2007년 4월 28일
현재의 방법은 같은 biopsies 및 뇌 조각과 같은 작은 어려운 관리, 조직 조각의 sectioning 재현할 그라 이오 스탯 수 있습니다. 우리는 조직의 처리와 정기적으로 400 미크론 두께의 뇌 조각 5-10 미크론 시리얼 섹션을 생성하는 표준 그라 이오 스탯을 촉진하기 위하여 간단한 알루미늄 동결 단계를 활용.
안녕하세요, 저는 하버드 의과대학의 연구원이며 연세대학교 의과대학 세브란스 병원의 의과대학생인 박준입니다. 본 자료는 슬라이스 표본의 박절 제작을 위한 것입니다. 저는 테이프를 사용하여 OCT 플랫폼용 몰드를 준비하고 있습니다.
OCT로 몰딩하고 크라이오스탯 내에서 동결시키거나, 분쇄된 드라이아이스를 사용하여 동결된 OCT 플랫폼 주변의 TAFE를 제거하고 있습니다. 동결 척과 크라이오스탯 장착 스테이지의 정렬 표시 및 척 고정 장치를 보여드리고 있습니다. OCT 플랫폼을 통해 섹셔닝을 진행하고 있습니다.
온타리오 표면이 평평합니다. 재표면 처리된 OCT 플랫폼을 제거하고 크라이오스탯(cryostat) 동결 스테이지 위에 올립니다. 이 샘플을 OCT에 넣으며, 이 샘플은 이전에 PBS 내 30% glycerol 또는 sucrose로 저온 보존되었습니다.
이 단계는 컬럼 형성 상단 위로 약 5mm 정도 돌출된 외부 링을 사용하여 동결 컬럼을 준비하는 과정입니다. OCT를 위한 홈을 만들고, 조직 샘플을 동결 컬럼 표면 중앙에 조심스럽게 배치한 후 홈이 채워질 때까지 OCT를 천천히 첨가합니다. 그 다음 동결 컬럼 주위를 분쇄된 드라이아이스로 둘러쌉니다.
조직과 OCT는 20에서 60초 이내에 완전히 얼어야 합니다. 시료의 온도가 상승함에 따라, 샘플이 얼어 있는 상태를 유지하면서 외부 링을 제거할 수 있습니다. 이 단계에서는 동결 컬럼의 샘플을 옆으로 밀어 크라이오스탯(cryostat)에 배치합니다.
OCT 플랫폼 표면에 OCT 한 방울을 떨어뜨리고, 적절한 압력을 가하며 시료를 배치하면 시료가 OCT 플랫폼 위에 빠르게 동결됩니다. 이는 표시선을 맞추어 시료를 크라이오스탯 마운팅 스테이지에 고정하는 단계입니다. 조직 시료 상단의 OCT 층을 깎아내며 절편을 제작합니다.
조직 박편을 유리 슬라이드에 부착한 후 냉동 보관하거나 상온에서 보관하며, 유리 슬라이드에 부착된 조직을 대상으로 반응을 수행할 수 있습니다. 슬라이드 위에 시약을 뿌린 후 가볍게 흔들어 섞어주며, 빛에 민감한 시약인 경우 덮개를 씌울 수 있습니다. 반응의 후속 단계는 슬라이드를 뒤집어 폐기 용기에 넣어 세척한 다음, 다음 시약을 적용함으로써 쉽게 수행할 수 있습니다.
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이 방법은 생검 및 뇌 절편을 포함하여 취급이 까다로운 소형 조직 샘플의 재현 가능한 크라이오스탯(cryostat) 절편 제작을 가능하게 합니다. 이는 조직 취급을 용이하게 하는 단순한 알루미늄 냉각 스테이지와 표준 크라이오스탯을 사용하여, 400 µm 두께의 뇌 절편으로부터 5-10 µm의 연속 절편을 제작합니다.
본 방법은 재현 가능한 박절(thin sectioning)을 통해 다운스트림 면역조직화학 분석이 가능하게 함으로써, 신경과학 연구에서 작고 취약한 조직 샘플을 다루는 어려움을 해결합니다. 이는 전기생리학적으로 특성이 규명된 뇌 영역으로부터 일관된 조직학적 판독 결과를 제공함으로써 타겟 검증 및 기전적 리스크 감소를 지원합니다. 또한, 제한된 조직 입력값으로부터 데이터 품질을 향상시켜 전임상 모델의 예측 신뢰도를 높여줍니다.
이 방법은 뇌 절편 준비물의 기능적 스크리닝 이후 조직학적 확인을 지원함으로써 발견의 연속성에 통합됩니다.