0 조회수 • 2:54 분 • April 30th, 2023
- 시작하려면 배아 배지가 들어 있는 페트리 접시에 배아 몇 개를 부드럽게 옮깁니다. 이제 집게로 융모막을 잡고 다른 집게로 찢어집니다.
다음으로, 찢어진 부분을 통해 배아를 부드럽게 밀어 넣습니다. 배아에서 융모막을 제거하면 배아의 성장과 움직임이 가속화됩니다. 파편을 제거하려면 파스퇴르 피펫을 사용하여 배아 배지가 들어 있는 다른 페트리 접시로 배아를 옮깁니다.
페트리 접시를 인큐베이터에 넣고 배아가 섭씨 28도에서 자라도록 합니다. 조명이 켜진 물로 채워진 현미경 스테이지를 실험 전에 섭씨 28도로 설정하여 유충 행동의 온도 관련 편차를 방지합니다.
페트리 접시를 무대에 놓고 접시 위의 카메라에 장착합니다. 다음으로, 배아를 카메라의 시야각 중앙에 놓습니다. 이제 뭉툭한 바늘로 배아를 부드럽게 만지고 비디오 카메라 녹화 소프트웨어에 유충 반응을 기록하십시오.
자극을 받으면 배아는 강력한 탈출 반응, 즉 급격한 회전과 함께 폭발적인 수영을 보여줍니다. 유충이 탈출하는 동안 접촉과 유충의 최대 가속도 사이의 시간을 측정합니다.
예제 프로토콜에서는 외부 자극에 대한 제브라피시 유충의 반응을 관찰할 것입니다.
- 분석을 수행하려면 약 25ml의 배아 배지로 채워진 페트리 접시를 약 섭씨 28도로 설정된 조명이 있는 온도 제어 스테이지에 놓습니다. 접시 위에 고속 카메라를 장착합니다. 비디오 녹화 소프트웨어를 실행하고 캡처 속도를 초당 1,000프레임으로 설정하여 빠른 수영 속도를 캡처할 수 있도록 합니다.
배아를 페트리 접시의 중앙에 배치하고 시야에서 명확하게 볼 수 있습니다. 녹음을 누른 다음 머리 위에 뭉툭한 바늘로 배아를 부드럽게 만져 기계 감각 자극을 전달합니다.
배아가 시야 밖으로 헤엄쳐 나오거나 휴식으로 돌아오면 기록을 중지합니다.
- 동일한 유충에 대한 반복 검사는 일부 질병 모델에서 습관화로 이어지거나 근육 약화를 촉진하여 촉각 자극에 대한 반응을 감소시킬 수 있습니다. 따라서 각 배아는 한 번만 테스트해야 합니다.