Name: 쥐에서 Orthotopic 힌드 - 림브 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-12T17:40:00.000+00:00
Duration: 14 min 3 s
Description: 배우세요 쥐 Orthotopic 후지 이식술을 통해 복합조직 동종이식 및 허혈-재관류 손상 연구 방법을 알아보세요. 이 기법은 혈관 재생을 위한 커프 기술을 활용하여 면역학적 거부 반응 메커니즘을 탐구합니다.

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기증자 운영 및 힌드 - 림브 하베스트 <ol><li> 수술 절차에 대한 microsurgical 악기 살균 집합이 활용됩니다. 외과 수술의 시작하기 전에 변경해야 멸균 장갑을 포함하여 적절한 복장을 착용해야합니다. </li><li> 생쥐가 pentobarbital의 intraperitoneal 주사 (50mg/kg IP)와 anesthetized이며 전체 수술을 통해 안정적인 동물 체온을 용이하게 가열 작업 현장에 배치 부정사. </li><li> 작업의 제기 피부 절개하기 전에 각 모두 세 번 살균이며, 살균제 및 알코올. 밖으로 건조에서 동물 각막을 방지하기 위해 눈이 수술하기 전에 안과 연고 (Vidisic)와 윤활 있습니다. </li><li> 피부 절개는 약 사타구니 인대의 수준에서 오른쪽 사타구니에 걸쳐 이루어집니다. 대퇴 혈관이 양극성 소작과 무딘 절개 무료 해부되며 깊은 지점은 8-0 실크 출혈도 잡았 있습니다. </li><li> 헤파린의 300μl (50 IU)를 방지 응고에 대한 성기 정맥을 통해 주입합니다. </li><li> 대퇴 혈관이 사타구니 인대의 수준에 출혈도 잡았 그리고 묶인에 말초 절단됩니다. </li><li> 뒷다리가로 플러시됩니다 심심풀이 (4 ° C) 오분 이상의 대퇴 동맥을 통해 HTK 솔루션 (5ml). </li><li> 모든 근육 그룹이 급격하게 가위로 나누어져 있으며, osteotomy은 대퇴골의 말초 셋째 수준에서 본 회전 전기와 함께 수행됩니다. </li><li> 수확 사지 그러면 이식까지 보존 및 냉장 창고 얼음처럼 차가운 HTK 솔루션 20mL에 빠져들 수 있습니다. </li></ol> 받는 운영 및 이식 <ol><li> 쥐 수술 분야에 pentobarbital과 배치 부정사의 intraperitoneal 주사와 함께 anesthetized 있습니다. </li><li> 피부 절개는 약 사타구니 인대의 수준에서 오른쪽 사타구니에 걸쳐 이루어집니다. 대퇴 혈관이 양극성 소작과 무딘 절개 무료로 해부하고 있습니다. </li><li> 대퇴 혈관이 가능한 말초로 출혈도 잡았지만, 상복부의 선박 이륙하는 근위 있습니다. 혈관 클램프는 동맥과 정맥에 사타구니 인대의 수준에 배치됩니다. </li><li> 0.010 mm, 커프스 길이 :; 및 정맥 (커프 직경 안쪽 커프스 - 벽 두께 1.151 mm 폴리에틸렌 커프스는 동맥 (0.912 mm, 커프스 - 벽 두께 : 0.010 mm, 커프스 길이 2.0 mm 커프 직경 내부) 세웠어요 : 2.0 mm). 선박 루멘의 가장자리는 다음 선박 팽창시키는와 함께 뽑아이며 대퇴 동맥과 정맥은 즉석 (약 2mm)의 전신을 통해 everted과 원주 8-0 실크 봉합사로 고정됩니다. </li><li> 기증자 갈기갈기를위한 공간을 마련하기 위해받는 사지는 근육 그룹의 날카로운 해부와 제거하고 osteotomy는 대퇴골 중간에서 수행됩니다. </li><li> 기증자 사지는 HTK 솔루션에서 제거하고 이식은 18 게이지 바늘 (길이 : 1.5-2.0 cm)를 사용하여 대퇴골의 osteosynthesis로 시작하는 intramedullary의 막대로. </li><li> 복부 근육 그룹은 밀접하게 4-0 Vicryl 또는 Prolene 중단 봉합과 approximated 있습니다. </li><li> 혈관 anastomoses는받는 사람의 정맥 및 커프 복잡한 통해 기증자의 정맥과 동맥을 당기는에 의해 수행됩니다. 원주 8-0 실크 봉합사는 다시 문합을 확보하기 위해 배치됩니다. </li><li> 정맥 클램프는 동맥 클램프 다음 발표하고, reperfusion는 말초 사지와 도보로 색상의 반환뿐만 아니라 동맥을 통해 타악기 흐름에 의해 시각입니다. </li><li> 나머지 지느러미 근육 그룹은 4-0 Vicryl 또는 Prolene 중단 봉합과 함께 다시 approximated 수 있습니다. </li><li> 피부는 4-0 vicryl 또는 prolene 중단 봉합과 함께 닫힙니다. </li><li> 받는 사람 랫은 가열 패드에 위치 및 복구까지 면밀히 모니터링합니다. </li><li> 받는 동물은 세 posttransplant 일에 대한 예방 항생제 (Cefazolin, 20 MG / 일, IM) 및 Buprenex를 (0.1 MG / kg, SC)받을 수 있습니다. </li></ol>

<ol><li>Shapiro, R. I., Cerra, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+reimplantation+and+transplantation+of+a+complex+organ%3A+the+rat+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb.</a> J Surg Res. 24 (6), 501-506 (1978).</li>
<li>Petruzzo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+registry+on+hand+and+composite+tissue+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The international registry on hand and composite tissue transplantation.</a> Transplantation. 86 (4), 487-492 (2008).</li>
<li>Schneeberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+forearm+transplantation%3A+outcome+at+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">First forearm transplantation: outcome at 3 years.</a> Am J Transplant. 7 (7), 1753-1762 (2007).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

실험 연구 수십년은 앞서 및 최근 과거에 성공적인 인간의 손으로 이식 활성화합니다. 1978 년, 샤피로 외. 물론 여러 가지 병적인, 생리 및 면역 측면뿐만 아니라, 복합 조직 이식의 기능 결과를 연구에 적합한 쥐에 orthotopic 뒷다리 이식 모델을 개발했습니다. 우리는 비 봉합 커프 기술을 도입하여, 즉 프로 시저의 가장 어려운 부분 혈관 문합을 수정했습니다. 그것이 높은 생존율 (80-90%)와 프로 시저를 수행하는 기본적인 microsurgical 경험 외과를 단순화하고 수술을 단축하고 있습니다 기존의 봉합 기술에 비해. 봉합 anastomoses, 출혈의 위험, 혈전증, 그리고 작은 꽃자루의 꼬임의 다양성없이 감소하고 있습니다. 이것은 적절한 커프 크기 선택과 최소 수 있지만 혈액이 처음 즉석 통과 루멘과 충돌 사이트에서 수축이나 난기류는 커프 기술의 새로운 잠재적인 위험이있다. 또한, 작은 크기 불일치가 쉽게 다시 다른 직경의 혈관을 suturing에 내재된 ...

<table><tbody><tr><td>Nembutal&amp;#174;</td><td>OVATION Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>헤파린 면역(Heparin Immuno)</td><td>Ebewe Pharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK 용액</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>외막 가위(Adventitia Scissors)</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;SAS-21 R-8T</td><td></td></tr><tr><td>포셉(Forceps)</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;JFC-7</td><td></td></tr><tr><td>확장 포셉(Dilator Forceps)</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;D-5AZ</td><td></td></tr><tr><td>폴리미드 튜브(Polymide Tubes)</td><td>River Tech Medical</td><td>#17; #19</td><td></td></tr></tbody></table>

쥐에서 orthotopic 힌드 - 림브 이식

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

복합 조직 allotransplantation (CTA)는 이제 손, 팔 또는 숫자의 손실 후에 유효한 치료 옵션을 나타내고 재건 수술의 새로운 치료 법인되고 있습니다. 그러나, 장기적으로 높은 선량 다중 약물 치료는 광범위한 immunosuppressive 응용 프로그램을 halters 심각한 부작용의 위험을 베어링, 그래프트 생존을 보장하기 위해 필요합니다. 이 분야에 더 이상 진행은 기본적인 면역학 및 복합 조직 이식의 국소 빈혈 reperfusion의 부상의 이해에 따라 달라질 수 있습니다. 지금까지 쥐에 orthotopic 뒷다리 이식은 재건 이식 (RT)에 대한 선호하는 설치류 모델을했습니다, 그러나, 그것은 vasculature의 reattachment, 뼈, 근육과 신경에게 대한 특별한 microsurgical 기술을 필요로 매우 까다로운 절차입니다. 우리는 뒷다리 사지 이식을 밀고하는 신속하고 안정적​​인 접근을 제공하는이 모델에 대한 혈관 커프 문합 기술을 도입했습니다. 이 기술은 간소화하고 단축 수술을 성공적으로 높은 생존과 낮은 합병증 속도로 작업을 수행하기 위해 기본적인 microsurgical 경험 외과 수 있습니다. 기술은 물론 면역뿐만 아니라 국소 빈혈 reperfusion의 부상 (이리) 연구에 적합한 것 같습니다.

여기서 우리는 금 본위 것으로 보인다 orthotopic 쥐 뒷다리 - 사지 이식 절차를 설명<em&gt; 생체내에</em복합 조직 allotransplantation 연구&gt; 모델입니다.

쥐에서 Orthotopic 힌드 - 림브 이식

복합 조직 동종이식(Composite tissue allotransplantation, CTA)은 현재 손, 전완 또는 손가락 소실 후 유효한 치료 옵션이 되었으며, 새로운...

저는 인스브룩 의과대학 내장 이식 및 흉부외과 다니엘스 로스키 연구소의 로버트 수하입니다. 오늘은 재혈관화를 위한 커프 기법을 도입한 쥐의 사지 이식 절차를 보여드리겠습니다. 이 사지 이식 수술은 저를 포함한 외과 레지던트들에 의해 수행됩니다.우리는 복합 조직 동종이식편에서 발생하는 허혈 및 재관류 관련 손상을 연구하기 위해 이 동물 모델을 사용합니다. 또한, 이 절차를 통해 복합 조직 동종이식 거부 반응의 면역학적 사건을 연구하고, 거부 반응 발생을 방지하기 위한 전략을 연구합니다. 이러한 전략에는 표적 면역조절 요법의 사용을 통한 유지 면역억제제의 최소화 또는 완전한 회피가 포함됩니다.적색 후지 이식 절차는 공여 쥐에서 오른쪽 후지를 제거하여 얼음 위에 보관하는 공여 복합 조직 이식편 채취로 시작됩니다. 다음으로, 공여지 이식을 위한 공간을 확보하기 위해 수혜 쥐의 오른쪽 후지를 제거합니다. 이후 얼음 위에 있던 공여지를 꺼내 수혜 쥐에게 이식합니다.이 모델에서는 커프 기술(cuff technique)을 사용하여 혈관 문합술을 수행합니다. 본 실험에서는 250 g의 수컷 Louis Reds 쥐를 사용하였습니다. 펜토바르비탈(pentobarbital) 50 mg/kg을 복강 내 주사하여 마취를 유도하였습니다.마취된 쥐의 서혜부와 뒷다리 부위를 면도하고 소독하여 시술을 준비합니다. 직선형 미세수술 가위, 혈관 확장기, 곡선형 핀셋 2개를 포함한 미세수술 기구 세트 전체가 필요합니다. 또한, 가장 중요한 기구는 여기에 표시된 미세수술용 혈관 클램프입니다.마취 깊이를 확인하기 위해 발가락 꼬집기 반사(toe pinch reflex)를 이용합니다. 쥐를 멸균 플랫폼 위에 놓고 절개 전에 네 다리를 모두 완전히 펴서 고정합니다. 오염을 방지하기 위해 다리의 털을 제거합니다.서혜인대 높이의 오른쪽 서혜부에 절개를 가합니다. 피부 바로 아래에 대퇴 혈관들이 나타나며, 이를 바이폴라 응고술과 둔성 박리로 분리합니다. 그 후 상복벽 혈관들을 분리하여 소작합니다.분리 후 기구로 혈관을 직접 잡지 않고도 견인할 수 있도록 정맥과 동맥 주위에 단일 루프를 유지 봉합사로 배치합니다. 공여자 사지 채취 전, 동맥과 정맥의 심부 분지는 근위부에서 8-0 실크 봉합사로 결찰하고 원위부는 소작합니다. 헤파린 50 units를 외정맥(penal vein)을 통해 투여합니다.1분 후, 대퇴 혈관으로 주의를 돌립니다. 8-0 실크사를 사용하여 대퇴동맥을 가능한 한 밀착시켜 결찰하고, 대퇴정맥에 대해서도 동일한 절차를 반복합니다. 그 후 두 혈관을 결찰 부위의 원위측에서 절단하고, 5분에 걸쳐 헤파린 처리된 냉각 HDK 용액을 동맥을 통해 후지(hind limb)로 관류시킵니다.다음으로, 모든 근육군을 가위로 조심스럽게 분리합니다. 대퇴골 원위부 1/3 지점에서 회전식 전기 톱을 사용하여 골절술을 시행합니다. 채취한 사지는 보존 및 이식 전 저온 보관을 위해 20 milliliters의 ice cold HDK 용액에 담급니다.수혜측 수술은 공여측 수술과 마찬가지로 대퇴 혈관의 격리와 박리로 시작됩니다. 세심한 박리 후, 혈관을 가능한 한 원위부에서, 그러나 복벽혈관(epigastric vessels)의 분지점보다는 근위부에서 8-0 실크사를 사용하여 결찰합니다. 그 다음, 폴리라인 커프를 혈관 위로 당겨 수혜측 정맥에 커프를 장착합니다.정맥의 커프 상단과 커프 핸들 근위부에 단일 정맥 클램프를 적용하여 완전한 지혈을 보장합니다. 정맥 원위단의 결찰사를 절단한 후, 정맥을 커프 위로 젖힙니다. 8-0 결찰사를 혈관과 커프 주위로 원주 방향으로 묶어 수용 정맥을 제자리에 고정합니다.더 작은 직경의 커프를 사용하여 동맥에 대해 동일한 절차를 수행합니다. 수혜자의 뒷다리는 기증자의 뒷다리와 마찬가지로 근육 그룹을 정밀하게 절개하고 대퇴골 중앙에서 골절술을 시행하여 박리합니다. 이제 뒷다리를 이식할 준비가 되었습니다.공여자 다리를 HDK 용액에서 꺼냅니다. 18게이지 바늘을 골수 내 로드로 사용하여 대퇴골의 골유합을 시행함으로써 이식을 시작합니다. 바늘 끝부분을 잘라내고, 남은 바늘을 1.5~2cm 길이로 자릅니다.사지를 안정시키고 혈관 문합을 준비하기 위해, 복측 근육 그룹을 4-0 Vicryl 또는 proline 단속 봉합사로 가깝게 봉합합니다. Cuff R 문합의 경우, 공여 정맥을 확장하여 수혜 정맥과 커프 위로 끌어당긴 후, 또 다른 원주형 8-0 결찰사로 고정합니다. 공여 동맥에 대해서도 동일한 절차를 수행합니다.마지막으로, 두 혈관의 연결이 모두 완료되면 정맥 클램프를 먼저 제거하고, 이어서 동맥 클램프를 제거합니다. 원위부 사지와 발의 색상이 돌아오고 동맥을 통한 박동성 혈류가 확인되면 즉각적인 재관류가 이루어짐을 쉽게 시각화할 수 있습니다. 나머지 등쪽 근육군을 다시 접합합니다.피부는 4-0 Vicryl 또는 proline 단순 결절 봉합사로 봉합하며, 이로써 이식 절차가 완료됩니다. 수술 후 쥐는 가열 패드 위에서 체온을 유지시키며 진통제와 항생제를 투여합니다. 이후 48~72시간 동안 쥐를 면밀히 관찰하여 고통의 징후나 수술 합병증 여부를 확인합니다.커프(cuff) 재문합 기술은 해양 신장 이식 모델부터 이형성 심장 이식 모델에 이르기까지 지난 수십 년 동안 다양한 외과적 연구 분야에서 널리 시행되어 왔습니다. 이 기술을 통해 허혈-재관류 관련 손상뿐만 아니라 다양한 면역학적 현상을 연구할 수 있습니다. 본 이식 절차에 따라.본 연구에서는 이러한 독특한 커프(cuff) 기술을 사지 복합 조직 이식에 최초로 적용한 사례를 보여줍니다. 소동물 모델에서 커프 기술은 기존의 문합 봉합 기술과 비교했을 때 수술 시간, 술자에게 요구되는 미세수술 전문 지식 및 수술 중 혈손실을 유의미하게 감소시켰습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

우리는 시궁창에서 orthotopic 간 이식을위한 클래식 두 커프스 기술의 쉬운 설정 개정을 제시.

쥐에게 Orthotopic 간 이식

쥐의 Orthotopic 간 이식은 생명 의학 연구에 필수적인 실험 모델입니다. 여기 50 % 부분 이식을 사용하여 간장 동맥 재건과 orthotopic 쥐의 간 이식에 대한 수술 절차를 제시한다.

간 간선 재건과 부분 Orthotopic 간 이식의 쥐 모델에 대한 외과 절차

슈퍼 미세 혈관 문합을위한 비 봉합 커프 기술을 적용 마우스에서 소성을 뒷다리 이식이 새로운 모델은, 혈관 복합 동종 이식 (VCA)에 관한 생체 역학적 면역 학적 연구를위한 강력한 도구를 제공합니다.

마우스에서 소성을 뒷다리 이식

혈관 화 된 복합 알로이 식은 이식 받는 사람에 게 생명을 바꾸는 혜택을 제공 하지만, 이식 거부와 레이의 생물학적 원인은 제대로 이해 되지 않습니다. 여기에 제시 된 설치류 수술 모델은 재현 가능 하 고 임상적으로 관련 된 모델을 제공 하 여 연구원 들이 그 발생을 막기 위해 거부 사건과 잠재적인 치료 전략을 평가할 수 있도록 합니다.

변형 된 이종 성 복합체 동종 요법 연구에 대 한 쥐에서 변성 이성애 자 골 진 피부 플랩 모델

이 프로토콜은 면역학 및 기능 적 회복의 동시 연구를 향해 기어드 혈관 복합 동종 이식 (VCA)의 견고하고 재현 가능한 모델을 제시한다. 손 바느질 혈관 아나토모와 신경 응착오른쪽 중간 허벅지 뒷다리 직교 이식에 세심한 기술에 투자 된 시간은 기능적 회복을 연구 할 수있는 능력을 산출한다.

다음 단계: 쥐의 기능적 회복을 극대화하기 위한 신경 응복 성 직교 힌지 이식 모델

우리는 쥐에 있는 이종 성 복부 심혼 이식의 모형을 기술합니다, 현재 전략의 수정을 암시하는, 이는 단순화한 외과 접근으로 이끌어 내는. 추가적으로, 우리는 쥐에 있는 추가 이식 면역학 분석을 허용하는 중요한 심장 근육 세포의 귀 주입에 의하여 새로운 거부 모델을 기술합니다.

쥐에 있는 이종 심혼 및 심장 근육 세포 이식을 위한 면역학 모형

이 논문은 쥐에 있는 부분이성 골균 플랩 이식 프로토콜 및 중간 후속에 있는 그것의 잠재적인 결과를 제시합니다.

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이 프로토콜은 쥐의 정소성 좌측 폐 이식을 위한 개선된 기술을 설명하며, 수술의 어려움을 줄이고 생존율을 개선하는 데 중점을 둡니다.

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이 프로토콜은 쥐에서 무릎 아래 절단을 수행하는 방법과 즉시 표적 근육 재신경 운동(iTMR)을 수행하여 절단 관련 통증 치료 및 예방 전략을 조사하고 절단과 관련된 통증 메커니즘을 더 잘 이해하기 위한 방법을 시연합니다.

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우리는 이종 소성 후다리에서 목으로의 혈관 형성 종합 동체이식 마우스 모델을 제시합니다. 이 초미세수술 프로토콜은 0.3-0.5mm 혈관 문합을 포함하며, 나일론 필라멘트 유도와 정맥 커핑을 통합합니다. 이 연구는 관성 합성 동체 이식에서 내성, 허혈-재관류 손상, 면역학적 기전에 관한 번역 연구를 위한 신뢰할 수 있는 기반을 제공합니다.

쥐에서의 이소성 하지에서 목으로의 이식: 혈관 복합 동체이식의 초미세수술 모델

배우세요 쥐 Orthotopic 후지 이식술을 통해 복합조직 동종이식 및 허혈-재관류 손상 연구 방법을 알아보세요. 이 기법은 혈관 재생을 위한 커프 기술을 활용하여 면역학적 거부 반응 메커니즘을 탐구합니다.

쥐에서 Orthotopic 힌드 - 림브 이식

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