로 다시 채우고 그 위에 플렉시글라스 몰드를 배치합니다. Aris가 응고될 때 기포가 유입되지 않도록 주의하십시오.일반적으로 몰드를 제거하여 홈을 만듭니다. Aris를 배아 배지로 덮습니다. 디쉬를 덮고 사용 전까지 4 °C에서 보관하십시오.유리 모세관이 포함된 필라멘트로부터 굵고 넓은 주사 바늘을 준비합니다. 마이크로 로더를 사용하여 추적자인 phenol red가 포함된 주입 용액을 주사 바늘에 역충전하고, 바늘을 공기 펌프 주입기 스탠드에 연결합니다. 이를 해부 현미경 옆에 설치합니다.적절한 단계의 알을 주입용 플레이트로 옮깁니다. 실체 현미경 하에서 주입을 수행하는 동안 발달을 중단시키기 위해 배아를 최대 30분 동안 얼음 위에 보관할 수 있습니다. 포셉을 사용하여 각 홈에 7~10개의 알을 정렬합니다.주사 바늘이 알에 수직으로 닿을 수 있도록 알을 회전시킵니다. 배아의 1세포는 밀도 차이에 의한 오일 방울의 반대편에 위치합니다. 따라서, 주사를 위해 1세포가 오른쪽에 오도록 오일 방울이 왼쪽을 향하게 방향을 잡아야 합니다.핵산과 추적 염료는 난황이 아닌 배아의 세포질 내로 chorion을 통해 미세 주입됩니다. 제브라피쉬와 마찬가지로, 바늘을 알에 가깝게 이동시킵니다. 바늘 끝을 chorion에 접촉시키거나 미세 핀셋을 사용하여 바늘 끝을 뚫어 소량의 주입액이 끝단으로 흘러나오게 합니다.폐쇄가 발생한 경우 바늘을 다시 꺾고, Corian을 천자한 후 주입 바늘의 팁을 내층 바로 안쪽으로 이동시켜 바늘로의 역류 가능성을 줄입니다. 인젝터의 유지 압력을 약 80에서 100 hectare Pascals로 정밀하게 조정합니다. 막을 찌르고 바늘을 세포질 내로 삽입합니다.배아에 주입합니다. 배아를 측면에서 관찰하여 주입된 물질이 세포질 내에 균일하게 분포되었는지 확인합니다. 세포질에 올바르게 주입된 액체는 경계가 흐릿하게 보이지만, 난황에 너무 깊게 주입된 물질은 경계가 뚜렷하며 세포질로 이동하지 않습니다.주입된 배아를 깨끗한 배아 배지가 담긴 디쉬로 옮기고, 적절한 온도의 인큐베이터에서 필요에 따라 발달시키십시오. 패널 A는 1세포기 Meca 배아의 세포질에 루미넨 덱스트란(lumine dextran)이 정확하게 주입된 대표 이미지를 보여줍니다. 패널 B는 1세포기 Meca 배아의 난황낭에 루미넨 덱스트란(lumine dextran)이 잘못 주입된 대표 이미지를 보여줍니다. 점선은 1세포기 세포질의 윤곽을 나타냅니다.패널 C와 D는 각각 패널 A와 B의 배아를 주입 후 약 30시간이 지난 시점에 보여줍니다. 패널 D의 배아 몸체는 염료가 난황낭에 잘못 주입되었기 때문에 붉은색이 아님에 유의하십시오. 지금까지 색이 짙은 배아의 1세포기에 핵산 또는 추적자를 미세 주입하는 방법을 살펴보았습니다.이 절차를 수행할 때, 성공적인 주입을 위해서는 배아의 발달 단계가 정확해야 합니다. 이것으로 모두 마치겠습니다. 시청해주셔서 감사드리며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Microinjection은 수정된 zebrafish의 배아에 이물질을 소개하는 잘 설립하고 효과적인 방법입니다. 여기, 우리는 강력한 mRNA의 overexpression을 수행하기위한 microinjection 기술 및 zebrafish에서 morpholino의 oligonucleotide 유전자 최저 연구를 보여줍니다.

Zebrafish 태아의 mRNA와 Morpholino의 안티 센스 Oligonucleotides의 Microinjection.

이 동영상은 morpholino 또는 mRNA가 감소 또는 후속 개발 중에 특정 유전자 제품의 수준을 높일 수있는 한 세포 단계에서 zebrafish 배아에 주입 수있는 방법을 보여줍니다.

유전자 기능을 분석 Zebrafish 배아들 중 Microinjection

하드 chorion 부드러운 배아, medaka의 배아의 조작으로 인해 더 zebrafish에 비해 참여합니다. 이 비디오는 chimeras의 생산을위한 이미징 및 세포 이식에 대한 아가로 오스의 장착 dechorionation 포함한 medaka의 배아를 조작하는 방법에 대한 단계별 절차를 나타냅니다. 이러한 절차는 척추 게놈 기능의 유전자 해부 위해 상호 보완적인 기능을 최대한 활용하기 위해 실험실에서 medaka와 zebrafish를 사용하는 필수적입니다.

Chimeras의 생성에 대한 Medaka의 태아 및 세포 이식의 Dechorionation

이 비디오는 제브라피시 난황낭에 화합물을 전달하는 배아 미세주입 기술에 대해 설명합니다.

배아 미세주입: 제브라피시 노른자에 화합물을 전달하는 기술

미세 주입 계란, 배아, 다양한 종류의 세포로 DNA의 구조, mRNA를, 모르 폴리 노의 안티센스 올리고 뉴클레오티드 또는 다른 치료를 제공하는 데 사용되는 일반적인 기술입니다.

성게 접합자의 높은 처리량 Microinjections

morphant 배아를 생성하는 방법은 발달 메커니즘과 유전자 규제 네트워크를 연구하는 것이 필수적이다. 바다 스타 Patiria miniata는 이러한 연구에 대한 새로운 모델 시스템입니다. 여기서 우리는 배아의 문화를, 배우자를 얻기 생산을위한 프로토콜,이 종 접합자의 빠른 미세 주입을 제시한다.

의 미세 주입을위한 방법 Patiria의 minata 접합자

지중해초파리(medfly) Ceratitis capitata(Diptera: Tephritidae)는 전 세계 농업 해충입니다. 이 식물의 생물학에 대한 깊은 이해는 메드플라이 개체군을 통제하여 경제적 영향을 줄이는 데 중요합니다. 배아 미세주입(embryo microinjection)은 이 종에서 생식세포 형질전환(germ-line transformation)과 역유전학(reverse genetics) 연구를 모두 가능하게 하는 근본적인 도구입니다.

세계적인 농업 해충 곤충의 배아 미세 주입을 통해 핵산 배달,<em&gt; Ceratitis의 capitata</em

작은 실험용 물고기는 인간의 뼈 질환의 기저에 있는 메커니즘에 대한 뼈 연구와 뼈 조절 약물의 스크리닝을 위한 인기 있는 모델이 되었습니다. 이 보고서에서는 골다공증성 병변이 있는 medaka 유충의 뼈 세포에 대한 alendronate의 효과를 평가하기 위한 프로토콜에 대해 설명합니다.

약물 치료와<em&gt; 생체</em&gt;은 메다카 물고기 골다공증 모델에서 조골 파골 세포 상호 작용의 영상

CRISPR/Cas9 시스템을 사용 하 여 채널 메기 배아에서 유전자 편집에 대 한 간단 하 고 효율적인 microinjection 프로토콜 제공 됩니다. 이 프로토콜에서 RNAs 가이드 및 Cas9 단백질 1 셀 배아의 노 른 자에 microinjected 했다. 이 프로토콜은 두 채널 메기 면역 관련 유전자를 노크 하 여 검증 되었습니다 않았습니다.

CRISPR/Cas9 단백질의 유전자 편집에 대 한 채널 메기, Ictalurus punctatus, 배아로 microinjection

이 기사에서는 작은 모델 물고기 medaka (Oryzias latipes)에서 정자를 수집하는 두 가지 빠르고 효율적인 방법과 컴퓨터 보조 정자 분석 (CASA)을 사용하여 정자의 질을 안정적으로 평가하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

Teleost 모델의 정자 수집 및 컴퓨터 보조 정자 분석 일본 메다 카 (Oryzias latipes)

배우세요 메다카 태아의 미세주사 기법을 통해 유전자 단백질 기능을 분석하는 방법을. 1세포기 배아에 핵산과 추적자를 주사하여 생체내 유전자 기능을 연구할 수 있습니다.

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