Name: 마우스 폐에 Solutes 직접 Tracheal 떨어뜨림 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-08-29T17:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: 학습하세요 마우스 기관내 주입을 통해 폐에 용액을 직접 전달하는 방법을. 이 기법은 호흡생리학 연구에서 폐포 기능과 약물 전달을 연구하는 데 필수적입니다.

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이 작품은 NIH K99 HL09222601 및 MNH에게 수여 S &amp; R 재단 Ryaji Uneo 수상에 의해 지원되었다.

1. 마취 <ol><li> isoflurane과 쥐를 Anesthetizing하면 intraperitaneally 마취 관리를하기 전에 동물의 처리와 구속을 촉진 수도 있습니다. 흡입 마취제를 사용하면 또는 특정 연구에 적합하지 않을 수 있습니다 수 있습니다 제안한 폐 연구에서 첫 번째 isoflurane 사용의 영향, 또는 다른 마취제를 결정합니다. </li><li> isoflurane과 동물을 마취. 동영상은 산소와 혼합 2퍼센트 isoflurane에서 설정 isoflurane 기화기 챔버의 사용을 보여줍니다. 당신이 isoflurane 챔버가 없다면, 당신은 표준 또는 오픈 드롭 노출 기법을 사용하실 수 있습니다. 하단에 장착되어 와이어 메쉬와 벨 병 속에 쥐 (또는 다른 적절한 비 다공성 컨테이너)를 동봉. 메쉬 와이어 아래에 위치 거즈 패드하려면, 프로필렌 글리콜에 V / V isoflurane 30 % 혼합물을 적용합니다. 메쉬의 사용은 동물이 피부 자극 및 잠재 도달 했나봐을 일으킬 수있는 isoflurane - 절어 패드와 접촉하지 않도록 보장합니다. isoflurane에 짧은 노출 후, 동물은 anesthetized되어야하며 그릇이 스쳐 및 발가락 핀치 후 응답하지 않습니다 때 righting 반사와 응답하지 않습니다. </li><li> Xylazine과 300ml의 혼합의 내부 복막 주사로 마취 더 마우스. (창자 또는 다른 중요한 장기의 일부가 침투되지 않은 것을 막기 위해 다시 그릴 intraperitoneal 주사를 수행할 때 그것은 좋은 연습입니다.) 0.9 % 멸균 인산의 8850 μL 1000 μL 케타민을 (100 MG / ML) 150 μL를 Xylazine (100 MG / ML) 혼합하면 (PBS) 살린 버퍼. 생쥐의 경우 복용량이 체중의 10 GM 당 약 80 μL 것입니다. 최종 농도는 10 밀리그램 / 킬로그램 Xylazine과 100 밀리그램 / 킬로그램 케타민을 것입니다. 동물 건조 유지 및 체온의 과도한 손실을 방지하기 위해 절연해야합니다. 안과 연고는 각막의 건조 방지하기 위해 눈에 적용할 수 있습니다. </li></ol> 2. 외과 영역의 준비 <ol><li> 수술 절개가 이루어집니다 영역을 면도하지 않은 준비 지역에서 오염을 방지할 수 있습니다. 전기 면도기는 밀접한 동물에서 모피를​​ 면도 있습니다. 면도 지역은 절개 사이트보다 큰해야합니다. </li><li> 같은 나이르로 제모 크림의 후속 응용 프로그램, 모든 남아있는 모피를 제거합니다. 외과 영역에 제모 크림의 두꺼운 레이어를 적용하고 3 분에 둡니다. 젖은 수건으로 모피 및 제모 크림을 닦아. 10 분 초과에서 머리 제거 크림을 두지 마십시오. </li><li> 무균 수술 영역을 준비, 70 % 알코올, 또는 대체 스크럽 솔루션을 사용합니다. </li></ol> 3. 수술 <ol><li> sloped 수술 보드, 또는 직각 접근 금지 서에 anesthetized 동물을 놓습니다. </li><li> 목 앞쪽에 (목 지역) 근처에 작은 절개를합니다. </li><li> tracheal 반지를 시각화하고 액세스하기 위해 platysma과 앞쪽에 tracheal 근육을 멀리 해부하다. </li><li> 일반적으로, intratracheal 사출 볼륨 무게 3 μl 당 그램 (약 30-75 μL 최종 볼륨)입니다. 1mL 피하 (하위 Q) 30 게이지, 5/16-inch 바늘로 주사기를 사용 instillate의 해당 금액을 관리할 수 있습니다. 주사기 베벨 측면을 잡고 병렬 기관과 함께, 그리고기도에 instillate의 전체 볼륨을 주입. </li><li> 동물가 폐 속에 용질의 기지를 따라 온다하여 응답할 수 있습니다. 주사기를 통해 공기를 도입하고 폐가 확장 여부를 관찰하면 성공 삽관법 기법을 확인합니다. </li><li> 기관에서 주사기를 제거합니다. </li></ol> 4. 봉합. <ol><li> 바늘 홀더와 바늘의 스웨이지 (봉합 재료가 연결되어있는 바늘의 두꺼운 부분)을 파악. </li><li> 피부의 두께에 따라 떨어진 상처의 가장자리에서 90 ° 각도로 약 1~3mm에서 바늘의 끝에와 피부에 침투. 조직 하나를 통해 통과 후 종료 바늘을 파악. 개별적으로 매듭 간단한 바늘, 효율적으로 상처를 닫습니다. </li></ol> 5. 동물 복구 <ol><li> 동물 완전히 3-24시간 후 마취 및 수술에서 회복한다. </li></ol> 6. 대표 결과 형광 화합물 Intratracheal 떨어뜨림, dextran을 복합 Cy5.5는 B6 마우스 폐에 형광 화합물 (그림 1) 성공적으로 기지를 보여줍니다. 형광 염료는 주로 폐를 타겟으로하고 균일하게 분포돼있다. 즉시 절차 다음과 같은 위장관의 형광 신호가 식도가 실수 절차 (그림 2) 중 intubated 것을 나타냅니다. 수사 당국은 또한 폐로 화합물의 타겟 배달을 확인하고 instillate의 분포를 확인 폐가 팽창하고 폐 조직 조각 (2, 3) 준비하여 절차를 수행하거나 고정 histolo을gical 샘플. <img src="/files/ftp_upload/1941/1941fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 형광등 Cy5.5 신호가 성공적으로 얻은 마우스 폐에서 X - 레이 이미지와 함께 공동 등록. 1.4 MG Cy5.5 De​​xtran은 (10 μg / μL의 농도에서) B6 마우스 폐의기도로 얻은되었습니다. Cy5.5 신호는 675 나노미터 여기 필터와 695 nm의 방출 필터를 사용하여 검색했습니다. <img src="/files/ftp_upload/1941/1941fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 저조한 얻은 마우스 X - 레이 오버레이로 표시 형광 신호의 공동 등록. 내장에 Cy5.5 납품에​​ tracheal 떨어뜨림 프로토콜 결과 동안 식도의 부적 절한 삽관법.

<ol><li>Driscoll, K. E., Costa, D. L., Hatch, G., Henderson, R., Oberdorster, G., Salem, H., Schlesinger, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+instillation+as+an+exposure+technique+for+the+evaluation+of+respiratory+tract+toxicity%3A+uses+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Intratracheal instillation as an exposure technique for the evaluation of respiratory tract toxicity: uses and limitations.</a> Toxicol Sci. 55, 24-35 (2000).</li>
<li>Helms, M. N., Jain, L., Self, J. L., Eaton, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redox+regulation+of+epithelial+sodium+channels+examined+in+alveolar+type+1+and+2+cells+patch-clamped+in+lung+slice+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Redox regulation of epithelial sodium channels examined in alveolar type 1 and 2 cells patch-clamped in lung slice tissue.</a> J Biol Chem. 283, 22875-22883 (2008).</li>
<li>Helms, M. N., Self, J., Bao, H. F., Job, L. C., Jain, L., Eaton, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+activates+amiloride-sensitive+sodium+channels+in+alveolar+type+I+cells+in+lung+slice+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dopamine activates amiloride-sensitive sodium channels in alveolar type I cells in lung slice preparations.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 291, L610-L618 (2006).</li>
<li>Iyer, S. S., Ramirez, A. M., Ritzenthaler, J. D., Torres-Gonzalez, E., Roser-Page, S., Mora, A. L., Brigham, K. L., Jones, D. P., Roman, J., Rojas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidation+of+extracellular+cysteine%2Fcystine+redox+state+in+bleomycin-induced+lung+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Oxidation of extracellular cysteine/cystine redox state in bleomycin-induced lung fibrosis.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 296, L37-L45 (2009).</li>
<li>Li, T., Folkesson, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+for+alpha-ENaC+inhibits+rat+lung+fluid+absorption+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">RNA interference for alpha-ENaC inhibits rat lung fluid absorption in vivo.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 290, L649-L660 (2006).</li>
<li>Sager, T., Porter, D., Robinson, V., Lindsley, W., Schwegler-Berry, D., Castranova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+to+disperse+nanoparticles+for+in+vitro+and+in+vivo+investigation+of+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotoxicol%22%5BJournal%5D)">An improved method to disperse nanoparticles for in vitro and in vivo investigation of toxicity.</a> Nanotoxicol. 1, 118-129 (2007).</li>
<li>Xu, J., Gonzalez, E. T., Iyer, S. S., Mac, V., Mora, A. L., Sutliff, R. L., Reed, A., Brigham, K. L., Kelly, P., Rojas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+senescence-accelerated+mouse+model+in+bleomycin-induced+lung+injury+suggests+that+bone+marrow-derived+cells+can+alter+the+outcome+of+lung+injury+in+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gerontol+A+Biol+Sci+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Use of senescence-accelerated mouse model in bleomycin-induced lung injury suggests that bone marrow-derived cells can alter the outcome of lung injury in aged mice.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 64, 731-739 (2009).</li>
<li>Yeh, T. F., Lin, H. C., Chang, C. H., Wu, T. S., Su, B. H., Li, T. C., Pyati, S., Tsai, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+intratracheal+instillation+of+budesonide+using+surfactant+as+a+vehicle+to+prevent+chronic+lung+disease+in+preterm+infants%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Early intratracheal instillation of budesonide using surfactant as a vehicle to prevent chronic lung disease in preterm infants: a pilot study.</a> Pediatrics. 121, e1310-e1318 (2008).</li>
</ol>

Intratracheal instillations는 시험 화합물 (6)의 독성을 평가하기 위해 여러 가지 다양한 연구에 사용되었으며, 폐포 폐 상해 (4, 7) 유​​도, 직접 작은 oligonucleotides의 전달을 통해 계면 활성제 (8)뿐​​만 아니라, 변경 유전자 발현을 교체 폐 (5). 우리는 현재 폐암에 형광 산화 환원에 민감한 자료는 약리 성분, DNA 벡터, 바이러스, 그리고 함께 형광 표시기를 instilling)뿐만 아니라 2로 평범하고 pathophysiological 조건 생체내에 산화 스트레스를 측정하기 위해 1) instilling의 사용을 탐험 아르 / 또는 폐 유체 수송에있는 각 instillate의 효과를 평가하는 microRNA. 흡입 노출 ((1) 검토)를 통해 기지 프로토콜을 사용하여 폐에 이물질을 소개하는 몇 가지 장점이 있습니다. 떨어뜨림 프로토콜을 사용하여의 주요 장점은 독성, 발암성, 또는 방사성 물질에 노출 제한을 포함합니다. ...

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Webster Veterinary</td><td>14043-220-05</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd, Inc.</td><td></td><td>신규 동물 약물 신청서 #139-236</td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Bioniche Pharma</td><td>67457-001-10</td><td></td></tr><tr><td>Nair</td><td></td><td></td><td>약국에서 구매 가능</td></tr><tr><td>1mL 피하 주사용 주사기</td><td>BD Biosciences</td><td>309597</td><td>26 5/8 G</td></tr><tr><td>4-0 나일론 봉합사</td><td>Ethicon Inc.</td><td>1894G.S30</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 폐에 solutes 직접 tracheal 떨어뜨림

Direct Tracheal Instillation of Solutes into Mouse Lung

Intratracheal instillations 직접 폐에 solutes을 제공합니다. 이 절차는 폐암의 말초 지역에 instillate의 전달을 대상으로하고, 따라서 종종 폐포를 공부하기위한 연구에 통합됩니다. 우리는 생쥐에서 intratracheal instillations을 수행하기위한 세부적인 생존 프로토콜을 제공합니다. 이 방법을 사용, 하나는 말초 폐로 테스트 solutes 또는 고체의 제공 (예 : 폐 치료제, 계면 활성제, 바이러스, 작은 oligonucleotides)를 타겟팅할 수 있습니다. Tracheal instillations는 주로 상부 호흡기를 타겟으로하고 가능한 잠재적 유해 물질에 대한 조사에 노출될 수 있습니다 흡입 프로토콜을 통해, 원하는 방법 수 있습니다. 또한, tracheal 떨어뜨림 프로토콜을 사용하여, 동물 완전히 비침습 절차에서 복구할 수 있습니다. 이 같은 동물을 사용하여 시험 동물, 또는 다시 설치에 대한 후속 생리 측정을 만들기위한 수 있습니다. 폐에 소개 instillate의 금액은 신중하게 결정과 동물 복구를 보장하기 위해 osmotically 균형해야합니다. 일반적으로 30-75 μL instillate 볼륨 마우스 폐에 소개하실 수 있습니다.

Intratracheal instillations 직접 폐에 solutes을 제공합니다. 이 절차는 폐암의 말초 지역에 instillate의 전달을 대상으로하고, 따라서 종종 폐포를 공부하기위한 연구에 통합됩니다. 우리는 생쥐에서 intratracheal instillations을 수행하기위한 세부적인 생존 프로토콜을 제공합니다.

마우스 폐에 Solutes 직접 Tracheal 떨어뜨림

기관내 제재 주입은 용질을 폐로 직접 전달합니다. 이 절차는 주입물을 ...의 원위부 영역으로 전달하는 것을 목표로 합니다.

이 절차에서는 용질을 폐로 직접 전달할 수 있습니다. 먼저 기관을 노출시킵니다. 소형 설치류의 털을 제거하고 목의 전면 부근에 작은 절개를 만듭니다.기관을 노출합니다. 1 mL 피하 주사 바늘을 사용하여 체중 1 g당 3 µL의 용액을 기관을 통해 투여합니다. 주사기를 제거하고 상처 부위를 봉합합니다.안녕하세요, 에모리 대학교 생리학과의 Ma Helms 박사입니다. 안녕하세요, 이곳 에모리 대학교 내과 의학과의 Mauricio Rojas 박사입니다. 오늘은 폐의 말단 부위에 용질을 직접 주입하는 절차를 보여드리겠습니다.저희 실험실에서는 여러 가지 투여 화합물에 반응하는 폐액 제거 능력을 연구하기 위해 이 절차를 일상적으로 사용하며, 폐 손상 마우스 모델을 만들기 위해 이 기술을 사용하여 BLI를 전달합니다. 소형 설치류 폐에 용질을 직접 주입하는 방법은 귀하의 연구에 유용할 수 있습니다.이제 시작해 보겠습니다. 수술 준비를 위해 마우스는 먼저 isof fluorine으로 마취시킨 후, xylazine과 ketamine 혼합물을 복강 내 주사하여 추가로 진정시킵니다. 발가락 pinch 테스트를 수행하여 동물이 완전히 마취되었는지 확인하십시오.그 다음 전기 면도기를 사용하여 수술 부위의 털을 깎습니다. 남은 털을 제거하기 위해 수술 부위에 제모 크림을 두껍게 바릅니다. 제모 크림을 3분 동안 그대로 둔 후, 젖은 수건으로 털과 크림을 닦아냅니다.수술 부위를 70% alcohol로 닦아낸 후, Betadine 수술용 세정제로 닦아 동물을 무균적으로 준비합니다. 이제 동물의 수술 준비가 완료되었습니다.기관 내 투여 절차를 시작하기 위해, 마취된 동물을 경사진 수술대 위에 놓습니다. 목 또는 인후 부위의 앞쪽에 작은 절개를 가합니다. 포셉을 사용하여 넓은목근을 밀어낸 다음, 전방 기관 근육을 절개합니다.이를 통해 기관 고리를 시각화하고 접근할 수 있습니다. 기관이 노출되면 1 mL 피하 주사 바늘과 주사기를 사용하여 적정량의 제제(installate)를 투여합니다. 주사기의 바늘 끝(bevel)이 위를 향하게 하고 기관과 평행하게 유지한 상태에서 제제의 전체 용량을 기관 내로 주입합니다.전형적인 기관 내 주사 부피는 체중 1g당 3µL입니다. 기관에서 주사기를 제거하십시오. 폐에 용액이 주입된 후 동물은 헐떡이는 반응을 보일 수 있습니다.주사기를 통해 공기를 주입하여 폐가 팽창하는지 관찰함으로써 기관 삽관이 성공적으로

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

우리는기도를 통해 anesthetized 생쥐의 폐에 시험 물질의 비 수술 전달을 보여줍니다. 이 방법은 세균과 바이러스 병원균, 크린 시토킨, 항체, 구슬, 화학, 또는 염료로 폐 노출 수 있습니다. 우리는 더 이상 수확 및 유동세포계측법에 대한 폐, 폐 배수 림프절 (LDLNs) 처리 설명합니다.

유동세포계측법에 의해 폐, 폐 배수 림프절의 분석과 마우스의 비 수술 Intratracheal 떨어뜨림

이 비디오는 폐 점안, 고정 및 폐 용적 측정을 위해 기관에 액체를 주입하는 간단하고 신뢰할 수 있는 방법을 설명합니다.

폐 주입 및 고정: 기관에 액체를 주입하고 폐를 고정하여 고정된 폐 용적을 측정합니다.

출처: Venuprasad, K., et al. 기도 염증을 연구하기 위한 마우스 모델에서 헤모필루스 인플루엔자의 기관내 투여. J. Vis. 경험. (2016년)이 비디오는 하기도 감염을 모델링하기 위해 마취된 마우스에 폐 병원성 박테리아 접종물을 기관내 전달하는 방법을 보여줍니다.

마우스 모델에서 기관내 박테리아 전달 수행

본 논문은 폐 기능 측정 또는 쥐가 복구 나중에 시간에 공부를 할 수 있습니다 폐 기지에 대한 쥐를 intubating의 striaghforward하고 효율적인 방법을 설명합니다. 절차는 직접 기관을 비춰 저렴한 fiberoptic 광원을 포함한다.

마우스 폐 삽관 법의 간단한 방법

인간 폐 질환의 상태를 본뜬 모델의 사용은 특정 질환의 병태 생리학 및 / 또는 병인을 연구 및 치료 적 개입을 개발에 중요하다. 여기에 직접 마우스의 폐에 외인성 물질을 제공 할 수있는 비 침습적 인 기관 내 삽관 방법이 제시된다.

비 침습적 기관 내 삽관 마우스 폐의 병리학 및 생리학을 연구하는

시약의 기관 내 삽관 매개 (IMIT) 점안 호흡기 질환뿐만 아니라 폐에 직접 치료 시약을 주액하는 방법을 연구 우수한, 비 침습적 방법이다. 이 임상 시험에 적합한 신속하고 재현성이 높은 방법이다.

삽관 매개 기관 내 (IMIT) 떨어 뜨림 : 비 침습적, 폐 별 전달 시스템

이 논문의 목적은 크게 폐암 또는 다른 병리와 설정 및 마우스 폐의 분석에 도움이 될 간단한 방법을 설명하는 것입니다. 우리는 간단하고 확실하게 폐 instillations, 정착, 폐 용적 측정을 수행하는데 3 프로토콜을 제시한다.

마우스 폐 암 연구에 유용한 점안 및 고정 방법

이 문서에서는 삽관을 통해 마우스 기관에 직접 블레오 마이신 관리를위한 신속하고 간단한 방법을 제공합니다. 이러한 방법의 주요 장점은 마스터 높은 재현성 쉽고, 특수 장비 나 긴 회복 시간을 요구하지 않는다는 점이다.

마우스의기도 신속 삽관 용 개선 된 방법

신생아 설치류의 기관에 약물을 직접 주입하는이 기술은 국소 투여 약물 또는 생물학이 신생아 폐 질환에 미치는 영향을 연구하는 데 중요합니다. 추가적으로, 이 방법은 또한 동물 모델에서 폐 손상을 유도하는데 사용될 수 있다.

폐 질환을 치료하기 위해 신생아 설치류에 약물을 기관 내 점적하는 최소 침습적 방법

여기에서 우리는 비침습적 구인두 기관내 삽관을 통한 기관내 지질다당류(LPS) 전달을 위한 프로토콜을 제안합니다. 이 방법은 동물에 대한 수술 절차의 외상을 최소화하고 LPS를 기관으로 정확하게 전달한 다음 폐로 전달합니다.

Noninvasive Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation in Mice

이 프로토콜은 마우스를 최적으로 배치하고 카메라 기반 검이경을 경구로 삽입하면 성문을 시각화하고, 조직 외상을 최소화하면서 신속한 삽관을 수행하며, 폐에 액체를 일관되게 전달할 수 있는 방법을 보여줍니다.

쥐의 폐에 액체를 전달하기 위한 개선된 방법론: 소비자 검이경을 사용한 삽관

학습하세요 마우스 기관내 주입을 통해 폐에 용액을 직접 전달하는 방법을. 이 기법은 호흡생리학 연구에서 폐포 기능과 약물 전달을 연구하는 데 필수적입니다.

마우스 폐에 Solutes 직접 Tracheal 떨어뜨림

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