Name: Immunohistochemistry에 대한 슬라이스 준비 씬 Sectioning (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: 학습하세요 뇌 조직 및 생검 샘플의 재현 가능한 크라이오스탯 절단법을 알루미늄 동결 스테이지와 표준 크라이오스탯을 활용하여 5-10마이크론 두께의 연속 절편을 제작하는 방법입니다. 이 기법은 신경과학 및 조직학 연구자들에게 신뢰할 수 있는 실험 결과를 제공합니다.

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<ol><li> OCT 플랫폼 테이프에서 금형을 준비합니다. </li><li> OCT와 금형을 입력합니다. 그라 이오 스탯 내에서 또는 조각 드라이 아이스를 사용하여 고정. </li><li> 냉동 OCT 플랫폼 주변에서 테이프를 제거합니다. </li><li> 냉동 척하고 그라 이오 스탯 장착 무대와 척의 잠금에 대한 점수를 맞춥니다. </li><li> 표면까지 OCT 플랫폼을 통해 섹션 평면이다. </li><li> 그라 이오 스탯 동결 단계에서 재부 상 OCT 플랫폼과 장소를 제거합니다. </li><li> OCT에서 개최 조직 샘플 (이전 PBS에 30 % 글리세롤이나 자당과 cryopreserved). </li><li> 외륜은 OCT를 잘 형성 열의 맨 위에 5mm에 대한 예상과 동결 컬럼을 준비합니다. </li><li> 조심스럽게 냉동 열 표면의 중심에 위치 조직 샘플을 잘 채워 때까지 천천히 OCT를 추가합니다. </li><li> 조각 드라이 아이스와 냉동 열을 서라운드. 조직 및 OCT 완전히 20-60 초 이내에 정지한다. </li><li> 샘플 냉동 유지하면서 온도의 준비를 증가로서, 외륜을 제거할 수 있습니다. </li><li> 냉동 열 측면과 그라 이오 스탯의 장소에서 샘플을 슬라이드. </li><li> OCT 플랫폼과 기업의 압력을 적용 위치 표본 (조직 아래)의 표면에 OCT의 플레이스 놓습니다. 스피스먼 신속하게 OCT 플랫폼에 정지합니다. </li><li> 그라 이오 스탯에 보안 척 정렬 부호 무대를 장착. </li><li> 조직 표본을 외면 OCT를 통해 섹션을 참조하십시오. </li><li> 유리 슬라이드에 얇은 섹션을 탑재하고 냉동 또는 실온에서 해동 저장. </li><li> Immunoreactions은 유리 슬라이드에 장착된 조직에 대해 수행할 수 있습니다. </li><li> 시약은 슬라이드로 풀링됩니다 부드럽게 흥분 수 있으며, 조명에 민감한 경우 적용 수 있습니다. </li><li> 반응의 후속 단계는 쉽게 슬라이드를 위킹, 폐기물 콘센트에 반전 슬라이드에서 수행하고 다음 시약을 적용하고 있습니다. </li></ol>

<ol><li>Scoutern, C. W., O'Connor, R., Cunningham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+of+research+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Today%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation of research animals.</a> Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).</li>
<li>Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diminished+serotonergic+innervation+of+adult+medial+prefrontal+cortex+after+6-OHDA+lesions+in+the+newborn+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Dev.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).</li>
</ol>

여기에 제시 프로토콜과 연구자를 제공하는 간결한, 쉬운 따라 같은 같은 수행을 추가 연구를위한 biopsies 및 뇌 조각과 같은 작은 어려운 관리, 조직 조각, 얇은 그라 이오 스탯 섹션을 구하는 방법의 개요를 원위치 하이브리드화, 또는 immunohistochemistry 다양한 얼룩 방법.

<table><tbody><tr><td>O. C. T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤 용액</td><td></td><td></td><td>PBS 내 30% Glycerol Solution w/v</td></tr><tr><td>수크로스 용액</td><td></td><td></td><td>PBS 내 30% Sucrose Solution w/v</td></tr></tbody></table>

immunohistochemistry에 대한 슬라이스 준비 씬 sectioning

Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry

신경 과학뿐만 아니라 다른 분야의 많은 조사는 작은 공부 관련, 아직 보존되어있다 조직의 매크로 조각이나 섹션, 갓 뇌 조직 슬라이스 준비에서와 같이, 제거, 또는 excised하지만 가능한 있었죠. 조직 샘플은 처리하기 어려울 수 있으므로이 물질의 미세한 후속 연구, 도전하실 수 있습니다. 여기서 보여주는 0.2-5.0 mm의 범위 수있는 두께로 조직의 얇은 그라 이오 스탯 섹션을 얻기위한 방법입니다. 우리는 일상적으로 5-10 미크론 코로나 그라 이오 스탯 섹션에 순차적으로 400 미크론 두께 Vibratome 뇌 조각 했네요. 조각은 일반적으로 첫번째 전기 생리학 실험에 사용되는 다음 레코딩이 관찰되었다하는 지역의 cytoarchitecture의 미세 분석을 요구하고 있습니다. 우리는 통제하고 재현할 준비 및 조직 슬라이스의 위치를​​ 수있는 간단한 장치를 건설했습니다. 본 장치는 슬라이스에 대한 동결 무대의 역할 1.2 cm의 직경과 길이 실린더 5cm로 구성되어 있습니다. 반지는 snugly 조직 (예, 10 월) 냉동 화합물에 포장되어 수 있도록 슬라이스 주변의 실린더 벽 제공하는 이상의 슬라이드. 이것은 그때 신속하게 조각 드라이 아이스와 냉동이고 결과 웨이퍼는 그라 이오 스탯의 sectioning에 대해 쉽게 위치를하실 수 있습니다. 얇은 섹션 수있는 해동 장착 여기 시연으로 더 연구가, 현장 하이브리드화, 또는 immunohistochemistry에서 각종 얼룩 방법으로 수행할 수 있도록 코팅 슬라이드에.

현재의 방법은 같은 biopsies 및 뇌 조각과 같은 작은 어려운 관리, 조직 조각의 sectioning 재현할 그라 이오 스탯 수 있습니다. 우리는 조직의 처리와 정기적으로 400 미크론 두께의 뇌 조각 5-10 미크론 시리얼 섹션을 생성하는 표준 그라 이오 스탯을 촉진하기 위하여 간단한 알루미늄 동결 단계를 활용.

Immunohistochemistry에 대한 슬라이스 준비 씬 Sectioning

신경과학 및 기타 학문 분야의 많은 연구에서는 ... 처리된, 작지만 거시적인 조직 조각 또는 섹션을 연구하는 과정이 포함됩니다.

안녕하세요, 저는 하버드 의과대학의 연구원이며 연세대학교 의과대학 세브란스 병원의 의과대학생인 박준입니다. 본 자료는 슬라이스 표본의 박절 제작을 위한 것입니다. 저는 테이프를 사용하여 OCT 플랫폼용 몰드를 준비하고 있습니다.OCT로 몰딩하고 크라이오스탯 내에서 동결시키거나, 분쇄된 드라이아이스를 사용하여 동결된 OCT 플랫폼 주변의 TAFE를 제거하고 있습니다. 동결 척과 크라이오스탯 장착 스테이지의 정렬 표시 및 척 고정 장치를 보여드리고 있습니다. OCT 플랫폼을 통해 섹셔닝을 진행하고 있습니다.온타리오 표면이 평평합니다. 재표면 처리된 OCT 플랫폼을 제거하고 크라이오스탯(cryostat) 동결 스테이지 위에 올립니다. 이 샘플을 OCT에 넣으며, 이 샘플은 이전에 PBS 내 30% glycerol 또는 sucrose로 저온 보존되었습니다.이 단계는 컬럼 형성 상단 위로 약 5mm 정도 돌출된 외부 링을 사용하여 동결 컬럼을 준비하는 과정입니다. OCT를 위한 홈을 만들고, 조직 샘플을 동결 컬럼 표면 중앙에 조심스럽게 배치한 후 홈이 채워질 때까지 OCT를 천천히 첨가합니다. 그 다음 동결 컬럼 주위를 분쇄된 드라이아이스로 둘러쌉니다.조직과 OCT는 20에서 60초 이내에 완전히 얼어야 합니다. 시료의 온도가 상승함에 따라, 샘플이 얼어 있는 상태를 유지하면서 외부 링을 제거할 수 있습니다. 이 단계에서는 동결 컬럼의 샘플을 옆으로 밀어 크라이오스탯(cryostat)에 배치합니다.OCT 플랫폼 표면에 OCT 한 방울을 떨어뜨리고, 적절한 압력을 가하며 시료를 배치하면 시료가 OCT 플랫폼 위에 빠르게 동결됩니다. 이는 표시선을 맞추어 시료를 크라이오스탯 마운팅 스테이지에 고정하는 단계입니다. 조직 시료 상단의 OCT 층을 깎아내며 절편을 제작합니다.조직 박편을 유리 슬라이드에 부착한 후 냉동 보관하거나 상온에서 보관하며, 유리 슬라이드에 부착된 조직을 대상으로 반응을 수행할 수 있습니다. 슬라이드 위에 시약을 뿌린 후 가볍게 흔들어 섞어주며, 빛에 민감한 시약인 경우 덮개를 씌울 수 있습니다. 반응의 후속 단계는 슬라이드를 뒤집어 폐기 용기에 넣어 세척한 다음, 다음 시약을 적용함으로써 쉽게 수행할 수 있습니다.

thin-sectioning-of-slice-preparations-for-immunohistochemistry

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

다음 비디오는 포르말린 고정 및 파라핀 임베딩으로 조직의 형태를 보존하는 방법을 설명합니다.

포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 조직 보존: 조직 형태학 연구 방법

이 입문 수준 프로토콜은 미세아교세포와 신경 요소에 대한 마커를 예로 들어 설치류 뇌의 면역조직화학적 염색을 완료하는 데 필요한 시약, 장비 및 기술을 설명합니다.

미세 아교 세포와 신경 세포에 대한 예 염색 : 저온 절단 된 쥐의 뇌 조직에서 면역 조직 화학에 대한 입문서

이 문서에서 설명하는 간접 면역 형광 프로토콜 탐지 및 마우스 유방 동맥에서 단백질의 현지화 할 수 있습니다. 완전한 방법은 유선 샘플을 제조 형광 현미경에 의해 이미지, 조직 절편을 면역 조직 화학 법을 수행하고, 이미지를 재구성하기 위해 주어진다.

마우스 유선의 냉동 섹션에 간접 면역 형광

많은 유형의 인간 뇌종양은 뇌 내의 특정 영역에 국한되어 있으며 배양에서 성장하기 어렵습니다. 이 프로토콜은 종양 미세환경의 역할을 다루고 유기형 마우스 뇌 절편에서 자라는 형광 원발성 뇌종양 세포를 분석하여 신약 치료를 조사합니다.

약물 치료를 종양 미세 환경을 공부하고 대상에 대한 뇌종양 / Organotypic 슬라이스 공동 문화 시스템

여기, 우리는 쉽게, 낮은 비용을 제공하고, 시간 효율적인 프로토콜은 화학적으로 투과 전자 현미경에 대한 면역 조직 화학 염색을 미리 내장과 호환되는 장기 보존을 허용, 아크롤레인 정착액와 영장류 뇌 조직을 고정 할 수 있습니다.

면역 조직 화학 및 전자 현미경을 사전은 임베딩에 대한 비 인간 영장류 뇌 조직의 준비

여기, 선물이 파라핀 단면 개선 하는 프로토콜. 이 메서드는 절단 하 고 종래의 방법에 필요한 전송 프로세스를 피하기 위해 간단한 온도 챔버를 사용 하 여 부동을 결합 합니다. 그 결과, 효율과 그대로 파라핀 섹션 수가 크게 개선 했다.

절단 및 파라핀 끼워 넣어진 조직 단면에 대 한 부동 방법

우리는 생성, 재배 및 organotypic 조각 murine 폐 종양에서 파생 된의 체계적인 분석에 대 한 메서드를 제공 합니다. 우리는 또한 슬라이스 두께 대 한 최적화 하는 방법과 종양 조각 치료 약물 농도 선택 하는 방법을 설명 합니다.

설립 및 종양 조각의 분석 Explants 진단 테스트에 대 한 전제 조건으로

성인 인간의 뇌에서 자유롭게 떠있는 슬라이스 문화를 준비하는 프로토콜이 제시된다. 상기 프로토콜은 멤브레인 인서트를 이용한 널리 사용되는 슬라이스 배양 방법의 변형이다. 그것은 간단 하 고, 비용 효율적인, 그리고 단기 측정 을 실행 하기 위한 권장 연령 관련 된 뇌 질환 뒤에 신경 변성의 메커니즘을 해명 하는 것을 목표로.

성인 인간의 뇌에서 단기 자유 부동 슬라이스 문화

자유 부동 기술을 통해 연구원들은 고정된 조직 절편에서 면역조직화학을 포함한 조직학적 기반 염색을 수행하여 생물학적 구조, 세포 유형, 단백질 발현 및 국소화를 시각화할 수 있습니다. 이것은 뇌, 심장 및 간과 같은 여러 조직을 조사하는 데 유용할 수 있는 효율적이고 신뢰할 수 있는 조직화학 기술입니다.

자유 부유 조직 절편을 사용한 조직학적 기반 염색

이 프로토콜은 전체 토끼 눈의 고품질 냉동 절개를 얻기 위한 신뢰할 수 있는 방법을 설명합니다. 토끼 눈 절제술, 고정, 포매 및 절편 절차에 대해 자세히 설명하며, 이는 큰 눈에 면역조직화학을 활용하는 모든 연구에 쉽게 적용할 수 있습니다.

Whole Rabbit Eye의 고품질 냉동 절개 획득 

학습하세요 뇌 조직 및 생검 샘플의 재현 가능한 크라이오스탯 절단법을 알루미늄 동결 스테이지와 표준 크라이오스탯을 활용하여 5-10마이크론 두께의 연속 절편을 제작하는 방법입니다. 이 기법은 신경과학 및 조직학 연구자들에게 신뢰할 수 있는 실험 결과를 제공합니다.

Immunohistochemistry에 대한 슬라이스 준비 씬 Sectioning

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